慢性阻塞性肺疾病加重期和稳定期Th17和Treg细胞的表达

第３４卷２０１３年第６期　１１月　中山大学学报（医学科学版）　Ｖｏ１．３４　Ｎｏ．６　Ｎｏｖ．　２０１３　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＳＵＮ　ＹＡＴ—ＳＥＮ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＭＥＤＩＣＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥＳ）　慢性阻塞性肺疾病加重期和稳定期Ｔｈｌ７和Ｔｒｅｇ细胞的表达　陈钢　，谢灿茂　，罗志扬　，李敏菁　，张培芳　（１．中山大学附属第一医院呼吸内科，广东广州５１００８０；２．佛山市第一人民医院呼吸内科，广东佛山５２８０００）　摘要：【目的】探讨慢性阻塞性肺疾病（ＣＯＰＤ）急性加重期、稳定期患者和肺功能正常吸烟者外周血中Ｔｈｌ７、　ｒｒｅｇ细　胞的表达。【方法】选取慢性阻塞性肺疾病急性加重患者２８例、慢性阻塞性肺疾病稳定期患者２２例、吸烟肺功能正常者（对　照组）２２例为研究对象。流式细胞术检测外周血中Ｔｈｌ７细胞、ＣＤ４　ＣＤ２５￣＇Ｔｒｅｇ细胞的比例，ＥＬＩＳＡ检测诱导痰ＩＬ一１７、ＴＧＦ—　Ｂ１的水平。【结果】急性加重期ＣＯＰＤ组的外周血Ｔｈｌ７比例（％）较稳定期ＣＯＰＤ组增高（２．９２±０．１６　ｖｓ　１．２５￣０．１４，Ｐ＜　０．００１）、痰液ＩＬ一１７水平（ｎｇ／Ｌ）较稳定期ＣＯＰＤ组增高（８２．３３　４－１７．３８　ｖｓ　１２．６４±２．７４，Ｐ＜０．００１），外周血Ｔｒｅｇ比例（％）低于　稳定期ＣＯＰＤ组（８．５２±０．４７　ｖｓ　１　１．４５　４－０．７８，Ｐ＜０．００１）。急性加重期ＣＯＰＤ组、稳定期ＣＯＰＤ组外周血中Ｔｈｌ７比例与Ｔｒｅｇ　比例均呈负相关（ｒ分别为一０．７２３和一０．６７４，Ｐ均＜０．００１）。【结论】急性加重期ＣＯＰＤ的气道局部和全身的免疫反应以促炎的　“Ｔｈｌ７反应”占优势，稳定期ＣＯＰＤ以“Ｔｒｅｇ反应”占优势。　关键词：慢性阻塞性肺疾病；Ｔｈｌ７细胞；ＩＬ一１７：调节性Ｔ细胞　中图分类号：ＲＲ５６３　文献标志码：Ａ　文章编号：１６７２—３５５４（２０１３）０６—０９１７—０５　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｈｌ７　Ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　Ｔｒｅｇｓ　ｉｎ　ＳＣＯＰＤ　ａｎｄ　ＡＥＣＯＰＤ　ＣＨＥＮ　Ｇａｎｇ　，ＸＩＥ　Ｃａｎ—ｍａｏ　，ＬＵＯ　Ｚｈｉ—ｙａｎｇ　，ＬＩ　Ｍｉｎ－ｊｉｎｇ　，ＺＨＡＮＧ　Ｐｅｉ－ｆａｎｇ　（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｉｆｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｕｎ　Ｙａｔ—ｓｅｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５　１００８０，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｙｒ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　ｐｅｏｐｌｅ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｆｏｓｈａｎ，Ｆｏｓｈａｎ　５２８０００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｈｌ７　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　Ｔｒｅｇｓ　ｉｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｏｆ　ｓｔａｂｌｅ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｄｉｓｅａｓｅ（ＳＣＯＰＤ）ａｎｄ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｄｉｓｅａｓｅ（ＡＥＣＯＰＤ）．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】２８　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｏｆ　ＡＥＣＯＰＤ．　２２　ｏｕｔｐａｔｉｅｎｔｓ　ｏｆ　ＳＣＯＰＤ　ａｎｄ　２２　ｓｍｏｋｉｎｇ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｄｏｎｏｒｓ　ｗｅｒｅ　ｒｅｃｒｕｉｔｅｄ．Ｔｈ１７　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ＣＤ４　ＣＤ２５￣，Ｔｒｅｇｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｙｒ．Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＩＬ一１７　ａｎｄ　ＴＧＦ—ｐ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｐｕｔｕｍ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＥＬＩＳＡ．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　Ｔｈ１７　ｃｅｌｌｓ（２．９２±０．１６％）ｉｎ　ＡＥＣＯＰＤ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ＳＣＯＰＤ（１．２５±０．１４％，Ｐ＜Ｏ．００１），Ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＩＬ一１７　ｉｎ　ｓｐｕｔｕｍ（８２．３３±１７．３８　ｎｇ／Ｌ）ｉｎ　ＡＥＣＯＰＤ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ＳＣＯＰＤ（１２．６４±２．７４　ｎｇ／Ｌ，Ｐ＜０．００１）．　Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　Ｔｒｅｇ　ｃｅｌｌｓ（８．５２±０．４７％）ｉｎ　ＡＥＣＯＰＤ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ＳＣＯＰＤ（１　１．４５　－４０．７８％，Ｐ＜　０．００１）．Ｒｅｍａｒｋａｂｌｙ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｅｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ　Ｔｈｌ７　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　Ｔｒｅｇｓ　ｉｎ　ＡＥＣＯＰＤ（ｒ＝－０．７２３，Ｐ＜０．００１）　ａｎｄ　ＳＣＯＰＤ（ｒ＝一０．６４７，Ｐ＜０．００１）．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ】Ｔｈｌ７　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｗａｓ　ｄｏｍｉｎａｔｅｄ　ｉｎ　ＡＥＣＯＰＤ　ｗｈｅｒｅａｓ　Ｔｒｅｇ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｗａｓ　ｄｏｍｉｎａｔｅｄ　ｉｎ　ＳＣＯＰＤ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｃｈｒｏｎｉｃ　ｏｂｓｔｕｒｃｔｉｖｅ　ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｄｉｓｅａｓｅ；Ｔｈｌ７　ｃｅｌｌｓ；ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１７；ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　［Ｊ　ＳＵＮ　Ｙａｔ—ｓｅｎ　Ｕｎｉｖ（Ｍｅｄ　Ｓｃｉ），２０１３，３４（６）：９１７—９２１］　慢性阻塞性肺疾病（ｃｈｒｏｎｉｃ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｐｕｌｍ—　生、发展中起了重要作用。中性粒细胞的募集和活　ｏｎａｒｙ　ｄｉｓｅａｓｅ，ＣＯＰＤ）是世界范围内危害人类健康　化是ＣＯＰＤ发病中的一个关键环节。辅助性Ｔ细　的疾病，反复发生的气道慢性炎症在ＣＯＰＤ的发　胞ｌ７（Ｔ　ｈｅｌｐ　ｃｅｌｌ　１７，Ｔｈｌ７）细胞是近年来新发现　收稿日期：２０１３—０７—１２　基金项目：佛山市科技局医学类科技攻关项目（２０１１０８０７６）　作者简介：陈钢，博士研究生，副主任医师，研究方向：慢性气道炎症，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｇａｎｇ＠ｆｓｙｙｙ．ｃｏｍ；　通信作者，谢灿茂，教授，Ｅ－ｍａｉｌ　ｘｉｅｃａｎｍａｏ＠１６３．ｃｏｎ　９ｌ８　中山大学学报（医学科学版）　第３４卷　的ＣＤ４　Ｔ细胞，其分泌的白介素一１７（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　１７。ＩＬ一１７）具有强大的招募中性粒细胞功能［　。调　节性Ｔ细胞（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　Ｔ　ｃｅｌｌｓ，Ｔｒｅｇ）是一群具有调　节免疫功能的Ｔ细胞．能够抑制过强的免疫反应，　主要表现在诱导免疫失能和免疫抑制两个方面。　Ｔｒｅｇ通过细胞接触，或分泌转化生长因子ｐ　（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ—ｐ，ＴＧＦ—ｐ）等抑制性细　胞因子．抑制效应性Ｔ细胞的分化及功能，是诱导　和维持外周免疫耐受的重要细胞ｌ２，目前研究较　多的是ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ。Ｔｈｌ７和Ｔｒｅｇ平衡在维持　体内免疫环境中起重要作用，在分化过程中两者　相互抑制，失衡可引起局部或者全身异常的免疫　反应，和自身免疫性疾病、肿瘤、感染　等疾病密　切相关。目前关于ＣＯＰＤ患者中Ｔｈｌ７及Ｔｒｅｇ的研　究较少，我们通过比较ＣＯＰＤ急性加重、稳定期及　健康人群Ｔｈｌ７和Ｔｒｅｇ的细胞构成和细胞因子分　泌情况，进一步了解Ｔｈｌ７和Ｔｒｅｇ在ＣＯＰＤ中的作　用机制。　１材料与方法　１．１病例资料　收集２０１１年８月至２０１２年ｌＯ月在佛山市　第一人民医院呼吸内科住院的慢性阻塞性肺疾病　急性加重患者、呼吸内科门诊随访的慢性阻塞性　肺疾病稳定期患者及保健中心体检人群。慢性阻　塞性肺疾病急性加重组（ＡＥＣＯＰＤ组）２８例，均为　男性，年龄（６７．５７±５．７８）岁，纳入标准：①符合　２００７年修订版《慢性阻塞性肺疾病诊断指南》［　；　②年龄５５～７５岁；③吸烟指数＞３００；④有急性　加重表现：气促加重、痰量增加和痰转脓性。慢性　阻塞性肺疾病稳定期组（ＳＣＯＰＤ组）２２例，均为男　性，年龄（６８．７３±６．０９）岁，纳入标准：符合上述①　～③；近３个月内无急性加重史。排除标准：①合　并其他肺部疾病或其他系统感染：②有严重的其　他系统疾病或恶性肿瘤。吸烟肺功能正常组（对照　组）２２例，均为男性，年龄（６２．７３±５．６６）岁，为无　慢性心肺疾病的我院健康体检者，吸烟指数＞　３００。所有研究对象均签署知情同意书。本研究经　过佛山市第一人民医院伦理委员会批准。　１．２主要仪器及试剂　美国森迪斯公司Ｖｍａｘ２２９肺功能仪，美国ＢＤ　公司的ＦＡＣＳ　Ｃａｌｉｂｕｒ型流式细胞仪，别藻蓝素　（１ｏｐｈｙｅｏｃｙａｎｉｎ，ＡＰＣ）标记的抗人ＣＤ３单克隆抗　体．异硫氰酸荧光素（ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｉｎ　ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ，　ＦＩＴＣ）标记的抗人ＣＤ４单克隆抗体，藻红蛋白　（ｐｈｙｅｏｅｒｙｔｈｒｉｎ，ＰＥ）标记的抗人ＣＤ２５单克隆抗体　购自美国ＢＤ公司，ＰＥ标记的抗人ＩＬ一１７Ａ单克　隆抗体购自美国ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ公司，佛波酯、离子霉　素、莫能菌素购自美国Ｓｉｇｍａ公司。人细胞因子　ＩＬ一１７、ＴＧＦ一［３１的酶联免疫吸附实验（ｅｎｚｙｍｅ—　ｌｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏａｄｓｏｒｄｅｎｔ　ａｓｓａｙ．ＥＬＩＳＡ）试剂盒购自　Ｒ＆Ｄ公司。　１．３肺功能检测　参照美国胸科协会肺功能检查操作规范进行　常规肺功能检测。　１．４流式细胞仪检测　１．４．１　外周血标本采集及单个核细胞的分离　受　试者抽取清晨空腹静脉血５　ｍＬ，抗凝、稀释、离心　及洗涤后，收集离心细胞制成外周血单个核细胞　液（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ　ｃｅｌｌ，ＰＢＭＣ）悬液，　调整ＰＢＭＣ密度至２×１０　个／ｍＬ，用于流式细胞　术检测。　１．４．２　Ｔｈｌ７细胞检测　取ＰＢＭＣ１　ｍＬ加入佛波　酯（终浓度５０　ｎｇ／ｍＬ）、离子霉素（１　Ｉｘｇ／ｍＬ）、莫能　菌素（０．７　Ｉｘｇ／ｍＬ）和布菲尔德菌素（１　Ｉｘｇ／ｍＬ）置　３７℃、体积分数为５％ＣＯ　培养箱中培养６　ｈ。取　出细胞悬液转移至流式管中（１×１０　个／管）并用　磷酸盐缓冲液（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｕｆｆｅｒｅｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ＰＢＳ）洗　涤离心，加入１００　Ｌ破膜剂、１０　Ｌ抗人ＣＤ３一　ＡＰＣ单克隆抗体、２０　Ｌ抗人ＣＤ４一ＦＩＴＣ、５　Ｌ抗　人ＩＬ一１７Ａ—ＰＥ抗体或同型对照ＩｇＧ，振匀后置避光　孵育３０　ｍｉｎ，用ＰＢＳ洗涤后弃上清，用１０　ｇ／Ｌ多聚　甲醛固定液０．５　ｍＬ固定，４　ｑＣ保存待上机检测。采　集ＣＤ３＋ＣＤ４ＣＦ淋巴细胞２　０００个，数据分析采用　Ｃｅｌｌｑｕｅｓｔ软件。　１．４．３　ＣＤ４　ＣＤ２５　ｇｈ调节性Ｔ细胞检测　以ＣＤ４＋　ＣＤ２５　Ｔ细胞比例作为ＣＤ４　ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ细胞比例　进行研究［　。取ＰＢＭＣ至流式管中（１×１０ｏ个／管），　加入ｌ０　Ｌ抗人ＣＤ３一ＡＰＣ单克隆抗体、１０　Ｌ抗　人ＣＤ４一ＦＩＴＣ、１０　Ｌ抗人ＣＤ２５一ＰＥ或同型对照　ＩｇＧ并振匀，避光孵育１５　ｒａｉｎ，用ＰＢＳ洗涤后弃上　清并用１０　ｇ／Ｌ多聚甲醛溶液（０．５　ｍＬ）固定，４℃保　存待上机。采集ＣＤ３　ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞２　０００个，设　门确定出淋巴细胞的分布位置。计算ＣＤ３　ＣＤ４＋Ｔ　淋巴细胞中ＣＤ２５　ｇｈ细胞的百分率。将平均荧光强　第６期　陈钢，等．慢性阻塞性肺疾病加重期和稳定期Ｔｈｌ７和Ｔｒｅｇ细胞的表达　９１９　度为ＣＤ４　ＣＤ２５＋细胞群两倍的细胞群定义为　ＣＤ４＋ＣＤ２５ｒ￣ｏ，Ｔ淋巴细胞，数据分析采用Ｄｅｎｏｖｏ　Ｓｏｆｔｗａｒｅ公司开发的ＦＣＳ　Ｅｘｐｒｅｓｓ　４软件。　１．５　ＥＬＩＳＡ检测诱导痰ＩＬ一１７、ＴＧＦ—Ｂ１水平　入　２　结　果　２．１　ＡＥＣＯＰＤ组、ＳＣＯＰＤ和对照组一般资料和　选研究对象于清晨进行高渗盐水诱导痰处理。诱　导前１０　ｍｉｎ吸入沙丁胺醇４００　ｇ，３０　ｇ／Ｌ高渗盐　水超声雾化吸人１５　ｍｉｎ，用力咯痰至培养皿。用镊　子取出痰液黏稠、密度大的部分，与唾液严格区分　后收集。称重，加入４倍体积的０．１％二硫苏糖醇　充分混合。３７℃水浴１０　ｍｉｎ，网筛过滤，２　０００　ｒ／　ｍｉｎ（ｒ＝８　ｃｍ）离心１０　ｍｉｎ沉淀细胞，处理后上清　液一８Ｏ℃冻存。取上述冻存的上清液，通过ＥＬＩＳＡ　双抗体夹心法检测细胞因子ＩＬ一１７、ＴＧＦ一１３１，具体　操作按照试剂盒提供的说明书进行。　１．６统计学处理　基础肺功能比较　ＡＥＣＯＰＤ组、ＳＣＯＰＤ组和对照组年龄差异无　统计学意义。３组吸烟指数、第１秒用力呼气容积　（ｆｏｒｃｅｄ　ｅｘｐｉｒａｔｏｒｙ　ｖｏｌｕｍｅ　ｉｎ　ｏｎｅ　ｓｅｃｏｎｄ，ＶＦＥＶ　１）、　ＶＦＥＶ１与用力肺活量（ｆｏｒｃｅｄ　ｖｉｔａｌ　ｃａｐａｃｉｔｙ，　ＶＦＶＣ）的比值（ｒＦＥＶ１／ＦＶＣ）、ＦＥＶ１占预计值百分　数（Ｐ　ＦＥＶ１／ｗｅｄ）差异有统计学意义。两组基本情　况和基础肺功能指标见表１。　２．１　ＡＥＣＯＰＤ组、ＳＣ０ＰＤ和对照组一般资料和　基础肺功能比较　ＡＥＣＯＰＤ组、ＳＣＯＰＤ组和对照组年龄差异无　采用ＳＰＳＳ１６．０软件进行分析数据。计量资料　数据以均值±标准差表示，各组间差异性比较进　行方差齐性检验。方差齐采用单因素方差分析　ＬＳＤ法：方差不齐采用Ｋｒｕｓｋａｌ—Ｗａｌｌｉｓ法，两两比　统计学意义。３组吸烟指数、第１秒用力呼气容积　（ｆｏｒｃｅｄ　ｅｘｐｉｒａｔｏｒｙ　ｖｏｌｕｍｅ　ｉｎ　ｏｎｅ　ｓｅｃｏｎｄ，　ＦＥＶ１）、　ＦＥＶ１与用力肺活量（ｆｏｒｃｅｄ　ｖｉｔａｌ　ｃａｐａｃｉｔｙ，ＦＶＣ）的　比值（ＦＥＶ１／ＦＶＣ）、ＦＥＶ１占预计值百分数（ＦＥＶ１／　ｐｒｅｄ）差异有统计学意义。两组基本情况和基础肺　功能指标见表１。　２．２三组Ｔｈｌ７、Ｔｒｅｇ细胞及炎症因子的比较　较采用非参数Ｗｉｌｃｏｘｏｎ秩和检验。相关分析采用　Ｓｐｅａｒｍａｎ相关法　Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　Ｐ均为双侧。　表１　ＡＥＣＯＰＤ组、ＳＣＯＰＤ组和对照组的基本情况和基础肺功能指标　Ｔａｂｌｅ　１　Ｓｕｂｊｅｃｔ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ＡＥＣＯＰＤ　ｇｒｏｕｐ，ＳＣＯＰＤ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　（　±ｓ）　Ｖ　ｖＩ：ｆｏｒｃｅｄ　ｅｘｐｉｒａｔｏｒｙ　ｖｏｌｕｍｅ　ｉｎ　ｏｎｅ　ｓｅｃｏｎｄ；ｒ　ｌ　ｃ：ｍｔｉｏ　ｏｆ　Ｖｒｘｖｌ　ａｇａｉｎｓｔ　ｆｏｒｃｅｄ　ｖｉｔａｌ　ｃａｐａｃｉｔｙ（ＶＦＶＣ）；Ｐｒ＇ｚｅｌ￣：ｐｅｒｃｅｎｔ　ｏｆ　ｆｏｒｃｅｄ　ｅｘｐｉｒａｔｏｒｙ　ｖｏｌｕｍｅ　ｉｎ　ｏｎｅ　ｓｅｃｏｎｄ　ｉｎ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．　表２三组Ｔｈｌ７、Ｔｒｅｇ细胞及炎症因子的比较　Ｔａｂｌｅ２　ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＴｈｌ７，Ｔｒｅｇ　ｃｅｌｌ　ａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ　ｏｆ３　ｇｒｏｕｐｓ　（　±ｓ）　１）ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｓｔａｂｌｅ　ＣＯＰＤ，Ｐ＜Ｏ．０５；２）ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｐ＜Ｏ．０５　９２０　中山大学学报（医学科学版）　第３４卷　ＡＥＣＯＰＤ组、ＳＣＯＰＤ组和对照组外周血ＣＤ３　ＣＤ４＊Ｔ淋巴细胞中Ｔｈｌ７细胞的比例、外周血ＣＤ３　ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞中Ｔｒｅｇ细胞的比例、诱导痰中　ＩＬ一１７水平、诱导痰中ＴＧＦ—Ｂ１水平以及外周血　ＣＤ３＋ＣＤ４　Ｔ细胞中Ｔｈｌ７细胞和Ｔｒｅｇ细胞比值的　比较见表２，经Ｗｉｌｃｏｘｏｎ秩和检验ＳＣＯＰＤ和对照　组的Ｔｈｌ７细胞比例、诱导痰中ＩＬ一１７水平无统计　学差异，其它两两比较均有统计学差异。　２＿３相关性分析　相关分析结果显示，ＡＥＣＯＰＤ和ＳＣＯＰＤ中的　外周血Ｔｈｌ７比例与气道局部ＩＬ—ｌ７水平呈正相　关（ｒ分别为０．９２３和０．５３７，Ｐ分别为＜０．００１和　０．０４８）：上述两组患者中外周血Ｔｒｅｇ比例与气道　局部ＴＧＦ—ｆ３１水平亦呈正相关（ｒ分别为０．７３６和　０．５０１．Ｐ分别为０．００３和０．０１８）：ＡＥＣＯＰＤ和　ＳＣＯＰＤ中的外周血Ｔｈｌ７比例与Ｔｒｅｇ比例呈负相　关（ｒ分别为一０．７２３和一０．６７４，Ｐ均＜０．００１）。而在　健康对照组中，未见这些相关关系。　３　讨　论　本研究发现ＡＥＣＯＰＤ患者外周血中Ｔｈｌ７细　胞比例和痰液ＩＬ一１７水平均增高，而Ｔｒｅｇ细胞比　例低于ＳＣＯＰＤ患者。通过计算外周Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ比　值，可反映ＣＯＰＤ疾病时机体的全身炎症状态。　ＡＥＣＯＰＤ外周血Ｔｈｌ７比例与Ｔｒｅｇ比例呈负相关。　Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ比值较ＳＣＯＰＤ和对照组增高。提示　ＡＥＣＯＰＤ全身免疫反应程度升高。与此相对的是，　ＳＣＯＰＤ的外周血Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ比值较对照组明显降　低，提示ＳＣＯＰＤ的免疫状态以控制全身炎症反应　为主，炎症则较ＡＥＣＯＰＤ有所缓解。上述这些结果　提示，由于促炎的“Ｔｈｌ７反应”过度增强而Ｔｒｅｇ所　介导的免疫调节反应相对不足，导致ＡＥＣＯＰＤ的　“Ｔｈｌ７／Ｔｒｅｇ（即促炎／抑炎）”免疫平衡被打破，出　现了气道局部和全身的促炎反应。ＳＣＯＰＤ中也存　在外周血Ｔｈ１７比例与Ｔｒｅｇ比例的负相关。　ＳＣＯＰＤ的Ｔｒｅｇ比例远高于ＡＥＣＯＰＤ者，并且具有　较低的外周血Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ比值．提示ＳＣＯＰＤ以　“Ｔｒｅｇ反应”占优势。　对于Ｔｈｌ７细胞和ＩＬ—ｌ７在ＣＯＰＤ稳定期的作　用，目前存在争议。Ｂａｒｃｚｙｋ等ｌ　６ｌ通过ＥＬＩＳＡ检测　ＣＯＰＤ患者与健康志愿者诱导痰中ＩＬ一１７水平。发　现ＩＬ一１７在ＣＯＰＤ稳定期表达不增加。Ｄｏｅ等　通　过活检发现ＣＯＰＤ组与不吸烟的对照组相比，支　气管黏膜下ＩＬ一１７Ａ　细胞增加，但和肺功能正常　的吸烟者无差异。而石建邦等［ｓ］发现，与肺功能正　常的吸烟者相比，ＣＯＰＤ稳定期患者外周血ＩＬ～１７　水平明显增高，且与气流受限程度呈负相关。各　项研究的结论不同可能是因为ＣＯＰＤ异质性太　高　本研究为减少偏倚，仅以男性、吸烟的重度　ＣＯＰＤ患者为研究对象。本研究发现ＣＯＰＤ稳定　期的Ｔｈｌ７细胞比例和ＩＬ一１７与肺功能正常的吸　烟者无差异，且与肺功能无相关。这和Ｄｏｅｌ　７＿的结　论是一致的。细菌和病毒感染是ＩＬ一１７表达增加　的因素，也是ＣＯＰＤ急性加重的主要原因Ｅ９１，这可　能与本研究ＡＥＣＯＰＤ组ＩＬ一１７表达增加有关。　ＡＥＣＯＰＤ组外周血中Ｔｈｌ７细胞比例显著地高于　ＳＣＯＰＤ组以及对照组．反映ＡＥＣＯＰＤ炎症加剧，　提示可以将Ｔｈｌ７细胞作为ＡＥＣＯＰＤ炎症反应的　观测指标。　Ｔｒｅｇ具有免疫无能性和免疫抑制性，其控制　免疫应答的生理意义在于一方面可使感染信号持　续存在。以维持记忆细胞的生成。另一方面可以防　止引起组织破坏的病理性免疫应答发生。ＣＯＰＤ是　慢性气道炎症，且炎症从肺部“溢出”，引起全身炎　症反应，因此从Ｔｒｅｇ的功能上推测，在ＣＯＰＤ患者　体内Ｔｒｅｇ细胞的数量应该是减少的。有一项研究　支持这种观点，轻中度ＣＯＰＤ患者外周血ＣＤ４　ＣＤ２５　Ｔ细胞、ＣＤ４　ＣＤ２５　Ｔ细胞比例较健康人　群明显降低＿ｌｏ］。但多项研究表明，ＣＯＰＤ患者体内　Ｔｒｅｇ细胞的数量较健康人群增加。Ｌｅｅ等［ｎ］发现　ＣＯＰＤ患者急性发作期和肺气肿患者肺组织和外　周血中Ｔｒｅｇ细胞明显较正常人Ｉ￣ＪＪｔｌ。Ｓｍｙｔｈ等Ｅｌ２］　发现ＣＯＰＤ患者和吸烟者肺泡灌洗液中ＣＤ４＋　ＣＤ２５＋Ｔ细胞的数量增加，推测这些细胞可能已经　失去调节功能，使得机体免疫调节功能降低。本研　究表明ＣＯＰＤ稳定期Ｔｒｅｇ细胞数量较肺功能正常　吸烟者明显升高，与Ｓｍｙｔｈ等Ｉｌ’］观测的一致。但本　研究显示ＣＯＰＤ稳定期痰液ＴＧＦ一１３１也升高．且　和Ｔｒｅｇ细胞比例呈正相关，表明ＣＯＰＤ稳定期　Ｔｒｅｇ细胞功能正常。可能的机制是肺部慢性炎症　诱发Ｔｒｅｇ反应，生理意义在于减轻了肺部炎症．但　另一方面也使肺部病原菌难以清除，导致慢性感　染持续存在，同时由于ＴＧＦ一１３１在肺组织表达增　多，对慢性阻塞性肺疾病损伤过度修复，导致气道　重塑　第６期　陈钢，等．慢性阻塞性肺疾病加重期和稳定期Ｔｈｌ７和Ｔｒｅｇ细胞的表达　１　二＿　］Ｊ　１●Ｊ２　３　］ｊ　４　１Ｊ　１Ｊ５　　９２ｌ　综上所述，ＡＥＣＯＰＤ、ＳＣＯＰＤ外周血中Ｔｈｌ７　比例与Ｔｒｅｇ比例均呈负相关，提示ＣＯＰＤ存在　Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ失衡。ＡＥＣＯＰＤ患者外周血中Ｔｈｌ７细　胞比例显著地高于ＳＣＯＰＤ组及对照组．以“Ｔｈｌ７　反应”占优势；提示可以将Ｔｈ１７细胞作为　ＡＥＣＯＰＤ炎症反应的观测指标。稳定期ＣＯＰＤ外　周血Ｔｒｅｇ细胞比例增高，以“Ｔｒｅｇ反应”占优势　参考文献　Ｆｕｊｉｗａｒａ　Ｍ，Ｈｉｒｏｓｅ　Ｋ，Ｋａｇａｍｉ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｔ－ｂｅｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｂｏｔｈ　ＴＨ２　ｃｅｌｌ—ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ　ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ　ａｎｄ　ＴＨ１７　ｃｅｌｌ—ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ａｉｒｗａｙｓ［Ｊ］．Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃｌｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００７，１１９（９）：　６６２－６７０．　Ａｓｋｅｎａｓｙ　Ｎ，Ｋａｍｉｎｉｔｚ　Ａ，Ｙａｒｋｏｎｉ　Ｓ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　Ｔ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｃｅｌｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ　Ｒｅｖ，２００８，７　（５）：３７０—３７５．　Ｃｒｏｗｅ　ＣＲ，Ｃｈｅｎ　Ｋ，Ｐｏｃｉａｓｋ　ＤＡ，ｅｔ　ａ１．Ｃｒｉｔｉｃａｌ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ＩＬ－１７ＲＡ　ｉｎ　ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｉｎｆｌｕｅｎｚａ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．　Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００９，１８３（８）：５３０１—５３１０．　中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组．慢　性阻塞性肺疾病诊治指南（２００７年修订版）［Ｊ］．中华　结核和呼吸杂志，２００７，３０（１）：８－１７．　Ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｎｉｃ　Ｏｂｓｔｕｒｃｔｉｖｅ　Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　Ｄｉｓｅａｓｅ，　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｓｏｃｉｅｔｙ　ｏｆ　Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ　ｆｏｒ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ＣＯＰＤ　ｆ　２００７　ｒｅｖｉｓｅｄ　ｅｄｉｔｉｏｎ）　［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｔｕｂｅｒｃ　Ｒｅｓｐｉｒ　Ｄｉｓ，２００７，３０（１）：８－１７．　叶军，陈亚宝，徐洪涛，等．流式细胞术不同设门方　法对ＣＤ４＋ＣＤ２５＋调节性Ｔ细胞的检测方法比较［Ｊ］．　中华生物医学工程杂志，２０１０，１６（５）：４９５—４９８．　Ｙｅ　Ｊ，Ｃｈｅｎ　Ｙ，Ｘｕ　Ｈ。ｅｔ　ａ１．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇａｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｙｒ　［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｂｉｏｍｅｄ　Ｅｎｇ，２０１０，１６（５）：４９５－４９８．　［６］　Ｂａｒｃｚｙｋ　Ａ，Ｐｉｅｒｚｃｈａｌａ　Ｗ，Ｓｏｚａｆｉｓｋａ　Ｅ．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１７　ｉｎ　ｓｐｕｔｕｍ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ　ｗｉｔｈ　ａｉｗｒａｙ　ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ　ｔｏ　ｍｅｔｈａｃｈｏｌｉｎｅ［Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ　Ｍｅｄ．２００３，９７（９）：７２６—７３３．　［７］Ｄｏｅ　Ｃ，Ｂａｆａｄｈｅｌ　Ｍ，Ｓｉｄｄｉｑｕｉ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆｔｈｅ　Ｔ　ｈｅｌｐｅｒ　１７——ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　ＩＬ——１７Ａ　ａｎｄ　ＩＬ——　１７Ｆ　ｉｎ　ａｓｔｈｍａ　ａｎｄ　ＣＯＰＤ［Ｊ］．Ｃｈｅｓｔ，２０１０，３８（９）：　１１４０—１１４７．　［８］石建邦，徐晓玲，夏淮玲，等．慢性阻塞性肺疾病稳　定期患者和肺功能正常吸烟者外周血中Ｔｈ１７细胞　的表达及意义［Ｊ］．安徽医科大学学报，２０１２，４７（７）：　８３５—８３８．　Ｓｈｉ　Ｊ，Ｘｕ　Ｘ，Ｘｉａ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ　ｏｆ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　Ｔｈｌ７　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｓｔａｂｌｅ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａｎｄ　ｓｍｏｋｅｒｓ　ｗｉｔｈ　ｎｏｒｍａｌ　ｌｕｎｇ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ　Ａｎｈｕｉ，２０１２，４７（７）：８３５—８３８．．　［９］陈钢，谢灿茂，罗益峰，等．口服糖皮质激素治疗慢　性阻塞性肺疾病急性加重的疗效和疗程研究『Ｊ］．中　华结核和呼吸杂志，２００８，３１（８）：５７７—５８０．　Ｃｈｅｎ　Ｇ，Ｘｉｅ　Ｃ，Ｌｕｏ　Ｙ，　ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｄｕｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｒａｌ　ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｓ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｃｕｔｅ　ｅｘａｃｅｒｂａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｔｕｂｅｒｃ　Ｒｅｓｐｉｒ　Ｄｉｓ，２００８，３１（８）：　５７７－５８０．　［１０］Ｄｏｍａｇａｌａ—Ｋｕｌａｗｉｋ　Ｊ，Ｈｏｓｅｒ　Ｇ，Ｄａｂｒｏｗｓｋａ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．　ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　ＣＯＰＤ　［Ｊ］．Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ　Ｊ　Ｉｍｍｕｎ，２０１１，７３（９）：５９—６５．　［１１］Ｌｅｅ　ＳＨ，Ｇｏｓｗａｍｉ　Ｓ，Ｇｒｕｄｏ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉｅｌａｓｔｉｎ　ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ　ｉｎ　ｔｏｂａｃｃｏ　ｓｍｏｋｉｎｇ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｅｍｐｈｙｓｅｍａ　［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｍｅｄ，２００７，１３（９）：５６７—５６９．　［１２］Ｓｍｙｔｈ　ＬＪ，Ｓｔａｒｋｅｙ　Ｃ，Ｖｅｓｔｂｏ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．ＣＤ４－ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ＣＯＰＤ　ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｃｈｅｓｔ，２００７，１３２（９）：１５６—　１６３．　（编辑孙慧兰）