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重组菌的培养、诱导表达

2023-02-03 来源:步旅网


重组菌的培养、诱导表达

一、固体培养

1. 将含有重组菌的保存菌种采取无菌操作技术,用接种环将细菌在平板上用稀释法分区划线。

2. 37℃培养14-16小时,可见单克隆菌落时终止培养。

二、液体培养

1. 无菌操作,挑取单克隆菌落于一个含有5ml含有抗生素的 LB培养液的无菌管中,用透气的薄膜封住管口。37℃,250rpm摇床12-14小时,同时做阴性对照。

2. 取已培养好的种子菌液,按1%的的接种量接种于灭菌的LB培养液(含抗生素)中,即取2.5ml菌液加入250mlLB培养液中。37℃,250rpm摇床3.5-4小时,使其OD值达到1.0左右(0.8-1.2)。

三、诱导表达

1. 取IPTG加入已培养好的LB培养液中,使IPTG终浓度为1mmol/L。

2. 37℃,250rpm诱导4-5小时。

3. 4℃,4000 rpm离心10分钟收集菌体。

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注意:

(1)操作过程严格,需要无菌操作。

(2)培养液加的抗生素因不同质粒而异。

(3)收集时,保持低温,防止蛋白降解。

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