血清高尔基体蛋白73联合甲胎蛋白检测在原发性肝癌患者中的诊断价值

２２２　中国肿瘤临床２０１５年第４２卷第４期ＣｈｉｎＪＣｌｉｎＯｎｃｏｌ　２０１５，Ｖｏ１．４２，Ｎｏ．４　ＷＷＷ．ｅｊｃｏ　ｎ　临床研究与应用・　血清高尔基体蛋白７３联合甲胎蛋白检测在原发性　肝癌患者中的诊断价值　崔冉亮李悦国张鹏宇张鹏　摘要　目的：探讨高尔基体蛋白７３（ｇｏｌｇｉ　ｐｒｏｔｅｉｎ　７３，ＧＰ７３）联合甲胎蛋白检测用于原发性肝癌诊断的临床意义。方法：收集　２０１３年６月至９月天津医科大学肿瘤医院１６０例血清，其中原发性肝癌患者４６例，单纯肝硬化患者３０例，其他消化系统肿瘤患者　４４例，健康者４０例。应用酶联免疫吸附实验定量检测血清ＧＰ７３水平，电化学发光免疫分析检测血清甲胎蛋白（ａｌｐｈａ—ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ，　ＡＦＰ）水平。结果：ＧＰ７３诊断原发性肝癌的敏感性达到７３．９％，与本研究中ＡＦＰ敏感性（５６．５％）相比，前者有显著增高，差异有统　计学意义（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）。ＧＰ７３和ＡＦＰ联合检测敏感性有显著提高，可以达到８６．９％，与单独一种相比敏感性有显著性差异（Ｐ＜　０．叭）。结论：ＧＰ７３有可能作为原发性肝癌诊断的血清标志物之一，而ＧＰ７３和ＡＦＰ的联合检测对原发性肝癌的诊断也有较好的　应用价值。　关键词肿瘤标志物ＧＰ７３　甲胎蛋白　肝细胞癌　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－８ｌ７９．２０１４０７５７　Ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｐｈａ—ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　Ｇｏｌｇｉ　ｐｒｏｔｅｉｎ　７３　ｆｏｒ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　Ｒａｎｌｉａｎｇ　ＣＵＩ，Ｙｕｅｇｕｏ　ＬＩ，Ｐｅｎｇｙｕ　ＺＨＡＮＧ，Ｐｅｎｇ　ＺＨＡＮＧ　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ　ｔｏ：Ｐｅｎｇ　ＺＨＡＮＧ；Ｅ—ｍａｉｌ：ｌａｏｐａｎｇ．５６＠１６３．ｃｏｒｎ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ａｎｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｃａｎ—　ｃｅｒ，Ｎａｔｉｏｎａｌ”８６３”Ｐｌａｎ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３０００６０，Ｃｈｉｎａ　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｙｔ　ｏｆ　ａｌｐｈａ—ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ（ＡＦＰ）ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｌｉｖｅｒ　ｃａｎｃｅｒ　ｉｓ　ｐｏｏｒ　ａｎｄ　ｕｎ—　ｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｌｉｖｅｒ　ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｃｅｎｔ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｈａｖｅ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｌｕｍ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＰＨＣ）ａｎｄ　Ｇｏｌｇｉ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　７３（ＧＰ７３）ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ＰＨＣ．Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ａｉｍｓ　ｔｏ　ｄｉｓｃｕｓｓ　ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆ－　ｉｃａｎｃｅ　ｏｆ　ＧＰ７３　ａｎｄ　ＡＦＰ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｒｔｌｍ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｌｉｖｅｒ　ｃａｎｃｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＧＰ７３　ａｎｄ　ＡＦＰ　ｗｅｒｅ　ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｉｎ　４６　ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｐａｔｉｅｎｔｓ，３０　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｌｉｖｅｒ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ　ａｌｏｎｅ，４４　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｏｔｈｅｒ　ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ　ｔｕｍｏｒｓ，ａｎｄ　４０　ｈｅａｌｔｈｙ　ｓｕｂｊｅｃｔｓ　ａｓ　ｃｏｎｔｒｏｌｓ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｅｕｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ　ａｎｄ　ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓ—　ｃｅｎｃｅ　ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ＧＰ７３　ａｎｄ　ＡＦＰ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＲｅｓｕＩｔｓ：Ｔｈｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＰＨＣ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｗｉｔｈ　ＧＰ７３（７３．９％）ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ＡＦＰ（５６．５％），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｗａｓ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ（Ｐ＜　Ｏ．０　１）．Ｔｈｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｙ　ｔｏｆ　ＡＦＰ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ＧＰ７３　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｔｏ　８６．９％ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｈ　ｔｔｈｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｙ　ｔｏｆ　ａ　ｓｉｎｇｌｅ　ｉｎｄｉｃａｔｏｒ　ｒ尸＜０．０　１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＧＰ７３　ｍａｙ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＰＨＣ　ｓｅｕｍ　ｒｍａｒｋｅｒｓ　ｆｏｒ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ．Ｔｈｅ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＧＰ７３　ａｎｄ　ＡＦＰ　ｏｆｆｅｒｓ　ｇｒｅａｔ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｆｏｒ　ｆｕｔｕｒｅ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ＰＨＣ．　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｔｕｍｏｒ　ｍａｒｋｅｒ，Ｇｏｌｇｉ　ｐｒｏｔｅｉｎ　７３，ａｌｐｈａ—ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ，ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　原发性肝癌（ｐｒｉｍａｒｙ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｅａｒｅｉｎｏｍａ，ＰＨＣ）恶　低、治愈率不高的不良后果。　在过去相当长的时间里，甲胎蛋白（ＡＦＰ）是唯一　被推荐用于原发性肝癌监测的血清标志物　。回顾　性分析认为，ＡＦＰ作为早期原发性肝癌监测工具，敏　感度为３９％～６４％，特异度为７６％一９１％，阳性预测　性程度高、进展快、预后差、侵袭性强，是我国常见的　恶性肿瘤之一，已成为一个世界性难题，其发病率在　全球位居第４位，总患者数约５６．４万…。但是原发性　肝癌的发病比较隐匿，初期患者无明显症状，但当就　诊症状明显时，可能已经发展至原发性肝癌的晚期，　所以在治疗上成为一个很大的难题，导致５年生存率　值为９％～３２％　。　，因此其作为早期诊断的手段并不　理想；另外，肝脏超声用于临床研究中原发性肝癌诊　作者单位：天津医科大学肿瘤医院检验科，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室，国家“８６３”计划临床研究实验室（天津市　３０００６０）　通信作者：张鹏ｌａｏｐａｎ９．５６＠１　６３．ＣＯｒｎ　中国肿瘤临床２０１５年第４２卷第４期ＣｈｉｎＪＣｌｉｎＯｎｃｏｌ　２０１５，Ｖｏ１．４２，Ｎｏ．４　ｗｗｗ．ｅｊｃｏ．ｅｎ　２２３　断时，通常难以发现、确认＜３　ｃｍ的肿块，而且肝脏超　２结果　声受到操作者影响，限制其应用价值，从而不能作为　种监测性检验方法随　。因此，临床上迫切需要找　一２．１　ＧＰ７３与原发性肝癌临床因素的相关性　从表１中可以看出，原发性肝癌患者血清ＧＰ７３　的表达水平与性别、年龄、甲胎蛋白浓度、肿瘤直径、　结节数目、ＴＮＭ分期均无关，各组比较均无统计学差　异（Ｐ＞０．０５）；与是否合并肝硬化有关，两组差异有统　计学意义。ＧＰ７３在肝硬化和肝癌病变细胞中表达属　同向协同作用，也有相关文献显示Ｐ７３在肝硬化中表　达上调，但其升高程度远不及原发性肝癌　。所以，可　到一种更加灵敏的血清肿瘤标志物应用在检测原发　性肝癌。在新近的报道中发现，在原发性肝癌患者　血清中，ＧＰ７３水平显著提高，而且对于原发性肝癌的　诊断，ＧＰ７３也比ＡＦＰ出现更早　。本研究主要评估　血清ＧＰ７３和ＡＦＰ联合检测对于原发性肝癌诊断的　临床应用价值。　１材料与方法　将ＧＰ７３作为预测原发性肝癌的检测指标。　表１　ＧＰ７３在原发性肝癌的临床指标　Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＧＰ７３　ｉｎ　ｐｒｉｍｍｙ　ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｏｆ　ｄｉｆ－　ｆｅｒｅｎｔ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　１．１材料　收集２０１３年６月至９月问在天津医科大学肿瘤　医院就诊的１６０例血清，其中原发性肝癌患者４６例，　单纯肝硬化患者３Ｏ例，其他消化系统肿瘤患者４４例　（胃癌２３例，结直肠癌２１例），其中男性５９例，女性６１　例；年龄３５—７５岁，平均年龄为５５岁。均经本院病　理科病理学检测确诊，在此基础上分别检测了每例　患者的ＧＰ７３以及ＡＦＰ含量。选取４０例健康者为正　常对照，入选者无肝、脑、心、肾等主要脏器疾病，年　龄３２—６８岁，平均年龄５Ｏ岁。　１．２方法　１．２．１标本采集采用带有分离胶的进口真空采血　管取患者空腹静脉血４　ｍＬ，离心力３　０００　ｒｐｍ，离心　５　ｍｉｎ取血清待测。　１．２．２检测方法　甲胎蛋白（ＡＦＰ）的测定：采用　Ｒｏｃｈｅ　Ｅｌ７０电化学发光免疫分析仪及配套试剂盒（瑞　士Ｒｏｃｈｅ公司）检测血清ＡＦＰ浓度，操作严格按照仪　器和试剂说明书进行，并且高低质控品均在要求范　围内。参考值为２０　ｎｇ／ｍＬ，当患者血清水平超出临界　值时判定为阳性。　高尔基体蛋白７３（ＧＰ７３）的测定：ＧＰ７３检测所用　试剂盒由北京热景公司提供，采用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ　法检测血清ＧＰ７３的浓度。试剂盒内设ＧＰ７３标准品　０、２０、５０、１００、２５０　ｎｇ／ｍＬ。酶标板上预包被抗ＧＰ７３　２．２　ＧＰ７３和ＡＦＰ检测阳性率结果　各组人群ＧＰ７３和ＡＦＰ检测阳性率结果见表２。　本研究阳性率指敏感性，即患者中得出阳性检测的　样本占患者总数的百分比。诊断原发性肝癌ＧＰ７３的　敏感性达７３．９％，与本研究中ＡＦＰ敏感性（５６．５％）相　比，前者有显著增高，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。　而在单纯肝硬化组和其他消化系统肿瘤（主要是指　胃癌和结直肠癌）组中，ＧＰ７３和ＡＦＰ检测阳性率分别　为３６．７％、６．８％和４３．３％、９．１％，说明ＧＰ７３对于肝癌　单抗，与样本中ＧＰ７３反应结合，再加入ＨＲＰ标记　ＧＰ７３多抗，用ＴＭＢ底物显色，显色浓度与样品中　ＧＰ７３的浓度呈正比。通过酶标仪检测样本的吸光度　（Ａ）值，按已知ＧＰ７３标准品，计算出样品中ＧＰ７３的含　量。操作严格按照规程，结果按说明书规定＞１００　ｎｇ／ｍＬ　为阳性。试剂线性为０—２５０　ｎｇ／ｍＬ。对＞２５０　ｎｇ／ｍＬ　的样本，使用配套稀释液手工稀释后再检测。　１＿３统计学分析　采用ＳＰＳＳ　１７．０软件进行数据处理。组内ＧＰ７３　以及ＡＦＰ比较用ｔ检验，不同组间ＧＰ７３以及ＡＦＰ比　较予以单因素方差分析。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　的诊断有特异性，而对于单纯肝硬化和其他消化系　统肿瘤则意义不明显。健康人群中ＧＰ７３和ＡＦＰ敏　感性均为０，综上说明ＧＰ７３与过去唯一推荐原发性