反义α肌动蛋白基因腺病毒载体转染5／6肾切除大鼠抑制肾纤维化进展的研究

维普资讯 http://www.cqvip.com 重庆医学２００８年４月第３７卷第８期　７９１　・论　著・　反义　肌动蛋白基因腺病毒载体转染５／６肾切除大鼠　抑制肾纤维化进展的研究　干磊，李　敛，赵洪雯，刘　宏，吴亿，吴雄飞△　（第三军医大学西南医院肾科，重庆４０００３８）　摘要：目的观察大鼠血管平滑肌ａ肌动蛋白基因反义腺病毒栽体（ｐＡｄａｎｔｉ—ａ－ＳＭＡ）转染５／６肾切除大鼠对其肾脏纤维化　进程的影响。方法　建立ｐＡｄａｎｔｉ—ａ—ＳＭＡ转染５／６肾切除大鼠模型。实验分组，Ａ组：正常对照；Ｂ组：５／６肾切除大鼠；Ｃ组：　ｐＡｄａｎｔｉ—ａ－ＳＭＡ转染的５／６肾切除大鼠。统计２Ｏ周后存活率及血肌酐，行肾脏病理检查和肾脏损伤指数评分，行ａ－ＳＭＡ、ＴＧＦ－　８　、ＰＤＧＦ－ＢＢ的免疫组化并用Ｔｉｇｅｒ　９２０图像分析仪做半定量分析。结果１．３７。结论ｐＡｄａｎｔｉ—ａ－ＳＭＡ转染可延缓大鼠肾脏纤维化进程。　各组存活率为９５．０　、５８、８　、８２、９　；各组平均血肌　酐为：３９．７４、１３２．５７、８８．６５；各组肾损伤总指数：０．７９、１６．９１、１．４３；各组ａ－ＳＭＡ　细胞Ｔｉｇｅｒ　９２０图像分析仪结果：１．２２、１．８１、　关键词：反义ａ肌动蛋白；腺病毒；５／６肾切除大鼠　中图分类号：Ｒ３６５．６９２　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７１—８３４８（２００８）０８—０７９１—０２　Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｎａｌ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　５／６　ｎｅｐｈｒｅｃｔｏｍｉｚｅｄ　ｒａｔｓ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｔｒａｎｓｇｅｎｅ　ｏｆ　ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ａｌｐｈａ　ａｃｔｉｎ　ＧＡＮ　Ｌｅｉ，ＬＪ　Ｌｉａｎ，ＺＨＡ０　Ｈｏｎｇ—ｗｅｎ，ｅｔ　ａ１．　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｋｉｄｎｅｙ，Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ｔｈｅ　Ｔｈｉｒｄ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０００３８，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｏｆ　ｒｅｎａｌ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　５／６　ｎｅｐｈｒｅｃｔｏｍｉｚｅｄ　ｒａｔｓ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ　ｂｙ　Ｔｒａｎｓ—　ｇｅｎｅ　ｏｆ　Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　Ｖａｓｃｕｌａｒ　Ｓｍｏｏｔｈ　Ｍｕｓｃｌｅ　Ａｌｐｈａ　Ａｃｔｉｎ（ｐＡｄａｎｔｉ—ａ－ＳＭＡ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｏ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔ　５／６　ｎｅｐｈｒｅｃｔｏｍｉｚｅｄ　ｒａｔｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｐＡｄａｎｔｉ—ａ—ＳＭＡ．Ｒａｔｓ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ，ｗｅｉｇｈｔ，ｒｅｎａｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｎａｌ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｐａｔｈｏｌｏｇｙ　ｗｅｒｅ　ａｓｓｅｓｓｅｄ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａ—ＳＭＡ，ＴＧＦ－￣ｌ　ａｎｄ　ＰＤＧＦ－ＢＢ　ｉｎ　ｋｉｄｎｅｙ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　Ｔｉｇｅｒ　９２０．Ｒｅｓｕｌｔｓ　５／６　ｎｅｐｈｒｅｃｔｏｍｉｚｅｄ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｐＡｄａｎｔｉ—ａ—ＳＭＡ．Ｔｈｅ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　５／６　ｎｅｐｈｒｅｃｔｏｍｉｚｅｄ　ｒａｔｓ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｐＡｄａｎｔｉ—ａ—ＳＭＡ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｎｏｔ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｎａｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｎａｌ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｐａｔｈｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ　ｒａｔｓ　ｗａｓ　ｂｅｔｔｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｎｏｔ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ．Ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｏｆ　ａ—ＳＭＡ十ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｎｏｔ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＴＧＦ－ｆｌｌ十ａｎｄ　ＰＤＧＦ－ＢＢ＋ｃｅｌｌｓ　ｂｏｔｈ　ｓｈｏｗｅｄ　ｎｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｃｏｎｃｌｕ－　ｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ＲＦＢ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　５／６　ｎｅｐｈｒｅｃｔｏｍｉｚｅｄ　ｒａｔｓ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｐＡｄａｎｔｉ—ａ—ＳＭＡ　ｉｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ａｌｐｈａ　ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ　ｖｅｃｔｏｒ（ｐＡｄａｎｔｉ－ａ—ＳＭＡ）；ｒｅｎａｌ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ；５／６　ｎｅｐｈｒｅｃｔｏｍｉｚｅｄ　ｒａｔｓ　血管平滑肌ａ肌动蛋白（ａ—ｖａｓｃｕｌａｒ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ａｌｐｈａ　ａｃｔｉｎ，ａ－ＳＭＡ）重塑是肾脏固有细胞转分化的必需环节＿１］，肾脏　固有细胞转分化形成的肌成纤维细胞（ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＭＦ）或　类ＭＦ细胞是各种原因导致的肾间质纤维化（ＲＦＢ）和肾小球　硬化的病理基础［２　］，各种致／抑纤维化因子均需通过ＭＦ或　类ＭＦ细胞最终实现其作用［４　］。大鼠ａ－ＳＭＡ反义腺病毒载　射ｐＡｄａｎｔｉ－ａ－ＳＭＡ　０．５ｍＬ。　１．３实验分组双盲随机实验分组。Ａ组：正常对照；Ｂ组：　５／６肾切除大鼠；Ｃ组：ｐＡｄａｎｔｉ—ａ－ＳＭＡ转染的５／６肾切除大　鼠。实验终点：实验动物死亡或２Ｏ周后终止实验。留取静脉　血后处死并取肾脏固定保存。　１．４实验观测指标　体能在体外抑制ＴＧＦ－ｆｌ　诱导肾小管上皮细胞转分化＿６］，本实　验旨在探讨其能否在体抑制５／６肾切除大鼠的肾脏纤维化进　展。　１．４．１大鼠存活率　１．４．２血肌酐（ｓｅｒｕｍ　ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ，Ｓｃｒ）和尿素氮　１．４．３　肾脏病理及损伤指数评分包括ＨＥ、ＰＡＳ、Ｍａｓｓｏｎ染　１材料与方法　色。损伤指数评分计数方法参见赵雅妮［７　的方法。采用ＨＥ　切片，高倍镜下单盲观察２Ｏ个肾小球，按标准表１中６项指标　评分，计算其均值，作为该标本的肾小球损伤指数。低倍镜下　单盲依序观察左上、右上、左下、右下、中间５个肾小管间质视　野，按标准表２中８项指标评分，计算其均值，作为该标本的肾　１．１材料Ｗｉｓｔａｒ大鼠购自第三军医大学动物所。ｐＡｄａｎｔｉ—　ａ—ＳＭＡ工作液为自己构建　］。鼠抗人平滑肌肌动蛋白单克隆　抗体（ｍＡｂｌＡ４）购自北京中山公司，兔抗大鼠转移生长因子８　抗体和兔抗大鼠血小板衍化生长因子一ＢＢ购自武汉博士德公　司。　小管损伤指数。肾小球和肾小管损伤指数相加为肾损伤总指　Ｗｉｓｔａｒ　数。　１．２建立ｐＡｄａｎｔｉ－ｃｔ－ＳＭＡ转染５／６肾切除大鼠模型大鼠用大部分肾切除法（５／６肾切除法）建立慢性肾衰模型，右　肾静脉注入ｐＡｄａｎｔｉ—ａ—ＳＭＡ　１ｍＬ，以后每２周从尾静脉追加注　通讯作者Ｅ－ｍａｉｌ：Ｗｕｘｆｅｉ＠１２６．ｃｏｒｎ。　１．４．４　ａ—ＳＭＡ、ＴＧＦ－ｌｆ１、ＰＤＧＦ－ＢＢ的免疫组化及Ｔｉｇｅｒ　９２０　图像分析仪半定量分析分别制作不同抗体的免疫组化切片　维普资讯 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７９２　重庆医学２００８年４月第３７卷第８期　阳性细胞在Ａ组中少见，在Ｂ组和ｃ组中均大量广泛分布，以　后于２００倍下行连续５个视野的图像分析，计数阳性细胞数和　积分光密度（ｉｎｔｅｇｒａ　ｏｐｔｉｃａｌ　ｄｅｎｓｉｔ，ＩＯＤ）并计算平均光密度　（ａｖｅｒａｇｅ　ｏｐｔｉｃａｌ　ｄｅｎｓｉｔ，ＡＯＤ）值。　肾小管周围最常见；ＰＤＧＦ－ＢＢ阳性细胞分布基本同ＴＧＦ－￣　阳性细胞。所有的免疫组化切片用Ｔｉｇｅｒ　９２０图像分析仪测定　平均光密度并经方差检验发现ａ—ＳＭＡ　细胞各组间差异有统　计学意义，而ＴＧＦ－￣ｔ１　细胞和ＰＤＧＦ－ＢＢ　细胞均在Ｂ、Ｃ组间　差异无统计学意义，见表４。　表４　免疫组化半定量分析（　士５）　１．５统计学处理２结　果　用ＳＰＳＳ１０统计软件。存活率比较采用　检验；组间比较采用单因素方差分析，均数以ｉ±５表示。　２．１　ｐＡｄａｎｔｉ－ａ－ＳＭＡ转染５／６肾切除大鼠模型构建　７Ｏ％以　上大鼠能度过２周围手术期，９Ｏ　以上大鼠在１２周后发展为　终末肾，ｐＡｄａｎｔｉ－ａ—ＳＭＡ在肾脏组织中表达。　２．２大鼠存活率正常对照组大鼠存活率为９５　（１９／２０），　５／６肾切除组存活率约为５８．８　（２０／３５），ｐＡｄａｎｔｉ—ａ－ＳＭＡ处　理组存活率为８２．９％（２９／３６），Ｂ、Ｃ组均以２周后存活大鼠为　基准数，见表１。　表１　实验大鼠存活率　２．３大鼠肾功能Ｂ组ＢＵＮ和Ｓｃｒ达到大鼠尿毒症标准，Ｃ　组肾功能亦有明显损伤，程度较Ｂ组轻，见表２。　表２　大鼠肾功能变化（　±５　Ｊ　Ｓｃｒ；Ｆ＝１５６．８３０，Ｐ一０．００３，组间比较Ａ、Ｂ，Ｂ、Ｃ，Ｃ、Ａ，Ｐ均＜　０．０１；ＢＵＮ：Ｆ一１７３．３９１，Ｐ＝０．００５，组间比较Ａ、Ｂ，Ｂ、Ｃ，Ｃ、Ａ，Ｐ均＜　０．０１。　２．４　肾脏病理及损伤指数评分　Ａ组病理结构正常，Ｂ组表　现为终末肾，Ｃ组部分肾小球硬化，多数小球代偿性肥大，间质　可见部分纤维化，见插页１图１。取ＨＥ切片行肾小球损伤评　分、肾小管损伤评分及总评分，Ｂ组肾脏损害突出，Ｃ组评分显　著低于Ｂ组，见表３。　表３　肾损伤指数（　±５　Ｊ　肾小球损伤指数：Ｆ一１７９．９３８，ｐ－－０．００１，组间比较Ａ、Ｂ，Ｂ、Ｃ，Ｃ、　Ａ，Ｐ均＜Ｏ．０１；肾小管损伤指数：Ｆ＝２２３．１２７，Ｐ＜０．０００，组间比较Ａ、　Ｂ，Ｂ、Ｃ，Ｃ、Ａ，Ｐ均＜Ｏ．０１；肾损伤总指数：Ｆ－－２３７．８８５，Ｐ＜０．０００，组　间比较Ａ、Ｂ，Ｂ、Ｃ，Ｃ、Ａ，Ｐ均＜Ｏ．０１。　２．５免疫组化及半定量分析　各实验组大鼠肾组织行ａ—　ＳＭＡ、ＴＧＦｑ３１、ＰＤＧＦ－ＢＢ特异性免疫组化检查，Ａ组无或仅有　少量ａ—ＳＭＡ阳性细胞，Ｂ组中残余肾小球、肾小管和肾间质中　可见大量ａ－ＳＭＡ阳性细胞并呈弥漫分布，已经硬化的部分ａ—　ＳＭＡ阳性细胞明显减少；Ｃ组中在肥大的肾小球、肾小管和肾　间质中有少量散在ａ－ＳＭＡ阳性细胞，见插页１图２　ＴＧＦ－［？　ａ—ＳＭＡ：Ｆ＝９３．７５４，Ｐ＝０．００１，组间比较Ａ、Ｂ，Ｂ、ｃ，ｃ、Ａ，Ｐ均＜　０．０１；ＴＧＦ－［８１：Ｆ一７２９．９６５，Ｐ＜Ｏ．００２，组间比较Ａ、Ｂ，Ｃ、Ａ，Ｐ均＜　０．０１；Ｂ、Ｃ＝０．８５５＞０．０５；ＰＤＧＦ－ＢＢ：Ｆ＝９３０．７８９，Ｐ＜０．００４，组问比　较Ａ、Ｂ，Ｃ、Ａ，Ｐ均＜Ｏ．０１；Ｂ、Ｃ＝０．５５１＞Ｏ．０５。　３结　果　肾间质纤维化是复杂的病理过程，致病环节众多，影响因　素繁杂。大量研究表明ａ－ＳＭＡ基因在ＲＦＢ中起着不可替代　的作用。目前公认ＲＦＢ主要经历了致病因素一细胞损伤一促　纤维化细胞因子一肾固有细胞转分化一ＭＦ／类ＭＥ形成一　ＥＣＭ沉积一瘢痕形成这一基本病理过程，其中肾固有细胞向　ＭＦ或类ＭＦ转分化是各种原因所致ＲＦＢ的共同途径，ＭＦ则　是ＥＣＭ的主要来源，正是ＥＣＭ的不断堆积最终导致了ＲＦＢ。　ａ－ＳＭＡ是ＭＦ主要的细胞骨架和标记蛋白，是其表面Ｓｍａｄ家　族共同的结合蛋白，是ＭＦ结构和功能的基础，ａ－ＳＭＡ重塑过　程也是肾固有细胞转分化的必需步骤ｌ＿８］。近年来，很多学者利　用ＴＧＦ－￣ｔ　抗体、受体拮抗剂，ＴＧＦ－￣ｔ。基因和ＴＧＦ－１３。受体基　因反义技术等方法进行了大量体外和动物实验，这些方法抑制　ＲＦＢ作用强度不足而且不能持久，表明单独阻断某一因子，难　以获得理想效果。本实验选择的ａ－ＳＭＡ是肾间质纤维化的共　通途径，在ＲＦＢ中有独特作用。　无论是缺血、梗阻、中毒、免疫还是其他致病因素导致的　ＲＦＢ，ａ—ＳＭＡ重塑均是其不可逾越的关键环节。本实验中５／６　肾切除大鼠Ｓｃｒ为１３２．６ｔ￣ｍｏｌ／Ｌ，达到文献报道的１２０ｔｌｍｏｌ／Ｌ　慢性肾衰指标，为合格的对照组。利用ｐＡｄａｎｔｉ－ａ－ＳＭＡ转染　５／６肾切除大鼠，转染的大鼠存活率明显高于未转染的大鼠，　转染与未转染组间肾功能水平差异有统计学意义，说明反义ａ—　ＳＭＡ基因在体延缓肾脏纤维化有效。肾脏病理检查发现５／６　肾切除大鼠表现为终末肾而经ｐＡｄａｎｔｉ－ａ－ＳＭＡ转染的５／６肾　切除大鼠主要表现为代偿性肥大，表明转染后大鼠通过抑制ａ—　ＳＭＡ重塑而具有了耐受因高通透、高滤过及缺血缺氧所导致　的肾间质纤维化和肾小球硬化能力。ａ—ＳＭＡ特异性免疫组化　和半定量分析表明ａ－ＳＭＡ的表达与ＲＦＢ严重程度一致，与既　往大量研究吻合　］，进一步说明ｐＡｄａｎｔｉ－ａ－ＳＭＡ转染可以通　过抑制ａ－ＳＭＡ重塑而抑制ＲＦＢ。ａ—ＳＭＡ、ＴＧＦ－／３　、ＰＤＧＦ－ＢＢ　在未转染的５／６肾切除大鼠中有同向的表达变化趋势，与ＲＦＢ　正相关，与既往研究相符＿　ｊ；但在经ｐＡｄａｎｔｉ－ａ－ＳＭＡ转染的　５／６肾切除大鼠肾组织中，作者首次发现ＴＧＦ－￣ｔ。、ＰＤＧＦ－ＢＢ表　达与ａ—ＳＭＡ表达和ＲＦＢ呈现出分离现象，说明ｐＡｄａｎｔｂａ－　ＳＭＡ抑制５／６肾切除大鼠ＲＦＢ的过程是通过抑制ａ－ＳＭＡ重　塑而阻断ＴＧＦ一　和ＰＤＧＦ－ＢＢ等促纤维化（下转第７９５页）　维普资讯 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重庆医学２００８年４月第３７卷第８期　ＮＦ－￣Ｂｐ６５、ＩＣＡＭ一１及Ｆ４／８０水平与对照组的相当，肾脏也未　见明显病理变化。本实验结果提示：同样的狭窄程度，肾动脉　粥样硬化斑块破裂是造成肾脏损害的主要原因之一。动脉粥　样硬化本来就是血管的一种炎症反应，ＮＦ－￣Ｂｐ６５介导血管内　７９５　ｒａｋｕｌ　Ｋ，Ｋｏｖａｌｉｋ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｉｎ　ｒｅｎａｌ　［２］　Ｃｏｎｌｏｎ　ＰＪ，Ａｔｈｉｖａｓｃｕｌａｒ　ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｊ　Ａｍ　Ｓｏｃ　Ｎｅｐｈｒｏｌ，１９９８，９（２）：２５２．　［３］　王海燕．动脉粥样硬化性肾动脉狭窄［Ｊ］．中华内科杂志，　２００５，４４：８Ｏ１．　皮细胞损伤，有明显的激活动脉粥样硬化斑块，促使其不稳定　的作用＿５］。随着斑块破裂，斑块内的炎症因子（包括ＮＦ－￣Ｂ　［４］　Ｏｈａｓｈｉ　Ｒ，Ｍｕ　Ｈ，Ｙａｏ　ＱＺ，ｅｔ　ａ１．Ｃｅｌｌｕｌａｒ　ａｎｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ｗｉｔｈ　ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌｓ［Ｊ］．　Ｔｒｅｎｄｓ　Ｃａｒｄｉｏｖａｓ　Ｍｅｄ，２００４，１４：１８７．　ｐ６５）及微血栓等血管活性物质随血液到达肾脏，这些血管活性　物可激活肾脏内的ＮＦ－￣Ｂ，导致ＮＦ－￣Ｂ　ｐ６５及受控的ＩＣＡＭ一１　等细胞因子高表达。核因子一．ｃＢ是一种与炎症递质的产生、细　［５］　Ｗｉｌｓｏｎ　ＳＨ，Ｂｅｓｔ　ＰＪ，Ｅｄｗａｒｄｓ　ＷＤ，ｅｔ　ａ１．Ｎｕｃｌｅａｒ　ｆａｃｔｏｒ－　ｋａｐｐａ　Ｂ　ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｓ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ｐｌａｑｕｅ　ａｎｄ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｕｎｓｔａｂｌｅ　ａｎｇｉｎａ　ｐｅｃ—　胞增殖、细胞外基质交联和细胞凋亡有关的转录因子，其活化　后易位到核，对靶基因尤其是涉及炎症和免疫反应等方面的基　因表达起着关键性的调控作用［６］。ＩＣＡＭ一１的表达上调，可通　ｔｏｒｓ［Ｊ］．Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，２００２，１６０：１４７．　　Ａ，Ｐｉｓａｎｏ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ　ｄｉｔｈｉｏ—　［６］　Ｃｕｚｚｏｃｒｅａ　Ｓ，Ｒｏｓｓｉｃａｒｂａｍａｔｅ　ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｏｒｇｅｎ　ｆａｉｌｕｒｅ　ｉｎ—　过促进单核细胞在动脉内膜积聚参与动脉粥样硬化的形成Ⅲ７］；　促使单核巨噬细胞募集和黏附，巨噬细胞的黏附可激活ＮＦ－　ｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｚｙｍｏｓａｎ　ｉｎ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ　Ｃａｒｅ　Ｍｅｄ，２００３，　２９（１１）：２０１６．　ＪｃＢ＿８］，ＮＦ＿．ｃＢ的再次激活又可以激活单核巨噬细胞的增殖基　因促使其活化Ⅲ９］。巨噬细胞活化促使炎症反应加强。如此循　环往复，使肾脏内的炎症反应不断加强，最终是炎症因子大量　［７］　赵向彤，潘优津，金胜鑫．糖调节受损者血清细胞间黏附　分子一１水平的变化［Ｊ］．重庆医学，２００７，３６（９）：８６２．　ａｔｃｈｅｎｋｏ　Ｌ，Ｒｏｍａｎｏｖ　Ｓ，Ｍａｌｉｎｉｎａ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　［８］　Ｄｉ释放、肾内血管内皮损伤、加重炎症反应和微血栓形成。因此，　（１）肾动脉粥样硬化斑块发生破裂，首先是动脉炎症引起，继而　ｏｆ　ｎｏｖｅｌ　ｍｅｄｉａｔｏｒｓ　ｏｆ　ＮＦ＿｛ｋａｐｐａ）Ｂ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｇｅｎｏｍｅ－ｗｉｄｅ　波及到下游的肾脏发生炎症性损害。ＮＦ＿．ｃＢ的活化占有重要　地位。（２）治疗ＡＲＡＳ疾病的时机应考虑到肾动脉粥样硬化　斑块的活动性，肾动脉狭窄程度不应是衡量治疗时机的惟一指　标　ｓｕｒｖｅｙ　ｏｆ　ｍｏｎｏｃｙｔｅ　ａｄｈｅｒｅｎｃｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｌｅｕｋｏｃ　Ｂｉｏｌ，２００５，７８（６）：１３６６．　ｍ　ＪＨ，Ｈａ　ＩＳ，Ｈｗａｎｇ　ＣＩ，ｅｔ　ａ１．Ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｐｒｏｆｉ—　［９］　Ｋｉｌｉｎｇ　ｏｆ　ａｎｔｉ—ＧＢＭ　ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ　ｍｏｄｅｌ：ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　参考文献：　ＮＦ－｛ｋａｐｐａ）Ｂ　ｉｎ　ｉｍｍｕｎｅ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｋｉｄｎｅｙ　ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｋｉｄ—　ｎｅｙ　Ｉｎｔ，２００４，６６（５）：１８２６．　［１］黄朝晖，吴雄飞，赵洪雯，等．ＡｐｏＥ　一小鼠肾动脉狭窄及肾　损害特点观察［Ｊ］．第三军医大学学报，２００７，２９（１９）：　１８４４．　（收稿日期：２００７—１２—０５）　（上接第７９２页）　ｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｐａｔｈｏｌ，２００１，１（４）：２９９．　［６］　干磊，吴雄飞，吴亿．反义ａ肌动蛋白基因腺病毒载体对　ＴＧＦ２，￣　刺激的肾小管上皮细胞转分化的影响［Ｊ］．第三　军医大学学报，２００７，２９（１３）：１３０１．　因子导致的ＲＦＢ。　虽然载体反义基因治疗的许多关键技术尚不完善，ｐＡｄａ—　ｎｔｉ—ａ－ＳＭＡ的实用尚遥远，但本实验的结果为ＲＦＢ治疗奠定　了扎实的理论基础，相关技术进展后，将可能成为临床有效的　治疗方法。　参考文献：　［７］　赵雅妮，李惊子，王海燕．血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂与血　管紧张素转换酶抑制剂抗大鼠肾脏纤维化的作用及机制　探讨［Ｊ］．中华老年多器官疾病杂志，２００２，１（１）：３６．　　ＭＰ，Ｆｅｒｒａｒｉｏ　Ｆ，Ｇｉａｒｄｉｎｏ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ—ｒｕｅｓ—　［８］　Ｒａｓｔａｌｄｉｅｎｃｈｙｍａｌ　ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｕｂｕｌａｒ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　［１］Ｓｃｈｏｒｃｈ　Ｗ，Ｓｅｅｍａｙｅｒ　ＴＡ，Ｇａｂｂｉａｎｉ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｍｙｏｆｉ一　ｂｒｏｂｌａｓｔ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｓｕｒｇ　Ｐａｔｈｏｌ，１９９８，２２（２）：１４１．　［２］　付小兵，程飚，盛志勇．创面愈合与瘢痕形成的分子学研　究［Ｊ］．中国临床康复，２００２，６（２）：４６４．　ｌ　ＧＲ，Ｃａｂｂｅｌｌ　ＪＨ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　［３］　Ｅｆｅｎｄｙ　ＪＬ，Ｃａｍｂｅｌｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｃｕｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｙｏｆｉｂｒｏ－　ｒｅｎａｌ　ｂｉｏｐｓｉｅｓ［Ｊ］．Ｋｉｄｎｅｙ　Ｉｎｔ，２００２，６２（１）：１３７．　ｄａ　Ｈ，Ａｌｐｅｒｓ　ＣＥ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　［９］　Ｊｏｈｎｓｏｎ　ＲＪ，Ｌｉｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌ　ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ　ｂｕｙ　ｒａｔ　ｍｅｓａｎｇｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｉｍｍｕｎｅｃｏｍｐｌｅｘ　ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｉｎｖｅｓｔ，１９９９，８７（３）：　８４７．　ｂｌａｓｔｓ　ｉｎ　ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　ｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ　ｔｉｓｓｕｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｐａｔｈａｌ，２０００，　１９２：２５７．　［１０］Ｇｏｕｍｅｎｏｓ　ＤＳ，Ｔｓａｍａｎｄａｓ　ＡＣ，Ｏｌｄｒｏｙｄ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｔｒａｎｓ—　ｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ－ｂｅｔａ（１）ａｎｄ　ｍｙｏｆＩｂｒｏｂｌａｓｔｓ：ａ　ｐｏ—　ｔｅｎｔｉａｌ　ｐａｔｈｗａｙ　ｔｏｗａｒｄｓ　ｒｅｎａｌ　ｓｃａｒｒｉｎｇ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｇｌｏｍｅｒ—　　Ｒ．Ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｆｉｂｒｏ—　［４］　Ｋｕｎｚ　Ｓｃｈｕｇｈａｒｔ　ＬＡ，Ｋｎｕｅｃｈｅｌｂｌａｓｔｓ（ｐａｒｔ　Ｉ）：Ａｃｔｉｖｅ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｐａｒｔｉｃｉｐａｎｔｓ　ｉｎ　ｔｕｍｏｒ　ｄｅ—　ｕｌａｒ　ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｎｅｐｈｒｏｎ，２００１，８７（３）：２４０．　（收稿日期：２００７－１２－０５）　ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｈｉｓｔｏｌ　Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ，２００２，　１７（２）：５９９．　ｕ　Ｙ，Ｔｅｍｐｌｅｔｏｎ　ＤＭ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍｅｄｉ一　［５］　Ｌｉ维普资讯 http://www.cqvip.com (图1、2见正文792页)图1各组肾脏病理(Masson，X100)(图，…3见正文第794页)．～。一、图…2B…、C组“aSMA阳…一胞“…”。性细表达、X(200’)未破裂蛆破裂蛆图3ARAS斑块破裂与F4／80表达(图4～7见正文第799页)图4对照组16周肾小球毛细血管襻(×2900)图6ADR组第4周肾小球足细胞足突广泛融合。图5对照组16周肾小管上皮细胞(×7000)图7ADR组第4周肾小管上皮细胞线粒体肿胀，和空泡变显著