用铁氰化钾法测定王浆中总糖的含量

用铁氰化钾法测定王浆中总糖的含量

黑龙江农业经济职业学院(157041)　　李凤玉

摘要:铁氢化钾法不但操作简便,容易掌握,而且比斐林氏容量法更具有结果准确和终点明显等优点,因此,建议在教学和科研上采用本法测定王浆中的总糖含量。

关键词:王浆中的总糖;铁氢化钾法;斐林试剂法;还原;滴定;滴定终点　　王浆中总糖的含量是王浆产品等级和理化要求的一项重要检测指标。王浆中的糖类物质占干物质中可溶性成分的78%,其中包括葡萄糖45%、果糖52%、麦芽糖1%、龙胆二糖1%、蔗糖1%。97%是还原性的单糖。

目前应用的检测方法是斐林试剂法,原理是斐林试剂A、斐林试剂B混合时,生成的天蓝色氢氧化铜沉淀,立即与酒石酸钾钠反应,生成深蓝色的氧化铜与酒石酸钾钠的络合物———酒石酸钾钠铜,酒石酸钾钠铜被王浆样液中的还原糖还原,生成红色的氧化亚铜沉淀。滴定达到终点时,稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝指示剂还原为无色的隐形体,而显示出氧化亚铜的鲜红色。在具体的操作中由于不是用纯的还原糖液进行滴定,蓝色消失后不是出现氧化亚铜的鲜红色,而由蓝色———蓝红色———砖

红色,并且颜色过度不明显,本实验操作又在是加热煮沸的条件下进行滴定,终点就更不容易判断,往往就造成实验误差。用铁氰化钾法代替斐林试剂法测定王浆中总糖含量,滴定达到终点时,稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原为无色,蓝色消失时滴定终点明显,很容易判断,结果准确,且操作简便,容易掌握。因此,建议在教学和科研上采用本法测定王浆中的总糖含量。

1　原理

样品经除去蛋白质后,加入盐酸,在加热条件下使二糖水解转化为还原糖,还原糖在碱性溶液中能把铁氰化钾还原为亚铁氰化钾,根据铁氰化钾的溶液和王浆样液的量,便可计算出王浆中总糖的含量。以葡萄糖为例,其反应式为:

(COOH)2+6K4Fe(CN)6+4H2O　　C6H12O6+6K3Fe(CN)6+6KOH=(CHOH)4・

葡萄糖　　铁氰化钾　　氢氧化钾　　葡萄糖二酸　　亚铁氰化钾　水　　2　试剂

ρ=10g/L):溶解10g2.1　铁氰化钾溶液(铁氰化钾(分析纯)于蒸馏水中,并用蒸馏水稀释至1000mL,置于棕色瓶中保存。每次临用前按下法标定其滴定度。

称取在减压下(50mm汞柱以下)不超过70℃干燥的纯蔗糖1g(精确至0.0002g),用蒸馏水溶解,移入250mL容量瓶中,定容并摇匀.用移掖管吸取25mL,移入100mL容量瓶中,加入25mL蒸馏水和5mL浓盐酸(ω=36%～38%,分析纯)。并将瓶置于70℃水浴中,使瓶

中溶液在2min内热至67℃～69℃,并在69℃保持7.5～8min,使全部加热时间为10min。取出后置流水下迅速冷却至室温。滴加1—2滴酚ρ=酞醇溶液,并加入约10mL氢氧化钠溶液(ρ=50g/L)中200g/L),然后用稀氢氧化钠溶液(

和至恰呈微碱性,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀.再用下述滴定样液的操作程序进行标定,按下式计算出每10mL铁氰化钾溶液相当于转化糖的克数即滴定度(T)

T=

V×G1000×0.95

・6・

式中:G———称取的纯蔗糖的量(g);

V———滴定时消耗糖液的mL数;

养　蜂　科　技　　　　　　　　　　　　　　2005年第3期

4.2　试样溶液滴定:用移液管吸取10mL

铁氰化钾溶液和2.5mL氢氧化钠溶液(ρ=100g/L),置于100mL三角烧瓶中,用蒸馏水稀

0.95———换算系数(0.95g蔗糖可转化成1g转化糖);1000———稀释比。

释1倍,加1滴次甲基蓝指示剂,置石棉网上控制在2min内加热至沸,以先快后慢的速度,从滴定管中滴加试样溶液,并保持溶液沸腾状态,待溶液颜色变浅时,以每两秒一滴的速度滴定,直至蓝色刚好褪去为终点,记录样液消耗体积mL数。4.3　计算:T×200100W×V

ρ=106g/L);2.2　亚铁氰化钾溶液(ρ=219g/L):称取乙酸2.3　乙酸锌溶液(锌21.9g,加冰乙酸3mL,加蒸馏水溶解并稀释至100mL;

ρ=50g/L);2.4.1　氢氧化钠溶液(ρ=100g/L);2.4.2　氢氧化钠溶液(ρ=200g/L);2.4.3　氢氧化钠溶液(2.5　盐酸(c=6mol/L):量取盐酸50mL,

王浆中总糖含量(以转化糖计)%=

化糖的克数;W———试样重量(g);

式中:T———每10毫升铁氰化钾溶液相当于转

加蒸馏水稀释至100mL

ω=36%～38%);2.6　浓盐酸(ρ=10g/L);2.7　次甲基蓝指示剂(ρ=1g/L,乙醇溶2.8　甲基红指示液((液)。

3　仪器

3.1　电热恒温水浴锅:温度波动±1℃;3.2　分析天平:感量0.0001g或电子天

V———滴定所耗蜂蜜样液毫升数;200———稀释比。

注:平行试验结果的允许误差为0.5%。5　说明

5.1　乙酸锌及亚铁氰化钾作为蛋白质沉

淀剂,这两种试剂混合形成白色的氰亚铁酸锌沉淀,能使王浆溶液中的蛋白质共同沉淀下来,澄清效果较好。

5.2　铁氰化钾要贮于棕色瓶中

5.3　测定中应严格控制水解温度和时间,

平,感量0.001g。

4　试验步骤

4.1　试样处理:精密称取蜂王浆试样约4g,置于100mL容量瓶中,加蒸馏水50mL,振摇

使试样溶解后缓缓加入乙酸锌溶液及亚铁氰化钾溶液各5mL,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀。静置30min后用干燥滤纸过滤,弃去初滤液数毫升,滤液备用。

精密吸取上述滤液50mL,置于100mL容量瓶中,加入盐酸(c=6mol/L)10mL,摇匀,置于电热恒温水浴锅中,在67℃～69℃下水解10min,流水冷却至室温,加甲基红指示液2滴,

保证二糖的完全水解,且水解结束应立即取出,迅速冷却中和,以防止单糖的损失。

5.4　测定中滴定速度,加热时间及热源稳

定程度,三角烧瓶壁厚对测定准确度影响极大,故在平行测定的过程中,实验条件力求一致,平行测定的样品溶液,消耗mL数相差不超过0.1mL

5.5整个过程应保持在微沸状态下进行。5.6滴定至终点蓝色褪去之后,就不应再

ρ=200g/L)中和至溶液摇匀,用氢氧化钠溶液(

呈黄色,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀备用。

滴定。因次甲基蓝指示剂被还原褪色后,当接触空气时又被氧化重现蓝色。