微柱凝胶法在血型鉴定中的应用

２０１７年第４卷第１４期　２０１７　Ｖｏ１．４　ＮＯ．１４　临床医药文献杂志　Ｊｏｕｒｎａｌ　０ｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ　２７４５　微柱凝胶法在血型鉴定中的应用　李伟敬　，夏瑞雪　，崔艳　（１．解放军第２６６１￣院检验科，河北承德０６７０００；２．解放军第２６６医院麻醉科，河北承德【关键词】微柱凝胶法；血型鉴定；应用　【中图分类号】Ｒ４４６．６２　【文献标识码】Ａ　０６７０００）　【文章编号】ＩＳＳＮ．２０９５－８２４２．２０１７．１４．２７４５．０１　ＡＢＯ血型系统是被发现的人类第一个血型系统，至　细胞或比例３：１稀释）。撕开卡封膜，于兰Ａ、黄Ｂ、灰Ｄ、　今，现发现人类血型系统已有３Ｏ多种，随着人类对血型的　Ｃｏｎｔｒｏｌ微柱管反应腔中加入１％待检ＲＢＣ悬液各５０¨ｌ：于白　进一步研究，Ｒｈ血型系统是红细胞血型中最为复杂的一　色Ａ、Ｂ、Ｏ、自身管分别各加入待检血浆５０　ｕｌ，再分别加　个血型系统，因此血型在输血前的正确鉴定，是确保安全　入对应的１．０％Ａ１、Ｂ、Ｏ型试剂红细胞悬液、待检红细胞　输血的重要措施，直接关系到患者的生命安全。目前传统　悬液５０　ｕ１。将检测卡，置离心机静置５　ｒａｉｎ，１０００　ｆｍｉｎ，　的ＡＢＯ血型和Ｒｈ血型鉴定主要采用玻片法，其敏感度不　２　ｍｉｎ，１８００　ｒ／ａｒｉｎ，３　ｍｉｎ离心后取出，判定结果。　能满足临床输血安全需求。因此，我们选择了微柱凝胶法　１．４．２玻片法　ＡＢＯ、Ｒｈ（Ｄ）血型定型检测卡在同一卡片上进行正反血　按照《全国临床检验操作规程》进行操作并判定结　”。　型鉴定。　２结果　１材料与方法　在２０００例血型鉴定标本中ＲｈＤ阴性５例（用玻片鉴定　１．１一般资料　也为阴性），正反定型不符７例（其中红细胞抗原减弱例２　检测标本为我院２０１６年８～１２月送检的门诊及住院患者　例，高效价冷凝集素２例，拖尾现象３例）。　２０００份ＥＤＴＡ抗凝新鲜血样。　１．２试验原理　３讨论　本检测卡是利用微柱凝胶过筛检测原理。若待检患者红　红细胞血型抗原减弱２例均为肿瘤患者，由于凝集反应　细胞与凝胶中的单克隆ＩｇＭ抗Ａ、抗Ｂ、抗Ｄ试剂发生特异性　减弱，影响结果判定。针对此问题，我们根据凝集反应减　凝集反应，或待检患者血浆与ＡＢＯ试剂红细胞发生特异凝集　弱程度，把肿瘤患者红细胞悬液浓度相应增加，用标准血　反应，通过ＴＤ．２Ｙ医用多功能离心机离心后，凝集的红细胞　清再鉴定一次，结果准确。血型鉴定中高冷凝集素的影响　被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或凝胶颗粒间隙　应引起我们的高度重视，高效价冷凝集素是患者体内产生　之中，判为阳性结果，表示待检患者红细胞含相应的血型抗　了抗自身红细胞的嗜异性冷抗ＩｇＭ。血型鉴定过程中由于在　原，或待检患者血浆含相应的抗体；如果ＲＢＣ全部沉积于凝　室温条件下进行，嗜异性冷抗ＩｇＭ即可与自身红细胞发生非　胶孔腔底部，则判为阴性结果，表示待检测红细胞不含相应　特异性凝集反应，出现凝集现象而导致血型判断错误。对　的抗原，或待检血浆不含相应的抗体。正定型管有４管，其　此我们先把待检红细胞用生理盐水洗涤三次，在用３７℃水　中蓝色Ａ管含３５％单克隆ＩｇＭ抗Ａ（效价≥１２８），黄色Ｂ管含　浴箱温育３Ｏ　ｒａｉｎ后进行检测并结合玻片法，做出正确判断。　３５％单克隆ＩｇＭ抗Ｂ（效价≥１２８），灰色Ｄ管含３５％单克隆　经过检查发现拖尾现象是由于实验人员在撕封条的时候用　ＩｇＭ抗Ｄ（效价≥６４），白色Ｃｏｎｔｒｏｌ管含生理盐水３５％，各　力过猛　导致抗Ａ孔里的血清污染到抗Ｂ血清孔里，出现结　微柱管分别含凝胶６５％，在卡片上的排列顺序从左至右由　果拖尾现象，给结果判读增加难度。我们的解决办法是检　第一管起分别为兰Ａ、黄Ｂ、灰Ｄ、自Ｃｏｎｔｒｏｌ；反定型管有　测卡在离心机１０００　ｒ／ｒｎｉｎ，２　ａｒｉｎ；１８００　ｒ／ａｒｉｎ，３　ｒａｉｎ离心后　４管，白色Ａ、Ｂ、Ｏ、自身管全部为无抗体微柱管，各管分　小心撕开封条，避免用力过猛。通过实验我们总结在检测　别含生理盐水３５％、凝胶６５％，在卡片上排列顺序从左至右　卡使用过程中，如因运输过程产生气泡，可将检测卡放置　由第５管起分别为白Ａ、白Ｂ、白０、自身。　在漩涡振荡器上震荡，使气泡漂移至胶面为止，３０００　ｒ／ａｒｉｎ　１．３试剂与仪器　离，６２　ａｒｉｎ。延长抗原抗体反应时间，按１０００　ｒ／ｍｉｎ，２　ｍｉｎ；　ＡＢＯ、Ｒｈ（Ｄ）血型定型检测卡（中山市生科试剂仪　１８００　ｒ／ａｒｉｎ，３　ｒａｉｎ离心，可提高试验灵敏度。避免因离心　器有限公司），ＡＢＯ血型反定型试剂盒（人红细胞）（长　速度过快、时间过长导致结果假阴性。及时发现由于细　春博德生物技术有限责任公司），ＴＤ．２Ｙ医用多功能离心机　菌污染、纤维蛋白析出，抗凝血不佳胶体上清液挥干导致　（中山市生科试剂仪器有限公司）。　的假阳性。玻片法作为我们常用的血型鉴定方法，其敏感　１．４检测方法　度不能满足疑难血型的鉴定。微柱凝胶法成为目前血型检　１．４．１　ＡＢＯ、Ｒｈ（Ｄ）血型定型检测卡　测的主要方法，弥补了玻片法的不足，具有血型鉴定时间　观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，将卡　短，结果准确、清楚，灵敏度高，易于保存备查等优点。　放置平衡至室温，使用前置离心机１０００　ｆｍｉｎ离心２　ｒａｉｎ，　因此，微柱凝胶法检测血型为临床安全输血提供了有效保　ｌ　８００ｒ／ａｒｉｎ离　６３　ｍｉｎ。将待检全血标本离心分离红细胞与血　障，值得推广使用。　浆（血清），取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。制　参考文献　备ｌ％待检红细胞悬液（５００　ｕｌ生理盐水或血型分析用稀释　［１］　叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程．第三版，南京：东　液对５　ｕｌ压积红细胞）与１％的Ａ１、Ｂ、０型试剂红细胞悬　南大学出版社．　液（１５００　ｕｌ血型分析用稀释液对５００　ｕｌ的４％Ａ１、Ｂ、Ｏ红　本文编辑：吴卫