低氧培养对骨膜细胞成软骨分化的影响重点

史堡塞鹭窆Ｅ型盘查；！！§堡！旦箜！！鲞筮！塑堡！也』垦翌！！强：丛型垫！！，！！！：！ｉ：塑！：！・１２８１・・实验研究・低氧培养对骨膜细胞成软骨分化的影响张峻玮陆海涛杨宇明袁峰郭开今邓斌作者单位：２２１０００徐州，江苏省徐州医学院研究生学院（张峻玮、陆海涛、杨宇明）；２２１００６徐州，江苏省徐州医学院附属医院脊柱外科（袁峰、郭开今、邓斌）通信作者：袁峰，Ｅｍａｉｌ：ｃｎｘｚｙｆ＠１６３．ｃｏｒｎＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１１３０１－９０３０．２０１６．０５．０３３ｌ摘要】目的体外分离培养骨膜细胞，探讨低氧对其成软骨分化的影响。方法采用兔胫骨骨膜为材料分离骨膜细胞，完全培养基培养，倒置显微镜观察细胞形态；成软骨诱导培养基诱导分化，根据培养环境氧浓度分为实验组（低氧组，３％Ｏ：）及对照组（常氧组，２０％Ｏ：）；诱导２周后甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察细胞Ⅱ型胶原、蛋白聚糖的合成；反转录－聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）检测成软骨相关基因Ⅱ型胶原０【１（Ｃｏｌ２０ｔ１）、性别决定区Ｙ框蛋白９（Ｓｏｘ９）、蛋白聚糖（Ａｇｇｒｅｃａｎ）以及低氧诱导因子一ｌｅｔ（ＨＩＦ一１ｄ）的表达变化。结果原代培养骨膜细胞生长良好，呈梭形旋涡状或平形状生长；诱导后实验组甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色均强于对照组；成软骨指标Ｃｏｌ２Ⅸ１（１．００±０．１７）、Ｓｏｘ９（０．７７±０．１３）、Ａｇｇｒｅｃａｎ（１．１２±０．１０）及ＨＩＦ－ｌｏｔ（１．４５±０．２８）ｍＲＮＡ表达水平高于对照组（０．６４±０．１２、０．３８±０．０１、０．６８４－０．０３、０．８９±０．２０），呈一致的上调趋势（Ｐ＜０．０５）。结论骨膜细胞体外生长良好，低氧具有明显促进骨膜细胞分化为软骨细胞的作用。【关键词】低氧；骨膜细胞；成软骨分化；低氧诱导因子－ｌｄ基金项目：江苏省“科教兴卫”医学重点建设人才项目（Ｈ２０１１２９）’１１ｌｅｅｆｆｅｃｔｏｆｈｙｐｏｘｉａｏｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｂｉｌｉｔｙｏｆｐｅｒｉｏｓｔｅｕｌｃｅｌｌｓｉｎｔｏｃａｒｔｉｌａｇｅＺｈａｎｇＪｕｎｗｅｉ．ＬｕＨａｉｔａｏ，拖愕Ｙｕｍｉｎｇ，Ｙｎａｎ％愕，Ｇｕｏ‰ｉｊｉｎ，眈昭历，ｌＧｒａｄｕａｔｅＳｃｈｏｏｌ，ＸｕｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｘｕｚｈｏｕ２２１０００，Ｃｈｉｎａ（Ｚｈａｎｇ邝，如日７’，砌ｎｇ肼）；Ｄｅ—ｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓ，ｆｋＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＸｖｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｉｅ，Ｘｕｚｈｏｕ２２１００６，Ｃｈｉｎａ（ＹｎａｎＦ，ＧｕｏｇＪ．隗醒丑）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａ以ｈｏｒ：ＹｕａｎＦｅｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｃｎ《硼罾１６３．ｃｏｒｎ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＳｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｏｆｒａｂｂｉｔｔｉｂｉａｌｐｅｒｉｏｓｔｅａｌｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｔｏｆｕｒｔｈｅｒｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｈｙｐｏｘｉａｏｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｂｉｌｉｔｙｉｎｔｏｃａｒｔｉｌａｇｅ．ＭｅｔｈｏｄｓＲａｂｂｉｔｔｉｂｉａｌｐｅｒｉｏｓｔｅｕｍｗａｓｕｓｅｄｔｏｓｅｐａｒａｔｅｔｈｅｐｅｒｉｏｓｔｅａｌｃｅｌｌｓ。ａｆｔｅｒｗｈｉｃｈｃｏｍｐｌｅｔｅｍｅｄｉｕｍｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｉｎｖｅｒｔ．ｅｄｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅＷａｓｕｓｅｄｆｏｒｃｅｌｌｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ．ＤｅｆｔｎｅｄｍｅｄｉｕｍＷａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｍａｋｅｐｅｒｉｏｓｔｅａｌｃｅｌｌｓｄｉｆｆｅｒｅｎ．ｔｉａｔｅｉｎｔｏｃａｒｔｉｌａｇｅｉｎｈｙｐｏｘｉａｇｒｏｕｐ（３％０２ｉｎｃｌｕｄｅｄ）ａｎｄｎｏｒｍｏｘｉａｇｒｏｕｐ（２０％０２ｉｎｃｌｕｄｅｄ）．Ａｆｔｅｒｉｎ—ｄｕｃｉｎｇｆｏｒ２ｗｅｅｋｓ。ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｈａｒｖｅｓｔｆｏｒｔｏｌｕｉｄｉｎｅｂｌｕｅｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｅａｌｓｔａｉｎｉｎｇｔｏｄｅ．ｔｅｃｔｐｍｔｅｏｇｌｙｃａｎａｎｄｃｏｌｌａｇｅｎｔｙｐｅＩＩ（Ｃ０１２）．ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ—ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ—Ｐｅｒｔ）ｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｙｐｅ２ｅｏｕａｇｅｎａｌｐｈａ１（Ｃｏｌ２ａ１），ｓｅｘｄｅｔｅｒ．ｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎＹ９（Ｓｏｘ９），ａｇｇｌ＂ｅｅａｎａｎｄｈｙｐｏｘｉａｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ—ｌｄ（ＨＩＦ一１俚）．ＲｅｓｕｌｔｓＰｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅｄｐｅｆｉｏｓｔｅａｌｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｎｇｏｏｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｗｉｔｈｓｐｉｎｄｌｅｓｐｉｒａｌｏｒｐａｒａｌｌｅｌｇｒｏｗｔｈｆｏｒｍ．Ｔｏｌｕｉｄｉｎｅｂｌｕｅｓｔａｉｎａｎｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｏｆｄｅｆｉｎｅｄｍｅｄｉｕｍｉｎｄｕｃｅｄｐｅｒｉｏｓｔｅａｌｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｔｒｏｎｇｅｒｔｈａｎｃｏｎｔｒ０１．ＴｈｅｍＲＮＡｌｅｖｅｌｏｆＣｏｌ２ｃｄ（１．００±０．１７），Ｓｏｘ９（０．７７±０．１３），ａｇｇｒｅｃａｎ（１．１２４－０．１０）ａｎｄＨＩＦ一１ｄ（１．４５±０．２８）ｔｈａｔｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈｅｃｅｌｌｓａｂｉｌｉｔｙｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇｉｎｔｏｃａｒｔｉｌａｇｅｗｅｒｅｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｉｎｄｕｃｅｄｐｅｒｉｏｓｔｅａｌｃｅｌｌｓｔｈａｎｃｏｎｔｒｏｌ（Ｏ．６４４－０．１２，０．３８±０．０１，０．６８±０．０３。０．８９±０．２０，Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎ．ｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅ汛ｖｉｔｒｏｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｒａｂｂｉｔｐｅｒｉｏｓｔｅａｌｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｎｇｏｏｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎ．Ｈｙｐｏｘｉａｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｐｒｏｍｏｔｅｐｅｒｉｏｓｔｅａｌｃｅｌｌｓｔｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｊｎｔｏｃａｒｔｉｌａｇｅｃｅｌｌｓ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｈｙｐｏｘｉａ；Ｐｅｒｉｏｓｔｅａｌｃｅｌｌ；Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｉｎｔｏｃａｒｔｉｌａｇｅ；Ｈｙｐｏｘｉａｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ一１仪Ｆｕｎｄｐｒｏｇｒａｍ：ＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅ’ＳＫｅｙＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＴａｌｅｎｔｓＰｒｏｇｒａｍ（Ｈ２０１１２９）软骨再生修复能力有限，软骨损伤的治疗是临床能更适合作为种子细胞用于修复软骨损伤。目前对于一大难题…。软骨组织工程技术的兴起为这一疾病骨膜细胞生物特性的研究主要是在２０％Ｏ：浓度培养的治疗带来新的希望。骨膜与骨的形成和修复密切相条件下进行的，这和体内组织处于低氧的微环境不符。关，分化潜能不随着年龄增加而丧失‘２｜，骨膜细胞可本研究旨在观察低氧对骨膜细胞成软骨分化的影响。万方数据生堡塞堕处型农盍垫！！生！旦筮塑鲞筮！塑垦！鱼』量墅§坚：迪垫！！：巡：箜：堂：１材料与方法１．材料：新西兰大白兔（购自徐州医学院实验动物中心，许可证号：ＳＣＸＫ（苏）２００５－０００５）。２．骨膜细胞分离培养及传代：无菌条件下取出兔胫骨内侧面骨膜，２ｇ／Ｌ胶原酶消化２０ｍｉｎ，磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）洗涤３遍后置于杜尔伯科改良伊格尔（ＤＭＥＭ）／Ｆ１２完全培养基（美国Ｔｈｅｒｍｏ公司），５％ＣＯ：、３７ｏＣ恒温培养箱内培养。相差显微镜下观察细胞融合至８０％一９０％时，用０．２５％胰蛋白酶消化传代。第３代骨膜细胞用于实验。３．实验分组及诱导分化培养：取第３代骨膜细胞，随机分为２组，实验组：低氧（３％Ｏ：）诱导培养组；对照组：常氧（２０％０：）诱导培养组。同时加入成软骨诱导培养基，成软骨诱导培养基：９８ｍｌ１：１ＤＭＥＭ／Ｆ１２加１ｍｌ双抗＋１００ｎｍｏＬ／Ｌ地塞米松加３７．５ｍｇ／Ｌ维生素Ｃ＋１ｍｍｏｌ／Ｌ丙酮酸盐加１ｍｌＩＴＳ细胞培养添加物（含胰岛素６．２５ｍｇ／Ｌ、转铁蛋白６．２５ｍｇ／Ｌ、亚硒酸６．２５“ｓ／Ｌ、亚油酸５．３５ｍｇ／Ｌ、牛血清白蛋白１．２５ｅｃ＇Ｌ）加１０斗ｇ／Ｌ转化生长因子ｐｌ，ｐＨ值７．４。分别置入低氧和常氧培养箱，每４ｄ换液１次。４．成软骨标志物染色：两组细胞诱导２周后分别行甲苯胺蓝（北京雷根生物技术有限公司）及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色［北京中衫金桥公司链菌素抗生物素蛋白．过氧化物酶（ＳＰ）试剂盒］。倒置显微镜下观察。５．软骨细胞基因检测：收集两组细胞，ＲＮＡ试剂盒（北京天根生化科技有限公司）提取总ＲＮＡ，逆转录试剂盒（北京天根生化科技有限公司）进行ＲＮＡ逆转录成ｅＤＮＡ，反转录．聚合酶链反应（ＲＴ．ＰＣＲ）扩增后检测相关基因的表达水平，以Ｂ．肌动蛋白（Ｂ－ａｃｔｉｎ）做内参，ＩｍａｇｅＪ进行分析灰度值分析。ＰＣＲ引物序列见表１。６．统计学方法：应用ＳＰＳＳ１６．０统计软件分析，数据采用均数±标准差（面±ｓ）表示，实验组与对照组的比较采用成组设计资料ｔ检验，检验水准Ⅸ值取双侧０．０５。以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。结果１．骨膜细胞形态学特征：倒置显微镜观察可见贴壁细胞呈梭形、多角形、类圆形；随着培养时间的增加，成为形态相对均一的梭形细胞，呈平行排列生长或漩涡状生长。传代的细胞生长速度明显增快，形态均一，呈漩涡状平行生长。２．成软骨标记物检测：甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色反映了细胞基质蛋白聚糖和Ⅱ型胶原合万方数据表１引物序列表基因名称引物序那’ｑ’）序列号序瑟度注：Ｃｏｌ２Ａ１：Ⅱ型胶原蛋白Ａ１；Ｓｏｘ９：性别决定区Ｙ框蛋白９；Ａｇｇｒｅｃａｎ３．软骨相关基因ｍＲＮＡ表达：ＲＴ．ＰＣＲ结果示低０【０【）ｍＲＮＡ表达高于常氧组；两组条带和内参灰ｍＲＮＡ表达水平差表２软骨基因表达比较（面－Ｉ－ｓ）注：Ｃ０１２ｄ１：ＩＩ型胶原ｏｔｌ；Ｓｏｘ９：性别决定区Ｙ框蛋白９；Ａｇｇｒｅｃａｎ：讨论骨髓间充质干细胞（ＢＭＳＣｓ）作为组织工程中最蛋白聚糖；ＨＩＦ—Ｉｎ：低氧诱导因子一ｌａ；Ｂ－ａｃｔｉｎ：Ｂ一肌动蛋白；Ｆ：上游引物Ｒ：下游引物成情况。低氧组甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色的染色深度、密度及范围均大于常氧组，说明产生了更多的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原。氧组Ⅱ型胶原蛋白ＡＩ（Ｃｏｌ２ｔｘｌ）、性别决定区Ｙ框蛋白９（Ｓｏｘ９）、蛋白聚糖（Ａｇｇｒｅｃａｎ）及低氧诱导因子一１（ＨＩＦ．１度值之比，应用两样本ｔ检验，示低氧组与常氧组Ｃｏｌ２ｃｘｌ、Ｓｏｘ９、Ａｇｇｒｅｃａｎ及ＨＩＦ—ｌａ异有统计学意义（Ｐ＜０．０５，表２）。蛋白聚糖；ＨＩＦ—Ｉｎ：低氧诱导因子一ｌａ；与常氧组比较，８Ｐ＜Ｏ．０５早发现并且研究最深入的种子细胞，尽管在基础研究领域取得了重大进展，始终未能在临床上获得广泛应用，这主要是因为ＢＭＳＣｓ的主要来源为成人骨髓，其细胞数量及增殖分化潜能随供者年龄的增大而下降，ＢＭＳＣｓ的采集须行骨髓穿刺术，来源受到限制，同时还可能存在着病毒感染等问题。骨膜细胞增殖能力空坐塞堕窆Ｅ整盘盍垫！ｉ生！旦筮塑鲞筮ｊ翅ｇｂ地』垦翌！！堡：丛业！Ｑ！！：！！！：！！：№：！・１２８３・强，分化潜能不随着年龄增加而丧失心１；骨膜细胞可直接分化为成骨细胞和软骨细胞，参与膜内成骨及软骨内成骨过程口１；骨膜细胞分化方向更易控制，体外培养表现出较强成骨、成软骨能力１４』。因此骨膜细胞可能比ＢＭＳＣｓ更适合作为组织工程的种子细胞用于修复软骨损伤。胞本身的优越性，骨膜细胞可能比干细胞更适合作为种子细胞用于治疗软骨损伤。参考文献［１］ＭａｋｒｉｓＥＡ，ＧｏｍｏｌｌＡＨ，ＭａｌｉｚｏｓＫＮ，ｅｔａ１．Ｒｅｐａｉｒａｎｄｔｉｓｓｕｅｅｎｓｉ—ｎｅｅｒｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｆｏｒａｒｔｉｃｕｌａｒｃａｒｔｉｌａｇｅ［Ｊ］．ＮａｔＲｅｖＲｈｅｕｍａｔｏｌ，２０１５，ｌｌ（１）：２１－３４．ＤＯＩ：１０．１０３８／ｎｒｒｈｅｕｍ．２０１４．１５７．机体内组织、器官的氧分压远低于大气，软骨组织较其他血供丰富的组织器官组织内氧分压更低（软骨表层７％，深层＜１％）。低氧调控细胞增殖分化的机制目前认为是和ＨＩＦ一１有关。ＨＩＦ．１是异二聚体转录因子，由ｌｔＩＦ一１０ｔ和ＨＩＦ一１ｐ两个亚单位组成，其中ＨＩＦ一１Ｂ表达水平较恒定，但ＨＩＦ—ｌｅｔ表达水平受到氧分压的严格调控，当培养环境中氧的浓度降低时，ＨＩＦ—ｌｏｔ表达水平呈指数性增加，氧浓度从２０％减少到［２］ＪａｎｓｅｎＥＪ，Ｅｍ∞８ＰＪ，ＧｕｌｄｅｍｏｎｄＮＡ，ｅｔａ１．Ｈｕｍａｎｐｅｒｉｏｓｔｅｕｍ—ｄｅ－ｒｉｖｅｄｃｅｌｌｓｆｒｏｍｅｌｄｅｒｌｙｐａｔｉｅｎｔｓ∞ａ∞ｕｒｅｅｆｏｒｃａｒｔｉｌａｇｅｔｉｓｓｕｅｅｎｓｉ－ｎｅｅｒｉｎｇ？［Ｊ］．ＪＴｉｓｓｕｅＥｎｇＲｅｇｅｎＭｅｄ，２００８，２（６）：３３１－３３９．ＤＯｌ：１０．１００２／ｔｅｒｍ．１００．［３］Ｃａｓｔｒｏ．ＳｉｌｖａＩＩ，ＺａｍｂｕｚｚｉＷＦ，ｄｅＯｌｉｖｅｉｒａＣａｓｔｒｏＬ，ｅｔａ１．Ｐｅｒｉｏｓｔｅａｌ—ｄｅｒｉｖｅｄｃｅｌｌｓｆｏｒｂｏｎｅｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：ａｐｒｏｍｉｓｉｎｇｃａｎｄｉｄａｔｅ【Ｊ］．ＣｌｉｎＯｒａｌＩｍｐｌａｎｔｓＲｅｓ，２０１２，２３（１０）：１２３８—１２４２．ｐｒｏｔｅｉｎ２ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓＤＯＩ：１０．１１１１／ｊ．１６００－０５０１．２０１１．０２２８７．ｘ．［４］ＹｕＹＹ，ＬｉｅｕＳ，ＬｕＣ，ｅｔａ１．Ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｒｅｐａｉｒ［Ｊ］．Ｂｏｎｅ，２０１０，４７（１）：６５－７３．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｂｏｎｅ．２０１０．０３．０１２．［５］ＣａｏＬ，ＹａｎｇＦ，ＬｉｕＧ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｐｒｏｍｏｔｉｏｎｕｓｉｎｇａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｅｎｄｏｃｈｏｎｄｒａｌｏｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｂｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｐｅｒｉｏｓｔｅａｌｃｅｌｌｆａｔｅｄｕｒｉｎｇｂｏｎｅ６％，ＨＩＦ－１仪表达增加１倍，当氧浓度从６％下降到０．５％，ＨＩＦ一１０ｔ表达增加１０倍，因此ＨＩＦ．１仪是诱导低氧基因和修复细胞适应低氧环境的核心因子。ＨＩＦ－１仅激活可使Ｓｏｘ９活化，Ｓｏｘ９参与软骨的形成，表达于所有的软骨前细胞和分化的软骨细胞，对软骨的发育成熟等过程发挥重要的调节作用∞Ｊ。有研究结果表明将小鼠胚胎干细胞的Ｓｏｘ９基因删除，小鼠的软骨无法形成∞ｊ。Ｓｏｘ９通过与Ｃｏｌ２０ｔｌ和Ａｇｇｒｅｃａｎ基因ｏｆｃａｒｔｉｌａｇｅｄｅｆｅｃｔｒｅｐａｉｒｍｅｄｉａｔｅｄｓ０圆ｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒｏｆｒａｂｂｉｔｂｏｎｅｍａｌＴＯＷ［６］Ｍａｎｕｙｌｏｖｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２０１ｌ，３２（１６）：３９１０－３９２０．ＮＬ，ＦｕｊｉｗａｒａＹ，ＡｄａｍｅｙｋｏＩＩ，ｅｔａ１．１１ＩｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＳｏｘ９ｒｅｖｅｒｓａｌｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙｔｈｅＧＡＴＡ４／ＦＯＧ２ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｃｏｍｐｌｅｘｉｎｄｏｍ—ｉｎａｎｔＸＸ３５６－３６７．ｓｅｘｍｏｕ∞ｍｏｄｅｌｓ［Ｊ］．ＤｅｖＢｉｏｌ，２００７，３０７（２）：ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｙｄｂｉｏ．２００７．０４．０４０．［７］ＬｅｆｅｂｖｒｅＶ，ＬｉＰ，ｄｅＣｒｅｍｂｒｕｇｇｈｅＢ．ＡａｌｅｎｅｗｌｏｎｇｆｏｒｍｏｆＳｏｘ５ＣＯ．（Ｌ－Ｓｏ】【５），Ｓｏｘ６ａｎｄＳｏｘ９ｅｏｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｃｈｏｎｄｒａｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙａｃｔｉｖａｔｅｔｈｅｔｙｐｅＩＩｃｏｌｌａｇｅｎｇｅｎｅ［Ｊ］．ＥＭＢＯ，１９９８，１７的增强子元件结合，激活Ｃｏｌ２０ｔｌ和Ａｇｇｒｅｃａｎ基因的表达，合成软骨骨基质Ⅱ型胶原和Ａｇｇｒｅｃａｎ等¨引。（１９）：５７１８－５７３３．ＤＯＩ：１０．１０９３／ｅｍｂｏｊ／１７．１９．５７１８．［８］ＨａｎＹ，ＬｅｆｅｂｗｅＶ．Ｌ—ｓ０】ｃ５ａｎｄＳｏｘ６ｇｅｎｅｉｎｄｒｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅａｇｇｌ℃ｃａｎｔｏａｃａｒｔｉｌａｇｅｂｙｓｅｃｕｒｉｎｇｂｉｎｄｉｎｇｏｆＳｏｘ９ｃｅｌｌｆａｒ－ｕｐｓｔｒｅａｍｅｎｈａｎ—ｃｅｒ［Ｊ］．ＭｏｌＢｉｄ，２００８，２８（１６）：４９９９－５０１３．（收稿日期：２０１５—１２・１１）我们提取的骨膜细胞增殖能力强，有良好的成软骨分化潜能，同时实验模拟体内微环境，证实了低氧具有促进骨膜细胞分化为软骨细胞的作用。鉴于骨膜细ＤＯＩ：１０．１１２８／ＭＣＢ．００６９５．０８．・读者・作者・编者・本刊对中、英文摘要的一般要求论著类、综述类文章须著录中、英文摘要，论著类文章为结构式摘要，综述类文章可选择指示性摘要，其他类别稿件（如简报等）不附中、英文摘要。中、英文摘要应按结构式摘要格式撰写，采用第三人称，内容包括目的（Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ）、方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ）、结果（Ｒｅｓｕｌｔｓ）和结论（Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ）。其中结果部分应包括关键性或主要的数据。摘要中不列图表，不引用文献，不加评论和解释。中文摘要可适当简略、扼要一些（一般在４００字以内），英文摘要内容可相对具体一些（一般在６００个实词以内），以适当增加英文信息量。英文摘要应包括文题、作者姓名（汉语拼音，姓氏、名字仅首字母大写，双字名中间不加连字符）、全部作者的所属单位、科室名称、所在城市名和邮政编码及国名。应列出全部作者姓名和通信作者电子邮箱。本刊编辑部万方数据