非原代培养的细胞一般冻存于液氮之中，需要培养时要先从液氮中取出使之复苏：
1) 实验准备：将水浴箱温度调至37℃，并将含10%FBS的培养液置于其中预热；
2) 在记录本上查到所要复苏的细胞存于液氮罐中的位置；
3) 从液氮罐中取出所要细胞，立即置于37℃水浴箱中，使其快速解冻；
4) 将冻存管及培养液瓶的外表面用70%酒精擦拭后，入放入超净台；
5) 将细胞悬液移到离心管中，并加入2-3ml培养基，用吸管轻轻吹打；
6) 1000～1500rpm离心3分钟；
7) 吸去上清液，加入2-3ml培养液，吹打均匀，使细胞悬浮；
8) 将细胞悬液移到50ml培养瓶中，补加约5-8ml培养液；置于二氧化碳培养箱中培养（拧松培养瓶盖）
细胞的冻存
细胞冻存的原则是要逐步缓慢降温，以避免细胞内部形成冰晶对细胞造成伤害。
1) 贴壁细胞经消化、离心收集，悬浮细胞经离心收集；
2) 大约106个细胞加入1ml冻存液，用吸管吹打，使细胞分散成单细胞悬液；
3) 加入到冻存管中。如用1.8ml的冻存管，每管最好不要加入超过1.5ml的细 胞悬液；
4) 在冻存管上标明细胞名称及冻存日期；
5) 用厚布或卫生纸包裹冻存管，置于4℃半小时，然后置于-20℃两小时，再置于-40℃两小时，然后置于液氮上方过夜；第二天将细胞置于液氮中；（也可将保种管用干脱脂棉包裹后胶带封好直接放于-80℃冰箱内4-5天，即可放于液氮灌保存。但-80℃冰箱也可保存细胞株2-3月。）
6) 记下冻存管存放的位置，作好冻存记录。
注： 目前常用的保护剂有甘油和二甲基亚矾(DM50)，它们可降低冰点，在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外。 为了保持细胞最高的存活率，一般采用慢冻快融的策略。
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