替比夫定对慢性乙型肝炎患者T细胞亚群的影响

广州医药２０１０年第４１卷第５期　・２３・　替比夫定对慢性乙型肝炎患者Ｔ细胞亚群的影响　邓良准　庄　军　１　中航工业３２０１医院感染科（陕西　汉中　７２３０００）；２　解放军２６４医院（山西　太原【摘要】　目的探讨替比夫定对慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）患者细胞免疫功能的影响。方法０３０００１）　采用流式细胞术检　测４０例ＣＨＢ患者在服用替比夫定前后外周血Ｔ细胞亚群，同时检测３２例健康体检者外周血Ｔ细胞亚群作为对照组。　结果　ＣＨＢ组较健康对照组ＣＤ３　Ｔ细胞、ＣＩＭ　Ｔ细胞百分比以及ＣＤ４／ＣＤ８明显降低（Ｐ＜０．０５），ＣＤ８　Ｔ细胞百分比　明显升高（Ｐ＜０．０５）。ＣＨＢ患者在使用替比夫定后，ＣＤ３　Ｔ细胞、ＣＩＭ　Ｔ细胞百分比以及ＣＩＭ／ＣＤ８有明显回升（Ｐ　＜０．０５），ＣＤ８　Ｔ细胞百分比则出现明显下降（Ｐ＜０．０５）。结论替比夫定可改善ＣＨＢ患者的细胞免疫功能。　【关键词】　替比夫定Ｔ细胞亚群慢性乙型肝炎　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００—８５３５．２０１０，０５．００９　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｔｅｉｂｉｖｕｄｉｎｅ　ｏｎ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｓｕｂｓｅｔｓ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　Ｄｅｎｇ　Ｌｉａｎｇｚｈｕｎ‘，Ｚｈｕａｎｇ　Ｊａｎ　．１　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ　Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｃｈｉｎａ　Ａｖｉａｔｉｏｎ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　３２０１　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈａｎｘｉ，Ｈａｎｚｈｏｎｇ　７２３０００，Ｃｈｉｎａ．２　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｓｐｅｃｉａｌ　Ｃａｒｅ，２６４　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｐ　，Ｓｈａｎｘｉ，Ｔａｉｙｕａｎ　０３０００１，Ｃｈｉｎａ　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｔｅｌｂｉｖｕｄｉｎｅ　ｏｎ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｉｍｍｕｎｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｈｅｐ—　ａｔｉｔｉｓ　Ｂ（ＣＨＢ）．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｓｕｂｓｅｔｓ　ｏｆ　４０　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ＣＨＢ　ｂｅｆｏｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　Ｔｅｌｂｉｖｕｄｉｎｅ　ｔｈｅｒａｐｙ．Ｉｎ　ａｄｄｉｔｉｏｎ，３２　ｈｅａｌｔｈｙ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ｗｅｒｅ　ｃｈｏｓｅｎ　ａｓ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ＣＤ３　ａｎｄ　ＣＤ４　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ＣＤ４／ＣＤ８　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ＣＨＢ　ａｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｃｏｎｔｒｏｌｓ（Ｐ＜　０．０５）．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ＣＤ８　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｉｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｃｏｎｔｒｏｌｓ（Ｐ＜０．０５）．　Ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ＣＤ３　ａｎｄ　ＣＩＭ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ＣＤ４／ＣＤ８　ａｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｂｅｆｏｒｅ　Ｔｅｌｂｉｖｎｄｉｎｅ　ｔｈｅｒａｐｙ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ＣＤ８　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｉｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｂｅｆｏｒｅ　Ｔｅｌｂｉｖｕｄｉｎｅ　ｔｈｅｒａｐｙ（Ｐ＜　０．０５）．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｅｌｂｉｖｕｄｉｎｅ　ｃａｎ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｉｍｍｕｎｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ＣＨＢ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】Ｔｅｌｂｉｖｕｄｉｎｅ；Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｓｕｂｓｅｔｓ；Ｃｈｒｏｎｉｃ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　１０．９）岁。两组在病情、病程、年龄以及性别等方面均无　显著性差异。　乙型病毒性肝炎是一种由乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）引起　的疾病，ＨＢＶ感染本身不引起肝细胞破坏，而是通过机体　免疫反应间接引起肝细胞坏死。这种免疫反应主要通过细　１．２治疗方法：治疗组４０例患者均给予替比夫定（诺华　公司生产）口服，每日１次６００　ｍｇ，共２４周。分别检测用　药前后Ｔ细胞亚群。　胞因子介导”　。Ｔ淋巴细胞的功能异常及亚群比例失衡所　导致的组织损伤与乙型肝炎的发病有关，是乙型肝炎的发　病机制之一　。本文应用流式细胞仪检测替比夫定治疗前　后乙型肝炎患者细胞免疫功能变化，探讨其临床意义。现　将结果报告如下。　１资料与方法　１．３主要试剂和仪器：ＰＥ（藻红蛋白）标记的ＣＩＭ单抗，　ＡＰＣ（别藻青蛋白）标记的ＣＤ８单抗，ＰｅｒＣＰ（多甲藻叶绿　素蛋白）标记的ＣＤ３单抗，均购自美国ＢＤ公司。ＦＡＣＳ－　Ｃａｌｉｂａｒ流式细胞仪，购自美国ＢＤ公司。　１．１实验对象：４０例患者均为２００８年８月一２００９年１０月　１．４检测方法：采集静脉血２　ｍｌ，加入ＥＤＴＡ抗凝管中，　在我院住院治疗的慢性乙型病毒性肝炎患者，符合２０００年　全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎防治方　案规定的慢性乙型肝炎的诊断标准…。４０例慢性乙肝组患　混匀。向测定管中加入三色荧光标记单抗：ＰＥ—ＣＩＭ／ＡＰＣ—　ＣＤ８／ＰｅｒＣＰ—ＣＤ３单抗。再加入抗凝全血ｌＯＯｔｘｌ，室温避光　孵育３０　ｍｉｎ，然后加入１Ｘ溶血素２　ｍｌ，混匀。室温避光　孵育１０　ｍｉｎ，离心５　ｍｉｎ（３００　ｇ／ｍｉｎ）。弃上清，加入ＰＢＳ　者中，男２７例，女ｌ３例，年龄２０～５４岁，平均（３４．２±　１２．１）岁。选择对象标准：ＨＢｓＡｇ（＋），ＨＢｅＡｇ（＋），　ＨＢｃＡｂ（＋），ＨＢＶ．ＤＮＡ＞１．０×１０　ｃｏｐｉｅｓ／ｍｌ；年龄１８岁　以上，血清Ａ　水平在（１～１０）×ＵＬＮ（最高上限值）　２　ｍｌ，离心５　ｍｉｎ（３００　ｍｉｎ）。弃上清，加入３００／ｚｌ　ＰＢＳ　上机检测。　１．５统计学方法：采用ＳＰＳＳ１３．０统计软件对数据进行分　析，以Ｐ＜０．０５为有统计学意义。　２结果　之间；从未用过替比夫定和其他抗病毒药物；除外其他类　型病毒性肝炎，排除失代偿性肝硬化；除外自身免疫性肝　病。同时选择健康对照组３２例，均来自我院医护人员，其　中男２０例，女ｌ２例，年龄１９～５２岁，平均（３１．５±　２．１慢性乙肝组用药前与正常对照组Ｔ细胞亚群的比较：　与正常对照组比较，慢性乙肝组患者ＣＤ４Ｔ细胞百分比下　・２４・　医药２０１０年第４１鲞勇　降（Ｐ＜０．０５），ＣＤ８Ｔ细胞百分比升高（Ｐ＜０．０５），ＣＤ４／　比夫定治疗２４周后，与治疗前相比较ＣＩＭＴ细胞百分比升　ＣＤ８比值下降（Ｐ＜０．０５），差异有统计学意义。见表１。　高（Ｐ＜０．０５），ＣＤ８Ｔ细胞百分比下降（Ｐ＜０．０５），ＣＤ４／　２．２替比夫定治疗前后Ｔ细胞亚群的比较：慢性乙肝组替　ＣＤ８比值升高（Ｐ＜０．０５），差异有统计学意义。见表２。　表１　健康对照组与慢性乙型肝炎组Ｔ淋巴细胞亚群比较　３讨论　参考文献：　慢性乙型肝炎的发病机制非常复杂，至今仍未阐明，　［１］Ｍａｉｎｉ　ＭＫ，Ｂｏｎｉ　Ｃ，Ｌｅｅ　ＣＫ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｖｉｒｕｓ—ｓｐｅ—　已有研究结果表明，肝细胞的损伤并非是ＨＢＶ直接作用引　ｃｉｉｆｃ　ＣＤ８（＋）ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ　ｄａｍａｇｅ　ａｎｄ　ｖｉｒａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　起的，而主要是由于免疫损伤作用的结果　。本组资料显　ｄｕｒｉｎｇ　ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｅｘｐ　示乙型病毒性肝炎患者的ＣＤ３、ＣＤ４及ＣＤ４／ＣＤ８比值均较　Ｍｅｄ，２０００，１９１（８）：１２６９—１２８０．　健康对照组降低，ＣＤ８明显增高，与容易合并各种感染密　［２］张国娟，冯纪敏，周希静．乙肝病毒感染Ｔ淋巴细胞　切相关　。而ＣＤ３Ｔ细胞数量的明显下降，说明机体参加　亚群状态与肾脏损害的关系［Ｊ］．临床医学，１９９９，　细胞免疫反应的免疫活性细胞不足。ＣＤ３、ＣＩＭ和ＣＤ８Ｔ细　２８（５）３５７—３５９．　胞在对ＨＢＶ反应中发挥重要的作用，能够反映细胞免疫功　［３］Ｗｅｂｓｔｅｒ　ＧＪ，Ｒｅｉｇｎａｔ　Ｓ，Ｍａｉｎｉ　ＭＫ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　能的状况，并被认为是预测患者免疫力变化的有价值的指　ｐｈａｓｅ　ｏｆ　ａｃｕｔｅ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｉｎ　ｍａｎ：ｄｙｎａｍｉｃ　ｏｆ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　标　。慢性肝炎患者外周血中存在激活诱导Ｔ细胞死　ｉｍｍｕｎｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２０００，３２　亡　Ｊ，可以认为慢性肝炎、慢性重型肝炎和肝炎肝硬变患　（５）：１１１７—１１２４．　者外周血中Ｔ亚群细胞绝对数下降，可能与慢性病毒感染　［４］Ｒａｐｉｃｅｔｔａ　Ｍ，Ｆｅｒｒａｒｉ　Ｃ，Ｌｅｖｒｅｒｏ　Ｍ．Ｖｉｒｌａ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ　状态下病毒诱导Ｔ细胞活化凋亡（ＡＩＣＤ）而Ｔ细胞增殖不　ａｎｄ　ｈｏｓｔ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ＨＢＶ　足有关。慢性乙肝患者肝穿结果表明，在肝小叶的点、片　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｅｄ　Ｖｉｒｏｌ，２００２，６７（３）：４５４－４５７．　状坏死区有大量的ＣＤ８　Ｔ细胞浸润，提示ＣＤ８Ｔ细胞是引　［５］Ｔａｎｎｅｒ　ＭＳ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ　ｉｎｊｕｒｙ　ｒｅｌｅｖａｎｔ　ｔｏ　ｐｅｄｉａｔ—　起肝细胞损伤的主要细胞，在临床上表现为转氨酶升高。　ｒｉｃ　ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ｃｒｉｔ　Ｒｅｖ　Ｃｌｉｎ　Ｌａｂ　Ｓｃｉ，２００２，３９　替比夫定是人工合成的胸腺嘧啶脱氧核苷类抗ＨＢＶ药　（１）：１－６１．　物，２００７年２月经ＳＦＤＡ批准用于慢性乙型肝炎的治疗。　［６］林静华，焦晓阳，方琳丽，等．乙型肝炎患者外周血　替比夫定在细胞激酶的作用下被磷酸化为有活性的代谢产　Ｔ淋巴细胞亚群的变化及临床意义［Ｊ］．中国校医，　物腺苷，替比夫定５　一腺苷通过与ＨＢＶ中自然底物胸腺嘧　２００８，２２（３）：３２１・３２２．　［７］Ｌｉｎ　ＣＭ，Ｗａｎｇ　ＦＨ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｍｏｄｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅ—　啶５　腺苷竞争，从而抑制ＨＢＶ　ＤＮＡ多聚酶的活性；通过　ｃｉｉｆｃ　ＣＩＭ（＋）Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ｒｅｔｒｏｖｉｒｌａ—ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｇｅｎｅ　ｔｒａｎｓ—　整合到ＨＢＶ　ＤＮＡ中造成ＨＢＶ　ＤＮＡ链延长终止，从而抑制　ｆｅｒ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．　ＨＢＶ复制。　Ｃｌｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００２，１０４（１）：５８－６６．　Ｅｖａｎｓ等　在替比夫定的治疗过程中，它在大幅度降　［８］Ｎａｋａｍｕｒａ　Ｋ，Ｙｕｈ　Ｋ，Ｓｕｇｙｏ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　低病毒和抗原数量的同时，可以有效的降低Ｔ细胞表面　ｉｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｆｒｏｍ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ＰＤ一１的表达。而ＰＤ一１是耗竭Ｔ细胞表面的重要标志，对Ｔ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１９９６，１１１（１）：　细胞的活化和功能具有负向调控的作用。因此通过替比夫　１５６—１６４．　定抗病毒治疗，可以部分恢复机体免疫功能。本实验采用　［９］Ｅｖａｎｓ　Ａ，Ｒｉｖａ　Ａ，Ｃｏｏｋｓｌｅｙ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ　ｄｅａｔｈ　流式细胞术对治疗组患者在替比夫定使用前后的Ｔ细胞亚　１　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｄｕｒｉｎｇ　ａｎｔｉｖｉｒａｌ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　群进行检测，并加以比较。结果显示治疗后ＣＤ４　Ｔ细胞百　Ｂ：Ｉｍｐａｃｔ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｅ—ａｎｔｉｇｅｎ　ｓｅｒｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ［Ｊ］．　分比升高，ＣＤ８　Ｔ细胞百分比下降，ＣＤ４／ＣＤ８比值升高，　Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００８，４８（３）：７５９－７６９．　细胞免疫功能紊乱的现象得以纠正。而替比夫定本身并无　［１Ｏ］季伟，王慧芬，冯传前，等．慢性乙型肝炎患者外周　直接免疫调节的作用，这一结果考虑可能与替比夫定抑制　血淋巴细胞凋亡的检测及临床意义［Ｊ］．中华肝脏　ＨＢＶ复制、减轻病毒血症，慢性病毒感染状态下病毒诱导　病杂志，１９９９，７（２）：７７．７９．　Ｔ细胞活化凋亡（ＡＩＣＤ）减轻所致　。　（收稿日期：２０１０—０３—２２）