专利名称：基于可控型DNA聚合酶和外切酶活性的DNA重组
酶的制备方法及其应用
专利类型：发明专利发明人：刘喜朋,杜飞
申请号：CN201410466583.7申请日：20140912公开号：CN104195161A公开日：20141210
摘要：本发明属于蛋白质工程和基因克隆技术领域，具体为一种基于可控型DNA聚合酶和外切酶活性的DNA重组酶的制备方法及其应用。具体步骤如下：(1)构建DNA重组酶的表达载体；(2)改造DNA重组酶的DNA聚合酶和3’外切酶活性；(3)测定DNA重组酶突变体水解双链DNA时生成的5’单链突出端长度，(4)验证制备的DNA重组酶生成5’单链DNA突出端的长度和基因克隆效率。本发明的有益效果在于：其制备的5’单链突出端的长度可控，维持在15-25个核苷酸范围内，使得克隆效率和准确率达到最高，利用中等效率的感受态细胞即可满足克隆要求。制备的DNA重组酶可用于基因克隆、点突变等基因工程领域。
申请人：刘喜朋,杜飞
地址：200240 上海市闵行区沧源路770弄31号甲201室
国籍：CN
代理机构：上海新天专利代理有限公司
代理人：张宁展
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