bradford测蛋白浓度

考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质浓度

1、试剂：

（1）考马斯亮蓝试剂：

考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇,加入100ml 85% H3PO4,用蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤.最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250,4.7%（W/V）乙醇,8.5%（W/V）H3PO4.

（2）标准蛋白质溶液：

纯的牛血清血蛋白,根据其纯度同0.15mol/L NaCl配制成100 ug/ml蛋白溶液.

2.器材：\\x0b（1）可见光分光光度计 （2）旋涡混合器

3、标准曲线的制作

试管编号\\x050\\x051\\x052\\x053\\x054\\x055\\x056

100ug/ml标准蛋白（ml）\\x050.0\\x050.1\\x050.2\\x050.3\\x050.4\\x050.5\\x050.6

0.15mol/L NaCl （ml）\\x051\\x050.9\\x050.8\\x050.7\\x050.6\\x050.5\\x050.4

考马斯亮蓝试剂 （ml）\\x055\\x055\\x055\\x055\\x055\\x055\\x055

摇匀,1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色\\x05\\x05\\x05\\x05\\x05\\x05\\x05

A595nm\\x05\\x05\\x05\\x05\\x05\\x05\\x05

以A595nm为纵坐标,标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug）,在坐标轴上绘制标准曲线.

4、样品中蛋白质含量的测定

另取两支干净的试管（做一重复）,加入合适浓度的待测样品,使其测定值在标准曲线的范围内,测定方法同上,由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量.

注意事项：

1、 如果要求严格,最好在试剂加入后的5~20min内测定光 吸收,因为这段时间内颜色是最稳定的.

2、 若选择在旋涡混合器上混合,注意不要太剧烈,以免产生大量气泡而难于消除.