食用菌种质资源菌种保藏方法研究进展

专题综述　张　ｆｕ　《　噍阍苗　２０１３（４）・　食用菌种质资源菌种保藏方法研究进展　冯云利　郭相　邰丽梅　马明　桂明英　（中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所，云南昆明６５０２２１）　摘要　对食用菌菌种保藏的目的意义以及食用菌菌种几种　主要的保藏方法的原理和研究进展进行综述。　关键词　食用菌种质资源　菌种保藏　文章编号１０００—８３５７（２０１３）０４—０００８—０２　食用菌种质资源是科研和生产发展的根基，但是，近年　来由于环境污染、乱伐森林、过度采摘等因素的影响，野生食　用菌的种类和数量均逐年减少，有些种甚至濒临灭绝－－－。同　时，人工栽培的优良菌种也来之不易。因此，菌种保藏对野　生种质资源的基因保存，现有优良菌种遗传性能的相对稳定　以及对食用菌科研和生产均具有十分重要的意义　。菌种　资源保藏作为食用菌产业的一项基础工作已受到世界各　国的重视，国内外一些高级微生物研究单位均设有菌种保　藏机构　，美国模式菌种保藏中心（ＡＴＣＣ）、荷兰菌种保藏　中心（ＣＢＳ）、联合王国国家酵母保藏中心（ＮＣＹＣ）、德国微　生物保藏中心（ＤＷＳ）　以及中国微生物菌种保藏管理委员　会（ＣＣＣＭ）等。　１　食用菌菌种保藏的目的意义　菌种保藏的主要目的在于能较长时间保持菌种的生存　能力，保持菌种在遗传、形态和生理上的稳定性。对于生产　用的商业品种，就是要保持其生产性状的稳定性，任何的退　化变异都有可能给生产造成无法估量的损失　。同时，还要　保持菌种的物种独立性，使其免受其它微生物的污染，保持　纯培养状态。因此，菌种保藏与新品种的选育具有同等重要　性。特别是目前国内菌种分散生产，菌种来源不清，菇农之　间菌种误传，使菌种出现同名异物或同物异名的现象，造成　了菇农选择菌种的困难，而菌种的保藏和管理有利于这些问　题的缓解　。　２食用菌菌种保藏的方法　菌种保藏的方法很多，常采用控制温度、水活度、氧气和　营养等因素的方法，最大限度降低或抑制食用菌菌丝体的生　长从而达到菌种保藏的目的　。首先要挑选优良的纯菌种，　包括菌丝体和孢子；其次，根据其生理、生化特点，人为的创　造低温、干燥或缺氧等条件，抑制菌丝体的代谢作用，使其生　命活动降低或处于休眠状态，从而延长菌种生命以及使菌种　收稿日期：２０１２—１１—１６　基金项目：科技部科技基础性工作专项（ＳＱ２００８ＦＹ１５１０６１），云　南省科技厅对外科技合作计划省院省校科技合作专项（２０１２ＩＢ００８）。　作者简介：冯云利，硕士，主要研究方向是食用菌资源保护与标　本鉴定。　。　通讯作者。　８　保持原有的性状，防止变异　。　２．１　利用菌丝体保存的方法　２．１．１　琼脂斜面低温保藏将要保藏的菌种接种在ＰＤＡ斜　面培养基上培养，在２８～３２℃下培养，待菌丝体长满斜面时，　把试管的棉塞换成无菌橡皮塞，并用石蜡封口，置于４￣Ｃ的冰　箱低温保藏，每隔２～４个月转管１次　。该种方法保藏的菌　种不易老化，生命力强，接种后萌发快，能保持优良性状　，，但　转接周期短，污染风险大，且菌株易变异，易造成菌株衰退　。　２．１．２液体石蜡常温保藏法此法亦称矿物油保藏法。先　将化学纯石蜡油（无色、透明的黏稠液体）装于　角瓶中，塞　上棉塞并用牛皮纸包裹，放人高压锅中灭菌３０ｍｉｎ，然后置　于４Ｏ℃的恒温箱中，让水分蒸发至完全透明后备用，使用前　先将石蜡油做无菌检查。在无菌条件下，用无菌吸管将无菌　石蜡油注入已长好的斜面试管中，用量以高出斜面顶端１　ｃｍ　为宜，目的是使菌种与空气隔绝，阻止水分蒸发，降低细胞的　生长代谢活动，然后用蜡封口后，直立放入室内干燥处…一。　１５～２５￣Ｃ，可以保藏菌种５年…。该方法的优点是成本较低，保　藏时间较长，长达数年甚至几十年；缺点是转接培养较慢，往　往需要转接培养２－３次，才能除去菌丝体上的液体石蜡，使　菌种恢复正常生长　。　２．１．３　蒸馏水保藏法蒸馏水保藏方法适用于绝大多数食　用菌菌种保藏ｕ”。该法是用无菌蒸馏水保存食用菌菌丝体，　过程为：用移液器吸取４　ｍＬ无菌蒸馏水注入无菌安瓶中，将　发育成熟的菌落用无菌接种针挑取数块放入安瓶中，加盖密　封，室温保存。据报道，真菌用蒸馏水保藏可保存１—２０年ｕ　，　而且菌株污染少　。　２．１．４盐水保藏法食盐溶液具有高渗透性，对杂菌孢子的　萌发具有较强的抑制和杀灭作用，从而减少或避免保藏期间　菌种的污染　；同时，食盐中含有食用菌生长所必需的钠、镁、　钙等金属离子，对菌丝的生长有促进作用，转管后，由于水势　差，接种菌株吸水能力强，易恢复，成活率较高”　。　以液体培养的菌丝体作为保藏体，用无菌盐水作为保藏　液。将需保藏的菌种，接人ＰＤＡ液体培养液中，震荡培养５～　７　ｄ，将菌丝球移人装有５　ｍＬ无菌生理盐水的试管中，每管接　人４　５个菌丝球，塞上橡皮塞，并用石蜡封口，置室温或冰箱　里保藏”　。　２．２利用孢子保存菌种的方法　２．２．１　滤纸片保藏法取白色（收集深色的孢子）或黑色（收　集浅色的孢子）滤纸，剪成４．０　ｃｍＸ０．８　ｃｍ的小纸条，１２１￣Ｃ下　高温灭菌３０　ａｒｉｎ。真菌孢子采用钩悬法收集　。将载有孢子　的滤纸条放入无菌试管中，用白胶塞封口，再将试管放人干　２０１３（４）　龟同萄　于一种类似于固体状态而不发生结晶，可以通过空气干燥、化　学物质干燥蒸发水分，渗透液脱水、海藻盐包装脱水、化学保　护剂等手段实现玻璃化　。通过玻璃化法降温保存细胞时，细　胞内外的水都不形成冰晶，细胞结构不会受到机械损伤的破　坏　。此外，在恢复培养过程中应注意避免晶状体破碎和及时　洗去对真菌有毒的玻璃化溶液。Ｒｙａｎ等报道了应用此法成功　保藏一些真菌，如：Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ、Ｂｏｌｅｔｕｓ、Ｍｙｃｅｎａ等属的一些菌　种，而对Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ、Ｓａｐｒｏｌｅｇｎｉａ保藏的检测结果是全部死　燥器中１～２　ｄ，除去滤纸水分，最后低温保藏。保存期可达２～　１０年　－　。转接培养时，－将滤纸条取出，放在适宜的培养基上　培养，即可培养出所需要的菌种”　。　２．２．２沙土管保藏法取河沙用蒸馏水浸泡洗涤数次，过６０　目筛除去粗粒，加ｌ％稀盐酸煮沸３０　ｍｉｎ，再用水冲洗至ｐＨ　达到中性，烘干备用ｕ　。同时，取非耕作层的土壤，用蒸馏水　反复冲洗至ＤＨ中性，烘干碾细，过１００目筛，将处理好的沙、　土按２～４：１混匀，然后分装到小试管（０．５　ｇ每管），高压灭　菌１　ｈ，待无菌检验合格后才可使用。将已形成孢子的斜面　菌种，在无菌条件下注入无菌去离子水３　ｍＬ，制成菌悬液，再　用无菌吸管吸取菌液滴人砂土管中，以浸透砂土为止。将接　种后的沙土管放人盛有干燥剂的真空干燥器直至沙土干　燥。干燥的沙土管用无菌勺子捣松并每个菌种抽取１支接　于斜面培养基上，进行培养，观察生长情况　。检查无杂菌　亡，与常规应用的一些方法相比，高浓度玻璃化溶液对大多数　真菌是有毒的，不利于真菌菌株的长期保藏　。　２．３．４　固定化技术　固定化保藏技术是将真菌菌株先包裹　在藻酸钙中并进行超低温保藏的一种保藏技术。其基本过　程如下，制备真菌孢子或菌丝的藻酸盐悬浮液；将藻酸钙溶　液滴人藻酸盐的悬浮液，此时真菌孢子或菌丝体会包裹在形　生长，则将制备好的沙土管用石蜡封口放人冰箱，在低温下　可保藏２—１０年　。真空干燥操作须在孢子接人后４８　ｈ内完　成，以免孢子萌发　”。　２．３其它保藏方法　２．３．１　冷冻干燥保藏法　１９４５年Ｒａｐｅｒ＆Ａｌｅｘａｎｄｅｒ首次报　成的藻酸钙的小球中，放置一段时间；将菌丝或孢子小球转　移到高渗溶液中进行脱水；最后按照真菌保藏的一些常规方　法保藏菌种，如蒸馏水保藏、液体石蜡常温保藏、液氮超低温　保藏等　。Ｓｍｉｔｈ等建议该保藏技术可应用于一些担子菌、　卵菌以及一些不产孢真菌的保藏　。　道应用冷冻干燥保藏产孢真菌　，后来该方法被菌种保藏机　构应用。这种方法是采用真空、干燥、低温等手段，使菌种新　陈代谢活动处于相对静止状态，在低温下快速冷冻，又在低　温下真空干燥，从而使菌种细胞结构与成分保持原来状态　１１　８１。３　讨　论　目前菌种保藏的方法虽很多，但各具优缺点。超低温液　氮保藏法是目前国际上公认的较为理想的菌种保藏方法。　在美国模式菌种保藏中心（ＡＴＣＣ）用这种方法保藏双孢蘑菇　（Ａｇａｒｉｃｕｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ）菌种，９年后菌种仍稳定，应用于生产后，　产量、质量均无大的变化　。但这种保藏方法，需要液氮保藏　罐，该设备昂贵，而且要控制降温速率，就必须保证液氮的充　足供应，以此降低菌株变异的机率，因此，不被保藏机构广泛　采用。　对于真菌孢子来说，冷冻干燥是一种方便的长期保藏方　法，但菌丝体不适宜该法保藏。目前，仅有Ｐｅ￣ｏｔ等报道　Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ　ｓｐｐ．菌丝可经过冷冻干燥保藏后复活　。　该方法的过程是将安瓿瓶用２％的盐酸浸泡１０～１２　ｈ，用　蒸馏水冲洗干净后再用蒸馏水浸泡至ｐＨ呈中性，干燥后置　专　于高压锅灭菌４５　ｍｉｎ，烘干备用。将已生长好的孢子悬浮于　题　无菌的脱脂奶制成浓菌液，将菌液无菌操作分装于准备好的　安瓿瓶中，每支安瓿瓶分装０．２　ｍＬ。分装好的安瓿瓶放人低　综　冷冻真空干燥法，此法一般可保藏菌种２０年以上。雀稗　麦角菌（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓｐａｓｐａｌｉ）和黑麦麦角菌（Ｃ．ｐｕｒｕｒｅａ）的菌丝体　述　温冰箱中冷冻，然后将冷冻后的安瓿瓶置于冷冻干燥箱内，　冷冻干燥８～２０　ｈ后用真空泵抽真空，并在真空状态下熔封安　瓿瓶　ｌ。菌种冻干之后在４￣Ｃ下可以保藏２０多年　Ｈ　。　通过冷冻干燥保藏法保藏３年后检测，菌株全部存活，未检测　到生化性状的改变　”。但是该方法复杂，耗时较长，设备较贵　，且不适用于不产孢的真菌，所以目前还没有被专业的菌种　２．３．２液氮超低温保藏液法　１９６０年Ｈｗａｎｇ首次将此技术　应用于真菌的保藏　。根据液氮罐的构造类型，液氮超低温　保藏液法可分为隔氮式和浸氮式。其中，隔氮式是将保藏物　保藏于气相中，保藏温度一般在一１３５￣Ｃ左右，而浸氮式是将　保藏物保藏在液氮的液面之下，保藏温度为一１９６￣Ｃ　。　液氮超低温保藏方法能使食用菌菌丝的一切生长代谢活　动均停止，从而能避免菌种变异。液氮超低温保藏技术有３个　关键因素影响真菌保藏效果，一是降温速率控制，理论上保藏　保藏管理中心广泛采用。　至于固定化技术保藏方法，现已用于真菌酶制剂、生防　菌株、生物降解等多个方面的研究　”１。Ａｂｄｕｌｌａｈ等发现固　定化的技术并不对真菌的菌丝造成伤害，可以扩展用固定化　的技术应用于真菌的长期保藏。Ｗｏｏｄ等报道用固定化技术　和超低温保藏相结合的方法对Ｄａｃｔｙｌｏｒｈｉｚａ　ｆｕｃｈｓｉａ和　Ａｎａｃａｍｐｉｓ　ｍｏｒｉｏ的种子以及种子上附带的担子菌菌丝进行　保藏处理，保藏效果良好　。　目前，菌种保藏技术发展日新月异，但最主要的发展方　前的降温速率控制越慢越好，ｌ￣Ｃ／ｍｉｎ的降温速率适合大多数　真菌的保藏。二是复活过程中保藏物是否能快速升温到最适　向仍然是以保持菌株的稳定性为前提，方便科研、生产的正　常进行。＠　参考文献　［１］熊鹰，童云霞，唐利民，等．食用菌种质资源保藏方法研究【ＪＪ．西　南农业学报，２００１（１４）：９６—９８．　温度，目前处理的方法是将保藏的冻存管快速置于３７～４５％的　水浴锅中，放置１－２　ｍｉｎ　Ｏｌ。三是保护剂的种类和浓度的选　择，常用的保护剂有甘油、二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）等　。　２．３－３玻璃化技术玻璃化保藏技术可能是食用菌菌种保　藏的一个未来发展方向。玻璃化技术实质就是让水分子处　（下转Ｐ１７）　９　２０１３（４）　龟嗣苗　参考文献　［１］卯晓岚．中国大型真菌【Ｍ］．河南郑州：河南科学技术出版社，　２０００：３８８．　菌丝生长影响很大。紫陀螺菌菌丝生长温度范围为１５～　２４℃，最适生长温度为２１℃。较适ｐＨ范罔为５．５～６．５，最适　ｐＨ６．０。　由于培养温度比较试验和培养基初始ｐＨ比较试验同步　进行，培养时的初始ｐＨ和培养温度均不是试验结果中最适　ｐＨ和培养温度，所以菌丝生物量不十分理想。试验过程分　别采用了静置培养和振荡培养二种方式，由于振荡培养全部　污染，没有详实的数据，不便分析。但从培养的现象观察，振　荡培养要优于静置培养。　紫陀螺菌菌丝生长速度明显慢于一般腐生性菌类，这可　能与其共生的特殊营养要求有关，因此，需要进一步探讨紫　陀螺菌的营养机制和试验研究紫陀螺菌的培养条件。§　［２】谭爱华，刘发志．紫陀螺菌的形态特征及生长环境初报ｌＪ１．中国食　用菌，２００２，２ｌ（１）：６—７．　［３］谭爱华，张曙光，刘发志．紫陀螺菌营养成分分析ＩＪ１．食用菌学报，　２００１，８（４）：１５—１８．　［４］谭爱华，刘发志，余运岚，等．紫陀螺菌生态研究初报『Ｊ１＿食用菌学　报，２００２，９（３）：２２—２５．　［５］谭爱华，刘发志，鲁修琼．紫陀螺菌组织分离试验［Ｊ１．中国食用菌，　２００３．２２（５）：１８－２０．　［６］谭爱华，马富英，罗信昌．紫陀螺菌菌株的分离及鉴定［ＪＪ．华中农　业大学学报，２００４，２３（１）：５４—５７．　（上接Ｐ９）　【２］　黄年来．自修食用菌学【Ｍ］．江苏：南京大学出版社，１９８７　２ｌ８—２２０．　［２３］Ｐｅｒｔｏｔ　Ｅ，Ｐｕｃ　Ａ，Ｋｒｅｓｍｅｒ　Ｍ．Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｏｎｓｐｏｒｕｌａｔｉｎｇ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｕｎｇｕｓ　Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ［Ｊ］．Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉ—　ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９７７（４）：２８９—２９４．　［２４］　Ｓｃｈｉｐｐｅｒ　ＭＡＡ．＆Ｂｅｋｋｅｒ—Ｈｏｌｔｍａｎ　Ｊ．Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ｜ｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ　ｆｕｎ　ｇａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅｓ［Ｊ］．Ａｎｔｏｎｉｅ　ｖａｎ　Ｌｅｅｕｗｅｎｈｏｅｋ，１９７６，４２（３）：３２５—３２８．　中国食用菌栽培学【Ｍ１．北京：农业出版社，１９８８：２３５—２３９．　［３】　杨新美＿食用菌菌种保藏研究进展【Ｊ１．中国食用菌，　［４］　曾辉，王泽生．１９９４，５（１３）：５－６．　［２５］　吕线红，郭利美．工业微生物菌种的保藏方法［Ｊ］．山东轻工业学　院学报，２００７，２１（１）：５２—５５．　［２６］武治昌．食用菌菌种保藏技术【Ｊ　Ｊｌ农村科技开发，２００４（８）：２９—３０．　［２７］Ｈｗａｎｇ　ＳＷ，Ｌｏｎｇ　ｔｅｒｍ　ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｕｎｇｕｓ　ｃｕｌｔｕｒｅｓ　ｗｉｔｈ　ｌｉｑｕｉｄ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｒｅｆｒｉｇｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９６０（１４）：７８４—　７８８．　食用菌菌种保藏技术研究进展ｆＪ］．　［５］　张瑞颖，胡丹丹，左雪梅，等．食用菌学报，２０１０，１７（４）：８４—８８．　谈食用菌菌种的保藏『Ｊ１ｌ现代农业科　【６］　刘红，黄建军，许丽娟，等．技，２００８（１８）：１２１—１２３．　食用菌菌种的保藏方法［ＪＪ．现代种业，２００４（１）：　【７】　刘萍，姜晓坤．３０—３１．　［２８］吕和平，吴红宇，刑仁昌，等．食用菌菌株的长期保藏方法【ＪＪ．中　国食用菌，２００７，２６（２）：２９—３０．　［２９］　Ｒｙａｎ　ＭＪ，Ｓｍｉｔｈ　Ｄ，Ｊｅｆｆｒｉｅｓ　Ｐ．Ａ　ｄｅｃｉｓｉｏｎ—ｂａｓｅｄ　ｋｅｙ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｕｎｇｉ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ　食用菌菌种保藏技术ＩＪＪ．农村科技开发，２００４（８）：２９—３０．　［８］　武治昌．食用菌种保藏８法阴．农村新技术，１９９６（６）：４０—４１．　［９］　古立新．微生物菌种的保藏方法『Ｊ１．现代农业科　［１０】　许丽娟，刘红，魏小武．技，２００８（１６）：９９—１０１．　Ｂｕｒｄｓａｌｌ　ＨＨ．＆Ｄｏｒｗｏｒｔｈ　Ｊｒ．ＥＢ．Ｐｒｅｓｅｒｖｉｎｇ　ｃｕｌｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｗｏｏｄ－ｄｅ—　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２０００（１６）：１８３—１８６．　【３０］Ｓｍｉｔｈ　Ｄ．Ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃａｎｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｒｙｏｐｒｅｓ　ｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｕｎｇｉ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓ－　ａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆｔｈｅ　ＢｒｉｔｉｓｈＭｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｏｃｉｅｔｙ，１９８３（８０）：３６０—３６３．　生　ｃａｙｉｎｇ　Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃ０ｔｉｎａ　ｕｓｉｎｇ　ｓｔｅｒｉｌｅ　ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ　ｗａｔｅｒ　ｉｎ　ｃｒｙｏｖｉａｌｓ［Ｊ］．　Ｍｙｃｏｌｏｇｉａ．１９９４，８６（２）：２７５—２８０．　Ｂｏｒｍａｎ　ＡＭ，Ｓｚｅｋｅｌｙ　Ａ，Ｃａｍｐｂｅｌｌ　ＣＫ．，Ｊｏｈｎｓｏｎ　ＥＭ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ　ｆｕｎｇｉ　ａｆｔｅｒ　ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ　ｓｔｏｒ・　ａｇｅ　ｉｎ　ｓｔｅｒｉｌｅ　ｗａｔｅｒ　ａｎｄ　ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　ｒｅｃｅｎｔ　ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｓｔｏｒ－　理　　化　生　，　【１２】［３１］Ｐｅｒｔｏｔ　Ｅ，Ｐｕｃ　Ａ，Ｋｒｅｎｌｓｅｒ　Ｍ．Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｏｎｓｐｏｒｕｌａｔｉｎｇ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｕｎｇｕｓ　Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ［Ｊ１．Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９７７，４（４）：２８９—２９４．　［３２】王奕峰，金子辰，吴立梦＿微生物菌（毒）种保藏及管理［Ｊｊ＿上海预　防医学杂志，２００７，ｌ９（２）：８７—８９．　［３３］Ｐｅｒｅｉｒａ　ＲＭ，Ｒｏｂｅｒｔ　ＤＷ．Ａｌｇｉｎａｔｅ　ａｎｄ　ｃｏｒｎｓｔａｒｃｈ　ｍｙｃｅｌｉａｌ　ｆｏｒｍｕｌａ—　ｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｅｎｔ０ｍ。ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｆｕｎｇｉ　Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｂａｓｓｉａｎａ　ａｎｄ　Ｍｅｔａｒｈｉ—　隧蠢　ａｇｅｍｅｔｈｏｄｓｆＪＪ．Ｍｙｅｏｐａｔｈｏｌｏｇｉａ，２００６，ｌ６１（６）：３６１—３６８．　　Ｊ１．北华大学学　【１３］　徐莉．蒸馏水保存法在真菌实验室中的应用Ｉ报（自然科学版），２００４（１）：１１２．　食用菌菌种的简易保藏法［ＪＪ．贮藏加工，２００４（９）：３１．　［１４］　范立宝．ＪＪ．生物学通报，　【１５］　吴敏．食用菌菌种衰退的防止与菌种保藏ｌ１９９２（１）：６２．　ｚｉｕｍ　ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅｃｏｎｏｍｉｃ　Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｙ，１９９１（８６）：１　６５７—１　６６１．　［３４］Ｌｅｓｔａｎ　Ｄ，Ｌｅｓｔａｎ　Ｍ，Ｌａｍａｒ　ＲＴ．Ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｍｙｃｅｌｉａｌ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ｗｈｉｔｅ—ｒｏｔ　ｆｕｎｇｉ　ｏｎ　ｈｙｄｒｏｇｅｔｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９８（２０）：２４４—２５０．　野外药用真菌的菌种分离和保藏［ＪＪ．滁州学院　［１６Ｊ　殷培峰，浦冠勤．学报，２００７，９（６）：６９—７１．　一种获得大型真菌纯培养的有效方法一　［１７】　占琦，霍光华，王飞，等．改良孢子弹射法ｆＪ］．食用菌，２０１０（１）：２９－３０．　ｌ８　ｌ９　２０　［３５］　Ｗｏｏｄ　ＣＢ，Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ　ＨＷ，Ｍｉｌｌｅｒ　ＡＰ．Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｒｃｈｉｄ　ｓｅｅｄ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｆｕｎｇａｌ　ｓｙｍｂｉｏｎｔ　ｕｓｉｎｇ　ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ—‘ｄｅｈｙｄｒａ－　吴建忠．食用菌母种保藏技术ｆＪ１．科学种养，２００８（３）：２４．　霍红．蜜环菌菌种保藏技术要点　食用菌，２００３（６）：３４—３６．　顾金刚，李世贵，姜瑞波．真菌保藏技术研究进展【ＪＪ．菌物学报，　２００７．２６（２）：３１６—３２０．　ｔｉｏｎ　ｉｓ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｏｎ　ｍｏｉｓｔｕｒｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ａｎｄ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ［Ｊ］．　Ｃｒｙｏｌｅｔｔｅｒｓ，２０００（２１）：１２５—１３６．　▲封面圈角晖虎掌刺银耳（Ｐｓｅ“ｄｏ　如ｕｍ　ｇｅｌａｔｉｎｏｓｕｍ）　实体　较小，半透明似胶质，软、污白色扇形，匙形或掌状至圆形，具　短柄。夏秋季生长在比较阴湿针叶树倒腐木或枯木桩基　部。分布于吉林、广东、青海、西藏等地。可食用。　１　７　食用菌育种栽培加工技术［Ｍ］．湖南：湖南科学技术出版　［２１】　黄日明．社，１９９８．　ｅｘａｎｄｅｒ　ＤＦ．Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｌｄｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｌｙｏｐｈｉｌ　【２２］　Ｒａｐｅｒ　ＫＢ＆Ａｌｐｒｏｃｅｓｓ［Ｊ］．Ｍｙｃｏｌｏｇｉａ，１９４５，３７（４）：４９９—５２５．