出口水产品中微生物污染调查分析及限量探讨
2021-05-23
来源:步旅网
第1期(总第268期) 2012年1月 农产品加工・学刊 Academic Periodical of Farm Products Processing No.1 Jan. 文章编号:1671—9646(2012)O1—0024—06 出口水产品中微生物污染调查分析及限量探讨 贾爱荣 一,孟秀梅 ,夏雪奎 一,袁文鹏1I3,刘 新’,u, 刘昌衡1,3 (1.山东省科学院生物研究所,山东济南250014;2.山东省科学院中日友好生物技术研究中心,山东济南250014; 3.山东省应用微生物重点实验室,山东济南250014) 摘要:为了解出口水产品中微生物污染状况,并为制定微生物限量标准提供依据。采用GB/T 4789--2010的微生物 检测方法,检测待出口水产品中菌落总数、大肠菌群、大肠杆菌、沙门氏菌及金黄色葡萄球菌,并与国内外微生物 限量标准进行比较。结果显示,374份检测样品中均未检出大肠杆菌及沙门氏菌;金黄色葡萄球菌的总检出率为 1.87%;菌落总数基本符合标准,达标比例分别为:鱼制品93.3%,冷冻鱼类96.36%,虾类100%,软体动物85%, 饭食类88.89%;大肠菌群为主要污染菌,上述种类符合标准的比例分别为:58.53%,77.38%,72.73%,45%, 100%。 关键词:水产品;食品检测;微生物污染;限量标准 中图分类号:TS254.7 文献标志码:A doi:10.3969/jissn.1671—9646(X).2012.O1.006 Evaluation of Microbil Contaamination and Standard of Safety Limitation in Export Aquatic Products JIA Ai—rong ,MENG Xiu—mei ,XIA Xue—kui ,YUAN Wen-peng ,LIU Xin ,’LIU Chang-heng (1.Biology Institute of Shandong Academy of Sciences,Ji’nan,Shandong 250014,China; 2.Biotechnology Center of Shandong Academy of Sciences,Ji’nan,Shandong 250014,China; 3.Key Laboratory For Applied Microbiology of Shandong Province,Ji’nan,Shandong 250014,China) Abstract:In order to understand the status of microbial contamination in aquatic products for expo ̄,and provide the basis for microbial limits standard.the microbial detection methods in national food safety standard of GB/T 4789--2010 are used,to detect the total number of bacteria,coliorfIBS,Escherichia coli,Salmonella and Staphylococcus aureus,and to compare with the international microbial limit standard.The results show.Escherichia col and Salmonella aye not detected in 374 samples, StaphyloCOCCUS aureus detection rate iS 1.87%.the total number of colonies iS basically consistent with the standard.and the proportion of qualiifed product are 93I3%,96.36%,100%,85%,88.89%in fish products,frozen fish,shrimp,mollusks and meals respectively,coliform group is the main contaminated bacteria,the proportion of qualiifed product in above species are 58.53%,77.38%,72.73%,45%and 100%,respectively. Key words:aquatic;food inspection;microbial contamination;limit standard 水产品是我国出口的大宗产品之一,近几年产 世界各国及国际组织对水产品中微生物检测提 量及出口量不断上升。然而水产品在养殖、捕捞、 出了日益严格的要求,除了不可检出致病菌外,菌 贮藏、加工、运输、销售等环节容易受到病原微生 落总数也不可超标 。结合我国出口水产品微生物检 物的污染l1I, 因此,病原微生物检测是水产品及其 测情况,进一步研究比较世界各国及国际权威组织,加工品卫生检测中的一项重要工作,关系到消费者 如:欧盟委员会、国际食品微生物规格委员会、美 的健康及生命安全。其中沙门氏菌(Salmonella 国食品和药物管理局(FDA)、食品法典委员会 CMSF)等 spp.)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等 (CAC)、国际食品微生物标准委员会(I被认为是污染水产品的重要致病菌 ,已引起各个 根据各自特点及风险评估数据发布的水产品微生物 检验规定阎,不但对我国制订水产品微生物检验标准 国家卫生检测部门的广泛重视。 收稿13期:2011-09—08 基金项目:山东省科技攻关计划项目(2010GGC10522)。 作者简介:贾爱荣(1981一),女,山东人,博士,助理研究员,研究方向:微生物学。E-mail:jiaairong_.701@yahoo.com.cn。 为通讯作者:刘昌衡,男,研究员,研究方向:食品加工新技术、海洋活性物质。 2012年第1期 贾爱荣,等:出口水产品中微生物污染调查分析及限量探讨 ・25・ 具有十分重要的借鉴意义,而且有利于打破国外水 进行比较分析I】o/。 产品微生物限量技术堡垒,促进水产品出口,同时 也可将不合格水产品拒于国门之外,对保障我国水 产品安全具有十分现实的意义。 2011年3月一6月,笔者对山东省沿海部分企 业待出口的水产品进行检测调查,现将微生物检测 2结果与分析 2.1菌落总数的测定 检测的374份共lO种待出口水产品中菌落总 数<1×10s CFU/g所占的比例如下:调味沾粉蓝鳕鱼 情况报告如下。 1材料与方法 1.1材料与仪器 1.1.1试验材料 山东省沿海部分企业待出口的水产品,包括10种 冷冻水产品:调味蘸粉蓝鳕鱼片52份、调味蘸粉竹 荚鱼片57份、调味蘸粉鱿鱼片20份、调味沙丁鱼片 19份、白身鱼排51份、青鱼56份、鲐鱼片3O份、 蝶鱼24份、棒虾11份、鱼丸54份,共计采集374份 样品。 1.1.2试验菌株 沙门氏菌ATCC14028,金黄色葡萄球菌 ATCC6538,北京陆桥公司代购于美国模式培养物集 存库(American type culture collection,ATCC)。 1.1.3药品试剂 缓冲蛋白胨水(BPW)、亚硒酸盐胱氨酸增菌液 (SC)、亚硫酸铋琼脂(BS)、木糖赖氨酸脱氧胆盐琼 脂(XLD)、沙门氏菌显色培养基、平板计数琼脂 (PCA)、Baird—Parker琼脂、脑心浸出液肉汤(BHI)、 煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB),北京陆桥技术有限责 任公司提供;Coli ID选择性显色培养基,生物梅里 埃公司提供;兔血浆。 1.1.4仪器设备 HBM--400B型拍击式均质器,天津市恒奥科技 发展有限公司提供;YxQ—LS一60型立式压力蒸汽 灭菌器,上海博讯实业有限公司医疗设备厂产品; HzP一15O型全温震荡培养箱、DNP--9082型电热恒 温培养箱,上海精宏实验设备有限公司提供。 1.2沙门氏菌检测 根据食品安全国家标准GB/T 4789.4—2010食品 卫生微生物学检验沙门氏菌检验规定的方法,检测 水产品中沙门氏菌的污染情况。 1.3其他微生物检测 根据食品安全国家标准GB 4789.2—2010食品 卫生微生物学检验菌落总数测定,采用PCA对菌 落总数进行测定。根据食品安全国家标准GB 4789.10__2010食品卫生微生物学检验金黄色葡萄 球菌检测第一法,检测金黄色葡萄球菌。使用Coli ID 选择性显色培养基快速检测大肠菌群和大肠杆菌 。 1.4微生物限量分析 对国内外技术法规和标准中水产品微生物限量 片69.23%,调味沾粉竹荚鱼片80.70%,调味沾粉鱿 鱼片85.00%,调味沙丁鱼片89.47%,自身鱼排 74.51%,青鱼76.79%,鲐鱼片93.33%,蝶鱼 95.83%,棒虾100%,鱼丸100%;菌落总数<5× 10 CFU/g所占的比例依次为:94.23%,91.22%, 100%,100%,92.16%,96.43%,93.33%,100%, 100%,100%。 待出口水产品中菌落总数(CFU/g)污染分布隋 况见表1。 由表1可见,蘸粉类水产品菌落总数含量最高, 其次为冷冻鱼类,最后为棒虾和鱼丸。 检测的蘸粉类水产品(调味蘸粉蓝鳕鱼片、调 味蘸粉竹荚鱼片、调味蘸粉鱿鱼片、调味沙丁鱼片 和白身鱼排)为粗加工水产品,虽然有预烹煮环节, 但是在多步加工过程中易引入微生物污染。因此, 蘸粉类水产品菌落总数含量高于处理步骤较少的冷 冻鱼类。 鱼丸及棒虾的加工需要经过烹煮,属于半成品, 微生物污染较少,其中鱼丸的菌落总数全部在5× 104 CFU/g以下。 2.2大肠菌群的测定 调味蘸粉蓝鳕鱼片、调味蘸粉竹荚鱼片、调味蘸 粉鱿鱼片、调味沙丁鱼片、白身鱼排、青鱼、鲐鱼片、 蝶鱼、棒虾和鱼丸中,每克样品中大肠菌群的最近似 值(MPN值)小于10 MPN/g的比例分别为:40.38%, 31.58%,45.O0%,31.58%,15.69%,3.57%,73.33%, 45.83%,72.73%和100.00%;大肠菌群MPN值小于 100 MPN/g的比例依次为:59.62%,70.18%, 90.00%,63.16%,41.18%,44.64%,100.00%, 87.50%,90.9l%,100.O0%。 待出口水产品中大肠菌群污染分布情况见表2。 与菌落总数的测定结果类似,蘸粉类水产品的 大肠菌群含量也较高。鱼丸加工过程中对大肠菌群 的控制最好,含量都在10 MPN/g以下。 2.3大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及沙门氏菌的测定 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及沙门氏菌在待出 口水产品中的污染分布情况见表3。 由表3可知,所检测10类样品的大肠杆菌MPN 值均<3.0,也即0.1,0.01,0.001 g稀释度的大肠杆 菌检出阳性数为0。调味蘸粉蓝鳕鱼片、调味蘸粉竹 荚鱼片、白身鱼排和青鱼中均有金黄色葡萄球菌的 检出,检出率分别为3.84%,3.51%,1.96%和 ・26・ 农产品加工・学刊 2012年第1期 表2待出口水产品中大肠菌群污染分布情况 3.57%,其他产品中未检出。所检产品均未检出沙门 /MPN・g 氏菌污染,符合各标准要求。 2.4水产品检测结果与微生物限量标准的比较 将检测的10种待出口水产品划分为五大类,即 鱼制品(滚面包屑、预烹煮、冷冻):调味蘸粉蓝鳕 鱼片、调味蘸粉竹荚鱼片、调味沙丁鱼片、白身鱼 排;冷冻鱼:青鱼、鲐鱼片、蝶鱼;虾类(预烹煮、 去皮、冷冻):棒虾;软体动物(预烹煮、冷冻): 调味沾粉鱿鱼片;饭食(预烹煮、冷冻):鱼丸。本 研究检测结果与不同国家及组织的微生物限量标准 比较如下。 2.4.1 国内外技术法规和标准中鱼制品的微生物限量 各国家对鱼制品的微生物检验及限量指标的比 较见表4。 由表4可知,菌落总数的限定一般为1×10 5×10 CFU/g(m值)。关于大肠菌群的限量规定较 少,其中爱尔兰和以色列要求m值为500 CFU/g,新 表3大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及沙门氏菌在待出口水产品 西兰和英国标准规定检出数在100 CFU/g以下。 中的污染分布情况 8个国家对大肠杆菌的限量做出了要求,m值一般为 10 CFU/g。对于金黄色葡萄球菌的检测,一般要求低 于100 CFU/g。 将限量标准与本研究鱼制品(调味蘸粉蓝鳕鱼 片、调味蘸粉竹荚鱼片、调味沙丁鱼片、白身鱼排, 共179份)的检测结果相比较发现,检测样品中菌 落总数<5×10s CFU/g所占的比例依次为:94.23%, 91.22%,100%,92.16%,有6.70%(12/179)的产 品菌落总数超标。样品中大肠菌群<100 MPN/g的比 例依次为:59.62%,70.18%,63.16%,41.18%, <500 MPN/g的比例分别为:100.00%,92.98%, 100.00%,94.74%,98.04%。因此,检测样品仅符合 爱尔兰和以色列的大肠菌群限量规定。所检测样品 的大肠杆菌MPN值均<3.0,这符合各限量标准的最 高要求水平。各标准中对金黄色葡萄球菌的检测采 2012年第1期 贾爱荣,等:出口水产品中微生物污染调查分析及限量探讨 ・27・ 注:颁布数值单位为CFU/g。n:同一批次产品应采集的样品件数;c:最大可允许超出m值的样品数;m:微生物指标可接受水平的限量值; 指微生物指标的最高安全限量值。 用定量检测法,最高标准为10 CFU/g以下,而本研 物指标检验值大于m值ll(=l】。由此判断,本研究检测 究中执行行业标准,不能检出金黄色葡萄球菌,因 的样品符合金黄色葡萄球菌的限量标准。 4.2国内外技术法规和标准中冷冻鱼的微生物限量 而采用了定性检测法,检出便记录为阳性,检测的 2.阳性率为2.79%(5/179)。根据二级和三级采样方案 各国家对冷冻鱼的微生物检验及限量指标的比 规定,在n个样品中允许有≤c个样品其相应的微生 较见表5。 表5各国家对冷冻鱼的微生物检验及限量指标的比较 对比了6个国家或组织对冷冻鱼微生物的检验 定检出数在100 CFU/g以下。爱尔兰和以色列规定大 项目及其限量指标。菌落总数的限定为1×10s~5× 肠杆菌不得检出。对于金黄色葡萄球菌的检测,一 10 CFU/g(m值,表5)。爱尔兰和以色列规定大肠 般要求低于100 CFU/g。 菌群的限量标准<10 CFU/g,冰岛和新西兰标准则规 本研究检测的冷冻鱼类(青鱼、鲐鱼片、蝶鱼) 农产品加工・学刊 2012年第1期 共110份,菌落总数<5×10 CFU/g所占的比例依次 为:96.43%,93.33%,100%,仅有3.64%(4/110) 的产品菌落总数超标。样品中大肠菌群<i00 MPN/g 的比例依次为:44.64%,100.00%,87.50%,超标率 为22.62%。青鱼的大肠菌群含量严重超标,而30份 鲐鱼片均<10 MPN/g,符合最高标准。所检测样品 的大肠杆菌MPN值均<3.0,符合各限量标准的最高 要求水平。冷冻鱼类中金黄色葡萄球菌的总检出率 为1.82%(2/110)。 2.4.3 国内外技术法规和标准中虾类的微生物限量 各国对虾类的微生物检验及限量指标的比较见 表6。 由表6可知,菌落总数的限定一般为1 X 10s CFU,g (m值),西班牙和荷兰要求m值为5×104 CFU/g。 表6各国家对虾类的微生物检验及限量指标的比较 各国对软体动物的微生物检验及限量指标的比 104 CFU/g,符合各标准中的最高要求。大肠菌群< 较见表7。10 MPN/g和<100 MPN/g的比例分别为:72.73%和 由表7可知,其中4个国家或组织要求菌落总 90.91%。所检测样品的大肠杆菌MPN值均<3.0,符 数的限定为5 X 10 CFU佞(m值)。4个国家对大肠 表7各国家对软体动物的微生物检验及限量指标的比较 4个国家对大肠菌群的含量进行了限定,m值为 10 CFU/g或100 CFU/g。对大肠杆菌的限量标准中, 最高要求m值为10 CFU/g。对于金黄色葡萄球菌的 检测,一般要求需要低于100 CFU/g。 检测的11份棒虾样品中菌落总数均<5 X 合各限量标准的最高要求水平。金黄色葡萄球菌的 检出率为0,符合各种标准。 2.4.4 国内外技术法规和标准中软体动物类的微生 物限量 菌群的含量进行了限定,除英国要求低于100 CFU/g 检测的20份调味沾粉鱿鱼片品中菌落总数< g的比例为85%,15%的菌落总数在 外,其他3种标准要求m值为10 CFU/g。对大肠杆 5×10 CFU/g。大肠菌群<10 MPN/g的比例仅为 菌的限量规定中,一般要求m值为10 CFU/g。对于 l0 ~5×10 CFU/45%。<100 MPN/g的比例为90%。所检测样品的大 金黄色葡萄球菌的检测,一般要求低于100 CFU/g。 2012年第1期 贾爱荣,等:出口水产品中微生物污染调查分析及限量探讨 ・29・ 肠杆菌及金黄色葡萄球菌均未检出。 由表8可知,仅我国有对熟制鱼丸菌落总数限 2.4.5 国内外技术法规和标准中饭食类的微生物限量 量的专门规定,要求m值为5×104 CFU/g,其他国家 各国对饭食类的微生物检验及限量指标的比较 对饭食类菌落总数限定的最高标准为10 CFU/g(m 见表8。 值)。列举项目中仅西班牙对饭食类大肠菌群的含量进 表8各国家对饭食类的微生物检验及限量指标的比较 行了限定,m值为100 CFU/g。对大肠杆菌的限量要 参考文献: 求是不得检出或m值低于5,20 CFU/g。对于金黄色 [1】Lindkvist K B,Trondsen T,Xie J H.Restructuring the 葡萄球菌的检测,一般要求低于10 CFU/g。 Chinese seafood industry,global challenges and policy im— 检测的54份鱼丸样品中菌落总数均<5×104 plications[J].Mairne Policy,2008,32(3):432—441. 2】 Su Y C,Liu C C.Vibrio parahaemolyticus:A concern of CFU/g,符合我国标准,但是<104 CFU/g的比例为 [88.89%。大肠菌群、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌均 未检出,符合各种标准。 3结论 seafood safety口J.Food Microbiology,2007,24(6):549- 558. 【3】 Norhana M N W,Poole S E,Deeht H C,et a1.Preva— lence,persistence and control of Salmonella and Listeria in (1)检测的5大类水产品中,普遍存在菌落总数 shrimp and shrimp products:A review[J].Food Control, 2010,21(4):343—361. 和大肠菌群超标。在菌落总数测定中,符合普遍标 [4】 Mahmond S M B.Effect of X—ray treatments on inoculated Escheriachia coli O157:H7,Salmonella enterica,Shigella 准的比例分别为:鱼制品93.3%(<5×10s CFU/g ̄, 冷冻鱼96.36%(<5×10 cvu/g),虾类100%(<5 x lfexneri and Vibrio parahaemolyticus in ready——to——eat 10 CFU/g),软体动物85%(<5×10 CFU/g),饭食 类88.89%(<10 cvu/g ̄。大肠菌群测定中,上述种 类符合普遍标准的比例分别为:58.53%(<100 MPN/g),77.38%(<100 MPN/g),72.73%shrimp叨.Food Microbiology,2009,26(8):860-864. 【5】 Feldhusen F.The role of seafood in bacterial food borne di~ seases IJI.Microbes and Infection,2000,2(13):1 651— 1 660. 6】 Simon S S,Sanjeev S.Prevalence of enterotoxigenic staph— (<10 [ylococcus aureus in fishery products and fish processing MPN/g),45%(<10 MPN/g),100%(<10 MPN/g)。 (2)金黄色葡萄球菌仅在鱼制品及冷冻鱼中有检 测,检出率分别为2.79%(5/179)和1.81%(2/1 10), factory workers【J1.Control,2007,18(12):1 565—1 568. [7】 筱军.出口水产品细菌不可超标『J].饲料与畜牧,1993 (5):11. 符合所列各国际标准,但是我国规定金黄色葡萄球 [8 钟耀广.食品安全学【8JM】.北京:化学工业出版社, 20o5. 菌不得检出。 (3)大肠杆菌和沙门氏菌均未检出。 [9】 严纪文,朱海明,宋曼丹,等.Coli ID选择性显色培 本研究调研了国内外食品安全法规要求,并通 养基快速检测食品中大肠菌群和大肠杆菌的效果观 察『J].广东卫生防疫,1999,25(3):13—15. 过实例对微生物限量进行了探讨,希望在企业制定 【10]吕志平.国内外技术法规和标准中食品微生物限量[M1. 或更新出口产品企业标准时能给以指导。 北京:中国标准出版社,2002.