--直接滴定法
一、实验原理
将一定量的碱性酒石酸铜甲液,乙液等量混合,立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀,这种沉淀很快和与酒石酸钾纳反应,生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热条件下,以次甲基蓝作为指示剂,用除蛋白质后的样品进行滴定,样品溶液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应,生成红色的氧化亚铜沉淀,待二价铜全部还原后,稍过量的还原糖把次甲基蓝还原为其隐色体,溶液的蓝色消失,即为沉淀重点,根据样品溶液消耗量可计算出还原糖含量。
实验结果表明,1mol葡萄糖只能还原5mol多点的铜离子,且随反应条件变化而变化。因此,不能简单的根据化学反应式直接计算出还原糖的含量,而是用已知浓度的葡萄糖标准溶液标定的方法,或利用通过实验编制出的还原糖检索表来计算。
二、实验试剂与仪器
①碱性酒石酸甲液 称取15.00g五水硫酸铜及0.05g次甲基蓝,溶于水中并稀释到1000ml
②碱性酒石酸乙液 称取50.00g酒石酸钾钠及75.00g氢氧化钠,溶于水中,再加入4g亚铁氰化钾,完全溶解后,用水稀释到1000ml,储存于橡皮塞玻璃瓶中,
③葡萄糖标准溶液 精密称取1.0000g经过99℃干燥至衡量的纯葡萄糖,加水溶解后移入1000ml容量瓶中,加入5ml盐酸,用水稀释到1000ml。 ④酸式滴定管 ⑤可调式电炉
三、操作方法 ①样品处理
果汁饮料:吸取4.0ml样品,移入250ml容量瓶中,加水至刻度,混合后,备用。
②标定碱性酒石酸铜溶液
准确吸取碱性酒石酸铜钾液和乙液各5ml,置于150ml锥形瓶中,加水10ml,加玻璃珠2粒,从滴定管滴加约9ml葡萄糖标准溶液,加热使其在2min内沸腾(严格控制),准确沸腾30s,趁沸以每2s1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液,直至溶液蓝色刚好褪去为终点。
记录消耗葡萄糖标准溶液的体积。同时平行操作3份,取平均值,按下式计算。
F=cV
F----------10ml碱性酒石酸铜溶液(甲液,乙液各5ml)相当于还原糖的质量,mg;
c----------葡萄糖标准溶液的浓度,mg/ml;
V----------标定时平均消耗葡萄糖标准溶液的总体积,ml
③样品溶液预测
吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5.00ml,置于150ml锥形瓶中,加水10ml,加玻璃珠2粒,加热使其在2min内沸腾(严格控制),准确沸腾30s,趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液,滴定时要始终保持溶液呈沸腾状态。待溶液蓝色变浅时,以2s1滴的速度滴定,直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录样品溶液消耗的体积(样品中还原糖浓度根据预测加以调节,以0.1g/100g为宜,即控制样品溶液消耗体积10ml左右,否则误差太大)。 ④样品溶液测定
吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5.00ml,置于150ml锥形瓶中,加水10ml,加玻璃珠2粒,从滴定管中加入比预测时样品溶液消耗总体积少1ml的样品溶液,加热使其在2min内沸腾(严格控制),准确沸腾30s,趁热以2s1滴的速度滴定,直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录样品溶液消耗的体积。同时平行操作3份,取其平均值。
四、结果计算
F
还原糖(以葡萄糖计%)=——————*100 m(V/250)*1000
m------样品质量,g
F-------10ml碱性酒石酸铜溶液(甲液,乙液各5ml)相当于还原糖的质量,mg V-------测定时平均消耗样品的体积,ml
五、注意事项
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