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二细胞器的观察与线粒体的超活染色备课笔记

2021-08-12 来源:步旅网
蚌埠医学院教师备课笔记

授课对象 授课时间 教 学 内 容 新课导入 设问:如果细胞是个家庭,那么这个家庭里有哪些成员,他们的分布位置和作用是什么,用什么方法可以观察他们呢? 讲授新课 年 月 日 备 注 实验二 细胞器的观察与线粒体的超活染色 【实验目的与要求】: 1、掌握超活染色法 2、掌握光镜下线粒体、高尔基复合体的形态和分布 3、了解细胞超微结构特点 【实验器材与试剂】: 器材:光学显微镜、恒温水浴锅、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、小镊子、吸水纸。 材料:人口腔上皮细胞、蟾蜍肾脏切片、兔脊神经节切片 试剂: 1/5000詹纳斯绿B 【实验原理】 1、真核细胞中存在多种具有特殊形态机构和功能的细胞器。线粒体、高尔基复合体等经过特殊的染色后在光镜下就可被观察到,而有些细胞器由于体积非常微小只有在电镜下才可见到。 2、活体染色原理:线粒体是细胞内的一个重要的细胞器,是细胞内能量贮存和供能的主要场所。詹纳斯绿是线粒体的专一活体染色剂。线粒体内含有细胞色素氧化酶,当用詹纳斯绿 (janus green b)进行染色时,细胞色素氧化酶能与詹纳斯绿发生氧化反应,线粒体呈现为蓝绿色,而周围的细胞质则被还原成无色的区域。若用中性红-詹纳斯绿混合染色,可使线粒体显示更为清楚。 【实验内容】 一、蟾蜍肾脏切片线粒体的观察 低倍镜观察肾脏切片总体结构,找到肾小管横切面,换高倍镜观察,观察线粒体、细胞核等形态、分布,区别镜下图和线粒体的超微结构图。

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转换高倍镜或油镜观察,可见细胞核呈圆形,浅蓝色,内有一深染的核仁,核周围的细胞质中有许多蓝黑色颗粒或线状的结构,即为线粒体。 二、兔脊神经节切片高尔基体的观察 观察麻雀小脑、兔或猫的脊神经节切片标本,低倍镜下观察,可见到许多大小不等、被染成黄色的圆形神经节细胞,该细胞中央有一不着色呈空泡状的圆形细胞核可作为该细胞的标志。选择神经节细胞较多的部位,转换高倍镜或油镜仔细观察,可清晰看到细胞中央圆形、空泡状细胞核,有的核内可见1~2个发亮的呈淡黄色的核仁。细胞质中散在许多棕黑色颗粒状或短线状的结构,就是高尔基复合体。高尔基复合体在细胞内的位置一般集中于细胞核外的某一区域,但在镜下所见的神经节细胞中高尔基复合体却多半围绕在整个细胞的周围。在视野中也可以看到没有经过核的切面,该细胞内高尔基复合体就好象散在整个细胞中。 三、线粒体超活染色与观察 1、取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上,滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。 2、实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞,将刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中,染色10-l5min(注意不可使染液干燥,必要时可再加滴染液)。 3、盖上盖玻片,用吸水纸吸去四周溢出的染液,置显微镜下观察。 4、在低倍镜下,选择平展的口腔上皮细胞,换高倍镜或油镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中,分布着一些被染或蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构,即是线粒体。 【实验操作】 观察,并分组实验

【实验报告】 一、人口腔黏膜上皮细胞线粒体绘图 二、兔脊神经节细胞高尔基体绘图 注:各结构名称需标注 【讨论】 细胞内的各种细胞器电镜及光镜下的形态有什么区别 要点:线粒体:光镜下线粒体很小,呈颗粒状,杆状。若不 注意区分显微结构和超微结构,可能会把肾小管切面图误认 为是线粒体,因为切面图颇有点象线粒体的超微图。因此要 搞清概念。 高尔基体: 2 电镜下所见的高尔基复合体是由小囊泡、扁平囊泡、大囊泡 三部分组成,但光镜下呈颗粒状,弯曲的线状、交织的网状。 3

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