高效液相色谱法在药物分析领域中的应用刍议

高效液相色谱法在药物分析领域中的应用刍议

作者：张卫卫

来源：《读写算》2011年第18期

[摘要]本文作者首先介绍了高效液相色谱，然后对在药物分析领域中HPLC的应用进行了综述，具体如下文所示。

[关键词]高效液相色谱 药物分析 应用

HPLC的出现不过三十多年的时间，但这种分离分析技术的发展十分迅猛，目前应用也十分广泛。其仪器结构和流程也多种多样。高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置(用双泵)、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质，因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂，抗氧化剂、杀虫剂、除莠剂的分析等物质的分析。在中国药典中主要用于药物的含量测定、有关物质检查和鉴别等。

一、高效液相色谱及其特点

1、高效液相色谱仪主要是由色谱及控制器、色谱柱泵、进样器、检测器和数据处理器以及控制五大部分组成

分离原理是一个物理过程，流动相携带着待分析化合物和其他一些共存物质流过色谱柱，利用不同物质在固定相上的保留时间不同，从而出峰时间不同而达到分离。利用保留时间定性，峰高或者峰面积定量，在将分离后的各个成分一次通过一紫外检测器时就可检测出个化合物的浓度来。为了能够迅速地将液体通过色谱柱，必须高压。该方法的分离效能相对来说比较高，比气象色谱的分离效能高出许多倍。这些方面的优势使得高效液相色谱法在药物分析方面应用很广。

2、高效色谱法特点。高效液相色谱法有“三高一广一快”的特点

一、高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。二、高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。三、高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在uL数量级。四、应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。五、分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚

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至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间(进样器、柱接头、连接管和检测池等)中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。 二、高效液相色谱主要类型

1、吸附色谱(adsorption chromatograpby)

吸附色谱系色谱法之一种，利用固定相吸附中对物质分子吸附能力的差异实现对混合物的分离，吸附色谱的色谱过程是流动相分子与物质分子竞争固定相吸附中心的过程。吸附按物质状态可分为：固液吸附与固气吸附，但一般指固液吸附；按吸附手段可分为：物理吸附、半化学吸附、化学吸附。

2、分配色谱(partition chromatography)

分配色谱系色谱法之一种，利用固定相与流动相之间对待分离组分溶解度的差异来实现分离。分配色谱的固定相一般为液相的溶剂，依靠图布、键合、吸附等手段分布于色谱柱或者担体表面。分配色谱过程本质上是组分分子在固定相和流动相之间不断达到溶解平衡的过程。 3、离子色谱(Ion Chromatography)

离子色谱是高效液相色谱(HPLC)的一种，是分析阴离子和阳离子的一种液相色谱方法。离子色谱的分离机理主要是离子交换，有3种分离方式，它们是高效离子交换色谱(HPIC)、离子排斥色谱(HPIEC)和离子对色谱(MPIC)。用于3种分离方式的柱填料的树脂骨架基本都是苯乙烯二乙烯基苯的共聚物，但树脂的离子交换功能基和容量各不相同。HPIC用低容量的离子交换树脂，HPIEC用高容量的树脂，MPIC用不含离子交换基团的多孔树脂。3种分离方式各基于不同分离机理。HPIC的分离机理主要是离子交换，HPIEC主要为离子排斥，而MPIC则是主要基于吸附和离子对的形成。 4、亲和色谱

亲和色谱也称为亲和层析，是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法。亲和色谱在凝胶过滤色谱柱上连接与待分离的物质有一定结合能力的分子，并且它们的结合是可逆的，在改变流动相条件时二者还能相互分离。亲和色普可以用来从混合物中纯化或浓缩某一分子，也可以用来去处或减少混合物中某一分子的含量。 三、HPLC在药物分析中的运用

1、高效液相色谱法在药物含量测定中的应用

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天然药物的来源有动物、植物和矿物之分。由于化学成分复杂，有效成分可能有一个，也可以有多个，因此精确测定各有效成分的含量对药品质量控制，建立质量标准具有重要的意义。高效液相色谱法可对天然药物的成分进行分离鉴定，并测定有效成分的含量。葛根素是粉葛药材中的主要活性成分之一，具有扩张冠状动脉、降低血压、减少心肌耗氧量、抗心率失常、降血糖、将血脂、抗动脉硬化、改善微循环、抗肿瘤等多种压力作用。刘宁采用HPLC法测定四川粉葛中葛根素的含量，结果显示该法方简单易行，结果准确，可用于四川粉葛药材的质量控制。重要复方制剂和化学复合制剂通常含有多种有效成分，各有效成分的含量决定了药物的治疗效果。

2、HPLC在药物鉴别中的应用

中药材是加工中药饮片和生产中成药的用原料药，其品种的真伪、质量的优劣直接影响到临床用药的安全有效。中药鉴别时一切重要生产，研究至关重要的一步。在平时的监督检查中发现许多中药材伪劣品、混淆品出现的频率较大，伪劣品、混淆品与正品药物村子啊外观相似、但来源不同、性状和功效差异较大，价格相差往往也很大。根据对象的不同，常不能仅从形态上鉴别。而在HPLC法中因保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数，可用于药物的鉴别，在中国药典中就有大量的药物采用此法进行鉴别。随着高效液相色谱技术的发展和在药典中的重要性不断提高，出现了一些采用高效液相色谱法鉴别药物的新方法。例如，岗梅等7种冬青属中草药、18种石斛类生药、南北五味子、蜂胶的鉴别。通过对样品各有效成分的组分和含量的测定，从根本上鉴定药物真伪优劣，确定有效性，这误以为进一步完善、开发药物鉴别的方法提供了一种新的思路。 3、HPLC在添加违禁药物检查中的应用

近年来，食品、药品、保健品以及动物饲料等各方面频频出现非法添加违禁药物的事件。一些药品和保健品为了让消费者服用后产生显著效果，居然也在其中非法添加不允许的西药成分，这类成分往往对患者造成病情不受控制，药物中毒等不良反应，严重者甚至威胁到患者生命。高效液相色谱法在对添加违禁药物的日常检查工作中，正发挥着越来越重要的作用。为打击药品造假和保障人民用药安全、有效，提供了有力的技术支持。 四、结论

高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于400以上)的有机物(这些物质几乎占有机物总数的75％～80％)原則上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20％，而能用液相色谱分析的约占70～80％。高效液相色谱法由于分析速度快、分离效率高、检测的灵敏度高、检测自动化、使用面广阔、组分容易回收以及样品处理简单等等优点确定药方案和治疗剂量，以及药物定力学分析和药效评价提供了方法的基础。

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