２０ 咸宁学院学报（医学版）２００８年第２２卷第１期［Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｘｉａｎｎｉｎｇ ＣｏＨｅｇｅ（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）］ 肺癌患者肺组织中ＣＯＸ一２和 ＰＧＥ２表达的变化及其意义 黄翠萍 （成宁学院附属第一医院内科，湖北成宁４３７１００） 摘要：目的探讨非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者肺组织中环氧合酶－２（ＣＯＸ一２）和前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）表达的 变化及其与临床病理参数之间的关系。方法采用逆转录聚合酶联反应（ＲＴ—ＰＣＲ）和放射免疫法，分别检测３８ 例ＮＳＣＬＣ患者正常肺组织和肺癌组织中ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ和ＰＧＥ２表达的变化。结果３８例肺癌患者正常肺组织 和肺癌组织中分别有３４例和３例检测到ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ表达，阳性表达率分别为８９．４７％和７．８９％；半定量分 析肺癌组织中的ＣＯＸ－２ ｍＲＮＡ平均吸光度显著高于正常肺组织（Ｐ＜０．Ｏ１）。肺癌组织和正常肺组织匀浆中 ＰＧＥ２浓度分别为（４２．３３±６．１３） Ｌ和（５．８７±１．４０） Ｌ，两者比较差异亦具有显著性（Ｐ＜０．０１）。直线 相关分析发现肺癌组织中ＣＯＸ－２ ｍＲＮＡ的表达和ＰＧＥ２浓度的变化呈正相关（ｒ＝０．５５２，Ｐ＜０．０５）。ＣＯＸ－２ ｍＲＮＡ表达在不同性别、年龄、组织分型、ＴＮＭ分期和分化程度之间差异均无显著性（Ｐ均＞０．０５）。结论 ＮＳＣＬＣ患者肺癌组织中ＣＯＸ－２ ｍＲＮＡ和ＰＧＥ２表达增强，可能在ＮＳＣＬＣ的发生和发展中具有重要作用。 关键词：肺癌；环氧合酶；前列腺素Ｅ２ 中图分类号：Ｒ７３４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－０６３５（２００８）０１－００２０－０３ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃｙｃｌ００ｘｙｇｅｎａｓｅ ２ ａｎｄ Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ ｉｎ Ｌｕｎｇ Ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ＮＳＣＬＣ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ＨＵＡＮＧ Ｃｕｉ—ｐｉｎｇ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ｔｈｅ Ｆｉｍｔ Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆＸｉｏａｎｎｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉａｎｎｉｎｇ Ｈｕｂｅｉ ４３７１００，Ｃｈｉｎａ） ＡＢＳＴＲＡＣＴ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ ２（ＣＯＸ－２）ａｎｄ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ （ＰＧＥ２）ｉｎ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ（ＮＳＣＬＣ）ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｂｙ ｒｅｖｅｒｓｅ—ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ—ＰＣＲ）ａｎｄ ｍｄｉ０ｉｍｍｕｎ０ａｓｓａｙ，ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＣＯＸ一 ２ ｍＲＮＡ ａｎｄ ＰＧＥ２ ｉｎ ｃａｒｃｉｎｏｍｅ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ｎｏｒｍｅｌ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ３８ ｃａｓｅｓ ｏｆ ＮＳＣＬＣ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ａｎｄ ａｖｅｒｇｅ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｏｆ ＣＯＸ－２ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｗｅｒｅ ｓｉｎｉｇｉｆｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｌｕｎｇ ｎｏｒｍａｌ ｔｉｓｓｕｅ（Ｐ＜０．０ １）．ＰＧＥ２ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｗｅｒｅ ｓｉｎｉｇｉｆｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｔｉｓｓｕｅ（Ｐ＜０．０ １）．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａ ｇｏｏｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｅｘ— ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ ａｎｄ ＰＧＥ２（ｒ＝０．５５２．Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ ｈａｄ ｎｏ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｓｅｘ，ａｇｅ，ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｙｐｅ，ＴＮＭ ｓｔａｇｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｄｅｇｒｅｅ（Ｐ＞０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＴｈｅ ｅｘｐｒｅｓ— ｓｉｏｎ ｏｆ ＣＯＸ－２ ｍＲＮＡ ａｎｄ ＰＧＥ２ ｉｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ＮＳＣＬＣ ｐａｔｉｅｎｔｓ，ｗｈｉｃｈ ｍａｙ ｐｌａｙ ａｎ ｉｍ— ｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ． ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ：Ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ；Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ一２；Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ 环氧合酶（ＣＯＸ）是分解花生四烯酸（ＡＡ）、生 成各种内源性前列腺素（ＰＧ）过程中的重要限速 湖北省教育厅科研基金资助（编号：Ｑ２００６２８００４） 维普资讯 http://www.cqvip.com
咸宁学院学报（医学版）２００８年第２２卷第１期［Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｘｉａｎｎｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）］ 酶。目前发现其主要存在两种亚型：ＣＯＸ－１和 ２１ ３０ｓ，４℃下３５００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，取上清液置一 ３Ｏ℃保存待测。采用放射免疫法检测ＰＧＥ２浓 度。操作步骤按试剂盒（北京东亚免疫技术研究 所提供）说明书进行。 １．４统计学处理 ＣＯＸ．２。近年来的研究表明ＣＯＸ－２参与了多种肿 瘤的细胞增殖、抗凋亡和ｉｌⅡ管生成过程，与肿瘤的 发生和发展密切相关…。为探讨ＣＯＸ ２与肺癌 的关系，我们采用逆转录聚合酶联反应（ＲＴ－ＰＣＲ） 技术和放射免疫法分别检测肺癌组织中ＣＯＸ－２ ｍＲＮＡ和ＰＧＥ２的表达，并探讨其与肺癌临床病理 采用ＳＰＳＳ１０．０软件包进行统计，计量资料数 据采用ｑ检验和直线相关分析，计数资料百分率 参数的相关性。 １资料与方法 １．１ 一般资料 我院２００２年１Ｏ月至２００４年４月经病理确诊 非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者３８例。男２６例，女 １２例；年龄３１～６９岁，平均４６．７岁。其中鳞癌 ２２例，高、中、低分化分别为８、１０、４例；腺癌１６ 例，高、中、低分化分别为６、７、３例。按ＵＩＣＣ １９９７ 分期标准 进行ＴＮＭ分期：Ｉ ａ期４例，Ｉ ｂ期５ 例，Ⅱａ期７例，Ⅱｂ期８例，Ⅲａ期６例，Ⅲｂ期５ 例，Ⅳ期３例。所有患者均为首次发现并确诊，不 伴有慢性阻塞性肺疾病、哮喘、肺间质纤维化以及 其他感染性疾病，术前均未行放疗、化疗或生物免 疫治疗。术中取肺癌组织和远离肿瘤的正常组织 在１ｈ内速冻后，置一８ＯｃＣ保存待测。 １．２肺组织中ＣＯＸ－２ ｍＲＮＡ表达的检测 采用ＴＲＩｚｏｌ一步法提取肺组织总ＲＮＡ。用 ＤＮＡ／ＲＮＡ测定仪（英国Ｐｈａｒｍａｒｃｉａ公司产品）检 测ＲＮＡ浓度和纯度。取２ｔｘｇ总ＲＮＡ，加入Ｏｌｉｇｏ （ｄｔ）１５引物及逆转录酶（均为美国Ｐｒｏｍｅｇａ产品） 在２５ ｇ体积下，３７ｃＣ，６０ｍｉｎ完成逆转录反应后， 进行聚合酶链反应。ＣＯＸ－２引物序列 为：上游 ５＂－ＴＧＡＡＡＣ ＣＣＡＣＴＣＣＡＡＡＣＡＣＡ－３ 下游５ ＴＧ ＧＡＡＣＡＡＣＴＧＣＴＣＡＴＣＡＣＣ一３ ８一ａｃｔｉｎ引物序列为： 上游５＂－ＧＡＴＧＧＴＧＧＧＴＡＴＧＧＧＴＣＡＧＡＡＧＧＡ－３ 下 游５：ＣＣＴＣＡＴＴＣＣＣＣＡＴＡＣＴＣＡＴＣＡＣＣＴ＿３ 均由上 海生物工程公司合成。反应条件分别为：ＣＯＸ－２： ９４ｏＣ，３０ｓ；５５ｃＣ，１ｍｉｎ；７２ｃＣ，２ｒａｉｎ：７２ｃＣ．１０ｍｉｎ，３５ 个循环； ．ａｃｔｉｎ：９４ｏＣ，１ｍｉｎ；５６ｏＣ，１ｍｉｎ；７２ｏＣ， １ ｍｉｎ；７２ｃＣ，７ｍｉｎ，３５个循环。ＣＯＸ－２、８．ａｃｔｉｎ的扩 增产物分别为７２８ｂｐ和６３０ｂｐ。经２％琼脂糖凝 胶电泳，利用ＭＵＶＢ－２０凝胶分析系统（美国Ｕｌｔｒａ． １ｕｍ公司）对扩增产物条带进行扫描，以ＣＯＸ－２／ －ａｃｔｉｎ的吸光度（Ａ值）作为ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ表达 的相对含量。 １．３肺组织匀浆ＰＧＥ２的测定 ｛｝克肺组织加入９ｍｌ生理盐水，冰浴下匀浆 比较采用卡方检验。Ｐ＜０．０５为差异有显著性。 ２结果 ２．１肺组织ＣＯＸ－２ ｍＲＮＡ和ＰＧＥ２表达的变化 ３８例肺癌患者正常肺组织中发现有３例检测 到微弱的ＣＯＸ。２ ｍＲＮＡ表达，阳性表达率为７． ８９％，半定量分析平均吸光度为０．０１６２±０．００２１； 肺癌组织中有３４例检测到明显的ＣＯＸ－２ ｍＲＮＡ 表达，阳性表达率为８９．４７％，半定量分析平均吸 光度为０．８６４８ ４－０．２４１５，与正常肺组织比较，差异 均具有显著性（Ｐ均＜０．０１）。肺癌组织和正常肺 组织匀浆中ＰＧＥ２浓度分别为（４２．３３±６．１３） ｇ／ Ｌ和（５．８７±１．４０） ｇ／Ｌ，两者比较差异具有显著 性（Ｐ＜０．０１）。直线相关分析发现肺组织中 ＣＯＸ－２ ｍＲＮＡ的表达和ＰＧＥ２浓度的变化呈正相 关（ｒ＝０．５５２，Ｐ＜０．０５）。 ２．２肺癌组织中ＣＯＸ．２ ｍＲＮＡ表达与临床参数 的关系 ＣＯＸ－２ ｍＲＮＡ表达在不同性别、年龄、组织分 型、ＴＮＭ分期和分化程度之间差异均无显著性（Ｐ ＞０．０５，表１）。 表１肺癌患者ＣＯＸ－２ ｍＲＮＡ表达 与临床参数的关系 维普资讯 http://www.cqvip.com
２２ 咸宁学院学报（医学版）２００８年第２２卷第１期［Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＸｉａｎｎｉｎｇ Ｃｏｌｌｅｇｅ（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）］ ３讨论 ＣＯＸ是ＰＧ合成过程中的一个重要限速酶。 其中ＣＯＸ—ｌ亚型为结构型，在多数组织细胞中持 续低浓度表达，参与维持集体正常的生理功能； ＣＯＸ一２亚型为可诱生型，在正常生理状态下多数 组织内检测不到，当细胞受到细胞因子、生长因 子、炎症介质、促癌剂及一些癌基因产物等刺激后 便开始表达合成，其表达在２４ｈ内可以增加数十 倍。活化的ＣＯＸ一２催化ＡＡ产生一些具有多种生 物学活性的小分子物质ＰＧ，从而参与机体的多种 生理和病理生理过程。 ＣＯＸ一２在肿瘤中的意义首先明确于结肠和直 肠肿瘤，随后的研究逐渐发现消化道肿瘤及宫颈 癌中也有不同程度的表达。ＣＯＸ一２在肺癌中的作 用研究开始于１９９８年，Ｈｉｄｅ 采用免疫组织化学 方法研究ＣＯＸ一２在肺癌中的表达并初步探讨了 ＣＯＸ一２表达与临床病理类型等方面的关系。以后 又有多项研究证实ＣＯＸ一２在多种类型的肺癌中 均有不同程度的表达 。本文通过半定量分析发 现肺癌患者ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ表达的平均吸光度显著 高于正常对照组，肺癌患者ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ的阳性 表达率高达８９．４７％，而正常对照组中仅为７． ８９％，提示ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ对肺癌的诊断具有较高 的敏感性和特异性。结果还显示ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ表 达和肺癌患者的性别、年龄、组织分型、ＴＮＭ分期 和分化程度等临床参数无关。 关于ＣＯＸ一２参与肺癌的作用机制目前仍不 很清楚。有研究报道ＣＯＸ一２催化产生ＰＧＥ２，与 细胞膜上或核内的受体结合，促进细胞生长增殖； 或者诱导白介素－６（ＩＬ－６）、基质金属蛋白酶１和基 质金属蛋白酶２的表达，增强肿瘤细胞的侵袭 力 ’ 。我们亦发现肺癌患者血浆中ＰＧＥ２浓度 较正常组织显著性升高，ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ的表达和 ＰＧＥ２浓度的变化呈显著正相关，提示ＣＯＸ一２可 能通过ＰＧＥ２发挥其致癌作用。有关ＣＯＸ一２在肺 癌中的作用机制有待于进一步研究。 参考文献： ［１］Ｄａｎｎｅｎｂｅｒｇ ＡＪ，Ａｌｔｏｒｋｉ ＮＫ，Ｂｏｙｌｅ ＪＯ，ｅｔ ａ１．Ｃｙｅｌｏｏｘｙｇｅｎ－ ａｓｅ ２：ａ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｎｃ— ｅｒ［Ｊ］．Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ，２００１，２（９）：５４４ ［２］Ｌａｂａｂｅｄｅ Ｏ，Ｍｅｚｉａｎｅ ＭＡ，Ｒｉｃｅ ＴＷ．ＴＮＭ ｓｔａｇｉｎｇ ｏｆ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ：ａ ｑｕｉｃｋ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｃｈａｒｔ［Ｊ］．Ｃｈｅｓｔ，１９９９，１１５：２３３ ［３］Ｗａｔｋｉｎｓ ＤＮ，Ｐｅｒｏｎｉ ＤＪ，Ｌｅｎｚｏ ＪＣ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＯＸ－２ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｉｒｗ￣ｓ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ａｉｒ－ ｗａｙ ｅｐｉｔｈｅｌｉｌａ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ，１９９９，１３：９９９ ［４］Ｈｉｄａ Ｔ，Ｙａｔａｂｅ Ｙ，Ａｅｈｉｗａ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｙｅｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ ２ ＯＣＣＵｌ￣ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃ— ｅｒｓ，ｓｐｅｃｉｉｆｃａｌｌｙ ｉｎ ａｄｅｎｏｃａｒｅｉｎｏｍａｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， １９９８，５８：３７６１ ［５］Ｈａｓｔｕｒｋ Ｓ，Ｋｅｍｐ Ｂ，Ｋａｌａｐｕｒａｋａｌ ＳＫ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｔｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｙｅｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－－１ ａｎｄ ｅｙｅｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２ ｉｎ ｂｒｏｎｃｈｉｌａ ｅｐｉ－－ ｔｈｅｌｉｕｍ ａｎｄ ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ ｃｅｌ ｌｕｎｇ ｃｒａｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ， ２００２，９４：１０２３ ［６］Ｆｏｓｓｌｉｅｎ Ｅ．Ｍｏｌｅｃｕｌｒａ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｅｙｅｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２ ｉｎ ｎｅｏｐｌｓａｉａ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｃｌｉｎ ｌａｂ Ｓｃｉ，２０００，３０（１）：３ ［７］Ｃａｏ Ｙ，Ｐｒｅｓｃｏｔｔ ＳＭ．Ｍａｎｙ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｅｙｅｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２ ｉｎ ｃｅｌｌｌｕａｒ ｄｙｎａｍｉｃｓ ａｎｄ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｊ Ｃｅｌ Ｐｈｙｓｌｏｌ，２００２， １９０：２７９ （收稿日期：２００７—１０—２５）
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