小鼠肾脏缺血再灌注期间乙醛脱氢酶2表达的变化解析

・４６・生垡墨宣整焦苤查垫！垒生！旦蔓ｉ！鲞整！塑壁些』哑翌！墅望ｋ堕！』塑坚！婴垫！垒！ｙ丛≥Ｚ！盥垒！●实验研究●小鼠肾脏缺血再灌注期间乙醛脱氢酶２表达的变化和安梁茜子袁清洪善娟陈昌庆李树欣张大伟蔡明【摘要】目的探讨缺血再灌注（氓）期间小鼠肾组织乙醛脱氢酶２（√，曲Ｈ＇２）表达的变化。方法采用雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠夹闭双侧肾蒂的方法建立小鼠肾脏珉损伤模型，肾蒂夹闭时间为３０ｍｉｎ。采用随机数字表法将小鼠分为７组：假手术组、缺血再灌注１ｈ、３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ及７２ｈ组，每组８只小鼠。分别于假手术后１ｄ及再灌注后１、３、６、１２、２４及７２ｈ获取各组小鼠肾脏，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＥＲ）法检测肾组织ＡＬＤＨ－２ｍＲＮＡ的表达，采用蛋白质印迹法检测肾组织√６曲Ｈ二２蛋白的表达。结果小鼠肾脏氓后肾组织ＡＬＤＨ一２ｍＲＮＡ的水平迅速升高，至再灌注后３ｈ时达到峰值，与假手术组比较，氓３ｈ组和ＩＲ６ｈ组均显著升高（Ｐ＜ｏ．００１）；小鼠肾脏承后肾组织ＡＬＤＨ－２蛋白表达逐渐降低，至再灌注后３ｈ降至最低，之后逐渐升高，至再灌注后２４ｈ达到峰值，与假手术组比较，各ｍ组肾组织Ｊ蛆ＤＨ一２蛋白表达的差异均有统计学意义（Ｐｄ０．０１）。结论肾脏ｍ后ＡＬＤＨ－２在转录和蛋白水平的表达均有显著改变；ＩＲ过程对肾脏ＡＬ—ＤＨ一２的表达产生影响，并间接影响其对肾脏ｍ后致伤效应的调控作用。【关键词】小鼠；肾脏；缺血再灌注；乙醛脱氢酶２基金项目：国家自然科学基金（８１２００５４７，８１４７００４３）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｈａ啤ｓｏｆＩｄｄｅｈｙｄｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ２ｄｕｒｉｎｇｒｅｎａｌｉｓｅｌｍｎｉａ－ｒｅｌｍｆｆｕｓｉｏｎｉｎｍｉｃｅＨｅＡｎ’，ＬｉａｎｇＸｉｚｉ，ＹｕａｎＱｉｎｇ，ＨｏｎｇＳｈａｎｊｕａｎ，ＣｈｅｎＣｈａｎｇｑｉｎｇ，ＬｉＳｈｕｘｉｎ，ＺｈａｎｇＤａｚｏｅｉ，ＣａｉＭｉｎｇ．‘ＯｒｇａｎＴｒａｎｓｐｌａｎｔＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ｔｈｅ３０９ｔｈＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＰＬＡ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００９１，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：Ｃａｉ施行ｇ，Ｅｍａｉｌ：ｃａｉｍｉｎｇ＠ｍｅｄｍａｉｌ．ｃｏｍ．ｃｎＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｈａｎｇｅｏｆａｉｄｅｈｙｄｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ２（ＡＬＤＨ～［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ２）ｉｎｒｅｎａｌｔｉｓｓｕｅｓｏｆｍｉｃｅｕｎｄｅｒｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（Ⅱｔ）ｉｎｊｕｒｙ．ＭｅｔｈｏｄＭａｌｅＣ５７ＢＬ／６ＪｍｉｃｅＩＲｉｎｊｕｒｙｍｏｄｅｌｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｂｙｃｌｉｐｐｉｎｇｂｉｌａｔｅｒａｌｒｅｎ８ｌｐｅｄｉｃｌｅｓｆｏｒｉｎｔｏ７ｇｒｏｕｐｓｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅｒａｎｄｏｍｎｕｍｂｅｒｔａｂｌｅｍｅｔｈｏｄ：ｃｏｎｔｒｏｌ３０ｍｉｎ．Ｆｉｆｔｙ－ｓｉｘｍｉｃｅｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｇｒｏｕｐ，ａｎｄＩＲ１ｈ，３ｈ，６ｈ，１２ｈ，２４ｈａｎｄ７２ｈｇｒｏｕｐｓ．ＫｉｄｎｅｙｓｉｎＩＲ１ｈ，３ｈ，６ｈ，１２ｈ，２４ｈａｎｄ７２ｈｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｈａｒｖｅｓｔｅｄａｔｅａｃｈｔｉｍｅｐｏｉｎｔ。ａｎｄｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｈａｒｖｅｓｔｅｄａｔ２４ｈｏｆｓｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎ．ＴｏｔａｌｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＡＬＤＨ一２ｉｎｔｈｅｋｉｄｎｅｙｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＥＲ．ＷｅｓｔｅｍｂｌｏｔｔｉｎｇｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅＡＬＤＨ一２ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＲｅｓｕｌｔＴｈｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＡＵＤＨ一２ｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｒｉｇｈｔａｆｔｅｒＩＲａｎｄｒｅａｃｈｅｄｔｈｅｐｅａｋａｔ３｝ＬＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＡＵ）Ｈ－２ｍＲＮＡｉｎＩＲ３ｈｇｒｏｕｐａｎｄＩＲ６ｈｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｉｎｃｏｎｔｒ０１ｏｆＡＬＤＨ－２ｐｒｏｔｅｉｎｂｅｇａｎｔｏｄｅｃｌｉｎｅａｆｔｅｒＩＲａｎｄｒｅａｃｈｅｄａｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｇｒｏｕｐｓｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．００１）．Ｔｈｅａｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｍｉｎｉｍｕｍ３ｈ，ｔｈｅｎＡＬＤＨ－２ｐｒｏｔｅｉｎｉｎＩＲｉｎｃｒｅａｓｅｄａｎｄｒｅａｃｈｅｄｉｔｓｐｅａｋａｔ２４ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｉｎａｈ（Ｐ＜０．０１）．ＴｈｅＡＬＤＨ一２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１ｏｒＰ＜０．００１）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＡＬＤＨ一２ｈａｓａｎｉｍｐａｃｔｏｎｒｅｍａｒｋａｂｌｅｃｈａｎｇｅａｆｔｅｒｋｉｄｎｅｙＩＲ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇｔｈａｔｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆＩＲｈａｓＡＬＤＨ一２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄｉｎｄｉｒｅｃｔｌｙａｆｆｅｃｔｓｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＡＬＤＨ一２ｉｎｋｉｄｎｅｙＩＲｉｎｊｕｒｙ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ｍｉｃｅ；Ｋｉｄｎｅｙ；Ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ；Ａｌｄｅｈｙｄｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ２Ｆｕｎｄｐｒｏｇｒａｍ：ＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｍ（８１２００５４７，８１４７００４３）ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｎ№ｊ．ｉｓｓｒＬ０２５４－１７８５．２０１６．叭．０１１作者单位：１０００９１北京，怒放军第三。九医院器官移植研究所（和安、袁清、陈昌庆、李树欣、张大伟、蔡明）；０２１９００上海，上海交通大学医学院附属第九人民医院北院病理科（梁茜子）；１０００８４北京，清华大学免疫学研究所（洪善娟）肾脏缺血再灌注（ＩＲ）损伤是导致组织损伤和肾功能衰竭的重要原因，目前仍缺乏有效的治疗方法‘１｜。乙醛脱氢酶２（ＡＬＤＨ一２）是一种线粒体酶，在通信作者：蔡明，Ｅｍａｉｌ：ｃａｉｍｉｎｇ＠ｍｅｄｍａｉＬ∞ｍｃｎ万方数据生堡墨宣整蕉盘查垫！！生！旦箜ｉ！鲞筮！塑堡ｈ堕』Ｑ垡塑！！！垒！Ｐ！！坐！』！翌坚！！ｚ！Ｑ！！！ｙ！！：！！！丛垒！‘４７‘肾组织中广泛表达。我们的前期研究证实，生理剂量乙醇预处理可以减轻小鼠肾脏的ＩＲ损伤，而ＡＬＤＨ一２是其中的关键作用酶［２］。然而，肾脏ＩＲ是否会影响ＡＬＤＨ－２的表达仍不明确。因此我们采用小鼠肾脏ＩＲ模型，检测了肾ＩＲ期间ＡＬＤＨ一２在转录和蛋白水平的表达变化，为进一步探索ＡＬＤＨ一２的调控机制提供实验依据。材料与方法一、实验动物、试剂与仪器１．实验动物：清洁级雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠，鼠龄８～１０周，体重２０～２５ｇ，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，分笼饲养于我院器官移植研究所动物房，小鼠的饲养和实验均严格遵照中华人民共和国科学技术部颁发的《关于善待实验动物的指导性意见》。２．主要试剂和仪器：抗ＧＡＰＤＨ及抗ＡＬＤＨ一２抗体均购自英国Ａｂｃａｍ公司；蛋白浓度测定试剂盒购自美国ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司；引物合成由Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司完成。ＣＦＸ９６型荧光定量基因扩增仪为美国Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司产品；ＮＤ２０００Ｃ型紫外可见分光光度计为美国ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司产品；ＵｎｉｖｅｒｓａｌＨｏｏｄⅡ型凝胶成像分析系统为美国Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司产品。二、实验分组及小鼠肾脏ＩＲ损伤模型的建立１．分组：取５６只Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠，采用随机数字表法将小鼠分为７组：假手术组、缺血再灌注１ｈ、３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、７２ｈ组（即ＩＲｌｈ组、ＩＲ３ｈ组、ＩＲ６ｈ组、ＩＲｌ２ｈ组、ＩＲ２４ｈ组和ＩＲ７２ｈ组），每组８只小鼠。２．小鼠肾脏ＵＲ损伤模型的建立：取Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠，术前禁食１２ｈ，经腹腔注射戊巴比妥钠５０ｍｇ／ｋｇ麻醉后，腹部皮肤碘酒消毒，腹部正中切口，进入腹腔，术中保护输尿管，分离左右肾蒂，无损伤微型动脉夹迅速阻断左右肾蒂，可见肾脏由鲜红变紫黑色，表示夹闭成功。阻断肾蒂３０ｒａｉｎ后去除动脉夹，恢复血流灌注，可见肾脏迅速由紫黑色变为鲜红，恢复原来颜色。术中小鼠置于反馈式数控温床，通过直肠温度计控制加热系统，维持缺血期间体温在３６℃～３７℃之间。术后分两层缝合腹部切口。为维持小鼠体液平衡，术后皮下注射预热（３７℃）的生理盐水５００“ｌ。术后给与红外暖灯照射辅助苏醒。假手术组小鼠分离肾蒂后不阻断肾蒂血流，待３０万方数据ｒａｉｎ后分层缝合腹部切口，关闭腹腔。三、各组检测样本的采集及检测项目１．样本采集：假手术组小鼠于术后１ｄ后处死小鼠，各ＩＲ组分别于再灌注后各时间点处死小鼠，经各组小鼠腹主静脉取血，并获取各组小鼠的双侧肾脏。取各组小鼠双肾，左肾经１００ｇ／Ｌ甲醛固定后，石蜡包埋；右肾取出后迅速放入液氮中，继而矢状纵行剖开，然后分别置于一８０℃冰箱中冻存，待后续检测。２．ＡＬＤＨ一２ｍＲＮＡ的检测：采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ）法进行测定。取出冻存的各组部分肾组织，采用Ｔｒｉｚｏｌ法提取组织总ＲＮＡ，紫外分光光度计检测提取的ＲＮＡ浓度。引物序列的设计见表１。ｃＤＮＡ的合成转录参照Ｍ－ＭＬＶ逆转录试剂盒操作程序进行。反应体系２０肚ｌ，反应条件：９５℃３ｒａｉｎ预变性，９５℃１０Ｓ变性，６０℃２０Ｓ退火，７２℃１５Ｓ延伸，共进行３９个循环，最后一个循环后７２℃１０ｒａｉｎ总延伸。选择ＨｏｕｓｋｅｅｐｇｅｎｅＧＡＰＤＨ作为内参，对目的基因进行均一化。目的基因相对表达量的计算采用２一姗法［３］，将假手术组样本内目的基因表达水平设为１，对各ＩＲ组样本内目的基因的表达水平进行标准化。△ＣＴ２ＣＴ，Ｔａｒｇｅｔ—ＣＴ．ＧＡＰＤＨ；ＡＡＣＴ２ＡＣＴ。氓ｘ—Ｃｌ幽。表１ＡＬＤＨ一２ｍＲＮＡ的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应引物序列基因引物序列（５’－３’）ＡＬＤＨ一２上游：ＧＴＧＴＡＡＣＣＣＡＴＡＡｃｃＣＣｃＡＡＧＡ下游：ＣＡＣＣＡＧＣＡＧＡＣＥＬ玎ＣＡＡＧＣＧＡＰＤＨ上游：ＧＴＧＴＡＡＣＣＣＡＴＡＡＣＣＣＣｃＡＡＧＡ下游：ＣＡＣＣＡＧＣＡＧＡＣＷ＿ＥＴＣＡＡＧＣ３．ＡＬＤＨ一２蛋白水平的检测：采用蛋白质印迹法进行检测。取一８０℃冻存的各组小鼠右肾组织各约５０ｍｇ，加入适量磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）匀浆，１２０００×ｇ离心１５ｍｉｎ，去上清液，加入适量ＲＩＰＡ裂解液（康为世纪公司产品）及蛋白酶抑制剂混合物（Ｒｏｃｈｅ公司产品），于４℃下静置３０ｍｉｎ，每１０ｒａｉｎ振荡１次；１２０００×ｇ离心１５ｒａｉｎ后取上清液，采用ＢＣＡ法测定各组的蛋白浓度，调整样本浓度一致，上样量３０肚ｇ。十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤ睁ＰＡＧＥ）分离蛋白，浓缩胶电压８０Ｖ，分离胶电压１２０Ｖ，电泳２ｈ。湿式转・４８・生堡置宣整焦盘查呈！！垒生！旦筮！Ｚ鲞筮！塑盟迪』盟些！！塑！巳！塑！！』垫坚！型垫！鱼！ｙＱ！：！Ｚ！塑垒！膜装置将蛋白转至ＰＶＤＦ膜，含５０ｇ／Ｌ脱脂奶粉闭，室温振摇１ｈ，于４℃下加入一抗（抗ＡＬＤＨ一２抗体，１：１０００稀释），孵育过夜；用ＰＢＳＴ洗膜４次，每次１５ｍｉｎ；于室温下加入二抗（辣根过氧化２渐下降。与假手术组相比，ＩＲ１ｈ组、ＩＲ３ｈ组、ＩＲ６达量均显著减少，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；ＩＲ２４的三羟甲基氨基甲烷一ＨＣＩ－吐温２０溶液（ＴＢＳＴ）封ｈ组、ＩＲｌ２ｈ组小鼠肾组织ＡＬＤＨ一２蛋白的相对表ｈ组和ＩＲ７２ｈ组小鼠肾组织ＡＬＤＨ：２蛋白的相对表达量均显著增加，差异均有统计学意义（Ｐ＜物酶标记的山羊抗兔ＩｇＧ，Ａｂｃａｍ公司产品，１：０．００１，图２、３）。０００稀释）孵育１ｈ，ＰＢＳＴ洗膜４次，每次１５ＡＬＤＨ２ｍｉｎ。混合等体积Ａ液和Ｂ液，将显色剂滴加到ＰＶＤＦ膜正面，于凝胶成像分析仪上进行检测。以ＧＡＰＤＨ作为内参照，通过计算目标蛋白与糯’睁‘Ｆ＿赫＿ｑ假手术组１３６１２２４７２ＧＡＰＤＨＧｍ，ＤＨ的灰度比值进行半定量分析。四、统计学分析所有数据用ＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍ软件（５．０版）进行统计处理，实验数据以均数±标准差（互±ｓ）表示。两组数据的比较采用Ｓｔｕｄｅｎｔ’Ｓｔ检验或Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ检验（均为双尾），Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。结果再灌注时间Ｏ）图２各组小鼠ＡＬＤＨ一２蛋白的表达一、肾组织ＡＬＤＨ－２ｍＲＮＡ表达的变化小鼠肾脏ＩＲ后１ｈ，ＡＬＤＨ－２ｍＲＮＡ的表达无琴｝Ｉ－ＩＩＩ＿＿图３各组小鼠ＡＬＤＨ－２蛋白的相对表达量明显变化，再灌注后３ｈ时迅速升高并达到顶峰，随后逐渐下降，至再灌注后２４ｈ时恢复到正常水平。与假手术组比较，ＩＲ３ｈ组和ＩＲ６ｈ组肾脏ＡＬＤＨ一２ｍＲＮＡ的表达均显著升高，差异均有统计学意义（Ｐｄ０．００１，图１）。５０讨论肾脏ＩＲ损伤包括早期对细胞的直接损伤，以及随后启动的炎症反应所造成的继发损伤［４］。ＩＲ过程产生的大量活性氧造成的细胞氧化应激损伤就是重要的早期信号［５］。脂质过氧化是氧化应激反应的重要部分，产生具有高度活性的毒性醛类代谢物，如４一羟基壬烯醛（４一ＨＮＥ）和丙二醛（ＭＤＡ）ｅ６｜。这些醛类代谢物可扩散并攻击远处靶点，造成酶活性丧失，抑制ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白合成，在肾脏ＩＲ中发挥关键致伤作用。ＡＬＤＨ一２是线粒体内经典的糖３６１２２４７２髫４０懈蚕３０《Ｚ笔２０吞１０一《０假手术组ｌ再灌注时间∞图１各组小鼠Ｊ虹，ＤＨ．２ｍＲＮＡ的表达酵解蛋白之一，它可将乙醛转化为乙酸，对４一ＨＮＥ、ＭＤＡ等也有清除作用。ＡＬＤＨ－２在肝脏、脑、肾脏、心脏等器官高表达，其活性比其他同工酶强约１００倍。研究发现，ＡＬＤＨ－２可以通过清除醛类代谢物在心脏‘７｜、脑［８３及小肠［９１的ＩＲ损伤过程中发挥保护作用。我们的前期研究证实，ＡＬＤＨ－２在抗肾脏ＩＲ所致氧化应激中发挥关键作用。本实验中，我们采用小鼠肾脏ＩＲ模型，首次分二、各组小鼠肾组织ＡＬＤＨ－２蛋白的表达小鼠肾脏ＩＲ后１ｈ，ＡＬＤＨ２蛋白的表达迅速减少，并于再灌注后３ｈ时降至最低，随后逐渐升高，再灌注后１２ｈ时ＡＬＤＨ２蛋白的表达水平仍明显低于假手术组，至再灌注后２４ｈ时达到顶峰后逐万方数据主堡墨宣整焦盘查！！！鱼至！旦箜！！鲞筮！塑Ｑ迪』Ｑ堡塑！！塑！巳！塑！！』！坠坚！型呈！！！！ｙ！！：！！！丛！：！・４９・析了ＩＲ后ＡＬＤＨ一２在转录及蛋白水平的表达变化。结果表明，在转录水平，ＡＬＤＨ－２ｍＲＮＡ在ＩＲ后迅速升高，再灌注后３ｈ时达到峰值，随后逐渐下降；而在蛋白表达水平，肾脏ＩＲ后ＡＬＤＨ－２的表达先逐渐降低，在再灌注后３ｈ时降至最低，其后逐渐升高，再灌注后２４ｈ达峰后逐渐下降。ＡＬＤＨ一２蛋白降低的具体机制并不明确。Ｃｈｅｎ等［１０］曾在心脏ＩＲ损伤的研究中发现，ＩＲ后早期大量醛类代谢物的堆积可能造成心肌细胞线粒体功能障碍，这可能与ＩＲ后ＡＬＤＨ２蛋白表达的下调有关。Ｈｉｌｌ等［１１］认为醛类物质浓度过高时，一方面其本身可通过生成加合物的形式直接作用于蛋白质等生物分子；另一方面可激活细胞自噬作用，导致蛋白的降解。ＡＬＤＨ２ｍＲＮＡ的上调表达正与其蛋白下调时间相符，提示可能存在反馈性的刺激。另一方面，作为一种关键的醛类分解酶，ＡＬＤＨ一２表达受到多条信号通路的精确调控，其中转录后调控也可能影响ＡＬＤＨ２的表达。Ｌｉ等［１２］在小鼠心脏缺血模型的研究中发现抑制ｍｉＲ－２８可以提高ＡＬＤＨ一２的表达并改善心脏ＩＲ损伤。Ｆａｎ等［１３］也在小鼠心脏ＩＲ模型中观察到ｍｉＲ－３４ａ会下调ＡＬ—ＤＨ一２表达，从而加重心肌细胞凋亡。肾脏ＩＲ后多种ｍｉＲＮＡ的表达发生变化，这些ｍｉＲＮＡ的表达改变也可能对ＡＬＤＨ２的表达产生影响。本实验首次检测了ＡＬＤＨ一２在小鼠肾脏ＩＲ后的表达变化，将为深入研究改善肾脏ＩＲ损伤及其调控机制提供理论依据。参考文献［１３ＣｏｒｎｅｌｌＬＤ，ＳｍｉｔｈＲＮ，ＣｏｌｖｉｎＲＢ．Ｋｉｄｎｅｙｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｒｅｊｅｃｔｉｏｎａｎｄａｃｃｅｐｔａｆｉｃｅ［Ｊ］．ＡｎｎｕＲｅｖＰａｔｈｏｌ，２００８，３：１８９—２２０．［２］ＹｕａｎＱ，ＨｏｎｇＳ，ＨａｎＳ，ｅｔａ１．Ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｗｉｔｈｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｅｖｅｌｓｏｆｅｔｈａｎｏｌｐｒｏｔｅｃｔｋｉｄｎｅｙａｇａｉｎｓｔｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｂｙｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．ＰＬｏＳ万方数据Ｏｎｅ，２０１１，６（１０）：ｅ２５８１１．ＤＤＩ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００２５８１１．［３］ＬｉｖａｋＫＪ，ＳｃｈｍｉｔｔｇｅｎＴＤ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒｅｌａｔｉｖｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄａｔａｕｓｉｎｇｒｅａｌ—ｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲａｎｄｔｈｅ２（一ＤｅｌｔａＤｅｌｔａｃ（Ｔ））Ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ－］．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００１，２５（４）：４０２－４０８．［４］ＯｎｏＭ，ＯｋａｄａＨ，ＢｏｌｌａｎｄＳ，ｅｔａ１．ＤｅｌｅｔｉｏｎｏｆＳＨＩＰｏｒＳＨｐ－１ｒｅｖｅａｌｓｔｗｏｄｉｓｔｉｎｃｔｐａｔｈｗａｙｓｆｏｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，１９９７，９０（２）：２９３－３０１．［５］ＣｕｅｖａｓＢ，ＬｕＹ，ｗａｔｔＳ，ｅｔａ１．ＳＨＰ－１ｒｅｇｕｌａｔｅｓＬｃｋ－ｉｎｄｕｃｅｄｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ３－ｋｉｎａｓｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，１９９９，２７４（３９）：２７５８３－２７５８９．［６］麻勇，汪大伟，刘连新，等．小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型的建立［Ｊ］．中华消化外科杂志，２０１３，１２（９）：７０３－７０７．ＤＯＩ：１０．３７６０／ｅｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—９７５２．２０１３．０９．０１５．［７］ＬｉｕＧ，ＷｕＹ，ＧｏｎｇＳ，ｅｔａ１．Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓａｎｄｇｒａｆｔｒｅｊｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＴｒａｎｓｐｌＩｍｍｕｎｏｌ，２００６，１６（１）：２５—３１．［８］ＬｌｏｂｅｒａｓＮ，ＴｏｒｒａｓＪ，Ｈｅｒｒｅｒｏ－ＦｒｅｓｎｅｄａＩ，ｅｔａ１．ＰｏｓｔｉｓｃｈｅｍｉｃｒｅｎａｌｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｉｎｄｕｃｅｓｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｔｈｒｏｕｇｈＰＡＦａｎｄｏｘｉｄｉｚｅｄｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ．Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｂｙａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．ＦＡＳＥＢＪ，２００２，１６（８）：９０８－９１０．［９］ＡｒａｇｎｏＭ，ＰａｒｏｌａＳ，ＢｒｉｇｎａｒｄｅｌｌｏＥ，ｅｔａ１．Ｄｅｈｙｄｒｏｅｐｉａｎｄｒｏｓｔｅｒｏｎｅｐｒｅｖｅｎｔｓｏｘｉｄａｔｉｖｅｉｎｊｕｒｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｒａｎｓｉｅｎｔｉｓｅｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｄｕｓｉｏｎｉｎｔｈｅｂｒａｉｎｏｆｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｓ［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２０００，４９（１１）：１９２４—１９３１．［１０］ＣｈｅｎＣＨ，ＳｕｎＬ，Ｍｏｃｈｌｙ－ＲｏｓｅｎｎＭｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌａｌｄｅｈｙｄｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅａｎｄｃａｒｄｉａｃｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．ＣａｒｄｉｏｖａｓｅＲｅｓ，２０１０，８８（１）：５１—５７．ＤＯＩ：１０．１０９３／ｃｖｒ／ｃｖｑｌ９２．［１１］ＨｉｌｌＢＧ，ＨａｂｅｒｚｅｔｔｌＰ，ＡｈｍｅｄＹ，ｅｔａ１．Ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ－ｄｅｆｉｖｅｄａｌｄｅｈｙｄｅｓａｃｔｉｖａｔｅａｕｔｏｐｈａｇｙｉｎｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈ－ｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＪ，２００８，４１０（３）：５２５—５３４．［１２］ＬｉＳＰ，ＬｉｕＢ，ＳｏｎｇＢ，ｅｔａ１．ｍｉＲ－２８ｐｒｏｍｏｔｅｓｃａｒｄｉａｃｉｓｃｈｅｍｉａｂｙｔａｒｇｅｔｉｎｇｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌａｌｄｅｈｙｄｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ２（ＡＬＤＨ２）ｉｎｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓｃａｒｄｉａｃｍｙｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．ＥｕｒＲｅｖＭｅｄＰｈａｒｍａｃｏｌＳｃｉ，２０１５，１９（５）：７５２－７５８．［１３］ＦａｎＦ，ＳｕｎＡ，ＺｈａｏＨ，ｅｔａ１．ＭｉｃｒｏＲＮＡ－３４ａｐｒｏｍｏｔｅｓｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｐｏｓｔｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇａｌｄｅｈｙｄｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ２Ｉ－Ｊ］．ＣｕｒｒＰｈａｒｍＤｅｓ，２０１３，１９（２７）：４８６５－４８７３．［１４］ＬｏｒｅｎｚｅｎＪＭ．ＶａｓｃｕｌａｒａｎｄｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉｎｒｅｎａｌｉｓｃｈａｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．ＪＰｈｙｓｉｏｌ，２０１５，５９３（８）：１７７７－１７８４．ＤＯＩ：１０．１１１３／ＪＰ２７０３１８．（收稿Ｅｌ期：２０１５－１１－１６）