振荡磁场下超顺磁性链霉素PELA微球体外药物释放特征探索

中国抗生素杂志２００８年２月第３３卷第２期　文章编号：１００１．８６８９（２００８）０２－０１０１－０５　振荡磁场下超顺磁性链霉素ＰＥＬＡ微球体外药物释放特征探索　罗聪　安洪　・’　蒋电明　杨晓兰　朱照静　赖国旗　（１重庆医科大学附属第一医院，　重庆４０００１６；　２重庆医科大学，　重庆４０００１６）　摘要：　目的制备超顺磁性硫酸链霉素．聚乳酸．聚Ｅ，－－醇（ＰＥＬＡ）微球（ｓｕｐｅｒｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ　ｃｈｉｔｏｓａｎ　ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ　ＰＥＬＡ　ｍｉｃｒｏ－　用化学共沉淀法合成纳米超顺　ｓｐｈｅｒｅＳ，ｓｐＣＳＰＭ），研究此微球的特性，并对其在振荡磁场作用下体外药物释放规律进行研究。方法磁Ｆｅ，０４壳聚糖纳米粒（ｓｕｐｅｒｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ　ｃｈｉｔｏｓａｎ　Ｆｅ，Ｏ４　ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ，ｓｐＦＣＮ），再用双乳化（Ｗ／Ｏ／Ｗ）溶剂蒸发法制备ｓｐＣＳＰＭ。将　ｓｐＣＳＰＭ混合人兔血中形成血凝块，在３７℃模拟体液中进行体外药物溶出试验，用振荡磁场干预，用酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）检测硫酸链　霉素的释放量。结果振荡磁场能够增加ｓｐＣＳＰＭ血凝块中链霉素释放速率，与非磁性的壳聚糖聚乳酸．聚乙二醇（ＰＥＬＡ）微球　（ｃｈｉｔｏｓａｎ　ｓ￣ｅｐｔｏｍｙｃｉｎ　ＰＥＬＡ　ｍｉｃｒｓｐｈｅｒｏｅｓ，ＣＳＰＭ）相比，２６ｄ时使药物释放量提高３倍左右。结论　ｓｐＣＳＰＭ具有药物缓释功能，振荡　磁场可重复性增加体系中药物的溶出，此体系药物缓释周期超过三周。　关键词：壳聚糖；聚．ＤＬ－乳酸．聚乙＝醇共聚物（ＰＥＬＡ）；超顺磁性微球；振荡磁场；控释　中图分类号：Ｒ９４３　文献标识码：Ａ　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｒｕｇ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｆｒｏｍ　ｓｕｐｅｒ　ｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ　ｃｈｉｔｏｓａｎ　ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ　ＰＥＬＡ　ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｃｌｏｔ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔ　ｂｙ　ｏｓｃｉｌｌａｔｉｎｇ　ｍａｇｎｅｔｉｃ　ｆｉｅｌｄｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ　Ｌｕｏ　Ｃｏｎｇ　，　Ａｎ　Ｈｏｎｇ　，Ｊｉａｎｇ　Ｄｉａｎ・ｒｕｉｎｇ　，Ｙａｎｇ　Ｘｉａｏ—ｌ叭２，　Ｚｈｕ　Ｚｈａｏ－ｊｉｎ￣ａｎｄ　Ｌａｉ　Ｇｕｏ・ｑｉ。　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０００１６；　（１　Ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｌ＇ｄｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　＇　Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉａｎｃｅ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０００１６）　ＡＢＳＴＲＡＣＴ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｓｕｐｅｒ　ｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ　ｃｈｉｔｏｓａｎ　ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ（ｓｐＣＳＰＭ），ｔｈｅ　ｓｕｐｅｒ　ｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ　ｃｈｉｔｏｓａｎ　ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ　ＰＥＬＡ　ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ（ｓｐＣＳＰＭ）ｗｅｒｅ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｇｕｌａ　ｔｉｏｎ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｏｆ　ｓｐＣＳＰＭ　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｃｌｏｔ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔ　ｂｙ　ｏｓｃｉｌｌａｔｉｎｇ　ｍａｇｎｅｔｉｃ　ｆｉｅｌｄｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ　ｏｆ　ｓｕｐｅｒ　ｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ　ｃｈｉｔｏｓａｎ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｓｕｐｅｒ　ｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ　ＰＥＬＡ　ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ　ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｌａｔｅｘ．　Ｔｈｅ　ｄｒｕｇ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　ｓｐＣＳＰＭ　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｃｌｏｔ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔ　ｗａｓ　ｄｏｎｅ　ｉｎ　ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ　ｂｏｄｙ　ｆｌｕｉｄ　ｗｉｔｈ　ｏｒ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ｏｓｃｉｌｌａｔｉｎｇ　ｍａｇｎｅｔｉｃ　ｆｉｅｌｄｓ，ａｎｄ　ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ＥＬＩＳＡ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｄａｔａ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｏｓｃｉｌｌａｔｉｎｇ　ｍａｇｎｅｔｉｃ　ｆｉｅｌｄｓ　ｃｏｕｌｄ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｏｆ　ｓｐＣＳＰＭ　ｒｅｐｅａｔｅｄｌｙ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｈｉｔｏｓａｎ　ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ　ＰＥＬＡ　ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ　（ＣＳＰＭ），ｔｈｅ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｗａｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｂｙ　ｔｈｒｅｅ　ｔｉｍｅｓ　ａｔ　ｔｈｅ　２６ｔｈ　ｄａｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｏｓｃｉｌｌａｔｉｎｇ　ｍａｇｎｅｔｉｃ　ｆｉｅｌｄｓ　ｃｏｕｌｄ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｄｒｕｇ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｏｆ　ＳＰＣＳＰＭ　ｒｅｐｅａｔｅｄｌｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｅｒｉｏｄｓ　ｏｆ　ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｓｙｓｔｅｍ　ｗａｓ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　３　ｗｅｅｋｓ．　ＫＥＹ　ＷｏＲＤＳ　ｔｒｏｌｌｅｄ　ｒｅｌｅａｓｅ　Ｃｈｉｔｏｓａｎ；ＰＥＬＡ；　Ｓｕｐｅｒ　ｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ　ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｌ：ｅ；　Ｏｓｃｉｌｌａｔｉｎｇ　ｍａｇｎｅｔｉｃ　ｆｉｅｌｄｓ；　Ｃｏｎ一　收稿臼期：２００６．１２．１３　基金项目：国家高技术研究发展计划８６３计划（课题编号：２００２ＡＡ３２６０２０）。　作者简介：罗聪，男，生于１９６６年，在读博士研究生。　通讯作者，Ｅ．ｍａｉｌ：ａｎｈｏｎｇｌ１０６＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ　维普资讯 http://www.cqvip.com 振荡磁场下超顺磁性链霉素ＰＥＬＡ微球体外药物释放特征探索罗聪等　缓释制剂植人体后常被血液凝聚在局部或被纤维　结缔组织包裹，此时药物缓释制剂的药物能否顺利按　需要释放，是临床医生所关心的问题。链霉素的主要不　良反应是显著的第八对脑神经损害及肾脏毒性，如其　药物释放能控释或磁性局部浓聚，对减轻此药的不良　反应，增加临床使用范围具有重要的意义。特别是对骨　结核病，目前临床药物治疗仍有很多困难，如果具有磁　靶向局部浓聚链霉素或其他抗结核药物的控释药物制　剂试制成功，将给骨结核患者带来福音。　对于大多数药物传递系统而言，多数聚合物的释　药为扩散释放，因此药物释放受多种因素影响而较难　控制。药物控释系统为解决这类问题提供了思路，即通　过环境影响（如：温度、光、超声波、微波和磁场等物理　因素与ｐＨ、葡萄糖等化学刺激信号）使材料的结构与　功能发生变化，实施对药物释放信号的空间及时间控　制【Ｊ１。　为了能在需要时明显改变药物释放速度，１９８５年　Ｅｄｅｌｍａｎ和Ｆｏｌｋｍａｎ等用乙烯／乙酸乙烯酯共聚物　（ＥＶＡｃ）将牛血清与钐钴（ＳｍＣｏ）永磁体包埋，在体外　施加振荡磁场，能将释放速率提高５～ｌ０倍【　一１。但这　类磁性植人式缓释制剂中永磁体的代谢存在一定的问　题。由纳米Ｆｅ，Ｏ．制备的超顺磁性微粒具有强的磁响　应性，在无外加磁场时磁性可以很快消失，纳米Ｆｅ３０．　能够最终排出体外，是理想的医用磁性微粒【４１。在振荡　磁场干预下，超顺磁性植人式药物缓释微球在血凝块　中药物释放规律的研究，目前报道较少。　本研究是将纳米Ｆｅ，Ｏ．超顺磁微粒与链霉素复　合，用多聚物（ＰＥＬＡ）包裹形成微球，再与血液混合后　形成血凝块。在振荡磁场干预下探索其体外药物释放　情况，为后续的动物体内实验及今后的临床应用提供　实验依据。　１　实验部分　１．１　仪器和材料与方法　７８—１型磁力加热搅拌器：上海精科实验有限公　司；ＦＡ２５型均质机：上海弗鲁克流体机械有限公司；　ＦＤ　ＴＸ—ＦＭ—Ａ型磁天平：上海复旦天欣科教仪器有限　公司；Ｈｉｔａｃｈｉ一６００型透射电子显微镜（日本）；超声波　发生器本溪市无线电一厂；ＺＲＳ一６型智能溶出试验仪　（天津大学无线电厂）；ＦＩ＇ＩＲ一８９００傅立叶变换红外光　谱仪（日本岛津）；Ｓａｖａｎｔ　Ｍｏｄｕｌｙｏ冷冻干燥机（美国）；　５５０型Ｂｉｏｒａｄ酶标仪（美国）。　硫酸链霉素：华北制药股分有限公司；聚乳酸一聚　乙二醇共聚物【ＰＥＬＡ：Ｐ（Ｌ—ＰＥＧ　６０００）（９５：１０）】，ＭＷ　１５０００（中科院成都化学研究所）；壳聚糖（Ｃｈｉｔｏｓａｎ　ＳＣ　相对分子量１．３８×１０　脱乙酰度９０％）浙江澳兴生物　科技有限公司；硫酸铁铵ＮＨ．Ｆｅ（ＳＯ．）　・１２Ｈ　Ｏ，分析　纯，硫酸亚铁铵（ＮＨ・）　Ｆｅ（ＳＯ．）　・６Ｈ　Ｏ分析纯，重庆　川东化学试剂厂；ｐｌｕｒｏｎｉｃ　Ｆ一６８，Ｓｉｇｍａ公司（美国）；聚　乙烯醇（ＰＶＡ，ＭＷ＝２２　０００，水解度８８％，Ｓｉｍｇａ）；链霉　素（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ）试剂盒（北京望尔生物技术有限公　司）；其它试剂均为分析纯。　１－２　超顺磁性壳聚糖纳米球的制备　按文献［５】以化学共沉淀法制备超顺纳米磁性壳　聚糖纳米粒。　１－３　超顺磁性链霉素ＰＥＬＡ微球的制备　用双乳化（ｗ／ｏ／ｗ）溶剂蒸发法制备超顺磁性链　霉素ＰＥＬＡ微球　６．７】。将适量ＰＥＬＡ溶人二氯甲烷＋乙　酸乙酯混合液中成油相；将５％硫酸链霉素２．５与５ｍｌ　超顺磁性壳聚糖纳米球混悬液（约３５０ｍｇ）旋涡混合成　内水相；将适量ｌ％ｐｌｕｒｏｎｉｃ　Ｆ一６８（Ｗ／　）加人３０ｍｌ　２％ＰＶＡ水溶液中（Ｗ／　）成外水相。将内水相加人油　相超声乳化１０ｍｉｎ（功率ＩＯＯＷ）得Ｗ／Ｏ初乳；再将初　乳注人外水相中，ｌＯ０００ｒ／ｍｉｎ均质５～１０ｓ，得复乳。搅　拌挥发１２ｈ祛除有机溶剂，蒸溜水洗涤，离心（３０００　ｒ／ｒａｉｎ）倒出上清液（所有洗涤液均收集用于测定其中　链霉素含量），即得超顺磁性链霉素ＰＥＬＡ微球湿粉。　冻干得干粉，一４℃保存。　对照用链霉素ＰＥＬＡ微球亦参照此法制备，仅内　水相中加非磁性壳聚糖溶液。　１．４　超顺磁性壳聚糖纳米粒及链霉素ＰＥＬＡ微球表　征　１．４．１　形态、粒径与分布测定　取超顺磁性壳聚糖　纳米粒溶液滴至专用铜网上，直接在透射电子显微镜　下观察粒子的大小和形态。取超顺磁性链霉素ＰＥＬＡ　微球及链霉素ＰＥＬＡ微球在光学显微镜下观察粒子的　大小和形态。　１．４．２　红外光谱分析　取适量产品和ＫＢｒ一起研　磨、压片，并用红外分光光度计分别检测超顺磁性链霉　素ＰＥＬＡ微球及链霉素ＰＥＬＡ微球ＦＴＩＲ光谱。　１．４．３　磁感应强度　用磁天平测定超顺磁性壳聚糖　纳米粒及超顺磁性链霉素ＰＥＬＡ微球增重现象。　１．５　微球的载药量及包封率　１．５．１　链霉素标准曲线的绘制　用ＥＬＩＳＡ法测定硫　酸链霉素的浓度，取链霉素试剂盒（批号Ａ一０４１２２１一Ａ，　北京望尔生物技术有限公司）中提供的链霉素标准品，　浓度分别为：０、０．５、１．５、４．５、１３．５、４０．５ｎｇ／ｍｌ。在酶　标仪４５０ｎｍ／６３０ｎｍ波长下测定的Ａ值，测两次取平　均值；标准品获得的Ａ平均值均除以无标准品Ａ平均　维普资讯 http://www.cqvip.com

中国抗生素杂志２００８年２月第３３卷第２期　值再乘１００，得百分比形式吸光度值。以此吸光度值为　纵坐标，相应链霉素浓度的半对数值为横坐标绘制标　准曲线；标准曲线方程：Ａ＝５．５—２．２７　Ｃ（相关系数　ｒ＝０．９９８８，Ｐ＜Ｏ．０００１）。　溶液为基质以化学共沉淀法制备的。其反应式为：　Ｆｅ　＋２Ｆｅ　＋８０Ｈ一＝Ｆｅ３０４＋４Ｈ２０　调节粒径的大小主要是通过控制沉淀剂（ＮａＯＨ）　的使用，使沉淀离子同步沉淀，在分散剂存在及快速搅　拌下使沉淀离子浓度在大量成核后快速下降，限制晶　核的生长速度。当制备的Ｆｅ　０　壳聚糖粒径达３０ｎｍ以　下时，其颗粒问的热振动能足以克服磁吸引力，呈现超　顺磁性Ｉ。１。超顺磁性Ｆｅ　Ｏ　壳聚糖具有强的磁响应性　且和抗磁性物体一样在无外加磁场时磁性可以很快消　失。　１．５．２　包封率和载药量测定新制三批微球，收集　各组洗涤液，离一￣（８０００ｒ／ｍｉｎ），取上清液测定链霉素　浓度。并分别称量微球重量。　按下式计算微囊的载药量和包封率　包封率＝【（投入药量一上清液中药量）／投入药　量】×１００％　载药量＝［（投入药量一上清液中药量）／微球重　量】×１００％　．　本实验所制备的超顺磁Ｆｅ　Ｏ　壳聚糖纳米粒最小　可达Ｆｅ　Ｏ　纳米粒粒径在７～１２ｎｍ左右，呈球形，外形　规则且表面光滑。　１．６　微球体外溶出度实验　按《中国药典》溶出度测定第一法（转篮法），用　ｚＲＳ．６型智能溶出试验仪行体外溶出度实验。以三种　方式观测药物溶出情况：Ａ组，超顺磁性链霉素ＰＥＬＡ　微球，加用振荡磁场；Ｂ组，超顺磁性链霉素ＰＥＬＡ微　用磁天平测定纳米壳聚糖ＦｅｓＯ　及磁性链霉素　ＰＥＬＡ微球增重现象（环境温度２８￣Ｃ）。磁场强度为　１Ｏ、５０、１５０ｍＴ的磁场时，纳米壳聚糖Ｆｅ　Ｏ　溶液（磁流　球，ｄ２１加用振荡磁场；Ｃ组，链霉素ＰＥＬＡ微球。每组　观测两份样品，每份样品０．０５０ｇ，与新抽的兔血２ｍｌ　混合形成血凝块后，分别装入转篮中，各置于１０００ｍｌ　溶出液中。振荡磁场干预方法：振荡磁场由杭州仪表电　体比重０．０５３９ｇ／ｍ１）增重分别为０．０１９３、０．０２６３２和　０．０５８１ｇ。磁性链霉素ＰＥＬＡ微球增重分别为０．０１１２、　０．０１０９４和０．２７８７ｇ。磁场强度从６００ｍＴ逐次下调至　０ｍＴ时，两种材料在ｌＯｓ内增重下降至零，表明两种材　料有较强磁感应强度，且具有超顺磁性质Ⅲ。光镜下可　见磁性链霉素ＰＥＬＡ微球沿磁力线呈串珠样排列。　２．２　链霉素ＰＥＬＡ微球和超顺磁性链霉素ＰＥＬＡ微　球粒径及分布　机厂生产的７８．１型磁力加热搅拌器改装，感应磁场强　度为１２００ｒｏＴ，转速为５０～８０ｒ／ｍｉｎ。振荡磁场干扰时　间点为：Ａ组，按每次取样前２ｈ，每次振荡磁场作用时　间为ｌｈ；Ｂ组，ｄ２１后用振荡磁场干扰，每次干扰方式　同Ａ组；Ｃ组，振荡磁场干扰同Ａ组，作空白对照。　本实验所制备的链霉素ＰＥＬＡ微球和ｓｐＣＰＧＭ呈　圆形，表面光滑，分散性好。光学显微镜测定其平均粒　径分别为链霉素ＰＥＬＡ微球：　＝（３０．７６±５．３４）　；　溶出液采用Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ人工模拟体液，配方为ＮａＣＩ　８．５ｇ，ＫＣ１　０．２ｇ，ＣａＣｌ　０．２ｇ，ＮａＨＣＯ３　０．２ｇ，加水至　ｌＯ００ｍｌ。设置温度（３７±１）ｏｃ，转篮速度ｌＯＯｒ／ｍｉｎ。第　一超顺磁性链霉素ＰＥＬＡ微球：　＝（３２．９４±７．１５）Ｉｚｍ，　粒径分布较集中，粒径在５Ｏ　ｍ以下累计百分率分别　高达９９％和９８％（Ｆｉｇ．１，Ｆｉｇ．２）。　２．３　傅里叶红外光谱仪检测　超顺磁性壳聚糖链霉素ＰＥＬＡ微球和链霉素壳聚　次于溶出试验开始后１２ｈ，以后每隔２４ｈ采样，至　２６ｄ结束。每次取样５ｍｌ，用０．４　ｍ滤膜过滤，每次均　须补加模拟体液，以维持溶出液体积不变。每个时间点　取样三次，样品药物浓度用上述ＥＭＳＡ法测定。据标　准吸光度曲线计算不同时间微囊释放链霉素的量，计　算累计释放量，绘制体外释放曲线。　１．７　统计学分析　采用ＳＰＳＳ　１０．０软件包进行统计分析和处理，两　组均数问的比较采用ｔ检验；多组数据间比较采用单　向方差分析（Ｏｎｅ－ｗａｙ　ＡＮＯＶＡ）。Ｐ＜Ｏ．０５为统计显著　糖ＰＥＬＡ微球的红外光谱图图略。在ＣＳＰＭ红外光谱　图中３４２０ｃｍ　处出现ＰＥＬＡ末端羟基及羟基的伸缩　振动吸收峰因缔合作用而变宽，２９９６、１４５８和　性界值，结果以均数±标准差表示。　２　结果　２．１　纳米壳聚糖Ｆｅ　０　及超顺磁性链霉素ＰＥＬＡ微　球的外形及磁响应性　本实验超顺磁性Ｆｅ　Ｏ　壳聚糖纳米粒是用壳聚糖　Ｆｉｇ．１　０　２０　４０　６Ｏ　８Ｏ　Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ　ｓｉｚｅ（Ｉｚｍ）　Ｓｉｚｅ　ａｎｄ　ｓｉｚｅ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｐＣＰＧＭ　维普资讯 http://www.cqvip.com

・ｌ０４・　振荡磁场下超顺磁性链霉素ＰＥＬＡ微球体外药物释放特征探索罗聪等　∞Ｊ。Ｄ　ｕＩ等Ｌ１　０　ＩＩ　∞０Ｊ。一　一∞。ＩｎＬＩＢＪ　８　４　０　２０　４０　６０　８０　１００　Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ　ｓｉｚｅ（Ｉｒｍ）　Ｆｉｇ．２　Ｓｉｚｅ　ａｎｄ　ｓｉｚｅ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＰＧＭ　１３８４ｅｍ　处为ＰＥＬＡ和链霉素中多糖甲基吸收峰，　２８５３．８５和２９２４．０３、１４６０、７１２ｃｍＩ１处为ＰＥＬＡ和多　糖中次甲基Ｃ—Ｈ吸收峰，１１８０、１０９０ｃｍ　为Ｃ．Ｏ—Ｃ特　征伸缩振动吸收峰，来源于ＰＥＬＡ中乙二醇一　ＯＣＨ：ＣＨ：重复结构单位和多糖结构，１２７０ｃｍ　处吸收　峰来源于ＰＥＬＡ中乳酸重复结构单位的酯基Ｃ．Ｏ伸缩　振动，而酯基的Ｃ＝Ｏ伸缩振动出现在１７２５ｅｍ　处，　多糖中醛基因量少，其２７００～２８００及１７００ｃｍ　处不　显示，链霉素多糖中胍基在３４００ｃｍ　处（ｖＮ—Ｈ），　１６２６～１６５４ｃｍＩ１【６（Ｎ—Ｈ）面内］，１５６１ｃｍＩ１【１Ｊ（Ｃ＝Ｎ）］，　１４００ｃｍＩ１［１Ｊ（Ｃ—Ｎ）】，７００ｃｍＩ１［６（Ｎ—Ｈ）面外】左右出现　吸收，但大部分重叠；１６３７．８２ｅｍ　处出现交联壳聚糖　Ｓｅｈｉｆ碱Ｃ＝Ｎ伸缩振动。在ＳＰＣＳＰＭ红外光谱图中，　６０３．９９ｃｍ　处有Ｆｅ，Ｏ。特征吸收峰　１。综上所述，超顺　磁性壳聚糖链霉素ＰＥＬＡ微球的包覆是成功的。　２．４　包封率和载药量测定　两种微球包封率和载药量分别为：链霉素ＰＥＬＡ　微球：包封率（４７．５６±１．３９）￣２＇０，载药量（５５．２０±　１．５２）￣２＇ｏ；超顺磁性链霉素ＰＥＬＡ微球：包封率　（４８．５１±１．３９）％；载药量（３３．４２±１．５４）％。超顺磁性　链霉素ＰＥＬＡ微球载药量相对较低，主要是Ｆｅ，Ｏ。纳　米粉增加了微球的重量，故单位载药量下降。　２．５　微球体外溶出度实验　在振荡磁场下，血凝块中链霉素ＰＥＬＡ微球及超　顺磁性链霉素ＰＥＬＡ微球释放曲线见Ｆｉｇ．３和Ｆｉｇ．４。　从中可以看出，各组ＰＥＬＡ微球体外链霉素溶出时间　均超过三周有明显缓释作用，２４ｈ各组药物释放量均　低于总释放量１０％，突释不明显。分析其原因，药物分　子从微球中释放主要是靠浓度梯度经高分子微球中网　孔渗出，可能是本次实验微球制备中高分子包裹材料　中加入了小分子试剂乙酸乙酯，使其占据了微球中的　微孔，加上微球外有一层血凝块包裹，阻挡了药物分子　的快速扩散，因而无明显突释现象。　Ａ组从ｄ１既开始加用振荡磁场，每日药物溶出　量明显高于另两组（３倍左右）；Ｂ组于ｄ２１加用振荡　磁场，当日药物释放量同样提高了３．２５倍。统计学方　差分析，Ａ组与Ｂ、ｃ组之间的药物释放量均有显著性　差异（ｑ检验，Ｐ＜０．００１）；Ｂ组与ｃ组前２１ｄ（未加用振　荡磁场）相比，药物释放量组间差别无统计学意义（ｑ　检验，Ｐ＞Ｏ．０５）。　药物释放周期：此缓释体系在实验的ｄ２６时，仍有　较大的释放速率，此时Ａ组药物的释药百分率约为　８５％。实验后期体系应仍有药物释放，提示此体系可能　有较长的释药周期。　３讨论和结论　综上所述，超顺磁性微球的磁响应强度在本次所　使用的磁场下（１２００ｍＴ）能够促进微球中药物释放，其　机理可能有：（１）超顺磁性微球整体随振荡磁场运动，　起到了局部搅拌器的作用；（２）磁性纳米Ｆｅ，０　在微球　中振动，使微球产生了缝隙，建立了药物渗透通道，加　上纳米粒振动的挤压和吸引作用，增加微球和血凝块　中药物的释放。撤出振荡磁场时，可能因高分子材料的　２００　０００　８００　６００　４００　２００　０　ｆ（ｄａｙ）　Ｓｅｒｉｅｓ　Ａ：ｓｐＣＳＰＭ；Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｏｓｃｉｌｌａｔｉｎｇ　ｍａｇｎｅｔｉｃ　ｆｉｅｌｄｓ　ｅｖｅｒｙ　ｄａｙ；　ｅＳｒｉｅｓ　Ｂ：ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ　ＰＥＬＡ　ｍｉｅｒｏｓｐｈｅｒｅｓ；　ｅＳｒｉｅｓ　Ｃ：ｓｐＣＳＰＭ；Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｏｓｃｉｌｌａｔｉｎｇ　ｍａｇｎｅｔｉｃ　ｆｉｅｌｄｓ　ａｔｔｈｅ　２１ｔｈ　ｄａｙ　Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｄｒｕｇ　ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ　著　Ｏ０　兽　Ｏ０　Ｏ０　董重　Ｏ０　Ｏ０　喜　Ｏ０　Ｏ０　３　０　ｆ（ｄａｙ）　Ｓｅｒｉｅｓ　Ａ：ｓｐＣＳＰＭ；　］＇ｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｏｓｃｉｌｌａｔｉｎｇ　ｍａｇｎｅ｜ｉｃ　ｉｆｅｌｄｓ　ｅｖｅｒｙ　ｄａｙ；　Ｓｅｒｉｅｓ　Ｂ：ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ　ＰＥｉ　Ａ　ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ：　Ｓｅｒｉｅｓ　Ｃ：ｓｏＣＳＰＭ；Ｔｒｅａｔｍｅｎｌ　ｗｉｔｈ　ｏｓｃｉｌｌａ！ｉｎｇ　ｍａｇｎｅｔｉｃ　ｆｉｅｌｄｓ　ａｔｔｈｅ　２１ｔｈ　ｄａｙ　Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｄｒｕｇ　ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ　维普资讯 http://www.cqvip.com

中国抗生素杂志２００８年２月第３３卷第２期　・１０５・　弹性回位及纳米粒的占位，这些缝隙便缩小或关闭［２１，　从而回复微球原有的溶出度。　实验中观察到，样品中血凝块在搅拌过程逐渐破　碎、溶解。Ａ、Ｂ组中血凝块在ｄ５已基本溶解；Ｃ组在搅　助部分对链霉素耐药的结核病患者。　、　参考文献　【１】陆彬．药物新剂型与新技术【Ｍ】．北京：人民卫生出版　社。１９９８，３３０—３５２．　ｆ２】Ｅｄｅｌｍａｎ　Ｅ咒Ｋｏｓｔ　Ｊ，Ｂｏｂｅｃｋｔ。ｅｔ　ａ１．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｒｕｇ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｆｒｏｍ　ｐｏｌｙｍｅｒ　ｍａｔｒｉｃｅｓ　ｂｙ　ｏｓｃｉｌｌａｔｉｎｇ　ｍａｇｎｅｔｉｃ　ｆｉｅｌｄｓ　拌作用下，血凝块在ｄ８基本溶解。８ｄ后，应用振荡磁　场仍能明显加快药物溶出，Ａ、Ｂ组间比较，有显著性差　异（ｔ检验，Ｐ＜０．００１）。提示血凝块对振荡磁场的促药　物溶出作用无明显影响。　本研究将纳米Ｆｅ　Ｏ　超顺磁微粒引入多聚物　【Ｊ】．．，ＢｉｏｍｅｄＭａｔｅｒＲｅｓ，１９８５，１９：６７—８３．　【３】Ｆｏｌｋｍａｎ　Ｊ，Ｉ．ｉｍｇｅｒ　Ｒ　Ｓ，Ｈｓｉｅｈ　Ｄ　Ｓ　Ｔ。ｅｔ　１９９１－０５－２８．　Ｍａｇｎｅｔｉｃａｌｌｙ　ｍｏｄｕｌａｔｅｄ　ｐｏｌｙｍｅｉｒｃ　ｄｒｕｇ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｓｙｓｔｅｍ：ＵＳ。５　０１９　３７２［Ｐ】．　【４】Ｌａｅａｖａ　Ｚ　Ｇ　Ｍ。Ａｚｅｖｅｄｏ　Ｒ　Ｂ。Ｍａｒｔｉｎｓ　Ｅ　Ｖ，ｅｔ　．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆｍａｇｎｅｔｉｃ　ｆｌｕｉｄｓ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｓｔｕｄｉｅｓ【Ｊ】．．，Ｍａｇｎ　Ｍａｇｎｅｔｃｉ　Ｍａｔｅｒ。１９９９，２０１：４３１—４３４．　（ＰＥＬＡ）药物载体，并置于血凝块中，在振荡磁场干预　下观察其体外药物释放情况，探索纳米超顺磁微粒药　物缓释体系的释放特性。实验表明：　（１）纳米超顺磁壳聚糖链霉素ＰＥＬＡ微球具有药　物缓释功能，释药时间超过三周；　【５】罗聪，安洪。蒋电明，等．超顺磁性壳聚糖质粒明胶微球骨　植人体的制备及其体外特性【Ｊ］．中国药科大学学报，　２００６。３７（５）：４１３—４１８．　【６】Ｙｕ　Ｌ。Ｄｅｎｇ　Ｘ－Ｍ．Ｉｎｌｆｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｐａｒ－　ｔｉｄｅ　ｓｉｚｅ　ａｎｄ　ＤＮＡ　ｌｏａｄｉｎｇ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｆｏｒ　ｐｏｌｙ（ＤＬ・ｌａｃｔｉｃ　ａｃｉｄ　（２）由于血凝块的包裹，早期有防止药物突释作　用；　（３）振荡磁场能增加超顺磁壳聚糖ＰＥＬＡ微球中　链霉素释放速率，使药物释放速率提高３倍左右。因　此，可根据需要，定时增加药物释放。　ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｇｌｙｃｏ１）ｍｉｃｍｓｐｈｅｒｅｓ　ｅｎｔｒａｐｐｉｎｇ　ｆｒｅｅ　ＤＮＡ【Ｊ】．．，　Ｃｏｎｔｏｒｌ　Ｒｅｌ，２００２，８３（１）：１４７—１５５．　ｆ７】Ｄｅｎｇ　Ｘ　Ｍ。Ｚｈｏｕ　Ｓ　Ｂ。Ｌｉ　Ｘ　ｈ。ｅｔ　ａ１．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　ａｎｄ　本次实验探索了超顺磁性链霉素ＰＥＬＡ微球体外　药物释放过程，在实验中我们观察到用ＥＬＩＳＡ法检测　微量链霉素，灵敏度较高，但试验数据偶尔也存在误　差。下一步实验，我们准备用高效液相色谱检测法　（ＨＰＬＣ）进一步验证本实验的结果。另外，这种靶向控　释药物的方法，还可扩展应用到其他抗结核药物，以帮　ｒｅｌｅａｓｅ　ｐｒｏｆｉｌｅ　ｏｆｒ　ｏｌｐｙ・・ｄ／－ｌａｃｔｉｄｅ・－ｐｏｌｙ（ｅｔ・－ｈ￣ｅｎｅ　ｇｌｙｃｏ１）ｍｉｃｒｏｓ・－　ｐｈｅｒｅｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｈｕｍａｎ￣ｒｕｉｎ　ａｌｂｕｍｉｎ［Ｊ】．．，Ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｒｄ，　２００１，７１（２）：１６５—１７３．　【８】Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ　Ｔ，Ｓｃｈｏｐｆ　Ｂ。Ｈｏｆａｎｎ　ｍＨ，ｅｔ　．Ｓｕｐｅｒｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｅ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｓ　ｆｅｏｒ　ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｌｉｉ－ｍ　ｔａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ａ　ｎｅｗ　ｄｒｕｇ　ｄｅｈｖｅｒｙ　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ】．．，Ｍａｇｎ　Ｍａｇｎｅｔｉｃ　Ｍａｔｅｒ，２００５，２９３（１）：４８３—４９６．　（上接第７４页）　［１６３　Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ　Ｔ　Ｌ，Ｓｈｅｎ　Ｂ，Ｗａｌｓｈ　Ｃ　Ｔ．Ｏｘｉｄａｓｅ　ｄｏｍａｉｎｓ　ｉｎ　ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ　ａｎｄ　ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ｔｈｉａｚｏｌｉｎｅ　ｔｏ　ｔｈｉａ—　［Ｍ　３／／．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：Ｍａｒ—　ｃａｌ　Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９９７：１８７～２１６．　ｚｏｌｅ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｄｕｒｉｎｇ　ｃｈａｉｎ　ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ［Ｊ３．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　２００３，４２（３２）：９７２２￣９７３０．　［２ｏ３　Ｍｏｃｅｋ　Ｕ，Ｋｎａｇｇｓ　Ａ　Ｒ，Ｔｓｕｃｈｉｙａ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　ｔｈｉｏｓｔｒｅｐｔｏｎ　ｉｎ　Ｓｔｒｅｐｔｏ－　［１　７］Ｍａｒａｈｉｅｌ　Ｍ　Ａ，Ｓｔａｃｈｅｌｈａｕｓ　Ｓ，Ｍｏｏｔｚ　Ｈ　Ｄ．Ｍｏｄｕｌａｒ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｎｏｎｒｉｂｏｓｏｍａｌ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｓｙｎ．　ｍｙｃｅｓ　ａｚｕｒｅｕｓ　ａｎｄ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｌａｕｒｅｎｔｉｉ［Ｊ３．Ｊ　Ａｍ　Ｃｈｅｍ　Ｓｏｃ，１９９３，１１５：７９９２￣８００１．　ｔｈｅｓｉｓ［Ｊ３．Ｃｈｅｍ　Ｒｅｖ，１９９７，９７（７）：２６５１￣２６７４．　［２１］Ｓｍｉｔｈ　Ｔ　Ｍ，Ｙａ－Ｆｅｎ，Ｊ。Ｓｈｉｐｌｅｙ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｔｈｉｏｓｔｒｅｐ—　ｔｏｎ—ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ－ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｌａｕｒｅｎｔｉｉ　ｉｓ　［１８］Ｓｔａｃｈｅｌｈａｕｓ　Ｔ，Ｍａｒａｈｉｅｌ　Ｍ　Ａ．Ｍｏｄｕｌａｒ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｇｅｎｅｓ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｓ　ｌｏｃａｔｅｄ　ｗｉｔｈｉｎ　ａ　ｃｌｕｓｔｅｒ　ｏｆ　ｒｉｂｏｓｏｍａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｐｅｒｏｎｓ［Ｊ］．　Ｇｅｎｅ，１９９５。１６４（１）：１３７～１４２．　ｒｅｑｕｉｒｅｄ　ｆｏｒ　ｎｏｎ－ｒｉｂｏｓｏｍａｌ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ３．ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｌｏｌ　Ｌｅｔｔ，１９９５，１２５（１）：３～１４．　［２２］Ｔｕｒｇａｙ　Ｋ，Ｍａｒａｈｉｅｌ　Ｍ　Ａ．Ａ　ｇｅｎｅｒａｌ　ａｐｐｒｏａｃｈ　ｆｏｒ　ｉｄｅｎｔｉ—　ｆｙｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ　ｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｐｅｐｔ　Ｒｅ　，１９９４，７（５）：２３８～２４１．　［１９３　Ｚｕｂｅｒ　Ｐ，Ｍａｒａｈｉｅｌ　Ｍ　Ａ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｒｅｇｕ—　ｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｅｓ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ｍｕｌｔｉｄｏｍａｉｎ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｓ