硬叶兜兰菌根真菌的形态学特征与鉴定

第４２卷第２期　贵州林业科技　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｖｏ１．４２，Ｎｏ．２　Ｍａｙ，２０１４　２０１４年５月　硬叶兜兰菌根真菌的形态学特征与鉴定　田　凡　白新祥　王莲辉　姜运力　罗在柒　（１．贵州省林业科学研究院，贵州贵阳５５０００５；２．贵州大学林学院，贵州贵阳５５００２５）　摘要：将采集获得的野生硬叶兜兰植株，采用新单菌丝团分离法，分离纯化后，获得６株菌根真菌。对６　株内生菌的菌落形态、产孢结构和分生孢子形状、大小作了测量与观察及一些生物学特性初步鉴定，结果为５　株菌根真菌分别属于瘤菌根菌属（Ｅｐｕｌｏｒｈｉｚａ）、胶膜菌属（Ｔｕｌａｓｎｅｌｌａ）和镰刀菌属（Ｆｕａａｒｉｕ），未鉴定１种。　关键词：硬叶兜兰；菌根真菌；鉴定；形态学　中图分类号：Ｑ９４８．１２　２．３　文献标识码：Ｂ　Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｆｅａｔｕｒｅｓ　ａｎｄ　Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　Ｆｕｎｇｉ　ｏｆ　Ｐａｐｈｉｏｐｅｄｉｌｕｍ　ｍｉｃｒａｎｔｈｕｍ　ＴＩＡＮ　Ｆａｎ　ＢＡＩ　Ｘｉｎ—ｘｉａｎｇ２　ＷＡＮＧ　Ｌｉａｎ—ｈｕｉ　ＪＩＡＮＧ　Ｙｕｎ—ｌｉ　（１Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ．Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　５５０００５，２Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　５５００２５）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｓｉｎｇｌｅ　ｐｅｌｏｔｏｎ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｓｉｘ　ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ａ　ｗｉｌｄ　ｐｌａｎｔ　ｏｆ　Ｐａｐｈｉｏｐｅｄｉｌｕｍ　ｍｉｃｒａｎｔｈｕｍ．Ｔｈｅｓｅ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ　ｗｅｒｅ　ｔｈｅｎ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｏｌｏｎｙ，ｔｈｅ　ｃｏｎｉｄｉｏｇｅｎｏｕｓ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｐｏｒｅｓ，ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｗｈｉｃｈ　５　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ　ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ　ｔｏ　ｇｅｎｅｒａ　ｏｆ　Ｅｐｕｌｏｒｈｉｚａ，Ｔｕｌａｓｎｅｌｌａ　ａｎｄ　Ｆｕｓａｒｉｕ，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ｒｅｍａｉｎｄｅｒ　ｗａｓ　ｓｔｉｌｌ　ｕｎｉｄｅｎｔｉｉｅｄ　ｆＫｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐａｐｈｉｏｐｅｄｉｌｕｍ　ｍｉｃｒａｎｔｈｕｍ　Ｔａｎｇ　ｅｔ　Ｗａｎｇ，ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇｉ，ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　硬叶兜兰花奇色美，具有非常高的生物学研究　提高幼苗移栽后的成活率和生长速度，增加植株对　和观赏价值，引起了全世界兜兰专家及兰花爱好者　的极大兴趣川。由于过度采集、走私出境猖獗以及　生境破坏等原因，近十几年来野生硬叶兜兰的数量　逆境的抵抗能力，维持较低的发病率　ｑ　Ｊ。将兰科　菌根技术应用于硬叶兜兰种子萌发和植株生长将成　为保护其种质资源和使其产业化的必然趋势。　急剧减少，已经到了灭绝的边缘。属“野生动植物　国内外对于硬叶兜兰菌根真菌分类鉴定的研究　濒危物种国际贸易公约”（ＣＩＴＥＳ）附录Ｉ的保护　对象。因此，硬叶兜兰野生资源的保护和人工繁育　问题亟待引起社会各界的重视。　硬叶兜兰快速生长成为兰科植物生产者急切关　报道较少，仅见１名学者对硬叶兜兰菌根真菌进行　了分离、鉴定　ｊ。目前兰科菌根真菌的分离和形态　鉴定还主要依靠组织分离法和传统形态学的方法。　本研究采用新的单菌丝团分离法对硬叶兜兰菌根进　行分离¨…，形态鉴定采用经典形态学方法，即根　注的问题，已有的研究结果表明，共生真菌有助于　收稿日期：２０１３—１１—２２　作者简介：田凡（１９８５一）女，硕士，主要从事兰科植物菌根真菌研究。　通讯作者：罗在柒（１９７８～）男，副研究员，主要从事林木生物技术研究（Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｕｏｚａｉｑｉ＠１６３．ｃｏｍ）　１２　贵州林业科技　４２卷　据培养性状（菌落特征），显微形态特征及一些生　物学特性进行分类研究，对硬叶兜兰菌根真菌进行　初步分类鉴定，为硬叶兜兰的资源保存奠定基础，　同时也为其快速繁殖提供技术支持。　１　试验材料和方法　１．１试验材料　１．１．１供试植物　野生硬叶兜兰（Ｐａｐｈｉｏｐｅｄｉｌｕｍ　ｍｉｃｒａｎｔｈｕｍ　Ｔａｎｇ　ｅｔ　Ｗａｎｇ）成年植株采于贵州省惠水县。　１．１．２培养菌株培养基　标准培养基：美国ＢＤ（Ｄｉｆｅｏ）公司生产的标　准ＰＤＡ（Ｐｏｔａｔｏ　ｄｅｘｔｒｏｓｅ　ａｇａｒ）培养基和ＣＭＡ　（Ｃｏｒｎ　ｍｅａｌ　ａｇｅｒ）培养基。　１．２试验方法　１．２．１　分离方法　截取的硬叶兜兰新鲜根段于流水状态下冲洗干　净，分装于盛有无菌水的培养皿中，在超净工作台　上用解剖刀轻轻刮掉根毛、根被、表皮和其他附属　物，显微镜检，选出具有菌丝团的根段，无菌水冲　洗干净，再用０．１％升汞溶液分别处理２ｍｉｎ，无菌　水冲洗４～５次，将具有菌丝团的根切成３ｃｍ的小　段，然后用解剖针和镊子刮根段，使单菌丝团从皮　层细胞中游离出来，扩散到装有１０ｍｌ无菌水的直　径为６０ｃｍ培养皿中，２４￣（２恒温箱培养，培养１２ｈ　后在显微镜暗视野中找到生长出菌丝的菌丝团或菌　丝结，然后将光线调到最强，肉眼找到视界范围内　的菌丝团，用ｌＯ００１ｘｌ的移液枪吸取菌丝团，每次　吸取４５　ｌ菌丝团液，然后转接到面积为１ａｍ　小块　双抗ＰＤＡ培养基上，置于２４￣（２恒温箱培养。培养　４８小时后显微镜下镜检小块培养基，找到长出菌丝　的菌丝团，将菌丝团从小块培养基上切下，然后转　接至小块ＰＤＡ培养基，２４℃恒温培养，当菌丝生　长至０．５ｃｍ长时，切取菌丝尖端转接到直径为　９０ｅｍ的ＰＤＡ培养皿，纯化后转接到试管，培养保　存。　１．２．２菌落培养特征　将分离获得的菌株分别接到ＢＤＰＤＡ培养基和　ＢＤＰＤＡ培养基平板上，２４℃恒温培养，每天观察、　记录各菌株的菌落特征，包括菌落形状、大小、色　泽、生长速度及是否产生色素和香味等情况。挑取　菌落边缘及中央菌丝在光学显微镜下观察菌丝特征　（是否有隔和分枝，形状和颜色等），测量菌丝直　径。　１．２．３　菌株显微形态观察　插片培养法：将菌丝块接种于ＢＤＰＤＡ标准培　养基和ＢＤＣＭＡ标准培养基平板的中间，用小镊子　夹起一块无菌的盖玻片，在距接种点一定距离处以　４５度角的角度斜插入培养基中，不要插入培养基太　深，让菌丝爬上盖玻片约２／５时，再用小镊子将盖　玻片取出，自然干燥以后，将盖玻片转移到干净的　滴加有染色液或蒸馏水的载玻片上，显微镜下观察　产孢结构特征。　显微照片摄影：在ＯＬＹＭＰＵＳ倒置荧光数码显　微镜下，观察并选取具典型特征的视野拍照、直接　测量相关数据并进行描述记载。　菌丝细胞核染色计数：取ＢＤＰＤＡ培养基上生　长旺盛的菌丝，以番红Ｔ—ＫＯＨ和考马斯亮蓝染色　液染色，显微镜下进行细胞核计数。　１．２．４茵种鉴定　菌种鉴定依据菌株菌落的培养特征及菌株显微　形态观察的结果，结合大量可靠的文献资料，综合　分析对比相关特征的异同，最后确定鉴定菌株的分　类地位。　２　结果与分析　２．１菌落培养特征及显微形态观察　采用单菌丝团分离法分离获得１９株菌株，通　过ＢＤＰＤＡ培养基的菌落培养特征相似度的观察，　将ｌ９株内生菌筛选为６株菌株（菌落培养特征均　不一致的菌株）。６株菌株在ＢＤＰＤＡ培养基上具有　以下培养特征：　（１）ＹＹＤＬ００８　基本特征：菌丝细胞为双核。ＢＤＰＤＡ培养基　上菌落早期贴培养基生长，菌落表面光滑，边缘整　齐，厚薄均匀，后期产生气生细绒状菌丝，不明　显，菌落乳白色，形成同心环，具有香味（图１）。　菌丝的生长速度０．１２—０．１４ｍｍ／ｈ，菌丝直角或近　直角分枝，分枝第一隔与分枝点的距离为２．８７—　３．４９Ｉｘｍ，直角或近直角分枝，距分枝起源很近处　有横隔，念珠状细胞球形，少数柱状或椭圆形，大　小ｌ２．６４一ｌ４．２５Ｉ．ｚｍ×１３．２７～２１．４０Ｉｚｍ，念珠状细　胞链一般５个细胞（图１）；ＢＤＣＭＡ培养基上贴培　养基生长，无气生菌丝，生长速度０．１９—０．２９ｍｍ／　１６　贵州林业科技　４２卷　类真菌主要包括以下几个特征：细嫩菌丝隔的远侧　端附件形成一个分枝；分枝处缢缩，并在分枝点附　近形成一个隔；具有桶孑Ｌ隔膜；不形成分生孢子、　根状菌索和不具有锁状联合；具念珠状细胞¨　。　由表１的数据可知，５株菌株没有分生孢子、仅有　ＤＤ３４１株有，ＤＬｏ１３、Ｄ１３３１９、ＤＬ００８和ＤＬ０２０菌　株菌丝分枝点附近形成一个隔和菌丝细胞双核，都　具念珠状细胞，大多数具有香味，根据以上特征与　朱国胜　等学者的分类鉴定结果对比，初步鉴定６　株菌株为胶膜菌科（Ｔｕｌａｓｎｅｌｌａｃｅａｅ）的瘤菌根菌属　和胶膜菌属。鉴定结果见表３。　表３菌株初步鉴定结果　菌株　属　ＹＹＤＬ０１３　瘤菌根菌属（Ｅｐｕｌｏｒｈｉｚａ）　ＹＹＤＬＯ１９　瘤菌根菌属（Ｅｐｕｌｏｒｈｉｚａ）　ＹＹＤＵＤ０８　瘤茵根菌属（Ｅｐｕｌｏｒｈｉｚａ）　ＹＹＤＩＪＤ４１　镰刀菌属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）　ＹＹＤＬＯ２０　胶膜菌属（Ｔｕｌａｓｎｅｌｌａ）　ＹＹＤ【Ｄ１２　未鉴定　３　讨论　本次试验从硬叶兜兰菌根中分离获得与其共生　的菌根真菌６株，根据其菌落培养特征，光学显微　镜等传统形态学的特征观察，初步将其中５菌株鉴　定为瘤菌根菌属（Ｅｐｕｌｏｒｈｉｚａ）、胶膜菌属（Ｔｕｌａｓ—　ｎｅｌｌａ）和镰刀菌属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ），未鉴定１种。本　次试验分离到镰刀菌，众所周知，镰刀菌是一种植　物病原菌，能够危害多种经济植物。李明从杏黄兜　兰菌根中分离到的真菌类群中镰刀菌为优势菌　群¨引。范黎等自香果兰（Ｖａｎｉｌｌａ　ａｎｎａｍｉｃａ）等５　种附生兰花根中分离到了２种镰刀菌，镰刀菌菌株　经过实验证明可促进长苏石斛（Ｄ．ｂｒｙｍｅｒｉａｎｕｍ）　的种子发芽，可以说明该种可能是兰科植物菌根真　菌¨　。上述可以看出，镰刀菌能够在多种兰科植　物中被分离到，说明镰刀菌在兰科植物生长的环境　中普遍存在，与兰科植物生长关系密切。　Ｍｏｏｒｅ对原来隶属于丝核菌属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉ）的　兰科菌根真菌重新研究后，建立了３个新属，即角　菌根菌属（Ｃｅｒａｔｏｒｈｉｚａ）、瘤菌根菌属（Ｅｐｕｌｏｒｈｉｚａ）　和念珠菌根菌属（Ｍｏｎｉｌｉｏｐｓｉｓ），对应的有性世代分　别是：角担菌属（Ｃｅｒａｔｏｂａｓｉｄｉｕｍ）、胶膜菌属（Ｔｕ—　ｌａｓｎｅｌｌａ）和蜡壳菌属（Ｓｅｂａｃｉｎａ）、瓜亡革菌属　（Ｔｈａｎａｔｅｐｈｏｒｕｓ）　。范黎、郭顺星等对产于我国云　南和福建地区的ｌ９种兰科植物的菌根内生真菌进　行了分离、鉴定，发现了２６个兰科丝核菌类（Ｏｒ－　ｃｈｉｄａｃｅｏｕｓ　ｒｈｉｚｏｃｔｏｒｉａｓ）菌株，分别属于３个属，即　角菌根菌属、瘤菌根菌属和念珠菌根菌属【１５］。其　中有３个菌株已经证明能与某些兰科植物共生，促　进其种子发芽形成原球茎，可以说明这３个菌株可　能是某些兰科植物的菌根真菌。本研究从硬叶兜兰　菌根中也分离到了Ｅｐｕｌｏｒｈｉｚａ和Ｔｕｌａｓｎｅｌｌａ两个属　的。本研究的结果进一步的提示我们胶膜菌属和其　对应的无性态瘤菌根菌属可能是中国兰科植物较普　遍存在的共生菌根真菌。有关硬叶兜兰菌根的共生　机制有待深人研究。　目前兰科菌根真菌的分类和鉴定还主要依靠形　态学的方法。本研究分离到的真菌只鉴定到属，而　没有鉴定到种，这是因为兰科菌根真菌的鉴定比较　困难，由于某些高等真菌与低等真菌的同源性较　高，随着生物化学、遗传学以及分子生物学等相关　学科的发展，真菌的现代分类学中也不断引入了分　子生物学技术手段，在采用传统方法的同时，辅以　分子生物学手段，并结合计算机分析技术，将菌株　尽可能的鉴定到种。采用分子鉴定技术与传统方法　相结合，才能使鉴定结果更为准确。　参考文献　［１］陈心启，刘方嫒．云南几种兜兰属植物［Ｊ］．云　南植物研究，１９８２，４（２）：１６—１７．　［２］Ａｌａｍ　Ｍ　Ｋ，Ｒａｓｈｉｄ　Ｍ　Ｈ，Ｈｏｓｓａｉｎ　Ｍ　Ｓ，Ｓａｌａｍ　Ｍ　Ａ，　Ｒｏｕｆ　Ｍ　Ａ．Ｉｎｖｉｔｒｏ　ｓｅｅｄ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ（Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｎ　ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｓ　）　ｏｒｃｈｉｄ　ａｓ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ　ｂｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉａ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００２．１：１１１～１１５．　［３］Ｚｅｔｔｌｅｒ　Ｌ　Ｗ，Ｐｉｓｋｉｎ　Ｋ　Ａ，Ｓｔｅｗａｒｔ　Ｓ　Ｌ，Ｈａｒｔｓｏｃｋ　ＪＪ，　Ｂｏｗｅｌｓ　Ｍ　Ｌ，Ｂｅｌｌ　Ｔ　Ｊ．Ｐｒｏｔｏｃｏｒｍ　ｍｙｅｏｂｉｏｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｅｄｅｒａｌｌｙ　ｔｈｒｅａｔｅｎｅｄ　ｅａｓｔｅｍ　ｐｒａｉｉｒｅ　ｆｒｉｎｇｅｄ　ｏｒｃｈｉｄ，Ｐｌａｔａｎｔｈｅｒａ　ｌｅｕｅｏｐｈａｅａ　（Ｎｕｔｔ）Ｌｉｎｄｌｅｙ，ａｎｄ　ａ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｔｏ　ｐｒｏｍｐｔ　ｌｅａｆ　ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｉｎ　Ｍｙｃｏｌｏｇｙ，２００５，５３：１６３～１７１．　［４］颜容．独花兰菌根真菌的的研究［Ｄ］．北京林业　大学，２００５．　［５］杨友联．独蒜兰菌根真菌研究［Ｄ］．贵州大学，　２０ｏ６．　［６］董芳．几种兰科植物菌根真菌的筛选及种子萌发　条件的研究［Ｄ］．北京林业大学，２００８．　（下转第５页）　２期　仲维赫等：生长调节剂对马尾松扦插效果及内源物质的影响　５　物质发生变化。合理的生长调节剂处理后．扦插初　［５］陈晓月．马尾松扦插育苗技术及造林试验［Ｊ］．　期，穗条内源抑制物质含量提高。这样穗条在活力　浙江林业科技．２００８，２８（６）：５７—６２．　相对较高的离体初期便开始降解抑制生根的苯酚类　［６］吴则焰，刘金福，洪伟等．水松扦插繁殖体系研究　和酮类物质。由于穗条在本身活性较高时期便分解　［Ｊ］．中国农学通报２０１２，２８（２２）：２２—２６．　掉较高浓度的生根抑制物质，使生根过程中穗条生　［７］季孔庶，王章荣，陈天华，王明麻．几种生长调节　剂对马尾松插穗促根的效应［Ｊ］．福建林学院学报．２００１，　根阻力降低。不当的生长调节剂刺激后，穗条细胞　２１（２）：１２０—１２３．　的活性下降，降低了生根过程中细胞的脱分化再分　［８］季孔庶等．马尾松插穗内源抑制物质的研究［Ｊ］　化能力。在今后的研究中，可以把吲哚丁酸、吲哚　．林业科学．１９９７，３（２）：１４２—１５１．　乙酸作为马尾松主要生长调节剂，辅以微量６一ＢＡ　［９］麻文俊，张守攻，王军辉等．日本落叶松扦插生根　进行调节。针对酮类物质和苯酚类物质的变化，可　期内源激素和营养物质及酚酸含量变化特征［Ｊ］．西北植　以在扦插初期施加少量酮类和苯酚类物质，刺激穗　物学报，２０１３，３３（１）：０１０９～０１１１．　条内源物质的降解机能升高，辅助穗条生根。　［１０］朱林海。何丙辉．重庆地区马尾松嫩枝扦插技术　研究［Ｊ］．西南大学学报（自然科学版）．２０１０，３２（２）：　参考文献　３４～３７．　［１］周政贤．中国马尾松ｆＭ］．北京：中国林业出版　［１１］Ｒａｌｐｈ　Ｌ．Ｓｈｒｉｎｅｒ等著，张书圣等译．有机化合物　社．２００１．　系统鉴定手册［Ｍ］．化学工业出版社．２００７．　［２］丁贵杰，周志春，王章荣等．马尾松纸浆用材林培　［１２］李永进，丁贵杰．不同家系马尾松插穗内源生根　育与利用［Ｍ］．北京：中国林业出版社．２００６．　抑制物的分离、纯化及鉴定［Ｊ］．浙江林学院学报．２０１０，　［３］王明麻．论无性系林业一概念和应用［Ｊ］．南京　２７（４）：５０７—５１２．　林业大学学报．１９９３（１）：１—５，　［１３］刘玉民，刘亚敏．马尾松扦插生根过程相关生理　［４］陈亚斌．马尾松插穗生根能力的家系变异与选择　生化分析［Ｊ］．林业科学．２０１０，４６（９）：２８—３３．　效应［Ｊ］．林业科技开发．２０１２，２６（５）：１０７一ｌ１０．　（上接第ｌ６页）　．Ｔｒａｎｓ．Ｍｙｅｏ１．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．１９７５，２０：３３～３９．　［７］陈娅娅．鹅毛玉凤花菌根真菌研究［Ｄ］．贵州大　［１２］李明，张灼．杏黄兜兰菌根研究与应用［Ｊ］．　学，２ｏｏ８．　生物学杂志，２００１，１８（６）．　［８］朱国胜．贵州特色药用兰科植物杜鹃兰和独蒜兰　［１３］范黎，郭顺星，肖培根．密花石斛等六种兰科植　共生真菌研究与应用［Ｄ］．华中农业大学，２００９．　物菌根的显微结构研究［Ｊ］．植物学通报，２０００，１７（１）：　［９］罗玉容．硬叶兜兰菌根真菌的观察、分离和鉴定　７３～７９．　［Ｄ］．华南农业大学，２００８．　［１４］Ｍｏｏｒｅ　１Ｌ　Ｔ．Ｔｈｅ　ｇｅｎｅｒａ　ｏｆ　Ｒｈｉｚｏｅｔｏｎｉａ—ｌｉｋｅ　ｆｕ＿嚼：　［１０］Ｚｈｕ．Ｇ．Ｓ．，Ｙｕ，Ｚ．Ｎ．，Ｇｕｉ．Ｙ．，Ｌｉｕ．Ｚ．Ｙ．Ａ．　Ａｓｃｏｒｈｉｔｏｎｉａ，Ｃｅｒａｔｏｒｈｉｚａ　ｇｅｎ．ｎｏｖ，Ｅｐｕｌｏｒｈｉｚａ　ｇｅｎ．Ｎｏｖ，Ｍｏ－　ｎｏｖｅｌ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｆｏｒ　ｉｓｏｌａｔｉｎｇ　ｏｒｃｈｉｄ　ｍｙｅｏｒｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇｉ［Ｊ］　ｎｉｌｉｏｐｓｉｓ，ａｎｄ　Ｒｈｉｚｏｅｔｏｎｉａ，Ｍｙｅｏｔａｘｏｎ，１９８７，２９：９１—９９．　．Ｆｕｎｇａｌ　Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００８，３３：１２３～１３７．　［１５］范黎，郭顺星．十九种兰科植物根的内生担子菌　［１１］Ｏｇｏｓｈｉ，Ａ，Ｏｎｉｋｉ　Ｍ，Ｓａｋａｉ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ　［Ｊ］．热带作物学报，１９９８，１９（４）：７７—８２．　Ｇｒｏｕｐｉｎｇ　ａｍｏｎｇ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｏｆ　Ｂｉｎｕｅｌｅａｔｅ　Ｒｈｉｚｏｅｔｏｎｉａ［Ｊ］