中草药蛇菰提取物降血糖作用的实验研究

维普资讯 http://www.cqvip.com 中国药理通讯２００７年第二十四卷第三期　明显升高；大鼠肾脏指数明显升高；肾小球肥大，细胞增生，基底膜增厚。经ＨＴＰ干预后大鼠生化指标和肾脏　指数有明显改善，血甘油三酯明显降低；肾脏病变减轻。结论：ＨＴＰ对早期糖尿病肾病大鼠具有保护作用，能　够改善糖尿病大鼠的糖、脂代谢，对实验性糖尿病大鼠早期肾脏病变有防治作用。　重组胰高血糖素样肽一１突变体对糖尿病大鼠血糖的影响　张志珍林东子　广东医学院生物化学与分子生物学教研室　湛江５２４０２３　目的：观察重组胰高血糖素样肽一１突变体（２Ｇｌｙ－ＧＬＰ－１）对实验性糖尿病大鼠模型血糖和血浆胰岛素水平　的影响。方法：利用定点突变技术将ＧＬＰ－１基因第二位丙氨酸突变为甘氨酸（２Ａｌａ－＋２Ｇｌｙ），采用基因工程方法　制备重组ＧＬＰ－１突变体。正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠腹腔注射链脲佐菌素（６０　ｍｇ／ｋｇ），建立１型糖尿病大鼠模型。静脉　输注２Ｇｌｙ－ＧＬＰ－１（４．０　ｎｇ／ｋｇ．ｍｉｎ）１２０ｍｉｎ，观察血糖水平变化。正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠腹腔注射５Ｏ％葡萄糖　（３．２４　ｇ／ｋｇ），诱发暂时性高血糖动物模型。腹腔注射２ＧＩｙ－ＧＬＰ－１（１２　ｎｍｏｌ／ｋｇ），间隔取血测定血糖与胰岛素　水平。结果：与对照组相比，静脉输注重组２Ｇｌｙ－ＧＬＰ－１　３０ｍｉｎ后，血糖水平１４．２５±１．０３　ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｐ＜Ｏ．０５），　１２０ｍｉｎ后血糖水平９．０８士０．７５　ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｐ＜Ｏ．００１）。腹腔注射２ＧＩｙ－ＧＬＰ－１具有明显的促胰岛素分泌和降血糖　活性，处理组大鼠的血糖、血浆胰岛素水平与对照组之间的差别具有非常显著性意义（Ｐ＜Ｏ．００１），且呈现一定　的量效关系。结论：基因工程制备的重组ＧＩ　Ｐ＿１突变体能显著改善实验性糖尿病大鼠的血糖水平，这与其促胰　岛素分泌活性有关。该研究结果为ＧＩ　Ｐ＿１突变体的临床应用奠定了基础。　蛇菰提取物对人ＰＴＰ１Ｂ酶活性的抑制作用　田金英　叶菲　吉腾飞　苏亚伦　中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所　北京　１０００５０　目的：胰岛素信号传导系统中的蛋白酪氨酸磷酸酶１Ｂ（ｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｙｒｏｓｉｎｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ　１Ｂ，ＰＴＰＩＢ）是胰岛素　增敏剂的新靶点之一。本文旨在制备人ＰＴＰＩＢ蛋白，并观察多蕊蛇菰（Ｂａｌａｏｐｈｏｒａ　ｐｏｌｙａｎｄｒａ　Ｇｒｉｆｆ．）提取物对　ＩＹＩ＇ＰＩＢ的抑制作用。方法：采用分子生物学方法，以ＩＫＩ＇Ｇ诱导基因重组的ｈＧＳＴ—ＰｒｒＰ１　ＢＬ２１　Ｅ．Ｃｏｌｉ工程菌　过表达人类ＫＩ＇ＰＩＢ蛋白，经ＧＳＴ亲和层析柱纯化得到ｈＧＳＴ—ＰｒｒＰ１Ｂ蛋白质。以Ｂｉｏ－Ｒａｄ蛋白分析试剂测定蛋　白含量。采用体外酶学方法，以多肽ｐａｒａ－ＮｉｔｒｏＰｈｅｎｙｌ　Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ｐＮＰＰ）为底物，观察药物对ｈＧＳＴ－ＰＴＰＩＢ酶　活性的影响。多蕊蛇菰全草用石油醚加热回流，再经不同浓度的水、乙醇等溶剂提取，减压浓缩后得蛇菰提取　物。结果：经ｈＧＳＴ－ＰＴＰ１Ｂ－ＢＬ２１　Ｅ．Ｃｏｌｉ　Ｔ程菌扩增、诱导表达、并经ＧＳＴ亲和层析柱纯化，可得到人类　ｈＧＳＴ－ＰＴＰＩＢ蛋白质，平均得率为９．２土２．７ｍｇ／Ｉ　。将该蛋白质产物用７．５　ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，紫外扫描分析在　分子量４０ＫＤ附近有明显的单一条带，为ｈＧＳＴ－ＫＩ＇ＰＩＢ蛋白质。分离多蕊蛇菰全草共得到６１个提取物。其中，　在体外对ＰｒｒＰ１Ｂ酶的抑制率＞５ｏ　的有２１个提取物。对抑制率＞８０　的７个活性部位，进一步分析量效关系，　其５０％抑制率的浓度（ＩＣ５０）分别为０．５６６、０．５８８、０．５９６、０．６１６、０．６６７、０．９７０、和１．２３ｕｇ／ｍｌ。结论：诱　导基因重组的ｈＧＳＴ－ＫＩ＇ＰＩＢ－ＢＬ２１　Ｅ　Ｃｏｌｉ工程菌可得到ｈＧＳＴ－ＫＩ＇ＰＩＢ蛋白质，不同提取部位的蛇菰提取物对　ＰＴＰ　１Ｂ酶有显著的抑制作用。　中草药蛇菰提取物降血糖作用的实验研究　田金英　吉腾飞　苏亚伦叶菲　中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所　北京　１０００５０　目的：探讨中草药蛇菰提取物（ＳＨＧ）的降血糖作用及其作用机制。方法：以四氧嘧啶诱导雄性ＩＣＲ小鼠　形成糖尿病小鼠模型。用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度，用１２５Ｉ一胰岛素放射免疫法测定血清胰岛素浓度。以动　物清晨不禁食和禁食２．５　ｈ的血糖水平和口服葡萄糖负荷后的血糖水平的变化，评价药物对机体血糖及糖耐量　的影响；以腹腔注射葡萄糖负荷后的机体的血糖和血胰岛素水平，评价药物的促胰岛素分泌作用；以口服蔗糖耐　量试验和口服淀粉耐量试验评价药物对糖吸收的作用。结果：ＳＨＧ　２０、３０　ｇ生药／ｋｇ体重给动物口服，连续７～　４０　维普资讯 http://www.cqvip.com 中国药理通讯２００７年第二十四卷第三期　１Ｏ天，可显著降低正常和四氧嘧啶糖尿病小鼠的餐后血糖和空腹血糖水平。在正常或四氧嘧啶糖尿病小鼠的口　服蔗糖和口服淀粉耐量实验中，ＳＨＧ可明显降低并后移蔗糖或淀粉负荷后的血糖峰值，减少血糖一时间曲线下　面积。在正常和四氧嘧啶糖尿病小鼠的口服葡萄糖耐量实验中，ＳＨＧ可显著降低葡萄糖负荷后血糖的峰值，减　少血糖一时间曲线下面积。在正常小鼠腹腔注射葡萄糖耐量实验中，ＳＨＧ组平均血糖上升百分数明显低于对照　组，但血胰岛素水平与对照组无明显差异。结论：ＳＨＧ具有显著降低正常和糖尿病小鼠的餐后血糖和空腹血　糖、改善葡萄糖耐量的作用。ＳＨＧ控制血糖作用的机制可能与抑制肠道　～葡萄糖苷酶和增强体内葡萄糖代谢　有关。　西格列羧对自发性２型糖尿病ＫＫＡ　小鼠　胰岛素抵抗及脂质紊乱的改善作用　孙素娟　李平平　申竹芳　中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所　北京　１０００５０　目的：选用自发性２型糖尿病ＫＫＡｙ小鼠为模型，从糖代谢、脂质代谢等方面来评价西格列羧对高血糖、　胰岛素抵抗和脂质紊乱的改善作用。方法：根据胰岛素耐量实验中４Ｏ分钟血糖下降百分数、禁食血糖、血甘油　三酯、血总胆固醇水平的预测结果及体重，将ＫＫＡｙ小鼠均匀分为４组（ｎ一１０），即模型对照、西格列羧（２０　ｍｇ／ｋｇ）、阳性对照药罗格列酮（２　ｍｇ／ｋｇ）和非诺贝特（１５０　ｍｇ／ｋｇ）组，以雌性昆明小鼠作为正常组。每天灌　胃给药一次，连续给药约７周。于给药２周开始，进行胰岛素耐量实验、口服葡萄糖耐量实验、丙氨酸糖异生　实验，测定血胰岛素、血脂水平，以及肝脏、肌肉组织中甘油三酯、总胆同醇和游离脂肪酸水平。结果：实验　结果表明，西格列羧可明显改善ＫＫＡｙ小鼠受损的胰岛素耐量和葡萄糖耐量，降低血糖和血胰岛素水平，提高　胰岛素敏感指数，减低肌糖原含量，但对丙氨酸糖异生无抑制作用。西格列羧可减小脂肪细胞的大小直径，改　善脂肪组织的胰岛素抵抗。可明显降低血甘油三酯浓度、降低肝脏总胆周醇和游离脂肪酸水平。结论：西格列　羧在２０　ｍｇ／ｋｇ剂量下，能改善自发性２型糖尿病ＫＫＡｙ小鼠的胰岛素抵抗和脂质紊乱。　镉致大鼠肾脏线粒体功能损伤的研究　潘小海　孙锴　金泰虞。潘家祜　复旦大学公共卫生学院劳动卫生教研室　。复旦大学药学院药理教研室　鉴于镉（ｃａｄｍｉｕｍ，Ｃｄ）是目前污染环境、威胁人类健康的重要金属元素，肾脏是其最主要的靶器官和蓄　积部位。本研究分析了亚急性镉接触对大鼠肾脏线粒体功能的损伤效应并探究其相关机制。用于实验的ＳＤ大鼠　随机分为４组，连续７天分别皮下注射０、０．５、１．０、２．０　ＣｄＣＩ２（ｍｇ／ｋｇ　ｂｗ）。取大鼠肾脏，液氮保存后，通过　匀浆、离心制备线粒体。使用Ｃｌａｒｋ电极法测定线粒体的呼吸功能；使用荧光染料罗丹明１２３（Ｒｈ－１２３）测定线　粒体膜电位水平；使用ＤＴＮＢ法测定线粒体谷胱甘肽含量；使用黄嘌呤氧化酶法测定线粒体超氧化物歧化酶　（ＳＯＤ）活性。研究结果显示，镉染毒大鼠体重增加率随染镉剂量的增大而减少。同时，肾脏线粒体膜电位　（△　）随染镉剂量的增大而降低，呈现良好的剂量依赖性关系，且在最大剂量组有显著性差异（Ｐ＜ｏ．０５），降　低幅度为１５．５　。离体试验显示，Ｃｄ２　有类似Ｃａ抖的作用：诱发线粒体通透性孔道（ｍＰＴＰ）开放．引起膜电　位呈剂量依赖性下降。因此，亚急性镉接触对肾脏线粒体功能有一定损伤，特别表现在对线粒体膜电位的影响　上，可能与其诱导氧化磷酸化解偶连有关，其损伤机制正在进一步探究中。　新型抗慢性肾功能不全药硝克柳胺在大鼠肝微粒体和胞浆的代谢　盛莉　李燕　中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所　北京　１０００５０　目的：研究硝克柳胺在大鼠肝微粒体和胞浆中的代谢动力学及参与硝克柳胺体外代谢的药物代谢酶鉴定。　方法：硝克柳胺分别与大鼠肝微粒体和胞浆温孵一定时间后，应用ＨＰＬＣ方法测定硝克柳胺含量，计算体外代　谢速率和动力学参数（Ｋｉｎ，Ｖｍａｘ）。在微粒体或胞浆中加入选择性ＣＹＰ抑制剂、硝基还原酶抑制剂，鉴定参　与硝克柳胺代谢的药酶类型。结果：硝克柳胺在肝微粒体代谢是依赖ＮＡＤＰＨ／ＮＡＤＨ的酶促反应，缺氧代谢高　４１