1、试剂配制
1.浓硫酸:分析纯,95.5%
2. 5%苯酚:取苯酚5 g,置100 ml容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀后,置棕色试剂瓶中,冰箱中冷藏储存备用。
3.尺度葡聚糖(Dextran,瑞典Pharmacia)或分析纯葡萄糖。准确称取20m g经105℃干燥至恒重的葡萄糖尺度品于500ml容量瓶中,蒸馏水溶解定容。 2、制作尺度曲线
准确称取尺度葡聚糖(或葡萄糖)10mg于250ml容量瓶中,加水至刻度,分别吸取0.2、0.3、0.4、、、、及ml,各以蒸馏水补至1.0ml,然后加入5%苯酚1ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置20min以后于490nm测光密度,以1.0ml水按同样显色操纵为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得尺度曲线。
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尺度葡萄糖溶液 (mL) 蒸馏水(mL) 5%苯酚(mL)
浓硫酸(mL)
3 注意事项
(1)此法简单、快速、灵敏、重复性好,对每种糖仅制作一条
尺度曲线,颜色持久。
(2)制作尺度线宜用相应的尺度多糖,如用葡萄糖,应以校正系数0.9校正μg数。
(3)对杂多糖,分析结果可根据各单糖的组成等到主要组分单糖的尺度曲线的校正系数加以校正计算
(4)测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1—
—0.3之间。比方:小于0.1之下可以考虑取样品时取2克,仍取0.2ml样品液,如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。
(5)正常的反应溶液是深棕色。糖越多颜色越深。注意硫酸的纯
度。空白的颜色很深,说明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌(苯酚氧化生成)的颜色颜色过深的话说明你的酚的难度过大,一般是5%但是没遇到你说的那么严重,不是深红色的做的好的时候颜色很浅,颜色深点也有肯能。
操纵的时候有几条你需要注意的,这些对你的检测结果影响极大1、苯酚需要重蒸,配制的苯酚溶液需要妥善保管。2、样品检测的时候,向样品中加了苯酚溶液需要迅速摇匀,加入硫酸基本操纵:硫酸沿壁加,最好能旋转比色管,让硫酸能均匀的沿壁
流下。3、加完硫酸需要立即摇匀,前提是塞子要配套,不怕烫热、冷水浴,要准确。
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