细鳞鱼杀鲑气单胞菌杀鲑亚种的分离鉴定

　Ｉ杂　２０Ｉ　７　（　５３绉）　１０　９１　细鳞鱼杀鲑气单胞茵杀鲑亚种的分离鉴定　单晓枫　，康元环’，吴同垒　，孙武文。，张冬星　，贾俊鹏　，刘艳辉　，钱爱东　（１．ｒ　林农、ｆ　人　动物科学技术　院．　’　十水Ｋ　Ｊ３０１　Ｊ　８；２．河北科技师范　院河』七竹颅防　Ｊ　ｒ　验　书，河北秦　岛０６６００４；３．　林竹水Ｊ　：科　研究院，　林Ｋ伴Ｉ　３００００）　摘要：为确定　林省　渔场细鳞鱼发病步匕亡的病因，本研究１｛ｔ濒死的细鳞鱼体内分离山．　株优势菌．经动物同　试验，　该菌株对细鳞　具有敏病　，将其命名为ＢＲＬ一１５经蔺怵、　落肜态，理化特性，１６Ｓ　ｒＲＮＡ蘩冈序列分析，捧定菌株　ＢＲＬ一１５为杀继气　胞蔺杀继亚种。药敏试验结果显爪。该　株对所选抗菌药物中绝大多数高发敏感．．试验结果为细鳞鱼　杀鲑气单胞菌病的防治提供・定理论依据。　关键词：细鳞鱼；杀鲑气单胞菌杀鲑业种；分离鉴定；约墩　验　中图分类号：　９４３．１　２１　文献标志码：Ａ　文章编号：０５２９—６００５（２０１７）１０　００９１—０３　Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｅｒｏｍｏｎａｓ　ｓａｌｍｏｎ￣ｉｄａ　ｓｕｂｓｐ　Ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ　ｆｒｏｍ　Ｂｒａｃｈｙｍｙｓｔａｘ　ｌｅｎｏｋ　ＳＨＡＮ　Ｘｉａｏ—ｆｅｎｇ　，ＫＡＮＧ　Ｙｕａｎ—ｈｕａｎ　，ＷＵ　Ｆｏｎｇ—ｌｅｔ　，ＳＵＮ　Ｗｕ—ｗｅｌｌ‘ＺＨＡＮＧ　Ｄｏｎｇ—ｘｉｎｇ　，　，ＪＩＡ　Ｊｕｎ—ｐｅｎｇ　，ＬＩＵ　Ｙａｌ１一ｈｕｉ　，Ｑ１ＡＮ　Ａｉ—ｄｏｎｇ　（Ｊ．Ｃｏｌｈ　ｇｅ　ｏｆ’Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｄｉｌｉｎ　Ａｇｒｉ（’ｕｌｔｕｌ’ａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｌｌ　１　３０　ｌ　１　８，Ｃｔｉｆｎａ：　２．Ｈｅ１）ｅｉ　Ｎｏｎｎａｌ　Ｕ１ｌｉｖｅｒｓｉｌｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｈ）ｇｙ．Ｈｅｂｅｉ　１＇１’ＯＶｉｌ１Ｃ（　Ｋｅｙ　ｌａｂｍ’ａｔｏＤ　ｏｔ　ＶｅｔｅｒｉｎａＤ＇Ｐ１‘ｏｖｅｎｔｉｖｅ　ＭｅｄＭｎｅ．Ｑｉｎ—　ｈｕａｎｇｄｍ）０６６００４，Ｃｈｉｎａ；３．Ｊｉｌｉｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　Ｉｌｅｓｅｍｃｈ　ｌｎｓｔｉｔｕｌｅ　ｏｆ　ｆ＇ｉｓｈｅｌ’ｉＰｓ∽ｉｅｎｃｅ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００００，ＣｈｉｌＵ：Ｉ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｉｄｅｎｔｉｔ）＂ｔｈｅ　ｃａｕｓｅ　ｏｆ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｆｌ＇ｏｍ　ｔｈｅ　Ｂｒａ（。ｈ＇ｎ１）ｓｌａｘ　ｆ，，，ｏｋ　ｉｎ　Ｊｉｌｔ１１　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ．ｔｈｅ　ｐａｔｌｅｒｇｅｎｔ（－ｓｔ１’ａｉｎ　ＷＬＩＳ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　１１１０１’ｉｂｕｎｌＩ　Ｂｒａｔ　ｈＩ＂１１１’＇ｓｔａ、＿ｌ￣ｍｏｋ．Ａ　ｐｕｒｅｌｙ　ｅｎｈｕｒｅｌｌ　ｓｈ・ａｂｉ（ＩｊＲＬ一１５）（㈨　ｔＩ　Ｂｒｍ－　ｎ）＇Ｍａｘ　ｌｅｎａｋｉｎｆｅｃｔＰ１１．Ｉｔ　Ｗａｓ　ｉｄＰｎｔｉｔｉｅｔ｛　Ａｅｒｏ—　ｌｌｌＯｌｌａｓ　ｓａｌｍｆ）ｌｌｉｔ。ｉｄａ　ｓｕ１）ｓｐ．ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｉｔｓ　ｈｉ（）ｒｐｈｏｌｏｇｉｌ‘ａｌ，Ｏｌｉｄ　ｐｈ＞ｓｉｏｂｉｏｅｈｅｍｉｃａｌ（・ｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｅｓ．ａｎｄ　ｌ　６ＳｒＲＮ　Ａ　ｓｅｑｕｅｎ一　（’ｉｎｇ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｈ　ｏｆ　ｉｉｉ‘Ｉｌｇ　ＳＵＳ（　ｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｔｅｓｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｅｓｅｔＭｔｉｖｅ　ＷａＳ　ｔｏ　ｎｌｏｓｔ　ａｎｔｉｔｉｆｏｔｉｅｓ．Ｔｈｅｓｅ　ｒｅｓｕｈｓ　１）ｒｏｖｉｄｅ　ａ　ｓｔ・ｉｅｎｔｉｆｉｃ　ｂａｓｉｓ　Ｍ’ｔｒｅａｔｌｌｌｅｌｌ［ｏｆ　ＢＩ’　ｈＹｌｌ１￣ｓｌａ　Ｌｅｎｏｋ　ｉｎＧ（・ｔｅｄ　ｔＩ１　Ａｅｌ＂ＯｌｌｌＯｌｌａｓ．￣ａｈｎｏｎｉ（’ｉｄａ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｂｒａｒｈ、ｍ）＇ｓｔａ．、１．￣，ｎｏｋ；ＡｅｒｏＤｌＯｌｌａＳ　ｓａｈｎｏｎｉ￣・ｉｄａ　ｓｕ］，ｓｌｌ；Ｓａｈｎｏｎｉｃｉｄａ；ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎ（Ｉ　ｉｄｅｎｔｉｆｉ（－ａｔｉｏｎ；１１１’ｎｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　Ｃ０ｒｒｅｓｐ０ｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒｓ：ＱＩＡＮ　Ａｉ一（ｔｏｎｇ；１，ＩＩ．．　Ｙａｉ１一ｈｕｉ　细鳞伍求　ｊ：鲥－：Ｊｒ３　『ｊ、鲑科、细鳞位属，其牛活　、　洲东北部，址一种冷水性鱼类．　我国只有一属　一仇类资源，我国已在占林省　们汀流域、　龙江省　华Ｉ：』　流域、陕西省秦岭地　等地建、７：ｒ细鳞鱼自　然保护Ｉ）（，并进行人＿＿Ｉ：的规模化养贿　、　随符细鳞鱼驯养繁殖过程的　入，…观厂各种　利　，主　分　Ｌｆ北、尔北和华北的　些｝ｌＩ『流　重要学术研究价仳此　巾。　细鳞位足Ｈ家二二级保护水生野生动物，　仇　类学与动物地　疫痫．制约了ｌ其￡皮展　日前，已仃报道的细鳞鱼疾　病包ｊ．　场炎病、烂衄痫、水每病、　代虫痫等多种　２（）ｌ６　６月，吉林省延边　鲜族ｒ１治州桀养殖场的　外，　鳞仉营乔价值较高，还具有可以防止ｍ栓　成、　队伤ｆ　ｉ愈　等药刚功能，而受到人们喜爱　是．　于人类　『ｔ动范…扩大、捕捞过度等　，陔　处ｊ　濒临火绝的状念　为了保护这一名贵的　收舢｝ｉ　Ｉ９　Ｊ：２（）１　７（）３一（）４　』　金』川Ｉ：ｉ　Ｊ、Ｉ家ｒ１然利・　：Ｊ　金．ｃｏ　目（３ｌ２０ｌ９２７）；．　林竹砸　ｒ　、　科　技攻炎坝¨（２０１５０２０４０６５ＮＹ）；Ｉ。　林省科技厅ｎ然　金项Ｉ　Ｉ　（２０１　７０１０１０Ｉ６．　）　鳞仉体侧及尾部｝Ｈ　脓肿，　肜成溃疡，并何　部分化ｒ二现象　试验事从濒北鱼怵１人Ｊ分离ｆｌ；ｌ株优　势Ｉ　株，经动物Ｉ口］　ｉ式验证实　仃致病　，通过理　化　定、１６Ｓ　ｒＲＮＡ基凶Ｊ　列分析确定　种　，并对　株进行ｒ药敏试验　研究结果纠鳞仉溃疡病的　防治提供了　论依据　１材料与方法　简介：　唬枞（Ｉ９７７～）．　ｊ．副教授，　力’　的研究　ｌ＿＇＿ｍａｉｌ：、、ｆｊ９９７＠ｌ６３“｝ｆｆＪ　从錾动物细　学　通汛ｆ１　：饯爱尔．Ｅ－ｉｎａｉｌ：ｑｉａｎａｉ（ｈ，ｌ　）１　１５＠Ｉ６３．¨ｌｌｌ１：刘№　．　Ｅ一１１１．Ｉｉｌ．　Ｉ、川ｌ　Ｉ　Ｊｉ９　ｒ】６３　ｌ　ｌ１ＩＩ１　１．１　ｉＪ＝ｌ＝验材料患病细鳞鱼、健　细鳞ｆｆＬ，均取白　林竹延边朝鲜族自治州某渔场；ＲＳ培养　。　，购白　９２　ｒ『ｌｆｌｔ　杂志２０ｆ　７　４［－（第５３卷）第ｆ（１』９Ｊ　北京陆桥，卜物技术有限公司；　ｒ／１）ＮＡ聚合酶、　（１Ｍｐ、ＤＬ一２　０００　Ｍａｒｋｅｌ’，购自ＴａＫａＲａ公司；微量生　化反应管、药敏纸片，购自杭州微生物试剂有限公　菌在ＲＳ培养基上为圆形、边缘整齐的黄色菌落　、　革兰染色为革兰阴性短杆菌、两端钝圆、单在或双　在（见中插彩版图１）　２．２动物回　试验将菌株ＢＲＩ　一１５腹腔接种纠　鳞鱼，在４　ｄ内全部发病死亡，对照组无异常、剖检　病死鱼，其病理变化与自然病死鱼相同，从其体内　；其余均为闻产或进ｌ　１分析纯。　１．２病原　的分离纯化无菌操作，取濒死细鳞鱼　的肝脏、心脏等组织，划线接种于Ｒｓ琼脂平板，　２８　：培养２４　ｈ．挑取形态一致的优势菌落，再次划　线培养２４　ｈ，挑取单个菌落进行纯培养，并对纯化的　细菌进行革　染色，观察菌体形态。　也分离出与ＢＲ［　一１５菌落、菌体、理化特性相同的　细菌。　将组织滤液接种细鳞鱼，并未出现发病等现　象，说明这次引起细鳞鱼死亡的病原是细菌感染而　非病毒。　２．３理化鉴定结果　菌株ＢＲＬ一１５葡萄糖、麦芽　糖、甘露醇、甘露糖、蔗糖、半乳糖、ＯＮＰ（，、Ｊｊ儿汁七１１－Ｉ‘　苷、鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶、精氨酸脱羧酶、　精氨酸双水解酶、硝酸盐还原、氰化钾生长等结果　阳性；乳糖、阿拉伯糖、阿拉伯醇、木糖、山梨醇、肌　１．３动物【＿ⅡＪ归试验将纯化的细菌用无菌ＰＢＳ稀　释至１．５５×１０　ＣＦＵ／ｍ１　，以每尾０．２　ｍＬ的剂墩腹　腔注射感染健康细鳞鱼，同时设置对照组，腹腔注射　０．２　ｍＬ的尤　ＰＢＳ，每组感染ｌ０尾。饲养水温保持　７（）　、并保证溶氧充足　、持续观察７　ｄ，记录细鳞　鱼发病死亡情况，并对病死鱼进行细菌分离培养　．　此外，采集自然发病的濒死负心脏、肝脏等组　织，５倍　添加无菌ＰＢＳ（１ｇ：５　ｍＩ　），进行组织研磨　ｆＬ反复冻融，Ｉ２　０００　ｒ／ｒａｉｎ离心１５　ｉｎｉｎ取上清，上清　液川０．２２　Ⅲ滤膜过滤，滤液经无菌检验后接种健　康细鳞鱼，感染剂量、力。法与鱼尾数同上　、　Ｉ．４　生理乍化鉴定挑取分离株纯培养物，接种于　做　牛化反心管中，具体操作及结果判定标准　微　生化反Ｊ、　管说明书　ｌ．５　１６Ｓ　ｒＲＮＡ基因扩增及系统发育分析热裂解　法提取病原菌分离株的基因组，并以此为模板．扩　醇、尿素、靛基质、硫化氢、枸橼酸盐、运动性等结果　为阴性；与《伯杰氏细菌鉴定手册》比对，基本符合　杀鲑气单胞菌特性，初步判定其为杀鲑气　胞菌　、　２．４　１６Ｓ　ｒｌｑＮＡ基因序列与系统发育分析ＰＣＩＩ扩　增菌株ＢＲＬ一１５的１６Ｓ　ｒＲＮＡ基因片段经电泳检测　约１　４００　ｂｐ（图２），测序结果显示，该片段长１　４０３　ｈｐ，将基因序列进行同源性检索，同时选取不同气　单胞菌种属代表株及ＢＲＬ一１５菌株的ｌ６Ｓ　ｒｔ｛ＮＡ基　因序列构建系统发育树（图３），结果　永，菌株　ＢＲＬ．１５　１６Ｓ　ｒＲＮＡ基因序列与杀鲑气单胞菌杀鲑亚　种同源性达９９％以上。　增１６Ｓ　１．ＲＮＡ基因序列，引物为１６Ｓ　ｒＲＮＡ通用引　物：ＰＩ：５　一ＡＣＡＧ　１　ＦＴＣＡ　ＦＣＡＴＧＧＣＩ　ＣＡ－３　、Ｐ２：５　一ＧＴ一　（　ＧＡＣＣ（　（　ｃｃ（；　［＇ＧＴＧ　Ｉ＇Ａ一３　，由吉林省库美生物科　综合菌体、菌落形态，理化特性与１６Ｓ　ｒｌ－ｌＮＡ基　因序列分析结果显示，菌株ＢＲ［　一１５为杀鲑气单胞　菌杀鲑亚种。　Ｍ　】　技有限公州合成　ＰＣＲ反应条件为：９５℃预变性　５　ｌｌｌｉｌｌ￣，９４℃变性１　Ｉｌｌｉｎ、５５℃退火１　ｍｉｎ、７２℃延伸　１．５　ｌｎｉｌｌ、３０个循环，最后７２℃延伸１０　ｒａｉｎ。ＰＣＲ　产物经１．０％琼脂糖凝胶电泳检测，纯化回收后由吉　ｂｐ　ｂｐ　林省库美乍物科技有限公　测序　．　测序结果经ＮＣＢＩ数据库ＢＬＳＡＴ比对相似性，　许删ＭＥ（．Ａ６．０软件构建系统发育树进行比较　分析　１．６药敏试验药敏试验采用Ｋ—Ｂ纸片法，将病　２　０Ｏ０　原菌活菌扩增，并将菌浓度调成１．５×１０　ＣＦＵ／ｍＬ。　取０．１　ｍｌ　液涂布于　ＦＳＡ琼脂平板，选取２０种药　１　ＯＯＯ　７５０　５ＯＯ　２５０　１００　１　４００　敏纸片，贴丁　述平板，２８　ｃ【＝培养２４　ｈ，测量抑菌圈　Ｉ　ｆ径，依　（　Ｉ　ｓＩ标准，对药敏结果进行判定。　２结果　２．１　细菌的分离及菌落菌体形态　从患病濒夕匕细　鳞鱼体内分离　１株优势芮．命名为ＢＲＩ　一１５　该　图２菌株ＢＲＬ一１５　１６Ｓ　ｒＲＮＡ　ＰＣＲ扩增结果　Ｍ：Ｉ）ＮＡ分ｒ质　抓　；１：Ｉ　ｃ｜｛产：物　Ｉ　２０Ｉ　７　｝。（粥５３绉）　１０　ｊ　９３　２．５　药敏试验　闲株刈‘２（）种抗蔺药物的敏感　试　验结果　明，该菌株除对强力霉素、多黏雄索Ｂｌｆｔ　度敏感外。其余１　８种抗　药物均离度敏感（表１）　船　３讨论　如　ｍ　∞　至三　ｊ　ｌ　杀鲑气　胞蔺隶属丁气ｒ　胞菌科乒　单胞蔺　，』　卜有５个、　种，分）ｊｌＪ是杀鲱　种、尤色、　种、杀ｌ　Ｉ奉鲱　业种、　氏亚种和溶果胶业种　、陔芮分　川　‘泛，　Ⅵ　以引发多种水生动物发病，尤其足鲑科竹类巫易感　染，感染鱼体会出现皮肤溃疡等　状，严币肯会１）Ｉ起　死亡　本研究从忠溃疡细鳞值体『人】分离出　株细　试验　菌即是杀鲑气　胞菌杀鲑　种，该菌经动物　示．对细鳞鱼具有致病　，并与自然发病肯症状・　致　此外，本研究对病值纰织进行ｒ研麟、离心、取　图３分离菌株ＢＲＬ一１５　１６Ｓ　ｒＲＮＡ基因序列发育进化树　清，并川此上清进行了攻毒试验，结果　示，细鳞ｆｆＩ－并　表１　分离菌株ＢＲＬ一１５的药敏试验结果　药物名称　氟苯尼考　先锋霉素Ｖ　庆大撼素　头孢呋　药物含量（　ｇ／ｓ　ｔ－）　抑　幽／ｌｌ一　矗殷感性　Ｓ　ｓ　Ｓ　ｓ　药物　称　红霉豢　利镝　卜　磺胺ｆｔＩ　恶｝　约物禽　（　Ｉｉｔ　）　抑Ｉ　１／『１ｍ　敏感ｒ　５　５　…　恩诺沙　左氰氟沙早　复　新诺明　ｓ　ｓ　１　Ｉ　【Ｉ大哺妥因　缸曲南　大他｝、ｆＩ１松　ｃＪｑ　素　”　＂　强　每素　多粘毒素Ｂ　头孢咪吩　头他氨苄　ｓ　琊锥豢　诺氟沙　ｓ：高度敏感；Ｉ：ｒｆ　度敏感　未发病　综合以上试验证明，此次细鳞鱼溃疡病的病　是：荫株ＢＲＬ—ｌ５对试验所选的绝大部分约物均比　较敏感．这　ｊ异育银鲫源、鲤鱼源杀蚌气　胞菌杀　鲑　种的耐药性有一定　别卜　，卜ｊ川样为细鳞鱼　原为杀鲑气单胞菌杀鲑亚种。而究其感染原冈町能　是发病前期当地气温发生骤变、加上部分鱼体受伤，　致使鱼机体免疫力下降，其自身携带的细菌感染导致　发病，并迅速传染同池细鳞鱼，致使疾病暴发　杀鲑气单胞菌的５个亚种之问的理化特性区别　不大　，为更准确的鉴定，本试验通过ＰＣＲ扩增出　菌株ＢＲＬ一１５的１６Ｓ　ｒＲＮＡ基因序列，通过ＢＩ　ＳＡＴ　的病原菌杀鲑气单胞菌无色亚种的耐药谱也Ｊ）（别　较大　一这可能与【藕种　ｆ　、菌株来源地点／ｆ　有　定关联　此外，本试验所用细鳞鱼所属的养　场　为　ＩＩ泉流水养殖，水环境优良、受到抗乍索的污染　较少，鱼的抵抗　相对较强，而此次，皮病，女Ｉｌ　所讨　论，叮能是气温变化较为剧烈，加Ｌ换池导致的位　体受伤所致　此，菌株ＢＲＬ—Ｉ５的药敏试验结果　足对试验所选绝大多数药物敏感．　为防治细鳞讯溃疡病的发生，除『ＪｌＪ强日常管　理、尽量避免鱼体受伤外，如果研制其痫原的火活　疫苗或其他优质疫茁，则呵以更好预防该病的发　的比对以及系统发育树分析：其与ＧｅｎＢａｎｋ　公布　的杀鲑气单胞菌杀鲑亚种１６Ｓ　ｒＲＮＡ基因序列的　源性在９９％以上，且系统发育树显示，菌株ＢＲＩ　一　ｌ５与杀鲑气单胞菌杀鲑亚种聚为一支综合菌落　菌体形态、理化特性、１６Ｓ　ｒＲＮＡ基因序列分析，菌株　ＢＲＬ一１　５最终确定为杀鲑气单胞菌杀鲑哑种　、　目前，固内鱼类大部分细菌病的治疗仍以抗生　素为主，因此，为筛选合适的抗牛素治疗该病，本研　究对菌株ＢＲ［　一１５进行了药敏试验　令人欣慰的　生，还ｒ叮以减少抗生素的使用，进而降低耐药　株　出现的风险，减少食品巾药物残留的危害　（下转第９７页）　Ｃｈｉｎ＜　ｓＰ　Ｊｏｉｎ’Ｈａｌ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｔ‘ｉｎａｒ）一Ｍｅ＜ｔｉｔ・ｉｎｅ　中　跃杂志２０１７年（第５３卷）笫ｌ０期　９７　ｌｇＭ均升高，Ｃ组、Ｄ组、Ｅ组与Ａ组、Ｂ组相比差异　显著（Ｐ＜０．０５），Ｅ组的ｌｇＡ、ＩｇＭ含量最高。　参考文献：　［Ｉ］　何玉华，朵贵信．姜海龙，等．马铃薯淀粉渣在动物生产中的应　用研究进展［Ｊ］．中国畜牧杂志．２０１６，５３（８）：７３—７７．　［２］　Ｉ：ｌａｕｐ　Ｍ　Ｅｘｔｒａｉｔ　ｆ｛．ｕｎｅ　ｌｅｔｔｒｅ＜ｌｅ　Ｍ［Ｊ］．Ｂａｕｐ　ａｕｘ　ｐｌｕｓｉｅｔｕ　ｓ　Ｎｏｕｖｅｌ—　ｌｅｓ　ｓｕｂｓｌａｌｔ（・Ｐｓ　ｉｎＡ））１１　Ｉ８２６．３１（３）：１０８—１０９．　血清免疫球蛋白ｌｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ是人体内的３种　免疫球蛋白，我们又称抗体，是检查体液免疫水平　常用的方法，通常检测ｌｇＧ、ｌｇＡ、ｌｇＭ这３类免疫球　蛋白就可以代表血清免疫球蛋白的总体水平　这３种抗体结构与功能都是不一样的。其中　ｌｇＧ是主要的再次免疫反应抗体。ｌｇＭ是主要的初　次免疫抗体。ＪｇＡ是黏膜免疫中的主要分泌型抗　体。免疫球蛋白的主要作用是介导动物的体液免　疫，血清中抗体含量的高低在某种程度上反映了动　物机体对某些疾病的抵抗力．１　。血清免疫球蛋白　的测定是检查体液免疫水平常用的方法，通常检测　［３］　（；ｅＰＬＩＮＡＳ　Ｐ．Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｌｌｌ　ｈｍｅｎｔ　ｏｔ’ｐｏｔａｔｏ　ｐｒｏｃ。ｅｓｓｉｎｇ　ｗａｓｔｅ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｙｅａｓｔ　ｆｅｌｍｅｎｔａｌｉＯｌｌ　ｌ　Ｊ］．Ｂｉｏｒｅｓ　Ｔｅ（・ｈ．２００７．９８：ｌ　１３８一ｌ　１４３．　［４］　零字彬，孙晶趟，郎朗．　５铃薯中生物碱的毒理学研究进腱　［Ｊ］．　５铃兽产业　ｊ粮食安全，２００９，７：８４—８５．　［５］　睦晓茹．尼葵素及莨若烷类生物碱的叶Ｉ毒、检测及评价研究　【Ｄ］．兰州：兰州大学．２０ｌ３．　［６］　Ｂａｋｅｒ　Ｉ】Ｃ．Ｋｅｅｌｅｔ　Ｒ　Ｆ．ｅｌ　ａ１．Ｌｅｓｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｐｏｔ　ｔｏ　ｓｐｏｎｆｌ　ａｎｄ　ｅｘｌａ（‘　ｔｅｄ　ｐｏｔａｔｏ　ｓｐｏｍｔ　ａｌｋａｌｏｉｄ　ｔｏｘｉｅｉｌｙ　ｉＩ１　Ｓｙｒｉａｎ　ｈａｎｌｓｌｅｒｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎｉｔ’ａｌ　Ｉ＇ｏｘｋ－ｏｌｏｇｙ。１９８７．２５（３）：１９９－２０８．　［７］　Ｍｉ（・ｈａｌｓｋａ　Ｌ．Ｎａｇｅｌ　Ｇ．Ｓｗｉｎｉａｒｓｋｉ　Ｅ。ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｅｍ、ＰＩ　ｏｌ’ａ—Ｓｔ）．　ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ这３类免疫球蛋白就可以代表血清免　疫球蛋白的总体水平。　ＩｇＧ抗体激活补体，中和多种毒素，本试验中随　着马铃薯皮添加量的增多ＩｇＧ先升高后降低，说明　在一定毒性范围内ｌｇＧ的分泌能力能随着毒素的增　加能被激发出来，一旦超过某一毒性范围，这种分　泌能力就会下降。　ＩｇＡ和ＩｇＭ跟消化系统和呼吸系统的关系比较　［９］　１ａｎｉｎｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｅ　ｃａｌｃｉｕｎｉ　ｔｒａｌｌｓｐｏｎ　ｉｎ　ｒａｔ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　Ｊ　１．Ｇｅｎｅｔｉｔ・　Ｐｈａｒｍａ￣－ｏｌｏ　，１９８５，ｌ６（１３）：６９－７０．　［８］　筐晓茹，沈敏，刘伸．龙葵素中毒及检测的研究进展［Ｊ］．中困　同法鉴定。２０１３．６７（２）２：３５－４１．　Ｐｅｒ（　ｉｖａｌ（　Ｃ．Ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｌｉｇｈｔ　ｕｐｏｎ　ｇｌｙ（、ｏａｌｋａｌｏｉｄ　ａｎｄ　ｅｈｌｏｍ—　ｐｈｙｌｌ／＿ｉｔ－ｔ－ｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐｏｔａｔｏ　ｔｕｂｅｔ￣（Ｓｏｌａｎｕｍ　ｔｏ１）ｅｒｏｓｕｌｎ　Ｌ．）　［Ｊ１．Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９９，１４５（２）：９９～１０７．　［１０］　Ｓｏｎ　Ｙ（）．Ｋｉｍ　Ｊ，Ｌｉｍ　Ｊ　Ｃ．ｅｌ　ａ１．Ｒｉｐｅｆｒｕｉｔ　ｏｆ　Ｓｏｌａｎｏｍ　ｎｉｇｒｕｒｎ　１　．ｉｎｈｉｌｉｆｔｓ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｔｌ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ＭＣＦ一７　ｒｅｌｌｓ　ｆＪ］，Ｆｏ＜ｘｌ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｔ－ａｌ　Ｔｏｘｉ（・ｏｌｏｇｙ．２００３．４１：１　４２１一ｌ　４２８．　［１１］　张绍磊．膀胱内灌注加龙葵方预防膀胱癌复发的疗效观察　［Ｊ］．现代中西医结合杂志，２００８．１７（３）：４２７—４２８．　ｅｔ　ｎ，．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏ１　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ＨｅｐＧ　［１２］　Ｙ　Ｂ　Ｊｉ。Ｓ　Ｙ　Ｇａｏ、Ｃ　Ｆ　Ｊｉ．密切，是黏膜免疫中的主要分泌型抗体　ｊ，本试验　中ＩｇＡ，ＩｇＭ含量增加，而且在灌注试验过程中会观　察到小鼠有轻度的胃肠炎症状，肠道是病菌、毒素　２　ｃｅｌｌｓ　ｂｖ　ｓｏｌａｎｉｎｅ　ａｎｄ　Ｂｅｌ一２　ｐｌ・ｏｔｅｉｎ『Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅｔｈｎｏｐｈａｒ．　Ｉｌｉａ（　ｏｌｏｇ），．２００８，ｌ　１５：１９４—２ｏ２．　等进入机体的第一道屏障，可能会对肠道黏膜造成　损伤，导致ｇＡ，ＩｇＭ上升。　４小结　［１３］　刘艳芳．糖苷生物碱的研究进展［Ｊ］．赤峰！学院学报，２０１４，３０　（１）：８４－８５．　［１４］　１．，ａｎｇｋｉｈｌｅ　Ｓ．Ｓｔ・ｈｒｅｄｍ’Ｍ．Ｓｔｅｗａｒｌ　Ｄ．ｅｌ　ａ１．Ｔｈｅ　ａｃｕｔｅ　ｔｏｘＭ—　ｔｙ　ｏｆ　ｈｉｇｈ（１ｏｓｅｓ　ｎｆ　ｔｈｅ　ｇｌｙｃｏａｌｋａＭｄｓ．ａ—ｓｏｌａｎｉｎｅ　ａｎｄ　ａ一　马铃薯糖苷生物碱粗提品对小鼠有一定的毒　（＇ｈａｔ・ｏｎｉｎｅ．ｉ　ｉ１　ｔｈｅ　Ｓｖｉｒａｎ　Ｇｏｌｄｅｎ　ｈａｍｓｔｅｒｆ　Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｉｇ［ｉ．　【．ｏｈｔｎａｌ　ａｎｔｉ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｌｗ，２００８，５６（Ｉ　８）：８　７５３－８　７６０．　性作用，能够抑制小鼠体重的增长，不同浓度的马　铃薯糖苷生物碱使小鼠免疫器官指数降低，ＩｇＡ，ＩｇＭ　［１５］　Ｌｉ．ｌｆｎｇ　ＧＡＯ．Ｌｉｉａｎｉ－ｊｉ　ＷＥＮ．Ｈａｏ　ＹＵ．Ｋｎｏ＜，ｋｄｏｗｎ　ｏｆ　Ｓｔａｔ３　Ｐｘ—　ｐｒｅｓｓｉｎｎ　ｕｓｉｎｇ　ＲＮＡｉ　ｉｎｈｉｈｉｔｓ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｌａｒｙｎｇｅａｌ　ｔｔｌｍｏｒｓ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　含量升高，３００　ｒａｇ／ｋｇ体重马铃薯糖苷生物碱呈现　的对生长的抑制和对免疫功能的毒性最大，与对照　组相比差异显著（Ｐ＜０．０５），并对小鼠有致死作用。　　．［Ｊ］．　ｔａ　Ｐｈａｒｍａｅｏｌｏｇｉｔ－ａ　Ｓｉｎｋ　ａ，２００６；２７（３）：３４７—３５２．　［Ｉ６］　李会珍。张志军．马铃薯糖苷生物碱及其影响因素研究进展　［Ｊ］．食晶研究　开发，２０１２．３３（Ｉ１）：２２７—２２９．　．　．　　．乖出尔　不　矫　．　尜　尔　尔　不　币　带　币　　．场　钎　球　（上接第９３页）　［５］　Ｉ）ＮＡ　ｎｌｉｅｌｏａｒｒａｖｓ　ｊ　Ｊ．ＢＭＣ　Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２００６，７：４３　Ｃｉｐｒｉａｎｏ　Ｒ　Ｃ．Ｆｕｒｕｎｅｔｄｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ　Ｃａｕｓｅｄ　ｂｙ　Ａｅｒｏ—　参考文献：　［１］　刘宁，时晓，杜迎春，等．患病细鳞鱼杀鲑气单胞蔺的分离与鉴　定［Ｊ］．淡水渔业，２０１５，４５（１）：８８—９２．　ｎｌＯａ（ＩＳ　ｓａｌｍｏｎｉ（－ｉｄａ．Ｆｉｓｈ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｌｅａｆｌｅｔ　６６［Ｍ］．Ｕｎｉｔｅｄ　Ｓｔｏｌｅｓ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｌ　ｆ　Ｄｆ　ｔｈｅ　Ｉｎｔｅｒｉｏｒ，２００１：１－４．　ｎｓ　Ｊ．ｅｔ　ａ１．　４ｅｒｏｍｏｎａｓ　ｓａｌｍｏｎｉ—　［６］　Ｐａｖａｎ　Ｍ　Ｅ．Ａｈｂｏｎ　Ｓ　Ｌ．Ｚｏｒｚ６ｐｕｌ＿＝２］　李水发，张永泉，刘洋，等．黑龙江两种生态类型水域细鳞鱼肌　肉背养成分的比较分析［Ｊ］．东北农业大学学报．２０１１．４２（９）：　９７—１０３．　ｅｉｄａ　ｓｕｌ｝ｓｐ．ｐｅｅｔｉｎｏＯ＂ｔｉｃａ　ｓｕｈｓｐ　ｒｉＯ＇＋．．ａ　ｎｅｗ　ｐｅｅｔｉｎａｓｅ　ｐｏｓｉｔｉ￣　’ｓｕｂｓｐｅｔ・ｉｅｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｉ＇ｏｍ　ａ　ｈｅａｖｉｌｙ　ｐｏｌｌｕｔｅｄ　ｌ＇ｉＶｅｌ　Ｊ　１．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎｏ］ｑｌ‘Ｓ，：￣ｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｔ・ｔｅｒｉｏｌｏｇ）．２０００．５０：ｌ　１　１９—１　１２４．　［３］　ｒ］弧荣，武二栓，宗振东，等．细鳞鱼人＿１：繁育及大型水域放流　增殖技术［Ｊ］．内蒙占农业科技，２０１５，４３（５）：ＩＯｌ一１０３．　４ｊ　Ｎａｓｈ　Ｊ　Ｈ　Ｅ，Ｆｉｎｄ｜ａｙ　ｗ　Ａ．Ｌｕｅｂｂｅｒｔ　Ｃ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｎｑｍｒａｔｉｖｅ　ｇｅ—　ｎｏｍｉｅｓ　ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ　ｏｆ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｏｆ　Ａｅｒｏｎｌｏｌｌａ．￣ｓａｌｍｏｎｉ＋’ｉｄａ　ｕｓｉｎｇ　［７］　壬亚冰．梁利国．高金伟，等．异育银鲫源杀鲑气单胞菌杀鲑　种的分离鉴定［Ｊ］．微生物学通报，２０１６，４３（７）：１　５３２—１　５３９．　Ｅ＊ｆＪ．鲤鱼杀鲑气单胞菌的分离签定及耐药性分析　［８］　王海娟，：［Ｊ］．中国畜牧兽医，２０１５，４２（１）：１９２—１９６．　《３例奶牛卵泡囊肿的特殊病例》　（作　刘贤伙，ＩＩ　义　第６５　）　图２病例２　、：了寓千¨左侧卵巢ｌ　址ｌ　人　ＩＪｌＩ，印泡；Ｂ：Ｉ　ｉ人卯泡囊『ｌ【Ｉ１　分　ｊ子　１付连；【：：　挺Ｉ］Ｉ｝，ＩｉＩＪ泡液；１）：　刀所指输卵符　＿ｊ－卵巢　连　《细鳞鱼杀鲑气单胞茵杀鲑亚种的分离鉴定》图版　（作　单晓枞，钱爱尔等，ＩＩ　义　第９１～９３、９７贝）　图１　分离菌株的革兰阴性染色结果（１　０００　Ｘ）与菌落形态