培养基配方
1 斜面菌种保存培养基
1.1PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基)
称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂,充分溶解后趁热纱布过滤,分装试管,每试管约5—10ml（视试管大小而定)，121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
1。2麦芽汁琼脂培养基
麦芽汁的制备:干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。太粗影响糖化效率,过细影响过滤速度）,按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时,然后缓缓加温至55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4～6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。在糖化过程中，应每小时搅拌一次.取过滤后的清液，加1.8％琼脂，分装试管，每试管约5—10ml(视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用.
2基菌落总数检测
2。1平板计数琼脂培养基
将 胰蛋白胨5。0g、酵母浸膏2。5g、葡萄糖1。0g、琼脂15。0g加入蒸馏水1000ml
中，煮沸溶解后，调pH，然后在121℃下灭菌15min,取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测
3。1 GN增菌液
成分：胰蛋白胨:20g，葡萄糖：1g，甘露醇:2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0。5g，磷酸二氢钾4g,磷酸氢二钾1。5g，氯化钠5g,蒸馏水1000ml。pH7.0
制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为7.0，分装，在115℃高压灭菌15min。
3.2 HE琼脂
成分：胨:12g,牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g，琼脂18～20g，蒸馏水1000ml0,0。4%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml。，甲液20ml,乙液20ml。pH7。5
制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷却至50～55℃，倾注浇平板。
注1:此培养基不能高温灭菌。
注2：甲液的配置：
硫代硫酸钠：34g,柠檬酸铁钠：4g，蒸馏水：100ml。
注3：乙液的配置：
去氧胆酸钠：10g，蒸馏水:100ml。
注4：Andrade指示剂的配置：
酸性复红:0。5g，1mol/l的氢氧化钠溶液：16ml,蒸馏水:100ml。
将酸性复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液，数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1~2ml。
3。3 SS琼脂
3。3。1 基础培养基：
成分：牛肉膏：5g，胨：5g，三号胆盐：3。5g,琼脂：17g，蒸馏水：1000ml.
制法:将牛肉膏蛋白胨，三号胆盐加入到400ml蒸馏水中，将琼脂加入到600ml蒸馏水中，煮沸使其溶解，然后液混合，于121℃下灭菌15min，保存备用。
3.3.2 完全培养基
成分：基础培养基:1000ml,乳糖：10g，柠檬酸钠:8.5g，硫代硫酸钠：8.5g，10%柠檬酸铁溶液：10ml，1%中性红溶液：2.5ml,0.1%煌绿溶液：0。33ml。
制法：加热融化基础培养基，按比例加入处染料以外的所有成分，搅拌均匀，调pH7。0，加入中性红溶液和煌绿溶液,混合均匀后浇平板。
注1:配制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱48h内使用.
注2：煌绿溶液配好后，应在10日内使用.
注3:可以购买SS琼脂的干燥培养基。
3。4 麦康凯琼脂
成分：蛋白胨:17g，胨:3g，猪胆盐（牛、羊胆盐）：5g，氯化钠:5g，琼脂：17g,蒸馏水：1000ml，乳糖:10g，0.01％结晶紫水溶液：10ml，0.5％中性红水溶液：5ml.
制法:将蛋白胨、胨、猪胆盐、氯化钠溶解于400ml蒸馏水中，调pH7.2，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，将两液混合均匀，于121℃下灭菌15min备用。
临用时加热融化琼脂，趁热加入乳糖,等冷却到50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液,搅拌均匀后浇平板.
注：结晶紫和中性红水溶液配好后,须经高压灭菌.
3。5 伊红美蓝琼脂(EMB)
成分:蛋白胨:10g，乳糖：10g，磷酸氢二钾:2g，琼脂17g，2％伊红Y溶液:20ml，0.5％美蓝溶液：10ml,蒸馏水1000ml，pH7.1。
制法:将蛋白胨、磷酸盐、琼脂溶解于蒸馏水中,调pH，于121℃下灭菌15min备用。
临用时加热融化琼脂,并加入乳糖，冷却至50~55℃时加入伊红和美蓝溶液,混合均匀后浇平板.
3.6 三精铁琼脂
成分:蛋白胨：20g,牛肉膏：5g，乳糖：10g，蔗糖：10g，葡萄糖：1g，氯化钠：5g，六水硫酸亚铁铵:0。2g，硫代硫酸钠：0。2g，琼脂：12g，酚红：0.025g，蒸馏水：1000ml,pH7。4。
制法：将除琼脂和酚红以外的各种成分溶解于蒸馏水中，调pH，然后加入琼脂，加热溶解，加入0。2％酚红水溶液12。5ml，摇匀,分装时量多一点，于121℃下灭菌15min，搁高层斜面备用.
3.6葡萄糖半固体发酵管
成分：蛋白胨:1g，牛肉膏:0。3g,氯化钠：0.5g，1。6％溴甲酚紫酒精溶液：0。1ml，葡萄糖:1g,琼脂:0。3g，蒸馏水：100ml,pH7。4。
制法：将蛋白胨,牛肉膏，氯化钠加入水中，调pH后，加入琼脂，煮沸溶解，再加入指示剂和葡萄糖。分装，于121℃下灭菌15min，备用.
3.7 半固体管
成分:蛋白胨：1g，牛肉膏：0.3g，氯化钠：0.5g，琼脂：0。35~0。4g，蒸馏水：
100ml，pH7。4。
制法：将上述成分溶于水中,加热煮沸，并调pH后分装小试管，121℃高压灭菌15min，直立凝固备用。
3.8 尿素琼脂
成分:蛋白胨：1g，氯化钠:5g，葡萄糖1g，磷酸二氢钾：2g，0。4％酚红溶液：3ml,琼脂：20g，蒸馏水：1000ml，20％尿素：100ml，pH7。2±0.1。
制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，调pH，加入琼脂后加热使其溶化并分装小瓶，121℃高压灭菌15min,冷却至50~55℃后，加入经过滤灭菌的尿素溶液，最终尿素浓度为2％，最终的pH应为7。2±0。1。
分装于灭菌试管内，搁斜面备用。
3.9 西蒙氏柠檬酸盐琼脂
成分：氯化钠:5g，七水硫酸镁:0。2g，磷酸二氢铵：1g,磷酸氢二甲:1g,柠檬酸钠:5g,琼脂：20g，蒸馏水：1000ml，0.4%溴麝香草酚蓝溶液：40ml，pH6.8。
制法：先将盐类溶解于水中，调pH，再加琼脂，加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃下灭菌15min，搁成斜面。
实验方法：挑取少量琼脂培养物接种，于36℃±1℃培养4天,每天观察结果，阳性者斜面上有菌落生长。培养基由绿色转为蓝色.
3.10 氰化钾（KCN）培养基
成分：蛋白胨：10g，氯化钠：5g，磷酸二氢钾：0。225g，磷酸氢二钠：5。64g,蒸馏水：1000ml，0.5％氰化钾溶液：20ml，pH7.6。
制法:将除氰化钾以外的成分配好分装，121℃灭菌15min,放在冰箱内使其充分冷却,每100ml培养基加入0.5％氰化钾溶液2。0ml（最后浓度为1:10000），分装于12mm×100mm灭菌试管,每管约4ml，立刻用橡皮塞塞紧，放在4℃冰箱内，至少可保存两个月,同时将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装备用.
试验方法：将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成作为稀释菌液,挑取1环接种于氰化钾培养基,另外挑取1环接种于对照培养基，在36℃±1℃下培养1~2天，观察结果,如有细菌生长,则为阳性,经2天后不生长则为阴性.
注：氰化钾是剧毒物质，使用时应小心，切勿沾染，以免中毒.夏天分装培养基应在冰箱内进行，实验失败的主要原因是封口不严，氰化钾逐渐分解，变成氢氰酸气体逸出,以致药物浓度降低，细菌生长，造成假阳性现象。
3.11 氨基酸脱羧酶实验培养基
成分：蛋白胨：5g，酵母浸膏：3g，葡萄糖:1g，蒸馏水：1000ml，1。6%溴甲酚紫乙醇溶液：1ml，L-氨基酸或DL—氨基酸:0。5g或1g/100ml，pH6。8.
制法：除氨基酸以外的所有成分加热溶解后，分装每瓶100ml，分别加入各种氨基酸:赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1％加入。再调pH6。8，
对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内,每管0。5ml，上面滴加一层液体石蜡。115℃高压灭菌10min.
实验方法:从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36℃±1℃下培养18~24h，观察结果,氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色.阴性者因为碱性物质产生，但因葡萄糖产酸而是培养基变成黄色，对照管应为黄色。
3.12 蛋白胨水（靛基质试验用）
成分:蛋白胨或胰蛋白胨：20g，氯化钠：5g,蒸馏水:1000ml，pH7。4
制法：将上述成飞混合均匀，分装小管，121℃灭菌15min.
靛基质试剂：
柯凡克试剂：将5g对二氨基甲醛溶于75ml戊醇中，然后慢慢加入浓盐酸25ml.
欧—波试剂:将1g对二氨基苯甲醛溶于90ml95％的乙醇内，然后慢慢加入浓盐酸20ml。
实验方法:挑取少量接种物接种,在36℃±1℃下培养1~2天，必要时可培养4~5天，加入柯凡克试剂约0。5ml,轻摇试管，阳性者试剂层呈深红色，或加入欧-波试剂，沿管壁流下，覆盖于培养液表面,阳性者接触面上呈玫瑰红色。
注：蛋白胨应含有丰富的色氨酸，每批蛋白胨买来后应用已知菌种实验。
3.13 糖发酵管
成分：牛肉膏:5g，蛋白胨：10g，氯化钠:3g，十二水磷酸氢二钠：2g,0。2%溴麝香草酚蓝溶液：12ml，蒸馏水：1000ml,pH7.4。
葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内，121℃灭菌15min。
其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100ml，121℃灭菌15min，另将各种糖类配好10%溶液，一同灭菌,将5ml糖溶液加入到100ml液体培养基中，以无菌操作分装小试管.
注：蔗糖不纯,加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌.
实验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±1℃，一般观察2～3天，迟缓反应需观察14～30天。
3.14 5％乳糖发酵管
成分：蛋白胨：0.2g，氯化钠：0。5g，乳糖：5g，2%溴麝香草酚蓝水溶液：1.2ml，蒸馏水:100ml，pH7。4。
制法：除乳糖以外的各成分溶解于50ml蒸馏水内,调pH,将乳糖溶解于另外50ml蒸馏水中，分别于121℃灭菌15min,将两者混合，以无菌操作分装到小试管中。
注：在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1天内发酵。
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