肌酸激酶同工酶杂化型(MB)的应用与假性增高的原因及处理

肌酸激酶同工酶杂化型（MB）的应用与假性增高的原因及处理

作者：白冰 王鹏飞 史光华

来源：《健康必读（上旬刊）》2019年第08期

【摘 ;要】肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzymes）别名为血清肌酸激酶同工酶，是一种酶类成分，它有三种同工酶形式：肌肉型、脑型、杂化型，最为广泛使用的是杂化型的肌酸激酶同工酶简称（CK-MB），它在患者患有心肌损伤的时候是较好的血清标志物，目前广泛的检测方法是速率法，在大量的检测结果中证实此法所检测的结果中有小部分为假性增高，而CK-MB质量法采用的是单克隆抗体，具有抗原抗体反应的特异性及高度专一性，与其同工酶CK-BB及CK-MM无交叉反应，可以更好的反应指标的高低，因此本文来对CK-MB的应用及检测方法上的缺陷和优势进行比较。结合我院目前对于此种情况的处理进行探讨。 【关键词】肌酸激酶同工酶杂化型（MB）;假性增高;

【中图分类号】R197;;;;;;【文献标识码】A; ;;;;【文章编号】1672-3783（2019）08-0082-02

1 肌酸激酶同工酶的分型及CK-MB的应用 1.1分型：

肌肉型（MM）、脑型（BB）、杂化型（MB）.肌酸激酶分子是由脑型亚单位（B）和肌型亚单位（M）组成的二聚体，正常人体组织中常含3种同工酶，按电泳快慢顺序分别为CK-BB（CK1）、CK-MB（CK2）和CK-MM（CK3）。CK-BB主要存在于平滑肌和脑组织中，血清中几乎没有;CK-MB主要存在于心肌组织中，占血清中CK的0～4%;CK-MM主要存在于骨骼肌中，占血清中CK的96%～ 100%。CK-MB有自己的亚型，包括MB2（组织形式）和MB1（转化形式）。CK-MB2从心肌释放后，羧基末端被血浆羧基肽酶N水解，去掉一个赖氨酸残基转化为血清修饰亚型CK-MB1。CK和CK-MB是心肌组织损伤的敏感指标之一，特别是CK-MB更具特异性。心肌损伤过程中CK的升高主要是由于CK-MB的升高引起，表现为二者的同时升高。

1.2肌酸激酶同工酶杂化型（CK-MB）的临床应用 1.2.1在心肌疾病中的应用：

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肌酸激酶的同工酶在临床诊断中有十分重要的意义，在各种病变包括肌肉萎缩和心肌梗塞发生时，人的血清中肌酸激酶水平迅速提高，认为在心肌梗塞的诊断中测定肌酸激酶的活性比做心电图更为可靠。

肌酸激酶同工酶（CKMB）主要存在于骨骼肌和心肌细胞，心肌中CK-MB是骨骼肌中的五倍。肌酸激酶同工酶常见于心肌细胞外浆层，急性心肌梗死患者多在发病后4h～12h便能在血清中检测出[1]。CK-MB几乎只存在于心肌中，是心肌损伤敏感而特异的指标，已被 临床广泛应用，其在心肌损伤中的灵敏度达97.5%。

血清CK-MB用于急性心肌梗死诊断，也用于心肌梗死面积评估，目前认为是无条件测定肌钙蛋白情况下的首选心肌标志物。CK-MM亚型早期也曾用于心肌梗死诊断或监测，现已少用。肿瘤，肝病等的危重病患者可见CK-Mt或巨型CK升高，严重平滑肌坏死如坏死性肠梗阻可见CK-BB增高。

肌酸激酶同工酶 CK-MB分为 MB1和 MB2两种异型。CK-MB在心肌细胞中的主要以 MB2的形式存在，当心肌细胞受损时MB2就会被釋放，致使短时间内血清 CK-MB水平增高。CK-MB可以较早的反映心肌损伤，心肌细胞发生损伤时，CK-MB释放进人血液并在发病6h 内迅速升高，24h达到峰值，72h后开始下降并逐渐恢复到正常水平且CK-MB升高先于CK，36h内波动曲线与CK相平行。CK-MB活性增高还可见于肌肉疾病及手术患者，但其CK-MB/CK常 <6%，可与心肌损伤进行鉴别。[2]

1.2.2腹泻患儿大便细菌培养及轮状病毒检测结果与肌酸激酶同工酶的关系：

肌酸激酶同工酶（CKMB）是心肌损伤的重要标志物，小儿腹泻会容易导致水电解质紊乱等一系列病理改变，加之小儿心肺功能不健全，腹泻容易造成小儿心肌损伤特别是感染性腹泻会导致患儿CK-MB水平升高，[3]患儿的心脏负荷加重会导致CK-MB的活性增加。腹泻往往更严重，更容易出现水电解质紊乱。

1.2.3血清肌酸激酶同工酶在手足口病诊治中临床应用价值分析

手足口病患儿易合并心肌损害，检测血清CK-MB对早期诊断 手足口心肌损害有重要意义，随着治疗的开展，血清CK-MB浓度会相应的下降，因此CK-MB对判断手足口病的预后也具有指导意义。

1.2.4血液透析对慢性肾病患者肌酸激酶同工酶的影响：

在临床上，在诊断为肾小球肾炎、肾盂肾炎、IgA 肾病、 糖尿病肾病等情况下，病程超过 90 天，血液、尿液指标异常或肾小球滤过率降低时，均可称作为慢性肾病[4]。慢性肾病一旦得不到重视，导致病情恶化还会形成尿毒症[5]。慢性肾病具有发病率高、死亡率高、伴发心血管

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疾病多的特点，慢性肾病患者在血液透析后其 CKMB 平均值较血液透析前显著提高，CKMB指标对慢性肾病血液透析患者心脏功能检测具有参考价值.[6]

1.2.5;;N 末端 B 型钠尿肽原和肌酸激酶同工酶对肺炎患儿合并心力衰竭的诊断价值 根据研究显示心肌中的;NT-proBNP 可准确提示心室压的变化，当心衰发生时，心室肌细胞处于超负荷状态并不断释放非物质，使得其含量急剧升高。肺炎患儿的;NT-proBNP 和 CK-MB 水平均高于健康儿童，且合并心衰的肺炎患儿此二值数值更高。[7] 2 肌酸激酶同工酶杂化型（MB）假性增高的原因 2.1 CK-MB常用检测方法：

2.1.1 酶质量法CK-MB质量（CKMB-mass）：

CK-MB-mass是一种双位点酶免法，将样本添加到含有小鼠单克隆抗体抗人CK-MB抗体-碱性磷酸酶结合物和包被着小鼠单克隆抗人CK-BB的顺磁性微粒的反应管中。人血清CK-MB与抗CK-MB结合物相结合且固定于包被着抗CK-BB的顺磁性微粒上，人血清和血浆的CK-MB上的B亚单位抗原决定基（与CK-BB和CK-MB异构体共有的）与固定于固相上的抗CK-BB相结合，而小鼠抗CK-BB结合物则与血清或血浆CK-MB发生特异性反应（与CK-MM和CK-BB异构体不发生反应）。在反应管内温育完成后，结合在固相上的物质将置于一个磁场内被吸住，而未结合的物质则被冲洗除去。然后将化学发光底物Lumi-phos*530添加到反应管内，然后由照度计对反应中所产生的光进行测定。所产生的光的量与样本中内CK-MB的浓度成正比。样本内分析物的量由所储存的多点校准曲线来确定。是以ng/mL为检测单位，其检测优于以 U/L为检测单位的酶活性测定。因其采用的是单克隆抗体， 具有抗原抗体反应的特异性及高度专一性，与其同工酶CK-BB及CK-MM无交叉反应，且CK-MB质量检测不受血清中巨CK1及其他酶类、蛋白物质的等多因素的影响。其检测的特异性与灵敏度均高于CK-MB活性。但此法检测成本高且需要特殊仪器设备，因此临床上未得到普遍广泛地应用。 2.1.2 ：速率法：

使用多克隆抗体抑制CK的CK-M同工酶活性后，按照德国临床化学学会（DGKC）和国际临床化学学会（IFCC）推荐的连续监测法检测余下的肌酸激酶的活力，CK-MB由CK-M和CK-B亚单位组成，抗CK-M抗体完全抑制了CK-MM（肌酸激酶的主要活性部分）和CK-MB中的CK-M亚单位的活性，在检测CK的活力余下的CK-B的活力，相当于一半的CK-BB活力，所以将结果乘以2为CK-MB的活力。 2.1.2.1速率法检测影响因素：

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当血清中CK-BB异常升高时，使得检测结果中CK-MB活性为CK-MB活性和异常增高的 CK-BB活性之和的2倍，这将导致所测CK-MB活性的假性升高。

由于儿童的生理原因，尤其是婴幼儿、学龄前儿童其血-脑屏障发育不完整，外周血中会出现比成人更多的CK-BB，血液中CK-BB可高于成人[8]，因此采用速率法测得其CK-MB活性也将升高，甚至出现CK-MB活力大于CK总活力的现象。

部分脑部疾病出现时，脑组织中增多的;CK-BB 释放进入外周血，CK-BB活性的升高，必定影响CK-MB活性测定结果的准确性，因此在存在脑卒中疾患的患者血液中;CK-MB 的数值明显升高。[9]也有研究指出认为CK-BB与癌胚抗原、甲胎蛋白类似，存在于肿瘤或胎儿组织中，恶性肿瘤患者血清中CK-BB的检出率高达25%-41%，当能排除脑部疾病时，血清中出现异常水平CK和CK-MB，应怀疑肺、胃肠道、前列腺、胆囊等富含CK-BB等器官的恶性肿瘤。

当出现 M亚基活性不能被抗M亚基抗体抑制时也可造成CK-MB活性假性升高。由于巨CK的干扰： 分为巨CK1 和CK2。CK1是免疫球蛋白IgG 和IgA 或 IgM 的复合物，相对分子量较大，不易被单核巨噬细胞系统吞噬降解，在体内不易被排出，且有較长的半衰期，因此在血中存留时间较长，当血清中出现CK 同工酶与免疫球蛋白IGA或IGG形成的大分子复合物巨CK1或出现由线粒体CK（CK-MT）相互聚合形成的大分子聚合物巨CK2时，也将引起免疫抑制法所测CK-MB活性的假性增高。巨CK2众多文献认为不在健康人血中出现，它与恶性肿瘤密切相关，可作为肿瘤的一种标志物[10]。恶性肿瘤患者存在巨;CK2，其是线粒体 CK（CK-MT）相互聚合成的大分子寡聚体复合物，存在于膜上，线粒体崩解释放入血。另有研究表明，当肿瘤患者出现 CK-BB/总 CK>15%时，是潜在的致命危险信号。[11]当血清中存在巨CK2分子时，检测试剂中抗M亚基的抗体不能抑制其活性，将会影响CK-MB的检测结果。 此外，溶血的干扰：红细胞中不含CK、但红细胞中含有腺苷酸激酶（ AK） ，AK能直接参与 CK 速率法的第二步反应，使 NAD 还原成 NADH，从而引起 340nm 处吸光度上升。造成 CK 和 CK-MB 假性增高。[12]所以标本溶血也会对CK-MB活性的检测产生影响， 可使检测结果值偏高。因此速率法测CK-MB活性的特异性较差。 3 讨论：

在我科生化室，周平均检测速率法的肌酸激酶同工酶CK-MB约1000份，其中出现假性结果的约67份，约占6.7%。因此，我科室以解决实际问题出发本着对患者负责的态度 制定了解决对策 组内人员在每日工作中对假性增高的结果进行记录，记录主要信息是 病人姓名 科室，CK结果，CK-MB速率法结果 及质量法结果 以及医生诊断。对数据分析。 4 结果：

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生化组在检测CK-MB上两种方法都运用。由于儿童的特殊原因，我们新增加了儿科专属的医嘱组合和心肌酶系列，里面的针对肌酸激酶同工酶（CK-MB）运用质量法检测。其余涉及到肌酸激酶同工酶（CK-MB）的项目依旧使用速率法，但是在检测过程中如遇到CK-MB比CK高，或者CK结果不高而CK-MB测的结果超过参考范围（0-25U/L）者免费用质量法检测。做到给予患者和临床更为真实的检测报告。 5 总结：

质量法检测CK-MB得到的检测结果更为真实 受影响因素更小，但是成本高 检测时间长 以及方法难以运用到生化分析仪中成为其实际效果中的劣势。速率法检测可以运用到全生化分析仪，并且成本低，检测时间相对短在普及使用，但检测受到诸多因素影响。 参考文献