微小RNA-27a在肝癌组织的表达及其机制解析

主堡塞墼窆Ｅ整苤查！Ｑ！鱼生兰旦箜翌鲞箜璺翅ｇ！也』垦翌！些珞：△巳也垫！鱼：坠！：塑，塑！：堡・临床研究・微小ＲＮＡ一２７ａ在肝癌组织的表达及其机制傅德强许天文吴文艺赵爱月戴毅君林建光赖金枝作者单位：３６２０００福建泉州，福建医科大学附属第二医院肿瘤内科（傅德强、许天文、赵爱月、戴毅君、林建光、赖金枝），普通外科（吴文艺）通信作者：许天文，Ｅｍａｉｌ：ｘｕｔｉａｎｗｅｎ５３＠１６３．ｔｏｍＤＯＩ：１０．３７６０／ｅｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－９０３０．２０１６．０４．０６８【摘要】目的检测微小ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ，ｍｉＲ）一２７ａ在肝癌中的表达，探讨ｍｉＲ－２７ａ在肝癌细胞中的功能和作用机制。方法采用实时定量聚合酶链反应（Ｒｅａｌ・ｔｉｍｅＰＣＲ）检测ｍｉＲ－２７ａ在肝癌组织中的表达，细胞计数试剂盒（ＣＣＫ一８）细胞增殖实验检测ｍｉＲ－２７ａ对肝癌细胞的增殖影响，荧光素酶报道载体系统验证ｍｉＲ－２７ａ对Ｓｐｒｏｕｔｙ２（Ｓｐｒｙ２）基因３’非翻译区的作用，Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ检测ｍｉＲ－２７ａ对Ｓｐｒｙ２基因ｍＲＮＡ的抑制作用。结果ｍｉＲ－２７ａ在肝癌组织的表达量（０．６２±０．５４）比癌旁组织（Ｏ．２６±０．１３）显著上调（Ｐ＜０．０１），而且肝癌肿块越大的患者ｍｉＲ－２７ａ的表达越高（＞５ｅｍ组０．９２±０．６６，≤５ａｍ组０．３７±０．２７，Ｐ＜０．０５），提示ｍｉＲ－２７ａ的表达与肿瘤大小呈正相关。ＣＣＫ－８结果显示ｍｉＲ－２７ａ可显著促进肝癌细胞的增殖（Ｏ、２４、４８、７２ｈ的吸光度值分别为：对照组Ｏ．５４±０．Ｏｌ、Ｏ．７４±０．０４、０．９４±０．０３、１．２３±０．０７，ｍｉＲ－２７ａ转染组０．５５±０．０１、０．７１±０．０２、１．０２±０．０８、１．５９±０．０９，Ｐ＜０．０１）。荧光素酶报道载体结果说明ｍｉＲ－２７ａ直接作用于Ｓｐｒｙ２基因的３’非翻译区（ｍｉＲ－２７ａ野生型组抑制率约４０％，突变型组约５％）。Ｒｅａｌ．ｔｉｍｅＰＣＲ检测结果说明ｍｉＲ－２７ａ对Ｓｐｒｙ２基因的ｍＲＮＡ有显著的抑制作用（ｍｉＲ－２７ａ转染组０．００６０．００１５±０．０００５，对照组０．０１２０±０，抑制率约４７％，Ｐ＜０．０５）。结论ｍｉＲ－２７ａ在肝癌中高表达，可通过抑制抑癌基因Ｓｐｒｙ２的表达促进肝癌细胞的增殖。【关键词】癌，肝细胞；微小ＲＮＡ－２７ａ；细胞增殖；Ｓｐｒｏｕｔｙ２ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡ一２７ａｉｎｈｅｐａｔｏｃｅＨｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａＷｕｌｅｅｎｙｉ，ＺｈａｏＡｉｙｕｅ，Ｄａｉｒｉｊｕｎ，ＬｉｎＪｉａｎｇｕａｎｇ，ｋｉ．“ｎｚｈｉＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴｕｍｏｒＭｅｄｉｃｉｎｅ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄＡ顷ｔｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＦｕｊｉａｎＦｕＤｅｑｉａｎｇ，ＸｕＴｉａｎｗｅｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｎａ，曲ｏｕ３６２０００，Ｃｈｉｎａ（几ＤＱ，Ｘｕ邢，ＺｈａｏＡＹ，ＤａｉＹＪ，ＬｉｎＪＧ，ＬａｉＪＺ）；ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｅｒａｌＳｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ。Ｆｕｊｉａｎ肘ｅｄ幻ａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｕａｎｚｈｏｕ３６２０００，Ｃｈｉｎａ（Ｗｕ聊７）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：Ｘｕ死ａｎｗｅｎ．Ｅｍａｉｌ：ｘｕｔｉａｎｗｅｎ５３＠１６３．ｃｏｍＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｍｉｅｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ，【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅｍｉＲ）一２７ａｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨＣＣ）．ＭｅｍｏｔｉｓＲｅａｌ—ｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎａｃｔｉｏｎ（Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ）ｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｃｏｕｎｔｉｎｇｔｏＭｅｄｉｃａｌｒｅ—ｅｘａｍｉｎｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ一２７ａｉｎＨＣＣｔｉｓｓｕｅｓ．ＣｅＨｔｏｋｉｔ一８（ＣＣＫ一８）ｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｓｓａｙｗａｓｕｓｅｄｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｍｉＲ一２７ａｉｎＨＣＣｃｅｌｌｓ．ＬｕｅｉｆｅｒａｓｅａｓｓａｙｗａｓｍａｄｅｔｏｖａｌｉｄａｔｅｔｈｅｒｏｌｅｏｆｍｉＲ一２７ａｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＳｐｒｏｕｔｙ２（Ｓｐｒｙ２）３’ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄｎｌｉＲ一２７ａｏｎｒｅｇｉｏｎ（３’Ｕ’ｍ）．Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｍＲＮＡｌｅｖｅｌｏｆＳｐｒｙ２．ＲｅｓｕｌｔｓＭｉＲ一２７ａｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎＨＣＣｔｉｓｓｕｅｓ（０．６２±０．５４）ａｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｍａｔｃｈｅｄｎｏｒｍａｌｔｉｓｓｕｅｓ（０．２６±０．１３）．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｒｎｉＲ一２７ａｗａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｕｍｏｒｓｉｚｅ（＞５ｃｍ：０．９２±０．６６，ａｎｄ≤５ｅｍ：０．３７±０．２７，Ｐ＜０．０５）．ＣｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｓｓａｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｍｉＲ一２７ａｃｏｕｌｄｐｒｏｍｏｔｅＨＣＣｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈ（ＡｖａｌｕｅｉｎｍｉＲ一２７ａｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｇｒｏｕｐ：０．５５±０．０１，０．７１±０．０２，１．０２±０．０８，１．５９±０．０９，ａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ：０．５４±０．０１，０．７４±０．０４．０．９４±０．０３，１．２３士０．０７ａｔ０，２４，４８，７２ｈｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，Ｐ＜０．０１）．Ｌｕｅｉｆ－ｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｍｉＲ一２７ａｃｏｕｌｄｄｉｒｅｃｔｌｙｔａｒｇｅｔＳｐｒｙ２３’ｕＴＲ（ｗｉｌｄｔｙｐｅｇｒｏｕｐ：４０％，ａｎｄｍｎ－ｔａｎｔｇｒｏｕｐ：５％）．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ一２７ａｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅＳｐｒｙ２ｍＲＮＡｅｒａｓｅａｓｓａｙｌｅｖｅｌ（ｍｉＲ一２７ａｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｇｒｏｕｐ：０．００６５±０．０００５，ａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ：０．０１２０±０．００１０，ｉｎｈｉｂｉ—ｔｉｏｎｒａｔｅ：４７％．Ｐ＜０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＵｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｍｉＲ一２７ａｐｒｏｍｏｔｅｓｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｂｙｄｉｒｅｃｔｌｙｔａｒｇｅｔｉｎｇＳｐｒｙ２３’ＵＴＲｉｎＨＣＣ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ；ＭｉｃｍＲＮＡ一２７ａ；Ｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；Ｓｐｍｕｔｙ２微小ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ，ｍｉＲ）是一类长２０一２４个核酸的小非编码ＲＮＡ，并可通过抑制转录和降解ｍＲＮＡ调节基因表达‘１｜。ｍｉＲＮＡ主要通过结合ｍＲＮＡ的３’非翻译区，影响靶ｍＲＮＡ的稳定性或抑制其翻译。研究万方数据史堡塞墼处型苤查垫！！堡垒旦筮箜鲞筮垒翅堡！也』垦狸！！垡：垒四！！Ｑ！！：！！！：！！：№：兰结果表明，ｍｉＲＮＡ突变或者异位表达与多种人类癌症相关，ｍｉＲＮＡｓ可以起到肿瘤抑制基因或者癌基因的功能，可能在癌症的发生发展中起重要作用川。本研究旨在探讨ｍｉＲ－２７ａ在肝癌中的表达和功能机制。资料与方法１．一般资料：本研究由福建医科大学附属第二医院伦理委员会批准，纳入本研究中的患者均签署了书面同意书。收集２０例自２０００年至２０１４年原发性肝癌患者接受肝癌手术切除的癌组织和癌旁组织，所有组织均经过病理检查确诊，并收集患者的临床资料信息。２．实时定量聚合酶链反应（Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ）检测：总ＲＮＡ抽提采用Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司的Ｔｒｉｚｏｌ试剂。ｍｉＲ一２７ａ定量分析采用ＡＢＩ公司的ＴａｑＭａｎｍｉｃｒｏＲＮＡ检测试剂盒。该试剂盒包括特异的逆转录引物和相应的探针，采用Ｕ６小核ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）作为内参。ｃＤＮＡ合成用ＴａＫａＲａ公司的ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ逆转录试剂盒。Ｒｅａｌ．ｔｉｍｅＰＣＲ采用ＳＹＢＲＰｒｅｍｉｘ（ＴａＫａＲａ公司），１３－肌动蛋白（［３－ａｃｔｉｎ）作为内参。Ｓｐｒｏｕｔｙ２（Ｓｐｒｙ２）基因的定量分析引物：５’一ＴＣＣＧＡＡＡＣＡＣＣＡＡＴＧＡＧＴＡ．３’和５’．ＴＡＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＣＡＧＡＧＧＧ－３’。Ｂ—ａｃｔｉｎ弓Ｉ物：５’一ＴＴ—ＧＴＹＡＣＡＧＧＡＡＧＴＣＣＣＴＹＧＣＣ一３’和５’．ＡＴＧＣＴＡＴＣＡＣ．ＣＴＣＣＣＣＴＧＴＧＴＧ．３’。３．细胞培养：ＳＭＣＣ－７７２１肝癌细胞和ＨＥＫ－２９３Ｔ用含１０％胎牛血清的杜尔伯科改良伊格尔培养基（ＤＭＥＭ）培养。培养基中含青霉素１００Ｕ／ｍｌ，链霉素５０恤ｇ／ｍｌ。４．ｍｉＲＮＡ模拟物和细胞转染：ｍｉＲ－２７ａ模拟物和对照ＲＮＡ购自广州锐博生物公司。转染采用Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司的Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００。５．细胞增殖检测：细胞增殖采用细胞计数试剂盒（ＣＣＫ．８）试剂（Ｄｏｊｉｎｄｏ公司）。９６孔板种植２５００个细胞，细胞处理后，每孔加人１０斗ｌＣＣＫ一８，３７。Ｃ孵育２ｈ，检测４５０ｎｍ波长吸光度（Ａ）值。９６孔板每组３个复孔，实验重复３次。６．荧光素酶报告载体构建及检测：从基因组ＤＮＡ扩增Ｓｐｒｙ２的３’非翻译区，克隆到荧光素酶报道载体的荧光素酶报告基囚的下游。克隆引物为：５’－ＣＧＧＡＡＴＦ・ＣＣＡＴＣＡＴＩ＇ＡＡＴＣＡＧＧＡＡＴＡＴｒＡＣ．３’和５’一ＧＣＴＣＴＡＧＡＡ一唧’ＡＴ棚’ＧＧＡＣＡＴＡＴＧＣ．３’。使用搭桥ＰＣＲ方法进行突变载体的构建。ＨＥＫ－２９３Ｔ细胞接种于９６孑Ｌ板，第２天进行报告载体和ｍｉＲ一２７ａ模拟物转染，转染４８ｈ后，采用双荧光素酶检测试剂（Ｐｒｏｍｅｇａ公司）检测荧光素酶活性。万方数据７．统计学方法：应用ＳＰＳＳ１７．０统计软件分析，采用ｔ检验。以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。结果１．商Ｒ－２７ａ在肝癌组织中高表达：通过Ｒｅａｌ．ｔｉｍｅＰＣＲ的方法，检测２０对肝癌标本和癌旁组织中ｍｉＲ一２７ａ的表达，可见ｍｉＲ一２７ａ在肝癌中的表达显著上调（尸＜０．０１），癌组织的平均表达水平（０．６２±０．５４）是癌旁组织（０．２６４－０．１３）的２．４倍。根据肿瘤大小，患得分成肿块＞５ｃｍ组和肿块≤５ｅｍ两组，可见肝癌肿块越大的患者ｍｉＲ．２７ａ的表达越高（Ｐ＜０．０５），其中肿块＞５ｅｍ组的表达水平为０．９２±０．６６，肿块≤５ｃｍ组的表达水平为０．３７±０．２７，提示ｍｉＲ－２７ａ的表达与肿瘤大小呈正相关。２．ｍｉＲ－２７ａ可促进肝癌细胞的增殖：将ｍｉＲ．２７ａ模拟物转染到肝癌细胞ＳＭＣＣ－７７２１，不同时间点（０、２４、４８和７２ｈ）通过ＣＣＫ一８检测细胞的生长，其中对照组Ａ值分别为：０．５４４－０．０１、０．７４±０．０４、０．９４－４－０．０３和１．２３±０。０７，ｍｉＲ－２７ａ转染组Ａ值分别为：０。５５±０．０１、０．７１±０．０２、１．０２４－０．０８和１．５９±０．０９。结果显示，过表达ｍｉＲ．２７ａ可显著促进肝癌细胞ＳＭＣＣ－７７２１的生长（Ｐ＜０．０１）。３．ｍｉＲ－２７ａ特异靶向Ｓｐｒｙ２基因的３’非翻译区：根据ｍｉＲＮＡ靶基因预测，可见Ｓｐｒｙ２基因的３’非翻译区存在ｍｉＲ－２７ａ的结合位点。进一步，将Ｓｐｒｙ２的３’非翻译区克隆到荧光素酶报告载体ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ基因的下游，通过与ｍｉＲ一２７ａ模拟物共转，双荧光素酶检测显示ｍｉＲ一２７ａ可抑制荧光素酶报告载体的活性（抑制率约４０％），并且将结合位点突变后，发现这种抑制作用就消失了（抑制率约５％），说明ｍｉＲ－２７ａ可直接与这个位点结合作用于Ｓｐｒｙ２的３’非翻译区。４．ｍｉＲ－２７ａ可调控Ｓｐｒｙ２基因的表达：将ｍｉＲ－２７ａ模拟物转染到肝癌细胞ＳＭＣＣ－７７２１，２ｄ后收集细胞，抽提ＲＮＡ，检测Ｓｐｒｙ２的ｍＲＮＡ表达，可见ｍｉＲ－２７ａ可显著抑制Ｓｐｒｙ２的ｍＲＮＡ水平（对照组０．０１２０－４－０．００１０，ｍｉＲ－２７ａ转染组０．００６５４－０．０００５），抑制率约４７％（Ｐ＜０．０５），说明ｍｉＲ－２７ａ可抑制Ｓｐｒｙ２的表达。讨论既往文献报道，ｍｉＲＮＡ在细胞增殖、凋亡等各个方面都起到重要作用１３圳。本研究结果显示，ｍｉＲ．２７ａ在肝癌组织中呈高表达，与肿瘤大小呈正相关，可促进肝癌细胞的增殖；进一步研究表明，ｍｉＲ－２７ａ可直接作用与抑癌基因Ｓｐｒｙ２的３’非翻译区，抑制其表达。结果提示ｍｉＲ．２７ａ在肝癌具有重要的临床意义和功能。主堡塞墅处型盘查！！！！生垒旦箜！！鲞箜！塑垦！也』垦堑！！坚：垒Ｐ亘！！！！！：ｙ！！：！！：盟！：兰・１０９３・我们通过荧光素酶报告载体鉴定了Ｓｐｒｙ２为ｍｉＲ－２７ａ的一个靶基因。Ｓｐｒｙ２是Ｓｐｒｏｕｔｙ基因家族的Ａ１７２增殖和凋亡的影响［Ｊ］．中华实验外科杂志，２０１０，２７（１０）：１３７５—１３７７．ＮａｎＹ，ＺｈｏｎｇＹ，ＫａｎｇＣＳ，ｅｔａ１．ＳｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆｍｉｃｍＲＮＡ－４５１ｏｎ一员。Ｓｐｒｏｕｔｙ基因首先是在果蝇的胚胎中，研究肺部的分枝发育情况发现的¨Ｊ。研究结果表明，Ｓｐｒｏｕｔｙ蛋白是受体酪氨酸激酶（ＲＴＫ）的拮抗剂，可阻遏Ｒａｓ／丝裂原活化蛋白（ＭＡＰ）信号通路，抑制细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）的磷酸化∞引。Ｓｐｒｏｕｔｙ基因有４个成员：Ｓｐｒｏｕｔｙｌ、Ｓｐｒｙ２、Ｓｐｒｏｕｔｙ３和Ｓｐｒｏｕｔｙ４。其中Ｓｐｒｙ２研究比较最多，且在很多癌症中发现Ｓｐｒｙ２的表达是下调的，如乳腺癌‘９Ｉ、前列腺癌‘１０。１３以及肝癌口２１等，Ｓｐｒｙ２［６］［５］［４］ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｇｌｉｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅＡ１７２ｉｎｖｉｔｒｏ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＥｘｐＳｕｒｇ，２０１０，２７（１０）：１３７５－１３７７．ＤＯＩ：１０．３７６０／ｅｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－９０３０．２０１０１０．００２．虞亦鸣，周浩杰，谭云山，等．ｅｒｈｌＭ／ＨＥＲ４在胃癌的表达［Ｊ］．中华实验外科杂志，２００８，２５（１）：４１．ＹｕＹＭ，Ｚｈｏｕ｝王Ｊ，ＴａｎＹＳ，ｅｔａ１．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅｒｂＢ４／ＨＥＲ４ｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＥｘｐＳｎｒｇ，２００８，２５（１）：４１．ＤＯＩ：１０．３３２１／ｊ．ｉｓｓｎ：１００１－９０３０２００８．０１．０４２．ＨａｅｏｈｅｎＮ，ＫｒａｍｅｒＳ，ＳｕｔｈｅｒｌａｎｄＤ，ｅｔａ１．ＳｐｒｏｕｔｙｅｎｃｏｄｅｓａｎｏｖｅｌａｎｔａｇｏｎｉｓｔｏｆＦＧＦｓｉｇｎａｌｉｎｇｔｈａｔｐａｔｔｅｒｎｓａｐｉｃａｌｂｒａｎｃｈｉｎｇｏｆｔｈｅｄｒｏ－ａｉｒｗａｙｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，１９９８，９２（２）：２５３－２６３．ＤＯＩ：１０．１０１６／Ｓ００９２－８６７４（１３０）８０９１９－８．ｓｏｐｈｉｌａＣａｓｅｉＴ，Ｖｉｎ６ｓＪ，ＦｒｅｅｍａｎＭ．Ｓｐｒｏｕｔｙ，ａｌｌｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆＲａｓ可抑制癌细胞的增殖，被认为是一个抑癌基因。Ｓｐｒｙ２在癌中下调的机制尚未完全清楚，可能是由不同因素或多种因素引发的。本研究结果显示，ｍｉＲ－２７ａ可作用Ｓｐｒｙ２的３’非翻译区并直接抑制Ｓｐｒｙ２的ｍＲＮＡ表达，提供了Ｓｐｒｙ２在癌症中下调的一个新机制，即通过［８］［７］ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，１９９９，９６（５）：６５５－６６５．ＤＯＩ：１０．１０１６／Ｓ００９２．８６７４（ｏｏ）８０５７６－０．ＹｕｓｏｆｆＰ，ＬａｎＤＨ，ＯｎｇＳＨ，ｅｔａ１．Ｓｐｍｕｔｙ２ｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅＲａｓ／ＭＡＰｋｉ—ｎａｓｅｐａｔｈｗａｙｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＲａｆ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００２，２７７（５）：３１９５－３２０１．ＤＯＩ：１０．１０７４／ｊｂｅ．Ｍ１０８３６８２００．ＨａｎａｆｕｓａＨ，ＴｏｒｉｉＳ，ＹａｓｕｎａｇａＴ，ｅｌａ１．ＳｐｒｏｕｔｙｌａａｎｄＳｐｒｏｕｔｙ２ｐｒｏｖｉｄｅｅｏｎｔｍｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒｔｈｅＲａｓ／ＭＡＰＫｓｉｇｎａｌｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＮａｔｍｉＲＮＡ的调控作用。由于Ｓｐｒｙ２的功能已有文献报道，因此ｓｐ叫２是ｍｉＲ一２７ａ在肝癌细胞中促进增殖作用的一个重要功能靶基因，还可以进一步通过功能恢复实验来证实。参考文献＿二ＣｅｌｌＢｉｏｌ，２００２，４（１１）：８５０－８５８．ＣＷ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｒａｓ／ｍｉｔｏｇｅｎ．ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｂｒｅａｓｔＤＯＩ：１０．】０３８／ｎｃｂ８６７．［９］ｋＴＬ，ＹｕｓｏｆｆＰ，Ｆｏｎｇｋｉｎａｓｅｐａｔｈｗａｙｉｎｈｉｂｉｔｏｒａｎｄｌｉｋｅｌｙｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｐｒｏｕｔｙ１ａｎｄＳｐｍｕｔｙ２ａｒｅｄｅｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００４，６４（１７）：６１２７－６１３６．ＤＯＩ：１０．１１５８／０００８－５４７２．ＣＡＮ－０４．１２０７［１０］ＭｃＫｉｅＡＢ，ＤｏｕｇｌａｓｔｈｅｈｕｍａｎＤＡ，ＯｌｉｊｓｌａｇｅｒｓＳ，ｅｔａ１．ＥｐｉｇｅｎｅｔｉｃｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＳｐｒｏｕｔｙ２（ｈＳＰＲＹ２）ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｉｎｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．刘辉，贾招辉，王晓彬，等．微小ＲＮＡ一１００下调ＳＩＯＯＡ４表达抑制膀胱癌细胞迁移［Ｊ］．中华实验外科杂志，２０１５，３２（６）：１２２７一１２２９．ＬｉｕＯｎｅｏｇｅｎｅ，２００５，２４（１３）：２１６６－２１７４．ＤＯＩ：１０．１０３８／ｓｊ．ｏｎｃ．１２０８３７１．ＦｒｉｔｚｓｃｈｅＳ，ＫｅｎｚｅｌｍａｎｎＭ，ＨｏｆｆｍａｎｎＭＪ．ｅｔａｌＣｏｎｃｏｍｉｔａｎｔｄｏｗｎ．Ｈ，ＪｉａＺＨ，ＷａｎｇＸＢ，ｅｔａ１．ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆｍｉｅｒｏＲＮＡ一１００ｏｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＳＰＲＹｌＲｅｌａｔａｎｄＳＰＲＹ２ｉｎｐｒｏｓｔａｔｅｃａｒｃｉｎｏｍａ『Ｊ］．Ｅｎｄｏｃｒｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｂｌａｄｄｅｒｕｒｏｔｈｅｌｉａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓｔｈｒｏｕｇｈｄｏｗｎ．ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＳ１００Ａ４１２２７．１２２９．ＤＯＩ：１０．３７６０／ｅｍａ．ｉ．ｉｓｓｎ．１００１－９０３０．２０１５．０６．００４Ｃａｎｃｅｒ，２００６，１３（３）：８３９－８４９．１．０１１９０．ＡＢ，ｅｔａ１．Ｓｐｒｏｕｔｙ２，ａｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｉｔｏ．ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＥｘｐＳｕｒｇ，２０１５，３２（６）：ＤＯＩ：１０．１６７７／ｅｒｃ［１２］ＦｏｎｇＣＷ，ＣｈｕａＭＳ，ＭｃＫｉｅｃａｎｃｅｒｌＪ１．ＡｎｎｕＲｅｖ１ｕｌａｒｇｅｎ・ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｓｉｇｎａｌｉｎｇ，ｉｓｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌ．心ＧａｒｚｏｎＲ，ＣａｌｉｎＧＡ，ＣｒｏｅｅＣＭ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｓｉｎｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００６，６６（４）：２０４８－２０５８．（收稿日期：２０１５．１２．１０）Ｍｅｄ，２００９，６０（１）：１６７—１７９．ＤＯＩ１０．１１４６／ａｎｎｕｒｅｖ．ｍｅｄ．５９．０５３００６．１０４７０７．ＤＯＩ：１０．１１５８／０００８．５４７２．ＣＡＮ－０５．１０７２．口１Ｊ南阳，钟跃，康春生，等．ｍｉｃｒｏＲＮＡ－４５１对人脑胶质瘤细胞株读者・作者・编者・本刊对图表的要求作者投稿时，原稿中若有图示，每幅图表应单占ｌ页，集中附于文后，分别按其在正文中出现的先后次序连续编码。每幅图应冠有图题。说明性的文字应置于图下方注释中，并在注释中标明图表中使用的全部非公知公用的缩写。线条图应墨绘在白纸上，高宽比例以５：７为宜。以计算机制图者应提供激光打印图样。Ｎ）Ｃ医ｔｇ求有良好的清晰度和对比度；图中需标注的符号（包括箭头）请用另纸标上，不要直接写在照片上。每幅图的背面应贴上标签，注明图号、方向及作者姓名。若刊用人像，应征得本人的书面同意，或遮盖其能被辨认出系何人的部分。大体标本照片在图内应有尺度标记。病理照片要求注明染色方法和放大倍数。图表中如有引自他刊者，应注明出处。电子版投稿中图片建议采用ＪＰＧ格式。关于表格，建议采Ｊ千ｌ－＜横线表（顶线、表头线、底线），如遇有合计和统计学处理内容（如ｔ值、Ｐ值等），则在此行上面加一条分界横线；表内数据要求同一指标有效位数一致，一般按标准差的１／３确定有效位数。本刊编辑部万方数据