HPLC法测定复方益肝灵滴丸中水飞蓟素的含量

ＨＰＬＣ法测定复方益肝灵滴丸中水飞蓟素的含量　隋　军　苏　玉　张贤艳　（黑龙江大学化学化工与材料学院・哈尔滨１５００８０）　１仪器与试药日本ＳＨＩＭＡＤＺＵ　ＩＪｃ—ｌ０灯ＶＰ液相色谱仪；ＭＥｑＴＬＥＲ　残渣加热水ｌＯｍｌ充分搅拌，高速离心处理（１００００ｒ／ｍｉｎ），弃去上清　液，加甲醇定容至１０ｍｌ，摇匀，滤过，取续滤液，即得，作为供试品溶　液。　Ａ　４ｏ电子分析天平；复方益肝灵滴丸（自制）；水飞蓟素对照品（批号：　１１０８５６—２Ｏ０６０４中国药品生物制品检定所）：色谱甲醇；超纯水。　２方法与结果　２．４阴性时照溶液的制备　处方中去除水飞蓟素，其余按复方益　色谱柱：Ｃｍ２５０ｍｍ　Ｘ　４．６ｍｍ，５／ａｎ；流动相：甲醇：　肝灵滴丸制备工艺，制备水飞蓟素阴性对照品，再按供试品溶液的　制备方法操作，即得水飞蓟素阴性对照溶液。　分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照品溶液各　２．１　色谱条件水：冰醋酸（４８：５２：１）；流速：ｌｍｌ／ｍｉｎ；波长：２８８ｎｍ；柱温：２５℃。　２．２时照品溶液制备精密称取水飞蓟索对照品适量，加甲醇制　成每ｌｍｌ含０．８ｍｇ溶液，作为对照品溶液。　２．３供试品溶液制备取本品，研细，精密称取约０．２ｇ，加入１０ｍｌ　５　，注入液相色谱仪测定。结果表明，阴性对照溶液在与水飞蓟素　对照品相同保留时间处未出现相应色谱峰，无干扰检测。水飞蓟素　对照品、供试品及阴性对照品的ＨＰＬＣ图谱见图ｌ～３。　醋酸乙酯，超声处理ｌ５分钟使之充分溶出，滤过，滤液回收至干。　００Ｂ　０．０６ｎｏ４　Ｏ＿０２　０Ｄ　５Ｄ　１０　１５　２０　２５　咄ｊ　８　｛　＝＝　０．０２５Ｄ　１０　１５　２０　２５　：．　；　．：　图１水飞蓟素对照品ＨＰＬＣ图　图２供试品ＨＰＬＣ图　图３阴性对照品ＨＰＬＣ图　２．５测定波长的选择　取水飞蓟素对照品溶液，在２００ｎｍ～４００ｒｉｍ　进行光谱扫描，水飞蓟素在２８８ｎｍ处有最大吸收，故选择２８８ｎｍ为测　定波长。　取水飞蓟素对照品溶液、供试品溶液各５ｕａ，注入液相色谱仪中，按上　述色谱条件测定色谱峰峰面积积分值，计算供试品含量。结果水飞　蓟素含量（ｒａｇ／ｇ）分别为４５．２、４０．９、３８．７。　表１　回收率试验结果　２．６　线性范围　分别精密吸取水飞蓟素对照品溶液ｌｕａ、４ｕａ、８ｕａ、　ｌ２　、ｌ６　，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定色谱峰峰面积积　分值，以进样量（　）为横坐标，色谱峰峰面积积分值为纵坐标，得回　归方程为：Ｙ＝２１９．４１Ｘ一６．６９４，ｒ＝０．９９９７。结果表明水飞蓟素对照　品在０．８１２～１２．９９２，ｕｇ范围内有良好线性关系。　２．７精密度试验精密吸取水飞蓟素对照品溶液５ｕａ，注入液相色　谱仪中，按上述色谱条件测定色谱峰峰面积积分值，依法操作，重复　进样５次。结果ＲＳＤ为０．４４８％。　２．８重现性试验取同一批号（ｏ６０４０２）的供试品，研细，精密称取　３讨论　０．２ｇ，共计５份，按照供试品溶液的制备方法进行操作，即得供试品　溶液。分别精密吸取水飞蓟素对照品溶液、供试品溶液各５ｕａ，注入　液相色谱仪中。按上述色谱条件测定色谱峰峰面积积分值。根据峰　３．１　关于供试品溶液的制备复方益肝灵滴丸选用ＰＥＧ６ｏ０ｏ作为　固体分散载体，且在处方中用量较大，对供试品溶液制备有干扰需去　除。因其易溶于水和多数极性有机溶剂Ⅲ，且随温度增加，溶解度增　面积值计算含量，结果平均含量为４０．３　ｇ，ＲＳＤ为２．０５％。　２．９稳定性试验取同一供试品溶液，分别于０…２　４　８、１６、２４小时，　按上述色谱条件测定色谱峰峰面积积分值。测定结果显示，在２４小　时内无明显改变，ＲＳＤ为１．３６％。　２、ｌＯ回收率试验取已知水飞蓟素含量的供试品（批号０６０４０２，水　飞蓟素的含量为４０．３ｍｇ／ｇ）研细，精密称取０．１ｇ，共计５份，分别精密　加入水飞蓟素对照品溶液（配制浓度Ｏ、８１２ｍｇ／ｍ１）５ｍｌ，按供试品的制　备方法操作，作为供试品溶液。分别精密量取水飞蓟素对照品溶液　５ｕａ，供试品溶液５　，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定色谱　峰峰面积积分值。根据峰面积值计算含量，结果见表ｌ。　２．１ｌ样品测定取３个批号（０６０４０１、０６０４０２、０６０４０３）样品，精密称　加，温度较高时能与水任意混溶，故选用醋酸乙酯作为提取溶剂。　ＰＥＧ６ｏ０ｏ在醋酸乙酯中有一定溶解度，故加热水可完全除去　ＰＥＧ６Ｏ０ｏ。　３．２关于流动相的选择色谱条件的确定过程中，试用了２种流动　相系统：甲醇（磷酸调节使ｐＨ＝５．Ｏ）和甲醇：水：冰醋酸ｌ　Ｊ（４８：５２：１）。　其中采用前者作流动相，可以得到分离度较好的单重峰，重现性较　差。故选用甲醇：水：冰醋酸（８：４５２：１）作为本实验研究流动相系统，　以两峰峰面积之和计算。　参考文献　ｌ姚日生．药用高分子材料．北京：化学工业出版社，２００３：１８６．　２国家药典委员会．中华人民共和国药典一部．北京：化学工业出版　社，２００５：５６．　（修回：２００８—０２—０１）　取Ｏ．２ｇ，按供试品溶液的制备方法操作，得供试品溶液。分别精密吸