L-精氨酸预处理对肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

第２２卷第ｌ期　２０ｌ０年１月　肝胆胰外科杂志　Ｖ（Ｊ１．２２　Ｎ【１．１　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｐａｔｏｐａｎｃｒｅａｔｏｂｉｌｉａｒｙ　Ｓｕｒｇｅｒｙ　Ｊａｎ．２０１０　Ｌ一精氨酸预处理对肝硬化大鼠肝脏缺血　再灌注损伤保护作用的实验研究　张志强，蔡兵，吴鸣宇　（尢锡市人民医院肝胆外科．江苏无锡２１４０２３）　［摘要］　目的　探讨１　一精氨酸（Ｌ—ａｒｇｉｎｉｎｅ，Ｌ－ａｒｇ）预处理对硬化肝脏缺血再灌注（ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ，Ｉ／Ｒ）损伤　的保护作用及机制方法　采用硫代乙酰胺（ｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅ，ＴＡＡ）复制大鼠肝硬化模型，然后阻断第５叶入肝血　流３０　ｒａｉｎ，再灌注６０　ｒａｉｎ，建立部分肝缺血再灌注模型：２４只肝硬化大鼠随机分成４－＃ｇ（ｎ＝６）：（！）肝硬化大鼠对　照组（对照组），仅分离肝周围韧带，不进行肝门阻断及再灌注；②肝硬化缺血再灌注组（缺血再灌注组）；③Ｌ一精　氨酸预处理组（精氨酸组）；④Ｉ　一硝基精氨酸甲酯（Ｌ－ｎｉｔｒｏ—ａｒｇｉｎｉｎｅ—ｍｅｔｈｙ　Ｌ　ｅｓｔｅｒ，Ｌ－ＮＡＭＥ）预处理组（硝基精氨酸　甲酯组）　后三组分别于缺血前ｌ５　ｒａｉｎ经门静脉给予生理盐水、Ｉ　一ａｒｇ和Ｌ—ＮＡＭＥ处理．测定再灌注后肝内门　体分流、血清门冬氨酸转氨酶（ａｓｐａｒｔａｔｅ　ａｎａｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＡＳＴ）、丙氨酸转氨酶（ａｌａｎｉｎｅ　ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＡＩ　ｒｒ）、　乳酸脱氢酶（１ａｃｔａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＬＤＨ）和肝组织超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）、丙二醛（ｎｌａ１．　ｏｎｄｉａｈｔｅｈ，／ｄｅ，ＭＤＡ）、一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ，ＮＯ）、三磷酸腺苷酶（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ　ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＴＰａｓｅ）等的变化　、采　用门静脉连续输注山梨醇法．测定肝脏山梨醇摄取率，计算肝内门一体分流　结果　缺血再灌注组与对照组比　较：功能性肝血流量（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｂｌｏｏｄ　ｆｌｏｗ，ＦＨＢＦ）、ＳＯＤ显著降低（Ｐ＜０．０１），肝内分流率、肝内分流量　（ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｅ　ｓｈｕｎｔ　ｆｌｏｗ，ＩＨＳ｝’）、ＭＤＡ、ＡＩ　、ＡＳｑ　、ＬＤＨ显著升高（Ｐ＜Ｏ．０ｌ或Ｐ＜Ｏ．０５）；精氨酸组与缺血再灌注组　比较：ＮＯ、ＦＨＢＦ、ＳＯＤ、Ｎａ￣／Ｋ　ＡＴＰａｓｅ、Ｃａ“．ＡＴＰａｓｅ、Ｍｇ：　一ＡＴＰａｓｅ显著升高（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜Ｏ．０５），肝内分流率、　ＩＨＳＦ、ＭＤＡ、ＡＩＪＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ显著下降（Ｐ＜０．０ｌ或Ｐ＜０．０５）：硝基精氨酸甲酯组与缺血再灌注组比较：ＮＯ、ＦＨＢＦ　显著下降（Ｐ＜Ｏ．０１），ＩＨＳＦ、ＭＤＡ显著升高（Ｐ＜０．０１）。结论Ｌ—ａｒｇ对硬化肝脏缺血再灌注损伤有保护作用，其保　护机制是通过增加肝脏内源性Ｎ０．从而减少肝内门　体分流．增加功能性肝血流以及改善细胞能量代谢而实　现的，　［关键词］肝脏；肝硬化；缺血再灌注损伤；肝内门一体分流；一氧化氮；山梨醇；Ｌ一精氧酸；大鼠　［中图分类号］　Ｒ３　［文献标识码］Ａ　［文章编号］　１００７—１９５４（２０１０）０１—００１３－０５　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　Ｌ・－ａｒｇｉｎｉｎｅ　ａｇａｉｎｓｔ　ｌｉｖｅｒ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ・・ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ　ＺＨＡＮＧ　Ｚｈｉｑｉ￣ｍｇ，Ｃ４，Ｂｉｎｇ．　Ｍｉｎ￣＇ｕ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｈｅｐ（ａｏｂｉｌｉａｒｙ　Ｓｕｒｇｅｒｙ．ｔｈｅ　Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｗｕｘｉ　Ｃｉｏ　，Ｗｕｘｉ　２１４０２３　墨墨衄Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ａｎｄ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　Ｌ－ａｒｇｉｎｉｎｅ　ａｇａｉｎｓｔ　ｌｉｖｅｒ　ｉｓｏｈｅｍｉｃ－　ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（Ｉ／Ｒ）ｉｎｊｕＬ－ｙ　ｉｎ　ａ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ　ｃｉｎ＇ｈｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｏｒａｌ　ａｄ—　ｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｉｏａｅｅｔａｍｉｄｅ　ＣＦＡＡ）．Ｔｈｅ　ｒａｔｓ　ｕｎｄｅｎｖｅｎｔ　ｐａｒｔｉａｌ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｌｆｌｓｉｏｎ．Ｔｗｅｎｔｙ—ｆｏｕｒ　ｅｉｒ—　ｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｎｆｉｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　４　ｇｒｏｕｐｓ（ｎ＝６）．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ａｌｓｏ　ｓｅｒｖｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｓｈａｍ—ｏｐ—　ｅｒａｌＰｔｔ　ｃｏｎｔｒｏ１．Ｏｔｈｅｒ　ｔｈｒｅｅ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ　ｔｏ　３０　ｒａｉｎ　ｌｏｂａｒ　ｉｓｃｈｅｍｉａ　ａｎｄ　６０　ｍｉｎ　ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．Ｏｆ　ｔｈｅｎ１．　ｇｒｉｎｌｐｓ　Ｉ／Ｒ，Ｌ－ａｒｇｉｎｉｎｅ（Ｌ—ａｒｇ）ａｕｄ　Ｉ，－ＮＡＭＥ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｎｏｒｎｌａｌ　ｓａｌｉｎｅ，Ｌ－ａｒｇ　ａｎｄ　Ｌ－ｎｉｔｒｏ—ａｒｇｉ—　ｎｉｎｅ—ｍｅｔｈｙ　Ｌ－ｅｓｌｍ‘（Ｌ－ＮＡＭＥ）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｌｌ　ｄｒｕｇｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｊｅｃ，ｔｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｃａｔｈｅｔｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｉｓｔａｌ　ｉｌｅｏｃｏｌｉｅ　ｖｅｉｎｓ．１ｎｔｒａｐｏｒｔａｌ　ｉｎｆｕｓｉｏｎ　ｏｆ　ｓｏｒｂｉｔｏｌ（１　０　ｎｕｎｏｌ，ｑ　，０．２　ｍｌＪｍｉｎ）ｃｏｍｍｅｎｃｅｄ　ａｆｔｅｒ　６０　ｉｎｉｎ　ｒｅｐｅｆｆｕｓｉｏｎ，ａｔ　ｔｈｅ　ｓａｎｌｅ　ｔｉｍｅ，ｂｌｏｏ）１　ｓａｍｐｌｅ　ｗａｓ　ｄｒａｗｎ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｉｕｇｕｌａｒ　ｖｅｉｎ　ｃａｔｈｅｔｅｒ　ｆｏｒ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｔｅｓｔ，ｓｕｃｈ　ａｓ　ａｌａｎｉｎｅ　ａｌｌｌｉｌＨ）ｔｒｍ￣ｓｆｅｒａｓｅ（ＡＩ　），ａｓ１）ｍｌａｔｅ　ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＳ　ａｎｄ　ｌａｃｔａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＬＤＨ）．Ｔｗｏ　ｍｉｎｕｔｅｓ　ａｆｔｅｒ　ｕ’ｎｔｌ’ａｔｌ　ｏｎ　ｕｆ　ｓｎｒ１）ｉｔｏｌ　ｉｎｆｕｓｉｏｎ，ｂｌｏｏｄ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｒａｗｎ　ｓｉｍｕｈａｎｅｏｕｓｌｙ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｃａｒｏｔｉｄ　ａｒｔｅｒｙ．ｐｏｒｔａｌ　ｖｅｎｏｕｓ　ａｎｄ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｖｅｎｏｕｓ　ｃａｔｈｅｔｅｒｓ　ｆｏｒ　ｓｏｒｂｉｔｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｓｓａｙ．Ｐｏｒｔａｌ　ｖｅｎｏｕｓ　ｆｌｏｗ（ＰＶＦ）ａｎｄ　ｈｅｐａｔｉｃ　ａｒｔｅｒｉａｌ　ｌｆｏｗ（Ｈ　ＡＦ）ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｖｉａ　ｅｌｅｃｔｒｏｍａｇｎｅｔｉｃ　ｆｌｏｗ　ｐｒｏｂｅｓ．Ｈｅｐａｔｉｃ　ｓｏｒｂｉｔｏｌ　ｕｐｔａｋｅ　ａｎｄ　ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ　ｓｈｕｎｔ　ｆｌｏｗ　（ＩＨＳＦ）ｗｅｒｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ＰＶＦ，ＨＡＦ　ａｎｄ　ｓｏｒｂｉｔｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｏｒｔａｌ　ｖｅｉｎ，ｈｅｐａｔｉｃ　ｖｅｉｎ　ａｎｄ　ｃａｒｏｔｉｄ　收稿丑期：２００９—０２—２４　作者简介：张志强（１９７５一），男．江苏泅洪人．医学硕｝：，主治医师。　通讯作者：蔡兵，主任医师，顾十　ｔ导师．Ｅ－）ｎａｉｌ：（・ａ　ｎｇ＠ｗｕｘｉｐｈ．ｃｏｒｎ。　一ｌ３一　第２２卷　肝胆胰外科杂志　第１期　ａｒｔｅｒｙ．Ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，ｌｅｓｉｏｎ　ｌｉｖｅｒ　ｌｏｂｅｓ　ｅｘｃｉｓｅｄ　ｆｏｒ　ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｓｓａｙ，ｓｕｃｈ　ａｓ　ｓｕｐｅｒ—　ｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ），ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ），ｎｉｔｉｒｃ　ｏｘｉｄｅ　ｓｙｎｔｈａｓｃ（ＮＯＳ），ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ（ＮＯ）ａｎｄ　ＡＴＰａｓｅ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｉ／Ｒ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ　ｓｈｕｎｔｉｎｇ　ｆｒａｃｔｉｏｎ，ＭＤＡ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ，ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ＳＯＤ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ．Ｌ—ａｒｇ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ　ｓｈｕｎｔｉｎｇ　ｆｒａｃｔｉｏｎ，ＭＤＡ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ，ａｎｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ＳＯＤ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｐｒｏｔｅｃ—　ｔｉｖｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　Ｌ—ａｒｇ　ｃａｎ　ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ　ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ　Ｌｉｖｅｒ，ＩＹＲ　ｉｎｊｕｒｙ　ｍａｙ　ｂｅ　ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｄ　ｔｏ　ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ　ＩＨＳＦ，ｉｎ—　ｃｒｅａｓｉｎｇ　ＦＨＢＦ　ａｎｄ　ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ　ｃｅｌｌ　ｍｅｔａｂｏｌｉｚｅｓ　ｂｙ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ＮＯ．　■　■墨匝圈ｌｉｖｅｒ；ｌｉｖｅｒ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ；ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｉｎｊｕｒｙ；ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ　ｐｏｒｔａｌ　ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ｓｈｕｎｔｓ；ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ；ＳＯｒｂｉｔｏｌ；Ｌ—ａｒｇｉｎｉｎｅ；ｒａｔｓ　肝脏手术中出血以及肝血流阻断都会造成肝脏　缺血再灌注损伤．而大部分需要外科手术的病肝存　在不同程度的肝硬化，肝硬化肝脏对缺血更敏感，也　更易发生再灌注损伤。缺血再灌注损伤已经成为硬　化肝脏手术后的主要死因。硬化肝脏缺血再灌注损　伤机制还不是很清楚，目前尚缺乏有效防治硬化肝　脏缺血再灌注损伤的方法。　到肝素化。分别作左颈动脉插管用于颈动脉血样的　采集，右颈静脉插管用于输液、输血及采血。选２根　回结肠静脉插管，其中一根插入门静脉主干，用于门　静脉血样采集和注射药物；另一根插入回结肠静脉　内２　ｃｍ，连接微量注射泵，用于输注山梨醇。分离门　静脉和肝动脉，置人口径合适的电磁血液流量计探　头，测定血流量。２２Ｇ套管针穿刺肝叶，潜行至肝静　脉处，用于留取肝静脉血样。动脉夹完全阻断第５叶　肝蒂３０　ｒａｉｎ后再予开放６０　ｍｉｎ，即建立了部分肝　缺血再灌注损伤模型。　对照组仅分离肝周围韧带。不进行肝门阻断及　近年研究表明［１－２１，正常肝脏及硬化肝脏均存在　肝内门一体分流ｆｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ　ｐｏｒｔａｌ　ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ｓｈｕｎｔ．　ｉｎｇ，ＩＰＳＳ）。另有研究表明ｌ３－４１，在硬化肝脏及其缺血再　灌注损伤中，血管活性物质一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ，　ＮＯ）及一氧化氮合酶明显紊乱，ＮＯ有可能参与了　ＩＰＳＳ的调控。我们以肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注为　模型，以Ｌ．精氨酸（Ｌ—ａｒｇｉｎｉｎｅ，Ｌ—ａｒｇ）提供氮源，研究　ＮＯ能否通过调节ＩＰＳＳ，增加功能性肝血流量（ｆｕｎｃ—　ｔｉｏｎａｌ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｂｌｏｏｄ　ｆｌｏｗ，ＦＨＢＦ），改善细胞能量代　谢，从而保护肝脏，探讨预处理对硬化肝脏的保护机　制　ｌ材料和方法　再灌注；其余三组阻断第５叶人肝血流３０　ｍｉｎ．再　灌注６０　ｒａｉｎ。其中。对照组于分离韧带后、缺血再灌　注组于缺血前１５　ｒａｉｎ经门静脉输注生理盐水（２．５　ｍＬ／ｋｇ体质量）；精氨酸组和硝基精氨酸甲酯组于缺　血前１５　ｍｉｎ分别经门静脉输注Ｌ—ａｒｇ（３００　ｍｇ／ｋｇ体　质量［７１）和Ｌ—ＮＡＭＥ（１０　ｍｇ／ｋｇ体质量）。再灌注６０　ａｉｒｎ时（对照组于分离韧带后１０５　ｍｉｎ后），测定各　组门静脉血流量（ｐｏｒｔａｌ　ｖｅｎｏｕｓ　ｆｌｏｗ．ＰＶＦ）及肝动脉　血流量（ｈｅｐａｔｉｃ　ａｒｔｅｒｉａｌ　ｆｌｏｗ，ＨＡＦ），经颈静脉导管　１．１肝硬化动物模型的建立雄性ＳＤ大鼠（徐州　取静脉血０．８　ｍＬ，待测血ＡＳＴ、Ａ　、ＬＤＨ。然后经门　静脉输注Ｄ．山梨醇ｆ１０　ｍｍｏｌ／Ｌ，０．２　ｍＬ／ｍｉｎ），２　ｍｉｎ　后同时经颈动脉、门静脉、肝静脉导管各取血１．０　ｍＬ。取血应缓慢、匀速，时间均控制在１０　ｍｉｎ，以保　医学院动物中心提供），体质量２５０～３００　ｇ。在饮用　水中加入硫代乙酰胺（ｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅ，ＴＡＡ），初始浓　度为０．０３％，自由饮水，颗粒饲料喂养每周根据体质　量调整饮用水中ＴＡＡ浓度，每周体质量变化控制在　１５　ｇ以内，共饲养１２周，总体质量变化控制在６０只　以内【　。　证生命体征平稳。为补偿充血容量损失，术中适当　补充生理盐水约３　ｍＬ．取血期间经颈静脉输注预　先准备的肝素化新鲜鼠血（０．１　ｍＬ／ｍｉｎ）。血样注入　２４只肝硬化大鼠随机分成４组　＝　１．２　实验分组离心管中，待测山梨醇浓度。取血结束后立即处死　大鼠，迅速切下第５肝叶检测超氧化物歧化酶（ＳＵ—　ｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）、丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｖｄｅ，　６）：①肝硬化大鼠对照组（对照组）；②肝硬化缺血再　灌注组（缺血再灌注组）；③Ｌ．精氨酸预处理组（精氨　酸组）；④Ｌ一硝基精氨酸甲酯预处理组（硝基精氨酸　甲酯组）　ＭＤＡ）、ＮＯ、一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ，　ＮＯＳ）、钠／钾．三磷酸腺苷酶ＡＴＰａｓｅ。　（Ｎａ＋／Ｋ　一ａｄｅｎｏｓｉｎｅ　肝脏缺血再灌注损伤模型及手术操作：参考李　向农等［　Ｉ及Ｍｏｌｉｎｏ等［６１山梨醇摄取率实验。２％戊巴　ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，Ｎａ　／Ｋ　．ＡＴＰａｓｅ）、Ｃａ　．ＡＴＰａｓｅ、Ｍｇ　．　比妥腹腔麻醉（０．１５　ｍＬ／１００　ｇ体质量），麻醉成功　后，尾静脉缓慢注射肝素（３０　Ｕ／ＩＯ０　ｇ体质量）以达　一ｌ－３　肝内门一体分流的测定　根据山梨醇代谢特　点，肝脏山梨醇摄取率可代表ＦＨＢＦ占总肝血流量　ｌ４一　第２２卷　张志强，等：Ｌ．精氨酸预处理对肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注损伤保护作用的实验研究　第ｌ期　（ｔｏｔａｌ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｂｌｏｏｄ　ｆｌｏｗ，ＴＨＢＦ）的比例，　采用门静　脉连续输注山梨醇的方法，测定肝脏山梨醇摄取率。　血山梨醇浓度用酶分光光度法测定　Ｉ。由于颈动脉　和肝动脉ｍ中的山梨醇浓度相等，所以肝脏山梨醇　精氨酸甲酯组ＰＶＦ及ＴＨＢＦ较缺血再灌注组显著　降低（Ｐ＜０．０５）：肝内分流率在对照组为（２８．０％±　０．９％１，缺血再灌注组显著升至（６６．５％±６．３％）（，Ｊ＜　０．０１），精氨酸组较缺血再灌注组显著降低（Ｐ＜　０．０１）。硝基精氨酸甲酯组则显著升高至（７２．６％±　５．８％）（Ｐ＜Ｏ．０１）；缺血再灌注组较对照组的ＩＨＳＦ明　摄取率用以下公式计算：　肝脏　ｌ】梨醇摄取率（％）：Ⅱ　ｙ　毫筹　｛｝｝　裂　Ｌ　旦　×ｉｏｏ％　显增加而ＦＨＢＦ明显下降（Ｐ＜０．０１），硝基精氨酸甲　其中，ＳＰＶ、ＳＣＡ、ＳＨＶ分别表示门静脉、颈动脉、肝　静脉的山梨醇浓度。　ＦＨＢＦ和肝内分流翳（ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ　ｓｈｕｎｔ　ｆｌｏｗ，　酯组ＦＨＢＦ进一步降低，精氨酸组与缺血再灌注组　比较，ＩＨＳＦ降低（Ｐ＜０．０５），而ＦＨＢＦ显著升高（Ｐ＜　０．０１）（见表２）。　ＩＨＳＦ）分别朋下列公式计算：ＦＨＢＦ＝ＴＨＢＦ￣肝脏山梨　醇摄取率：ＩＨＳＦ＝ＴＨＢＦ—ＦＨＢＦ。　２－３　血生化指标　缺血再灌注组ＡＩＪＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ　显著高于对照组（Ｐ＜０．Ｏ１）；精氨酸组ＡＩＪｒｒ、ＡＳＴ、ＬＤＨ　则显著低于缺血再灌注组（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）：硝基精氨酸甲　酯组ＡＩＪＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ分别与对照组比较差异无统计　学意义（Ｐ＞０．０５）（见表３）。　１．４　血生化及肝组织生化定量分析　血清Ａ　、　ＡＳＴ、ＬＡＨ南ＡＵ１０００全自动生化分析仪检测。肝脏　组织ＳＯＤ、ＭＤＡ、ＮＯ、ＮＯＳ、ＡＴＰａｓｅ由南京建成生物　］一程研究所提供的试剂盒检测。　２．４肝组织生化指标　缺血再灌注组ＳＯＤ显著低　于对照组（Ｐ＜０．０１），而’ＭＤＡ显著高于对照组（Ｐ＜　１．５统计学方法　以均数±标准差表示，用Ｓｉｇｍａｓ—　ｔａｔ统计学软件对数据进行分析。对照组与缺血再灌　０．０５）；精氨酸组ＳＯＤ显著高于缺血再灌注组（Ｐ＜　０．０１），而ＭＤＡ显著低于缺血再灌注组（Ｐ＜Ｏ．０１），硝　基精氨酸甲酯组ＭＤＡ却显著高于缺血再灌注组　（Ｐ＜Ｏ．０１）（见表４）。　注组比较采用ｔ检验。缺血再灌注组、精氨酸组、硝　基精氨酸甲酯组之问比较采用单冈素方差分析　（ＡＮＯＶＡ）ｑ检验，检验水准ｃＬ＝Ｏ．０５。　２　结果　缺血再灌注组与对照组比较ＮＯ以及ＮＯＳ均　没有湿著变化（Ｐ＞０．０５）；精氨酸组ＮＯ、总一一氧化氮　２．１　山梨醇摄取率　对照组Ｌ【Ｊ梨醇摄取率为　合酶（Ｔ—ＮＯＳ）、内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）均显著　高于缺血再灌注组（Ｐ＜０．０１或（Ｐ＜０．０５），硝基精氨酸　甲酯组ＮＯ显著低于缺血再灌注组（Ｐ＜Ｏ．０１）（见表　５）。精氨酸组Ｎａ＋／Ｋ　ＡＴＰａｓｅ、Ｍｇ２　一ＡＴＰａｓｅ、Ｃａ　—ＡＴ．　ｆ７２．０％±０．９％）。缺血再灌注组山梨醇摄取率较对照　组显著降低（Ｐ＜０．０１）。精氨酸组山梨醇摄取率较缺　ｍ１再灌注组有明显恢复（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）（见表】）。　２．２　肝脏血流动力学　缺血再灌注组ＰＶＦ及　Ｐａｓｅ均显著高于缺血再灌注组（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１或Ｐ＜０．０５）　（见表６）　ＴＨＢＦ较对照组显著降低（Ｐ＜Ｏ．０５）：精氨酸组ＰＶＦ　及ＴＨＢＦ较缺血再灌注组显著升高（Ｐ＜Ｏ．０５）；硝基　表１　门静脉、肝静脉、颈动脉的山梨醇浓度及肝脏山梨醇摄取率　ｊ对照组比较：　Ｐ＜Ｏ．０５，　Ｐ＜Ｏ．０１；与缺魄再灌注组比较：＃Ｐ＜Ｏ．０５，　Ｐ＜０．Ｏ１　—１５—　第２２卷　表３血清肝脏酶学指标（Ｕ／Ｌ）　组别　对照组　ｎ　ＡＩ　ＡＳＴ　１６０．７￣２４．１　肝胆胰外科杂志　第１期　表４肝组织生化定量指标　ＬＤＨ　７５１．０￣９１．２　６　５５．０￣９．２　缺血再灌注组　精氨酸组　６　１１２．３±９．５　３９７．２＿＋２８．６　６　８８．５－＋８．８　３２６．５－＋４７．７　１２６６．３±１０３．７￥　１００５．８￣９４．９　硝基精氨酸甲酯组６　１２２．３－＋１０．２　４２４．８－＋４１．３　１３５６．３￣１０２．８　与对照组比较：　Ｐ＜Ｏ．０５，　Ｐ＜Ｏ．Ｏｌ；缺血再灌注组比较：蝌Ｐ＜Ｏ．０１　与对照组比较：　Ｐ＜Ｏ．Ｏ１：与缺血再灌注组比较：　Ｐ＜０．０１　表５肝组织ＮＯ含量及ＮＯＳ活力　与缺血再灌注组比较：　Ｐ＜Ｏ．０５，　Ｐ＜Ｏ．Ｏ１　表６肝组织ＡＴＰａｓｅ活Ｊ￣（ＩｘｍｏｌＰｉ／ｍｇｐｒｏｔ／ｈｏｕｒ）　组显著升高（Ｐ＜Ｏ．０５），主要体现在ｅＮＯＳ升高（Ｐ＜　０．０１），说明Ｌ．ａｒｇ能够诱导肝内ｅＮＯＳ表达。并利用　底物Ｌ—ａｒｇ合成更多的ＮＯ。　我们的研究显示。ＮＯ和ＩＰＳＳ具有密切的关系。　李向农等的研究证实Ⅲ，正常肝脏存在ＩＰＳＳ。这些分　流管道直径大多小于１５　ｍ，于窦前区起自门静脉　末梢分支，绕过肝窦直接注入肝静脉　生理情况下这　些分流处于关闭状态，当肝窦阻力升高时，ＩＨＳＦ可　与缺血再灌注组比较：＃Ｐ＜Ｏ．０５．槲Ｐ＜Ｏ．Ｏｌ　３　讨论　高达门静脉血流量的７０％。血管铸型研究已经证　实［２１，肝硬化肝脏存在大量门静脉一肝静脉吻合。我　们通过测定山梨醇肝清除率发现．肝硬化大鼠存在　大量的ＩＰＳＳ，肝内分流率达（２８．Ｏ％±０．９％）。当硬化肝　脏再灌注时，缺血再灌注组肝内分流率显著增加至　（６６．５％－＋６－３％）（１９＜０．０１），ＦＨＢＦ也由对照组（６．１－＋０．７）　本研究表明：Ｌ—ａｒｇ预处理对硬化肝脏Ｉ／Ｒ损伤　有明显的拈抗作用，表现在肝酶ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ以　及肝组织内氧自由基介导的脂质过氧化产物ＭＤＡ　明显低于缺血再灌注组．而反映细胞能量代谢的　ＮａＶＫ　ＡＴＰａｓｅ、Ｍｇ２＋＿ＡＴＰａｓｅ、Ｃａ　￣－ＡＴＰａｓｅ以及细胞　内氧自由基清除剂ＳＯＤ明显升高，当用ＮＯＳ抑制　剂Ｌ．ＮＡＭＥ抑制ＮＯ合成后．ＡＬＴ、ＡｓＴ、ＬＤＨ、ＭＤＡ　显著升高，提示肝脏损害加重．说明ＮＯ在Ｌ．ａｒｇ对　硬化肝脏Ｉ／Ｒ损伤的保护中起了重要作用。　ＮＯ是由ＮＯＳ催化底物Ｌ—ａｒｇ生成。ＮＯＳ包括　三种同工酶，即神经型（ｎＮＯＳ）、内皮型（ｅＮＯＳ）和诱　ｍＬ／ｍｉｎ／ｌＯ０　ｇ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ显著下降到缺血再灌注　组的ｆ２．４－＋０．４）ｍｉｄｍｉｒｄｌ００　ｇ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１），　肝脏的有效灌注减少．进一步加重肝脏的损伤，从而　参与了硬化肝脏的Ｉ／Ｒ损伤。肝脏损伤加重主要体　现在血清ＡｓＴ、ＡＬＴ、ＬＤＨ升高，肝脏ＭＤＡ增加，　ＳＯＤ、ＡＴＰａｓｅ下降。缺血前给予ＮＯ底物Ｌ．ａｒｇ，再灌　注后测定肝组织ＮＯ含量为ｆ０．８６＿＋０．１１）ｌｘｍｏｌ／ｇＰｒｏｔ，　显著高于缺血再灌注组（０．６６－＋０．０７）ｌｘｍｏｌ／ｇＰｒｏｔ（Ｐ＜　生型（ｉＮＯＳ）。肝内只有后两者。其中ｅＮＯＳ是血管内　皮固有的，ｉＮＯＳ是由以内毒素为代表的细胞因子诱　导巨噬细胞、内皮细胞、肝细胞等产生的１８－－９］。虽然理　论上肝硬化大鼠门静脉中内毒素水平较高并可在　Ｉ／Ｒ时进一步升高，刺激肝脏ＮＯＳ表达加强和ＮＯ　０．０１）；精氨酸组ＴＨＢＦ较缺血再灌注组也显著增　加．更为重要的是肝内血流分配发生了变化，即　ＩＨＳＦ减少（Ｐ＜０．０５），ＦＨＢＦ增加（尸＜０．０１）。从精氨酸　的合成增加，但我们的研究显示，硬化肝脏Ｉ／Ｒ后．　肝脏组织ＮＯ含量减少，但是差异无统计学意义（　Ｏ．０５）。这可能是由于内毒素等刺激所造成的ＮＯＳ　表达加强及ＮＯ合成增加与内皮细胞受损所造成的　ＮＯＳ活性降低及ＮＯ减少相抵消，故Ｉ／Ｒ后肝组织　ＮＯ含量变化不大。精氨酸组Ｔ—ＮＯＳ较缺血再灌注　一组与缺血再灌注组的比较中我们可以看出：ＴＨＢＦ　的增加主要是由于ＰＶＦ增加所造成的，而ＨＡＦ无　明显变化。缺血前给予非选择性ＮＯＳ抑制剂Ｌ＿　ＮＡＭＥ，ＮＯ较缺血再灌注组显著降低（Ｐ＜０．０１）；随　着ＮＯ的减少．ＦＨＢＦ较缺血再灌注组也显著降低　（Ｐ＜０．０５），肝脏损伤加重，表现在较缺血再灌注组血　１６—　第２２卷　张志强，等：Ｌ一精氨酸预处理对肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注损伤保护作｝ｆｊ的实验研究　第１期　清ＡＬＴ、ＡＳＴ和ＬＤＨ升高（Ｐ＜０．０１），肝组织ＭＤＡ增　加（Ｐ＜０．０１）．．Ｌ．ａｒｇ预处理和Ｌ．ＮＡＭＥ预处理，分别　所知甚少，有待更深入的研究。　参考文献：　（１］Ｌｉ　ｘ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ　ＩＳ，ＮＭｔａｌｉｎ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｉ￣ｏｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　促进和阻断了硬化肝脏再灌注后肝脏内源性ＮＯ的　合成，继而分别增加和减少了ＦＨＢＦ、，最终分别减轻　和加重了肝脏的Ｉ／Ｒ损伤。Ｌ—ａｒｇ预处理上调的ＮＯ　不但｛Ｊ舂『节了ＩＰＳＳ。还可以增加门静脉血流，更有效地　增加ＦＨＢＦ。　ｏｆ　ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ　ｓｈｕｎｔｓ　ｉｎ　ａｎａｅｓｔｈｅｔｉｓｅｄ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｇｕｔ，２００３，５２（９）：　ｌ３３９—１３４６．　【２】张爱龙．杨镇，肖亮．等．血吸虫病性门脉高压症兔肝脏微血管　构造变化的研究ｌ　Ｊ１．微循环学杂志，２００７，ｌ７（２）：ｌ１一ｌ２．　【３】Ｇｏｈ　ＢＪ，Ｔａｎ　ＢＴ，Ｈｏｎ　ＷＭ．ｅｔ　ａ１．Ｎｉｔｉｒｃ　ｏｘｉｄｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ａｎｄ　通过本实验，我们认为Ｌ．ａｒｇ预处理能够增加　ＮＯ合成，从而增加ＦＨＢＦ，发挥对肝硬化大鼠肝脏　Ｉ／Ｒ损伤的保护作用。Ｌ，ａｒｇ预处理还改善了细胞的　能量代谢．表现在精氨酸组肝组织ＮａＴＫ　ＡＴＰａｓｅ、　Ｍｇ　Ａ　ｒＰａｓｅ、Ｃａ　．ＡＴＰａｓｅ较缺血再灌注组显著升高　（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）　Ｌ．ａｒｇ预处理增加肝脏ＮＯ含量的机制有　ｈｅｉｎｅ　ｘｙｇｅｎａｓｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｌｉｖｅｒ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ　ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏ１．２００６，１　２（４）：５８８－５９４．　［４ｊ　Ｊｏｒｇｅ　ＧＳ，Ｂａｒｂａｒａ　Ｉ　，Ａｉｎａ　ＲＶ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎ　ｃｉｎ４ｍｔｉｃ　ｒａｔ　ｌｉｖｅｒｓ：Ａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｃｏｎｔｒｉｂｕｔ—　ｉｎｇ　ｔｏ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ｂｉ０ａｖａ＿１ａｂ　ｙＩＪＪ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００８，　４７（４）：１２４８—１２５６．　【５】Ｌｉ　Ｘ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ　ＩＳ，Ｎａｆｔａｌｉｎ　Ｒ．Ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅ．ｉｎｄｕｃｅｄ　ｍａｃｒｏｎｏｄｕｌａｒ　ｅｉｒｒｈｏｓｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ　ｗｉｔｈ　ｎｏ　以下几方面：①缺血期因肝脏损伤而释放大量精氨　酸酶，再灌注后进入体循环，使内源性Ｌ—ａｒｇ消耗，　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｈｅｐａｔｏｌ，２００２，３６（４）：４８８—４９３．　ｆ６］Ｍｏｌｉｎｏ　Ｇ，Ａｖａｇｎｉｎａ　Ｐ，Ｂａｌｌａｒｅ　Ｍ，ｅｌ　ａ１．Ｃｏｍｂｉｎｅ（１　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｌｉｖｅｒ　ｐｌａｓｍａ　ｆｌｏｗｓ　ａｎｄ　ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ　ＮＯ生成原料不足【１０１。Ｌ．ａｒｇ预处理为ＮＯ的合成提供　了底物。②精氨酸组ｅＮＯＳ较缺血再灌注组显著升　高（Ｐ＜０．０１），提示Ｌ．ａｒｇ能诱导肝细胞及内皮细胞　ｅＮＯＳ表达增强，从而增加了肝脏组织ＮＯ含量。⑨　当ＮＯ发挥肝脏的保护作用后，有效灌注的改善也　将提供更多的氧及ＡＴＰ，并使Ｌ．ａｒｇ更有效地与肝　细胞及内皮细胞作用，产生更多的ＮＯ。　综上所述．我们的研究证明Ｌ—ａｒｇ预处理对硬　化肝脏Ｉ／Ｒ损伤具有保护作用。Ｌ—ａｒｇ通过增加肝脏　ＮＯ含量。从而增加了ＦＨＢＦ，改善肝细胞能量代谢，　ｓｈｕｎｔｉｎｇ［Ｊ］．Ｄｉｇ　Ｄｉｓ　Ｓｃｉ，ｌ９９ｌ，３６（９）：１１８９—１１９６．　【７】蘸敏，陈秀芳，郑巧敏．Ｌ．精氨酸对糖尿病大鼠肝损伤的保护作　用ＩＪ１．中华老年多器官疾病杂志，２００７，６（４）：２６７—２６９．　【８】Ｔｈａｈｎａｎｎ　Ｓ，Ｊａｙｅｔ　ＰＹ，Ｄｕｐｌａｉｎ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．ＮＯ，ａ　ｍａｊｏｒ　ｒｅｇｕ‘　ｌａｔｏｒ　ｏｆ　ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ａｎｄ　ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ　ｈｏｍｅｎｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．Ｒｅｖ　Ｍｅｄ　Ｓｕｉｓｓｅ　Ｒｎｍａｎｄｅ，２００４，１２４（１０）：６３９—６４１．　ｆ９ｌ汤睿，孙瑞胡．周亚光，等．内毒素耐受大鼠肺部ｉＮＯＳ和ＮＯ表　达的动态变化和意义ＩＪＪ．中国急救医学，２００８，２８（１）：４２－４５．　【１０］Ｌａｎｇｌ　Ｆ，Ｒｏｔｈ　Ｅ，Ｓｔｅｉｎｉｎｇｅｒ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ａｒｇｉｎａｓｅ　ｒｅｌｅａｓｅｓ　ｆｏｌ—　ｌｏｗｉｎｇ　ｌｉｖｅｒ　ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ：Ｅｖｅｉｄｅｎｃｅ　ｏｆ　ｈｅｍｏｄｖｎａｍｉｃ　ａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｒｇｉｎａｓｅ　ｉｎｆｕｓｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，１９９５，５９（１　１）：１５４２—１５４６．　（编辑：鲁翠涛）　发挥对硬化肝脏Ｉ／Ｒ损伤的保护作用。但确切机制　还不很清楚．尤其在相关基因的转录和调控水平上　（上接第１２页）　　ＦＲ．Ｎｅｍｕｎａｉｔｉｓ　Ｊ，Ｇａｎｌｙ　１，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｔｒｉａｌ　ｏｆ　ｆ４】　Ｋｈｕｒｉｉｎｔｒａｔｕｍｎｒａｌ　ＯＮＹＸ一０　１　５．ａ　ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ—ｒｅｐｌｉｃａｔｉｎｇ　ａｄｅｎｏｖｉｍｓ，ｉｎ　Ａｌｅｍａｎｙ　Ｒ，Ｂａｌａｇｕｅ　Ｃ，Ｃｕｒｉｅｌ　ＤＴ．Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ　ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓ　ｒ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０００，１　８（７１：７２３—７２７．　Ｋａｌｕｚ　Ｓ，Ｋａｌｕｚｏｖａ　Ｍ，Ｓｔａｎｂｒｉｄｇｅ　ＥＪ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　ｅｘ—　ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ｈｙｐｏｘｉａ：ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＨＩＦ—ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ　ｈｙｐｏｘｉｃ　ｃｏｍｈｉｎａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｃｉｓｐｌａｔｉｎ　ａｎｄ　５－ｆｌｕｏｒｏｎｒａｃｉｌ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｒｅ（　ｕｒｒｅｎｔ　ｈｅａｄ　ａｎｄ　ｎｅｃｋ　ｃａｎｃｅｒ　ｌＪ１．Ｎａｔ　Ｍｅｄ，２０００，６（８）：８７９—　８８５．　ｓｉｇｎａｌ　ａｔ　ｔｈｅ　ｈｙｐｎｘｉａ—ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ　ｅｌｅｍｅｎｔ　ｌＪ１．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｉｍ　Ａｃｔａ，　２００８，３９５（１－２）：６－ｌ３．　　ａ１．Ｇｅｎｅ－ｖｉｒａｌ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｈｅｒａｐｙ　ｕｓｉｎｇ　ｆ８１　Ｓｕ　Ｃ，Ｎａ　Ｍ，Ｃｈｅｎ　Ｊ，ｅｔｄｕａｌ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ　ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉａ”ｇｊｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｇｅｎｅ　ｔｉｓ　Ｊ，Ｇａｎｌｙ　Ｉ，Ｋｈｕｒｉ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ　【５】　Ｎｅｍｕｎａｉａｎｄ　ｏｎ（－ｏｌｙｓｉｓ　ｉｎ　ｔ）５３　ｍｕｔａｎｔ　ｔｕｍｏｒｓ　ｗｉｔｈ　ＯＮＹＸ一０１５，ａｎ　ＥｌＢ一　５５ｋＤ　ｇｅｎｅ—ｄｅｌｅｔｅｄ　ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ，ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｄｖａｎｃｅｄ　ｈｅａｄ　ａｎｄ　ｕｅｃｋ　ｃａｎｃｅｒ：ａ　ｐｈａ．ｓｅ　Ｉｔ　ｔｉｒａｌ［Ｊ］Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．２０００．６０（２２）：　６　５９－６３６６　ｆｏｒ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｅｆｆｉｃａｃｙ［ＪＩ．Ｍｏｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２００８，６（４）：５６８—５７５．　（编辑：金永勤）