胶原诱导类风湿关节炎小鼠的重要脏器病理变化

世界科学技术一中医药现代化★中药研究　胶原诱导类风湿关节炎小鼠的　重要脏器病理变化六　郭晴睛　，郑　康　，赵雨坤１，刘　学　，邱雪梅　，樊丹平　，吕爱平　，何小鹃　（１．中国中医科学院中医临床基础医学研究所北京１００７００；２．西南交通大学生命　科学与工程学院成都６１００３１；３．香港浸会大学中医药学院香港９９９０７７）　摘　要：目的：观察胶原诱导关节炎（Ｃｏｌｌａｇｅｎ　Ｉｎｄｕｃｅｄ　Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＣＩＡ）小鼠发病高峰期重要脏器的病理变　化。方法：２Ｏ只雄性ＤＢＡ／１小鼠随机分为正常组和模型组，模型组给予牛ＩＩ型胶原混合完全弗氏佐剂诱导ＣＩＡ　模型。造模后每周进行关节炎指数评分，于第６３天处死小鼠，取心、肝、脾、肺、肾各组织和踝关节，利用ＨＥ染　色法观察各脏器的病理变化，并采用Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ法检测ｄ、鼠肺组织中转化生长因邗１（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ　Ｂｅｔａ　１。ＴＧＦ－／３１）以及肿瘤坏死因子ｏｒ（Ｔｕｍｏｒ　Ｎｅｃｒｏｓｉｓ　Ｆａｃｔｏｒ　Ａｌｐｈａ，ＴＮＦ一　）的ｍＲＮＡ表达水平。结果：成　功建立了ＤＢＡ／１小鼠胶原诱导关节炎模型。ＨＥ染色结果表明，除了踝关节出现明显的病理变化外，ＣＩＡ小鼠　的肺部有大量的炎细胞浸润，肺泡间隔增厚，肺泡腔中有炎性浸出物，而心脏、肝脏、脾脏和肾脏没有出现明显　的病理变化。Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ结果显示病变的小鼠肺组织中ＴＧＦ－￣１和ＴＮＦ—Ｏｔ的含量均显著高于正常的肺组　织。结论：胶原诱导的ＤＢＭ１小鼠，其踝关节呈现严重的病理变化，其肺部也出现明显的炎症，且与类风湿关节　炎肺部并发症的病理变化有相似之处，这些结果提示该模型可用于类风湿关节炎肺部病变的相关研究。　关键词：类风湿关节炎胶原诱导关节炎模型ＤＢＡ／１小鼠脏器病理变化　ｄｏｉ：１０．１１８４２／ｗｓｔ．２０１８．０１．０２１　中图分类号：Ｒ９６５　文献标识码：Ａ　类风湿关节炎是一种慢性、系统性的自身免疫疾　病，特征为多关节、对称性、侵袭性关节炎症，多发于　手、足小关节，常伴有关节外器官受累ｎ捌。类风湿关节　炎病人关节的主要病理特征表现为滑膜增生、关节腔　变小、炎细胞浸润、血管翳形成、关节软骨及软骨下骨　的破坏等【纠１。除了关节的病理变化，还会出现多种关　类风湿关节炎发病机制及病理变化的研究和认识，特　别是对关节病理的研究，但是利用动物模型研究类风　湿关节炎关节外病变的较少。小鼠胶原诱导关节炎模　型在临床表现和病理机制等方面与人的类风湿关节炎　有很多相似之处，是研究类风湿关节炎病理机制的较　理想模型【６】。因此，我们采用牛ＩＩ型胶原混合完全弗氏　佐剂诱导ＤＢＡ／１小鼠，观察小鼠各个重要脏器的病理　变化，以期观察该模型是否可用于类风湿关节炎关节　外病变的研究。　１实验材料　１．１实验动物　节外病变，例如心脏病变、肺部病变、肾脏损害等嘲。　类风湿关节炎的关节病变一般只能致残，致死罕见，但　是关节外的损害有致死的可能。因此，全面了解类风　湿关节炎的关节外表现有利于我们对类风湿关节炎全　貌的认识，有利于避免误诊，早期治疗，改善预后。　多种类风湿关节炎动物模型的建立促进了我们对　２０只ＤＢＡ／１小鼠，雄性，７－８周，１８－２２　ｇ，ＳＰＦ级，　收稿日期：２０１８一Ｏ１—１０　修回日期：２０１８一Ｏ卜２０　★　国家自然科学基金（８１４７ｏ０７２）：ＣＫＩＰ一１在类风湿关节炎骨破坏局部成骨细胞成骨功能受损中的作用研究项目类型，负责人：何小鹃　★★　通讯作者：何小鹃，女，副研究员，主要研究方向：中药免疫药理研究。　［　删ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ￣Ｍｏｄｅｒｎｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｅａｎｎｄＭａｔｅｒｉａＭｅｄｗａ］　１２３　２０１８第二十卷第一期　Ｖｏ１．２０　Ｎｏ．１　购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物许可　Ｄａｙ　０于尾根部皮内注射，１００　ｔｘＬ／只，Ｄａｙ　２１用同样的　方法加强免疫　。　２．２关节炎评分　证号：ＳＣＸＫ（京）２０１２—０００１，在恒温（２４±２）℃、光照周　期１２　ｈ环境中饲养。　１．２主要试剂及仪器　造模后每周进行一次关节炎评分，评分标准如下：　０分＝无红肿；１分＝小趾关节红肿；２分＝趾关节和小趾　关节肿胀；３分＝踝关节以下部位肿胀；４分＝整个足爪　肿胀（包含踝关节）。每次记录小鼠四肢的评分，累计　最高评分为１６分　］。　２＿３病理学观察　主要试剂：完全弗氏佐剂（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ，Ｌｏｔ：１５００３４）、　牛ＩＩ型胶原（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ，Ｌｏｔ：１４０５１９）、Ｍａｙｅｒ苏木素染　色液（ＬＥＡＧＥＮＥ，Ｌｏｔ：０９１１Ａ１５）、伊红染色液（Ⅱ　ＧＥＮＥ，　Ｌｏｔ：０８１０Ａ１５）、ＵＮＩＱ一１０柱式Ｔｒｉｚｏｌ总ＲＮＡ抽提试剂　盒（生工生物工程股份有限公司，Ｌｏｔ：ＣＡ０４ＫＡ４１０８）、　ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ　ＲＴ　ｒｅａｇｅｎｔ　Ｋｉｔ　ｗｉｔｈ　ｇＤＮＡ　Ｅｒａｓｅｒ（Ｐｅｒｆｅｃｔ　于Ｄａｙ６３处死小鼠，分离心、肝、脾、肺、肾和踝关　节。将脏器置于１０％福尔马林缓冲液中固定，将踝关　节剔除周围软组织后置于４％多聚甲醛中固定。踝关　Ｒｅａｌ　Ｔｉｍｅ）（Ｔａｋａｒａ，Ｌｏｔ：ＡＫ３４０１）、ＳＹＢＲ（￣）Ｐｒｅｍｉｘ　Ｅｘ　ＴａｑＴＭ　ｆＴｌｉ　ＲＮａｓｅＨ　Ｐｌｕｓ１（Ｔａｋａｒａ，Ｌｏｔ：ＡＫ７１０３）。　主要仪器：小型高速离心机（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，型号：Ｃｅｎ—　节固定４８　ｈ后，置于１０％ＥＤＴＡ脱钙液中脱钙，以１　ｍＬ　注射器针头能刺人关节骨内为脱钙完全。将脱钙好的　踝关节用不同浓度的梯度乙醇脱水，二甲苯中透明，石　蜡包埋，制作病理切片（４　ｍ），经苏木素一伊红（ＨＥ）染　色后，显微镜下观察各组织病理学变化。　２．４　Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ＰＣＲ检测小鼠肺组织中ＴＧＦ－ｌｆｌ和ＴＮＦ—　的ｍＲＮＡ水平　ｔｒｉｆｕｇｅ　５４３０）、涡旋振荡仪（其林贝尔仪器制造有限公　司，型号：ＱＬ一９０２）、荧光定量ＰＣＲ仪（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓ—　ｔｅｍｓ，型号：ＡＢＩ７５００）、包埋机（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ，型号：　Ｓｈａｎｄｏｎ　Ｈｉｓｔｏｃｅｎｔｒｅ　３）、切片机（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ，型　号：Ｓｈａｎｄｏｎ　Ｆｉｎｅｓｓｅ　ＭＥ＋）、展片机（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ，　型号：Ｔｉｓｓｕｅ　Ｆｌｏｔａｔｉｏｎ　Ｂａｔｈ）、烤片机（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ，　型号：Ｈｏｔｐｌａｔｅ）、正置生物显微镜（ＬＥＩＣＡ，型号：　按照ＵＮＩＱ一１０柱式Ｔｒｉｚｏｌ总ＲＮＡ抽提试剂盒的说　ＤＭ６０００Ｂ）、微量紫外分光光度计（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ，型　号：Ｎａｎｏｄｒｏｐ　２０００）。　１＿３引物合成及序列　明书提取小鼠肺总ＲＮＡ，使用Ｎａｎｏｄｒｏｐ　２０００测量　ＲＮＡ的纯度和浓度。按照Ｐｒｉｍｅ　Ｓｃｒｉｐｔ　ＲＴ　ｒｅａｇｅｎｔ　Ｋｉｔ　ｗｉｔｈ　ｇＤＮＡ　Ｅｒａｓｅｒ试剂盒中的说明书将ＲＮＡ反转录　成ｃＤＮＡ。Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ按照ＳＹＢＲ￣Ｐｒｅｍｉｘ　Ｅｘ　Ｔａｑ　ＴＧＦ－ｆｌｌ、ＴＮＦ一　及内参基因ＧＡＰＤＨ的上下游引　物委托生工生物工程（上海）股份有限公司设计合成。　ＴＧＦ一　１上游弓ｌ物：５　一ＡＴＴＧＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＴＣＴＣ—　ＴＹＧ一３　，下游引物：５　一ＴＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＴＡＧＡＣＴＡＧ　ＡＴＴＣ一３　；ＴＮＦ—Ｏｔ上游弓Ｉ物：５　一ＡＧＧＣＡＣＴＣＣＣＣＣＡＡ　ＡＡＧＡＴ一３　，下游引物：５，＿ＣＡＧＴＡＧＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴ—　ＧＧＴＧ一３　；ＧＡＰＤＨ上游引物：５＇－ＡＧＧＣＣＧＧＴＧＣＴＧＡＧ．　ＴＡＴＧＴＣ一３　，下游弓Ｉ物：５　一ＴＧＣＣＴＧＣＴＴＣＡＣＣＡＣＣＴＴ　ＣＴ一３　ＩＩ　ｆＴｌｉ　ＲＮａｓｅ　Ｈ　Ｐｌｕｓ）试剂盒中的说明书进行操作，扩增　程序为：９５℃３０　ｓｅｃ，（９５ｏＣ　５　ｓｅｅ，６０　４０　ｓｅｃ）ｘ４５个　循环，９５ｃＣ１５　ｓｅｃ，６０℃１　ｍｉｎ，９５℃１５　ｓｅｃ。采用２　计算目的基因ｍＲＮＡ的相对表达量。　３结果　３．１　ＣＩＡ小鼠体征观察情况　法　ＤＢＡ／１小鼠造模成功后，毛发逐渐失去光泽，前　２实验方法　２．１小鼠胶原诱导关节炎模型的制备　肢、后肢陆续出现红肿现象，功能障碍，活动减少，体重　下降，Ｄａｙ４２—６３为肿胀高峰期，发病率达１００％。图１　为正常小鼠和ＣＩＡ发病小鼠的关节比较图。　３．２　ＣＩＡ小鼠关节炎评分结果　将ＤＢＡ／１小鼠随机分成２组，分别为正常对照组　和模型组，每组１Ｏ只。模型组小鼠按以下方法造模：　ＣＩＡ小鼠的关节炎评分见图２，分析可知，小鼠于　Ｄａｙ２８左右开始发病，然后关节炎评分逐渐增高，　Ｄａｙ４２—６３为疾病高峰期，最高评分可达ｌ２分。　３－３　ＣＩＡ小鼠踝关节和心、肝、脾、肺、肾的组织病理变化　浓度为２　ｍｇ·ｍＬ　的牛Ⅱ型胶原溶液和完全弗氏佐剂　以１：１（体积比）的比例混合，将牛Ⅱ型胶原逐滴加人　完全弗氏佐剂中，整个过程在冰浴中进行，边滴边用匀　浆器乳化，每转３　ｍｉｎ，停止１　ｍｉｎ，直至将乳化剂滴至　水中，若不扩散说明已充分乳化。乳化剂需现用现配，　１２４　３．３．１踝关节病理表现　正常小鼠和ＣＩＡ小鼠的踝关节ＨＥ染色病理图见　［Ｗｏｒｌｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ￣Ｍｏｄｅｒｎｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｍａｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｉｃａ］　世界科学技术一中医药现代化★中药研究　正常小鼠　ＣＩＡ小鼠　图Ｉ正常小鼠和ＣＩＡ发病小鼠的关节比较图　１６　ｌ４　１２　§ｌ０　譬８　６　４　２　０　正常小鼠　２１　２８　３５　４２　４９　５６　６３　Ｄａｙｓ　ａｆｔｅｒ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ　一　ＣＩＡ小鼠　ＣＩＡ小鼠　图４小鼠心脏的ＨＥ染色图（ｘ２００）　图２　ＣＩＡ小鼠关节炎评分　陶３，结果　示：　常小鼠的踝关节结构完　，天节腔　内干净，关节表面光滑平整，滑膜细胞ｌ一２层，排列整　齐，软骨和骨非常完　。ｃＩＡ小鼠的踝关＇ｉｆ　ｏｆ　滑膜　增生，火　问隙明　变窄，有关节腔积液，大量的炎细　胞浸涧，　僻翳彤成，软骨和软骨　骨均有侵蚀现象、　３．３．２心脏病理学表现　正常小鼠和ＣＩＡ小鼠的心脏ＨＥ染色病理　４，结果　示：正常小鼠的　Ｃ，￣ＪＬ组织结构清晰，　Ｃ，ＪＩＪＬ纤维　细长，旱　形，心肌纤维问有少　的结缔组织。ＣＩＡ　正常小鼠　图５小鼠肝脏的ＨＥ染色图（Ｘ４００）　小鼠的心脏病理结果和正常小鼠的相似，没彳丁…现明　的病理变化。　３－３－３肝脏病理学表现　一　正常小鼠　正常小鼠　ＣＩＡ小鼠　¨　常小鼠和ＣＴＡ小鼠的肝脏ＦＩＥ染色病删　５，结果　／ｊ　：正常小鼠的肝小叶结构清晰完整，肝细胞　［司绕中　静脉呈放射状排列，形态结构　常。ＣＩＡ小　鼠的肝脏术ｆ¨现异常现象。　图６小鼠脾脏的ＨＥ染色图ｆｘ４００）　３．３．４脾脏病理学表现　正常小鼠和ＣＩＡ小鼠的脾脏ＨＥ染色病理　图　ＣＩＡ小鼠　６，结果表明：正常小鼠的脾脏结构特征清晰完整，【　Ｉ髓　和红髓的界限比较明　，能清楚的看到淋巴小结ｒｆ１央　动脉以及动脉周同的淋巴鞘，淋　细胞密集　ＣＩＡ小　鼠的脾脏没有发现明　的病理变化　图７小鼠肺脏的ｌｉｅ染色图（ｘ２ｌ￣９）　ＣＩＡ小鼠的肺部有大量的炎性细胞浸润，Ｈ巾池　隔增　３＿３．５肺脏病理学表现　ＩＦ．常小鼠和ＣＩＡ小鼠的肺脏Ｈ｝ｃ染色病理【殳］见　７，结果　示：正常小鼠的肺组织ｒｆ１肺泡的结构完整清　晰，肺泡腔和支气管腔非常干净，有少量的红细胞　厚，肺泡腔中有炎性浸…物，部分肺泡变小。　３＿３．６肾脏病理学表现　正常小鼠和ＣＩＡ小鼠的。肾脏ＨＥ染色病理『殳１　８，结果　示：正常小鼠的肾脏结构正常，有皮质和髓质　１２５　［Ｗｏｒｌｄ　－ｉｅｍ－　。ｎｄ　７　（－　２ｏｌｏｇｙｌＭｏｄｅ￣‘ｎｉｚａｔｉｏｎ　。Ｔｒａｄｉｔｉｏｎｎｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉ￣－ｉｎｅ　ａｌｔｄ　Ｍｔｔｌｅｔ’ｉａ　Ｍｅｄｉ￣·“］　２０１８第二十卷第一期★Ｖｏ１．２０　Ｎｏ．１　　．．ｔ二　·　．　ｌ　Ｊ　，．‘外最易受累的器官，这与肺内部丰富的结缔组织及血　液供应有很大关系。ＲＡ的肺部并发症包括肺问质病　变、细支气管炎、慢性支气管扩张、胸腔积液、类风湿结　节等“１。ＲＡ并发的呼吸系统疾病在ＲＡ患者死因中位　一　’．，　１．　，’　，　，　·　］　，　，Ｉ－　正常小鼠　　’ＣＩＡ小鼠　１　居第二位，且近年来其死亡率呈明显上升趋势，其中由　于类风湿关节炎间质性肺病（ＲＡ—ＩＩ｜Ｄ）引起的肺泡炎　图８小鼠肾脏的ＨＥ染色图（Ｘ４００）　盆　Ｉ　Ｉ　Ｎｏｒｎｌａｌ　Ｍｏｄｅｌ　性肺纤维化是其死亡的直接或问接原【大１”　。ＲＡ—ＩＬＤ　的高死亡牢是由于肺部病变早期症状不明　易被忽　略，晚期出现症状后预后差Ｉ川　此早发现、早诊断、　早治疗ＲＡ合并肺部并发症有重　意义。　问质性肺病早期肺实质细胞发生急性肺泡炎，炎　症和免疫效应细胞不断增生、募集与活化，随着病情发　０　ＮｏｒｉＩｌａｌ　Ｍｏｄｅ１　展，肺泡结构破坏，间质胶原紊乱，大量纤维组织增生，　肺泡隔被破坏，形成囊性化，病变小町逆”　。我们的研　究发现ＣＩＡ小鼠的肺部ｆｎ现明　的炎性病变，肺间质　内有大量的炎细胞浸润，肺泡间隔增厚，肺泡腔中有炎　性浸出物，这与ＲＡ肺部并发症的病理变化有相似　之处。　图９小鼠肺组织中ＴＧＦ　ｌ和ＴＮＦ－ｅｔ的ｍＲＮＡ表达水平　之分，可见大量的泌尿小管，以及由少量结缔组织、血　管、神经等构成的肾间质，肾小管上皮细胞完好。ＣＩＡ　小鼠的肾脏未见明显的病理变化。　３．４小鼠肺组织中ＴＧＦ　ｌ和ＴＮＦ一　的ｔｕＲＮＡ表达水平　由图９可知，模型组小鼠肺组织中ＴＧＦ一３１和　ＲＡ—ＩＬＤ的发病机制可能与细胞、细胞　子以及　细胞外基质等因素的相互作用有父，过程复杂，仍有待进　一ＴＮＦ—ＯＬ的ｍＲＮＡ水平明显高于正常组小鼠的肺组织　ｆＰ＜０．０１）、　步阐明”　。据报道，肺富含ＴＣＶ－ｐ，　导ＴＧＦ－／３活性　高表达是肺问质纤维化进程启动的重要　素之一　。　此外，ＴＮＦ—　等细胞因子可刺激肺内皮细胞和白细胞　４讨论　释放炎性介质，进而损伤肺组织，形成肺问质纤维化　”　。　类风湿关节炎作为以滑膜炎和关节炎为主要表现　的全身性疾病，经常伴有一些关节外损害１９　。本文采　用牛ＩＩ型胶原混合完全弗氏佐剂诱导ＤＢＡ／１小鼠，成　功建立了小鼠ＣＩＡ模型，并观察小鼠各个重要脏器的　病理变化，以期观察该模型是否存在关节外的并发　症。研究发现，造模成功的ＤＢＡ／１小鼠除肺部有明显　本研究采用Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ法分刖检测病变的ＣＩＡ小　鼠肺组织和正常的肺组织巾　ＦＧＦ一　ｌ和ＴＮＦ—　的　ｍＲＮＡ的表达水平，发现病变肺组织中ＴＧＦ一３１和　ＴＮＦ—　的ｍＲＮＡ水平显著高于正常怖组织。　综上所述．胶原诱导的ＤＢＡ／Ｉ小鼠的肺部病变与　ＲＡ肺部并发症的病理变化及发病０ＬＮ有相似之处，可　病变外，肝、心、脾、肾未　现明显的病理变化。　据临床观察及文献报道，肺脏是ＲＡ患者除关节　以利用该模型进行ＲＡ肺部受累的研究，有利于通过　动物模型进行深入的机制研究和药效研究。　３６．　４赵建平，冯振宁，孟霜，等．Ｊｘｌ湿　胶艇埘类　２０１５　１７（８）：１６５６—１６６３．　关节炎火鼠Ｔｔ、１７／　Ｔｒｅｇ平衡和局部炎性因子的影响．１ｔｌ：界科　技术一中医药现代化．　５　纵瑞凯。刘健．类风湿关节炎关　外病变研究逃腱．中医药临床杂　志．２０１０，２２（９１：８３３－８３５．　６周茹，杨以阜，左建平．Ⅱ型胶原诱导ｆｌ；Ｊ，Ｊ，鼠艾　炎动物模型的建市　及影响因素．中国药理学通报．２００６．２２（１２１：１　５３２一Ｉ５３５．　１２６　［Ｗｏｒｌｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ（”１ｄ　Ｔｅｃｈ，ｌｏｌｏｇｙ￣ｆｆｏｄｅｒｎｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ＣｈｉｎＰ　ｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｍａｔｅｒｉｎ　Ｍｅ＜ｔｉｆⅥ］　世界科学技术一中医药现代化★中药研究　７　Ｇｏｎｚａｌｏ—Ｇｉｌ　Ｅ，Ｐｒｒｅｚ－Ｌｏｒｅｎｚｏ　ＭＪ，Ｇａｌｉｎｄｏ　Ｍ．ｅｔ　ａ１．Ｈｕｍａｎ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ—ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌｌｓ　ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ　ｃ０１１ａｇｅｎ—ｉｎ—　ｄｕｃｅｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ｂｙ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ｈｏｓｔ—ｄｅｒｉｖｅｄ　ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ　２．３　ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ．　１３　Ｃａｖａｇｎａ　Ｌ，Ｍｏｎｔｉ　Ｓ，Ｇｒｏｓｓｏ　Ｖ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｍｕｈｉｆａｃｅｔｅｄ　ａｓｐｅｃｔｓ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒｓｔｉ—　ｔｉｌ　ｌａｕｎｇ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｂｉｏｍｅｄ　Ｒｅｓ　Ｉｎｔ２０１３，２０１３：　．７５９—７６０．ｄｏｉ：１０．１　１５５／２０１３／７５９７６Ｏ．　Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｅｓ　Ｔｈｅｒ．２０１６，１８：７７—８６．　８　Ｂａｓｈｉ　Ｔ，Ｓｈｏｖｍａｎ　０，Ｆｒｉｄｋｉｎ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｎｏｖｅｌ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｃｏｍＤｏｕｎｄ　ｔｕｆｔ．　ｓｉｎ—ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｅｈｏｌｉｎｅ　ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ　ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓＣｌｉｎ　Ｅｘｐ　．１４　Ｃｈｕ　Ｈ，Ｓｈｉ　Ｙ，Ｊｉａｎｇ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｓｈｅｎｋｓ　ｉｎ　ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｌｕｎｇ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆＴＧＦ—ｂｅｔａ／Ｓｍａｄ３　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ａｎｄ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　Ｓｔｒｅｓｓ．Ｓｃｉ　Ｒｅｐ．２０１７，７（１）：２２５２．　１５　Ｌｕｏ　Ｙ，Ｘｕ　Ｗ，Ｃｈｅｎ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｎｏｖｅｌ　ｐｒｏｆｉｂｒｏｔｉｃ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｂ　ｌｍｍｕｎｏ１．２０１６，１８４（１）：１９－２８．　９　Ｔｕｒｅｓｓｏｎ　Ｃ．Ｅｘｔｒａ－ａｒｔｉｃｕｌａｒ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｃｕｒｒ　Ｏｐｉｎ　Ｒｈｅｕｍａｔｏ１．　ＴＧＦｆｌ－ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　ｐｒｏｌｙｌ　ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｆｉｂｒｏｔｉｃ　２０１３，２５（３）：３６０—３６６．　１０　Ｂｏｎｇａｒｔｚ　Ｔ，Ｎａｎｎｉｎｉ　Ｃ，Ｍｅｄｉｎａ－Ｖｅｌａｓｑｕｅｚ　Ｙ　Ｆｅｔ　ａ１．Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ａｎｄ　，ｌｕｎｇ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｃｅｌｌｓ．Ｊ　Ｐａｔｈｏ１．２０１５，２３６（３）：３８４—３９４，　１６　Ｒｅｄｅｎｔｅ　Ｅ　Ｆ，Ｋｅｉｔｈ　Ｒ　Ｃ，Ｊａｎｓｓｅｎ　Ｗ，ｅｔ　ａ１．Ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ—　ａｃ－　ｃｅｌｅｒａｔｅｓ　ｔｈｅ　ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｉｂｒｆｏｓｉｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ｂｖ　ｔａｒ．　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉｌ　ｌａｕｎｇ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ａ　ｐｏｐｕｌａ．　ｔｉｏｎ—ｂａｓｅｄｓｔｕｄｙ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｈｅｕｍ．２０１０，６２ｆ６）：１５８３—１５９１．　１　１　Ｙａｎｇ　Ｊ　Ａ，Ｌｅｅ　Ｊ　Ｓ，Ｐａｒｋ　Ｊ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｐｏｏｒ　ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉｌ　ｌａｕｎｇ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　ｒｈｅｕ—　ｇｅｔｉｎｇ　ｐｒｏｆｉｂｒｏｔｉｃ　ｌｕｎｇ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ａｍ　Ｊ　Ｒｅｓｐｉｒ　Ｃｅｌｌ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏ１．２０１４，５０　（４）：８２５—８３７．　１７　Ｃｏｌｏｍｂ　Ｆ，Ｋｒｚｅｗｉｎｓｋｉ—Ｒｅｃｃｈｉ　Ｍ　Ａ，Ｓｔｅｅｎａｃｋｅｒｓ　Ａ，ｅｔ　ａ１．ＴＮＦ　ｕｐ—ｒｅｇｕ—　ｌａｒｅｓ　ＳＴ３ＧＡＩＡ　ａｎｄ　ｓｉａｌｙｌ—Ｌｅｗｉｓｘ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｌｕｎｇ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｉｔｓ．ＫｏｒｅａｎＪｌｎｔｅｒｎＭｅｄ．２０１７．２８．ｄｏｉ：１０．３９０４／ｋｊｉｍ．２０１６．３４９．　１２樊任珠．痹痛灵颗粒对胶原诱导关节炎关节滑膜及肺部病变血管新　生影响的研究．南京：南京中医药大学．２０１　１．　ｔｈｒｏｕ【ｇｈ　ａｎ　ｉｎｔｒｏｎｉｃ　ＡＴＦ２一ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ　ｅｌｅｍｅｎｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｊ．２０１７，４７４　（１）：６５－７８．　Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　Ｋｅｙ　Ｏｒｇａｎｓ　ｉｎ　Ｃｏｌｌａｇｅｎ　Ｉｎｄｕｃｅｄ　Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｍｏｕｓｅ　‰Ｑｉｎｇｑｉｎ￣，ＺｈｅｎｇＫａｎｇＩ，Ｚｈａｏ　Ｙｕｋｕｎ　，ＬｉｕＸｕｅ２，Ｑｉｕ　Ｘｕｅｍｅｉ￣，Ｆａｎ　Ｄａｎｐｉｎｇ１，ＬｕＡｌｐｉｎｅ，Ｈｅ　Ｘｉａｏｊｕａｎ　（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＢａｓｉｃ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｉｎ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｉｎａ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆＣｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１００７００，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｓｃｈｏｏｌ　ｆＬｉｏｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｊｉａｏｔｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ　６１００３１，Ｃｈｉｎａ；　３．ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＨｏｎｇＫｏｎｇＢａｐｔｉｓｔ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＨｏｎｇＫｏｎｇ９９９０７７，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｋｅｙ　ｏｒｇａｎｓ　ｉｎ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ（ＣＩＡ）ｍｉｃｅ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｗｅｎｔｙ　ｍａｌｅ　ＤＢＡ／１　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｇｒｏｕｐｅｄ　ｉｎｔｏ　ｎｏｒｍａｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｍｏｄｅｌ　ｒｏｕｐ　ｇｒａｎｄｏｍｌｙ．Ｍｉｃｅ　ｉｎ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｗｉｔｈ　ｂｏｖｉｎｅ　ｔｙｐｅ　ＩＩ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　ａｎｄ　ｃｏｍｐｌｅｔｅ　Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ　ａｄｊｕｖａｎｔ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ｉｎｄｅｘ　ｗａｓ　ｓｃｏｒｅｄ　ｏｎｃｅ　ｅｖｅｒｙ　ｗｅｅｋ　ａｆｔｅｒ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｓａｃｒｉｉｆｃｅｄ　ａｔ　Ｄａｙ　６３　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｈｅａｒｔ，ｌｉｖｅｒ，ｓｐｌｅｅｎ，ｌｕｎｇ，ｋｉｄｎｅｙ　ａｎｄ　ａｎｋｌｅ　ｊｏｉｎｔ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅｉｒ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｂｙ　Ｈ＆Ｅ　ｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｉｎ　ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｂｅｔａ　１（１’ＧＦ—　１）ａｎｄ　ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ　ａｌｐｈａ（ＴＮＦ－ａ）ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｕｎｇ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＣＩＡ　ｍｏｄｅｌ　ｗａｓ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｉｎ　ＤＢＡ／１　ｍｏｕｓｅ．Ｈ＆Ｅ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｍａｓｓｉｖｅ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｃｅ１１ｓ　ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｉｃｋｅｎｅｄ　ａｌｖｅｏｌｉ　ｓｅｐｔｕｍ　ｉｎ　ｌｕｎｇｓ　ｅｘｃｅｐｔ　ｆｏｒ　ａｐｐａｒｅｎｔ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ａｎｋｌｅ　ｊｏｉｎｔｓ　ｏｆ　ＣＩＡ　ｍｉｃｅ．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｈｅａｒｔｓ，ｌｉｖｅｒｓ，ｓｐｌｅｅｎｓ　ａｎｄ　ｋｉｄｎｅｙｓ　ｏｆ　ＣＩＡ　ｍｉｃｅ．Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｍＲＮＡ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＴＧＦ——／３１　ａｎｄ　ＴＮＦ—。ｏｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｕｎｇｓ　ｗｉｔｈ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｌｕｎｇｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　ＤＢＡ／１　ｍｉｃｅ　ｗｉｔｈ　ＣＩＡ　ｎｏｔ　ｏｎｌｙ　ｓｈｏｗｅｄ　ｓｅｖｅｒｅ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ａｎｋｌｅ　ｊｏｉｎｔｓ，ｂｕｔ　ａｌｓｏ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｉｎ　ｌｕｎｇ．Ｔｈｅｓｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｌｕｎｇ　ｏｆ　ＣＩＡ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｔｏ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｔｈｅｓｅ　ｒｅｓｕｈｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ＤＢＡ／１　ｍｉｃｅ　ｗｉｔｈ　ＣＩＡ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｌｕｎｇ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ；Ｃｏｌｌａｇｅｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ；ＤＢＡ／１　ｍｉｃｅ；Ｏｒｇａｎ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　（责任编辑：陈宁，责任译审：王晶）　１２７　［Ｗｏｒｌｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ￣Ｍｏｄｅｒｎｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｍａｔｅｒｉａ　ＭｅｄｉｃⅡ］