紫外分光光度法测定维生素B1片的含量

前言

维生素B1又称盐酸硫胺或抗神经炎素, 化学名为４-甲基-３-［（２-甲基-４-氨基-５-嘧啶基）甲基］-５-（２-羟基乙基）噻唑鎓盐酸盐。为白色结晶或结晶性粉末。在酸性溶液中很稳定, 在碱性溶液中易被氧化和受热破坏。遇光和热效价下降，故应置于遮光、凉处保存, 且不宜久贮, 具有维持正常糖代谢的作用，在临床上常用于防治缺乏维生素B1所致的脚气病，也用于神经炎、消化不良等症的辅助治疗[1] 。

近年来测定维生素B1片含量的方法较多，如高效液相法[2] 、荧光分光光度法[3] 、毛细管电泳电化学法[4] 、氧瓶燃烧电位滴定法[5] 等。这些方法操作麻烦、实验时间较长。紫外分光光度法仪器较便宜，普及度高且操作较简便，此外，维生素B1是由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季铵类化合物，噻唑环上季铵及嘧啶环上氨基，为两个碱性基团，可与酸成盐[6] 。维生素B1分子中具有共轭双键结构，在紫外区有吸收峰，故本次选用紫外分光光度法测定维生素B1含量，根据朗伯-比尔定律，利用紫外吸收光谱来进行定量分析，方法准确、简便、重复性好。 1. 仪器与试药 1.1仪器

紫外分光光度仪，分析天平，25mL棕色容量瓶，移液管。 1.2 试药

维生素B1片；维生素B1生化试剂BR；0.1mol·L -1 HCl（自制） 2．实验方法与结果 2.1 样品预处理

取维生素B1片20片（标示量为10.0mg），总重为1.23921g，其平均质量为61.96mg，充分研磨并混匀，称取3份样品置于25mL棕色容量瓶中，3份样品质量各为10.53mg、10.28mg、10.27mg，加0.1mol·L -1 HCl定容至25mL备用。 2.2对照品溶液配制

维生素B1对照溶液：在分析天平上精密称取维生素B1 10.90mg置于25mL棕色容量瓶，加0.1mol·L -1 HCl定容至25mL，作为维生素B1对照品储备液。

2.3光谱扫描 2.3.1全波长扫描

吸取0.5mL维生素B1对照溶液于25mL容量瓶中，用0.1mol·L -1 HCl稀释定容至刻度。以0.1mol·L -1 HCl作空白，在UV-2700紫外可见分光光度计上从200~800nm处进行扫描。结果表明最大吸收波长为246.5nm，吸光度为0.344。紫外全波长扫描图如图1所示。

1.0251.000Abs.0.5000.000-0.066200.00400.00nm.600.00800.00图1 紫外全波长扫描图

2.3.2标准曲线的绘制

分别量取对照品储备液0.30mL、0.50mL、0.70mL、0.90mL、1.10mL于25mL容量瓶中，加0.1mol·L -1 HCl定容，摇匀，得一系列浓度分别为5.232、8.72、12.208、15.696、19.184μg·mL-1的对照品溶液。分别将系列浓度对照品溶液（浓度从低到高）用UV-2700型紫外可见分光光度计在246.5nm处测出其吸光度，重复三次，取平均值。以对照溶液的质量浓度（x）为横坐标，吸光度（y）为纵坐标，绘制标准曲线如图2所示。结果表明其线性方程为：y=0.0437x-0.045，r=0.9992。

表1 对照品溶液与浓度的关系

编号 吸光度

1 2 3 4 0.632

5 0.805

0.192 0.334 0.479

浓度(μg/mL) 5.232 8 .72 12.208 15.696 1 9.184

图2 维生素B1标准曲线

2.3.3样品测定

分别从配好的三份样品溶液中各吸取5.0mL置25mL棕色容量瓶中，加0.1mol/L HCl稀释并定容，测定吸光度值，代入标准曲线方程中计算浓度。

表2 样品测定结果（n=3）

编号

吸光度

样品浓度（μg/mL） 标示量的百分含量(%)

标示量的百分含量平均值(%) RSD(%)

1 0.759 18.398 135.32

2

3

0.728 0.722 17.689 17.551 133.27 132.36 133.65 1.13

样品含量占标示量的百分含量在95%～105%，为合格药品，若不在此范围内，则为不合格药品。

3.讨论

本实验中测定的维生素B1片为不合格药品，且RSD值较大。

通过紫外分光光度法测定该维生素B1片含量，标准曲线相关系数r值良好，但百分含量不符合规定。可能是药品本身质量原因，也可能与操作误差有关，例如：实验前应对所用的仪器，如对容量瓶进行捡漏，尽量减少实验误差；称量也应由一人完成，并且尽量减少环境噪声，可以选择减重法称重，减少仪器称量带来的误差，但本次实验中并未采用减重法，可能称量纸上有残留药品，造成质量称取不准确；另外，本次实验操作中由于容量瓶不够，我们是将用过的容量瓶重新清洗，再次配制其他相应浓度溶液，所以可能对实验结果有一定影响。在对样品溶液进行测定吸光度值时，由于擦镜纸用完，可能比色皿上有未擦拭的液滴和指纹等杂质，影响了吸光度的准确测定。并且，维生素B1性质不够稳定，遇热、紫外线、氧气都会发生化学反应，分解或变质，操作时也会受实验环境的影响。 以上种种因素均会造成实验结果不准确，所以在做实验时，尽量减少每个环节可能会产生的误差。总体来说，用紫外分光光度法测定维生素B1片含量操作可行、方便、快速。