【关键字】突破
掌握操作技术，解答微生物的利用试题
1．下列有关平板划线分离法的操作错误的是( ) A．将接种环放在火焰上灼烧
B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液 C．蘸取菌液和划线要在火焰旁进行
D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连 2．在涂布平板操作时错误的是( ) A．将玻璃涂棒在酒精灯火焰上灼烧，直到烧红 B．取少量菌液滴加在培养基表面
C．将沾有少量酒精的玻璃涂棒在火焰上引燃待酒精燃尽后，冷却8～10 s再用 D．涂布时可转动培养皿，使涂布均匀 3．平板冷凝后要将平板倒置，其原因是( ) A．接种时再拿起来方便 C．正着放置容易破碎 4．高温灭菌的原理是( )
A．每种微生物生长的最适温度是一定的 B．每种微生物对高温环境都不适应
C．高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动 D．高温降低了环境中氧的浓度
5．微生物(除病毒外)需要从外界吸收营养物质，并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。下列有关微生物营养的说法，正确的是( )
A．纤维素分解菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的
B．在纤维素分解菌生长的培养基中只需碳源、氮源、水、无机盐即可正常生长 C．培养基中的营养物质浓度越高对微生物的生长越有利
D．生长因子是微生物生长必需的，而微生物本身合成这些物质的能力往往不足 6．下面对“从土壤中分离分解尿素的细菌过程中灭菌”的理解，不正确的是( ) A．防止杂菌污染 B．消灭全部微生物
C．稀释土壤溶液的过程必须在火焰旁操作 D．灭菌必须在接种前进行
7．某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是( )
A．利用平板划线分离法对细菌进行计数
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B．在皿底上标记日期等方便
D．防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染
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B．以石油为唯一碳源的培养基筛选 C．采用涂布分离法分离菌种 D．称取和稀释土壤样品时应在火焰旁
8．下列有关平板划线操作的叙述中，不正确的是( )
A．第一步灼烧接种环是为了躲免接种环上可能存在的微生物污染培养物 B．每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种 C．在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液
D．划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，躲免细菌污染环境和感染操作者
9．用涂布分离法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比( ) A．比实际值高 C．和实际值一致
B．比实际值低
D．可能比实际值高，也可能比实际值低
10．在对纤维素分解菌进行选择培养时，用液体培养基的目的是( ) A．可获得大量菌体
B．纤维素分解菌适宜在液体培养基上生长 C．可以充分利用培养基中的营养物质 D．可获得高纯度的纤维素分解菌
11．临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。 回答下列问题：
(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用__________法或____________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。
(2)取该单菌落适当稀释，用__________法接种于固体培养基表面，在37 ℃培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。
(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A__________________；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B____________；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明___________________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的____________。
(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素__________。
12．为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：
(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的
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空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_______________________；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为______________。 (2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_____________。 (3)示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。 (4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中__________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高__________的利用率。
13．纤维素分解菌能够产生纤维素酶分解纤维素。回答下列问题：
(1)在培养纤维素分解菌的过程中，进行平板划线时，每次划线结束后仍然要灼烧接种环，原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (2)在筛选纤维素分解菌的过程中，通常会产生________________色色素，这种方法能够通过颜色反应直接对纤维素分解菌进行筛选。甲同学在实验时得到了如图所示的结果，则纤维素分解菌位于____________内。 A．③
B．①②
C．②③
D．①②③
(3)乙同学打算从牛胃中分离纤维素分解菌并计数，与分离醋酸菌相比，进行培养时除了营养成分不同外，最主要的实验条件差别是__________________。该同学采用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目________。
(4)丙同学在提取和分离纤维素酶的过程中，为了保证抵制外界酸和碱对酶活性的影响，采取的措施是向提取液和分离液中添加____________。若要探究纤维素酶活性的最适温度，应如何设置对照？____________________________。
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答案精析
1．D
2．A [将蘸过酒精的玻璃涂棒在酒精灯火焰上引燃，然后在酒精灯火焰旁冷却，A错误；取少量菌液滴加在培养基表面，B正确；玻璃涂棒灭菌时，将沾有少量酒精的玻璃涂棒在火焰上引燃待酒精燃尽后，冷却8～10s再用，C正确；涂布时，玻璃涂棒可以不动，可转动培养皿，使涂布均匀，D正确。]
3．D [微生物实验室培养的关键在于防止杂菌污染，平板冷凝后，要将平板倒置，其原因是防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染，故选D。]
4．C [蛋白质是生命活动的主要承担者，遗传物质DNA控制蛋白质的合成，高温会破坏蛋白质和核酸的空间结构，使它们变性失活，因此高温灭菌的原理是：破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动，C项正确。]
5．D [纤维素分解菌是异养型微生物，其碳源为有机物，如纤维素等。硝化细菌是自养型微生物，其碳源物质为CO2，因此A错误；纤维素分解菌的培养基中需加入维生素做生长因子，才能正常生长，因此B错误；培养基中的营养物质浓度过高会导致微生物不能从培养基中吸水，将出现失水过多而死亡的现象，对生长不利，因此C错误。] 6．B 7.A
8．C [平板划线操作中，接种环取菌种前灼烧的目的是避免接种环上可能存在的微生物污染培养物，以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种。划线结束仍需灼烧接种环，是为了能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。]
9．B [用涂布分离法对样品中活菌数目进行统计,只是一种估测,根据此方法的实验过程可知,在某一稀释度下涂布的平板菌体数具有一定的偶然性,并不是绝对均匀的,所以取若干个平板菌落数量的平均值比较接近样品中菌体数的真实值。用涂布分离法来统计样品中活菌的数目有可能几个细菌同时在一起,当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落,而样品稀释度无论多高都很难使其中的细菌都单个分布于培养基上,故计数结果比实际值低。]
10．A [不同物理形态的培养基其作用不一样，固体培养基用于菌种的分离、鉴定、菌落计数、菌种保藏等；液体培养基可用于获得大量菌体。]
11．(1)划线 稀释涂布(或涂布) (2)涂布 (3)敏感 不敏感 该致病菌对C的敏感性比A的弱 耐药菌 (4)A
12．(1)检测培养基平板灭菌是否合格 3.8×10 (2)灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 (3)B (4)溶解氧 营养物质
解析 (1)为了检测培养基平板灭菌是否合格，可在涂布接种前，随机取灭菌后的空白平板先
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行培养一段时间。0.1 mL稀释液中平均有(39＋38＋37)/3＝38个活菌，则每毫升稀释液中活菌的数目为38/0.1＝380，则稀释前每毫升水样中活菌数目为380×100＝3.8×10，则每升水样中活菌数目为3.8×10×1 000＝3.8×10。
(2)接种环、接种针等金属用具可直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，以达到迅速彻底灭菌的目的。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，其目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。
(3)比较图A和图B可以看出：A培养基中细菌的分布呈线性，是用平板划线法接种培养后得到的结果；B培养基中细菌均匀分布，是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。 (4)振荡培养可以提高培养液中溶解氧的含量，还可以使菌体与培养液充分接触，提高了营养物质的利用率，因此振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。 13．(1)及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境或感染实验操作者 (2)黄色或棕绿 A (3)保证无氧环境 少(低) (4)缓冲溶液 不同的温度梯度之间就可以相互对照
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