HPLC-CAD法测定硫酸卡那霉素及注射液含量及有关物质

中国抗生素杂志２０１　８年３月第４３卷第３期　３４１　文章编号：１００１—８６８９（２０１８）０３—３４１—０７　ＨＰＬＣ．ＣＡＤ法测定硫酸卡那霉素及注射液含量及有关物质　李珉侯金凤陆岩李文东　王俊秋车宝泉　（北京市药品检验所中药成分分析与生物评价北京市重点实验室，北京１０２２０６）　摘要：目的　建立测定硫酸卡那霉素原料及其注射液中有关物质与卡那霉素含量的高效液相色谱．电喷雾检测器（ＨＰＬＣ—　ＣＡＤ）方法。方法采用Ｗａｔｅｒｓ　ＨＳＳ　Ｔ３色谱柱（４．６ｍｍ￣２５０ｍｍ，５　ｍ），以０．２　ｍｏｌ／Ｌ￣＝氟乙酸水溶液为流动相，流速０．３ｍＬ／ｍｉｎ，柱　温３０￣Ｃ，电喷雾检测器的喷雾器温度为３５℃。结果　新建方法对卡那霉素与硫酸盐、有关物质分离良好，精密度、重复性、回　收率均满足分析要求。卡那霉素浓度与峰面积线性关系良好（Ｒ２＞０．９９），检出限可达到６．１ｎｇ。采用该方法对单硫酸卡那霉素、　硫酸卡那霉素以及硫酸卡那霉素注射液进行了测定，检出的有关物质个数及含量均高于现行标准的结果。结论　新建方法灵敏　度更高、分离度更好，能检出更多杂质，可以满足硫酸卡那霉素原料及注射液有关物质及含量测定分析要求。　关键词：电喷雾检测器；硫酸卡那霉素；有关物质；含量测定；硫酸卡那霉素注射液；高效液相色谱法　中图分类号：Ｒ９７８．１，Ｒ９１７　文献标志码：Ａ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ａｎｄ　ｋａｎａｍｙｃｉｎ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｉｎ　ｋａｎａｍｙｃｉｎ　ｓｕｌｆａｔｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｉｎｊ　ｅｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ａｎ　ＨＰＬＣ－ＣＡＤ　ｍｅｔｈｏｄ　Ｌｉ　Ｍｉｎ，Ｈｏｕ　Ｊｉｎ－ｆｅｎｇ，Ｌｕ　Ｙａｎ，Ｌｉ　Ｗｅｎ—ｄｏｎｇ，Ｗａｎｇ　Ｊｕｎ－ｑｉｕ　ａｎｄ　Ｃｈｅ　Ｂａｏ—ｑｕａｎ　（Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎ￣ｏｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆＡｎａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０２２０６）　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｃｈａｒｇｅｄ　ａｅｒｏｓｏｌ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ　（ＨＰＬＣ—ＣＡＤ）ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ａｎｄ　ｋａｎａｍｙｃｉｎ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｉｎ　ｋａｎａｍｙｃｉｎ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｒａｗ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａ　Ｗａｔｅｒｓ　ＨＳＳ　Ｔ３　ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ￣２５０ｍｍ，５ｇｍ）ｗａｓ　ｕｓｅｄ．Ａｎ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　０．２ｍｏｌ／Ｌ　ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔａｔｅ，ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　Ｏ．３ｍＬ／ｍｉｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　３０￣Ｃ．Ｔｈｅ　ｓｐｒａｙ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　ＣＡＤ　ｗａｓ　３５￣Ｃ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｉｓ　ｎｏｖｅｌ　ｍｅｔｈｏｄ，　收稿日期：２０１７－１１－２９　作者简介：李珉，女，生于１９８７年，博士，主管药师，主要研究方向为抗生素类药物分析及质量控制研究。　Ｅ—ｍａｉｌ：ｍｉｒａｎｄａｌｉ４１８＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。　通讯作者，Ｅ—ｍａｉｌ：ｃｈｅｂａｏｑｕａｎ＠１２６．ｃｏｍ　通讯作者：车宝泉，工作至今一直从事药品质量标准研究、药品　一　第读院析于作化北一于，者作先学京文北者后博市章京：取士药６大篇李得学品，珉化位检包学验，括所学２０与Ｓ士１。Ｃ５４分－学年共Ｉ论子２位至发０文工今表１以４程年及就第篇就学分职一，　累计影响因子１７．１６３。目前主要研　质量评价、化妆品、保健食品检验等工作。多次承担科技部、北　京市科委研究课题，２０１１年主持承担北京市科技计划“添加剂　鉴别和检测平台建设”，建立毒性药物、禁限用添加剂等的质谱　定性定量方法，可快筛毒害化学物质并定量，为食品、药品提供　监测手段。先后在国内外刊物上发表学术论文７５篇，其中ＳＣＩ及　ＥＩ论文１０篇，专利授权６项。曾获北京市优秀人才项目资助、北　究方向为抗生素类药物分析及质量　控制研究。　京市科学技术二等奖、药物分析杂志优秀论文一等奖，中国药学　发展食品药品质量检测技术“杰出青年”奖。　３４２　ＨＰＬＣ．ＣＡＤ法测定硫酸卡那霉素及注射液含量及有关物质　李珉等　ｋａｎａｍｙｃｉｎ，ｓｕｌｆａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ｗｅｒｅ　ｗｅｌｌ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ｔｈｅ　ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｅｒｅ　ａｌｌ　ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｋａｎａｍｙｃｉｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ　＞０．９９）．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｌｉｍｉｔ　ｃｏｕｌｄ　ｒｅａｃｈ　６．１ｎｇ．Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｋａｎａｍｙｃｉｎ　ｍｏｎｏｓｕｌｆａｔｅ，ｋａｎａｍｙｃｉｎ　ｓｕｌｆａｔｅ　ａｎｄ　ｋａｎａｍｙｃｉｎ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｎｕｍｂｅｒ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｈｅ　ｃｕｒｔｒｅｎｔ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｒｅｓｕｌｔｓ．Ｃｏｎｅｌｕｓｉｏｎ　Ｈｉｇｈｅｒ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｂｅｔｔｅｒ　ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ａｃｈｉｅｖｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｉｓ　ｎｏｖｅｌ　ｍｅｔｈｏｄ．ｗｈｉｃｈ　ｃｏｕｌｄ　ｄｅｔｅｃｔ　ｍｏｒｅ　ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｍｅｅｔ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ｈｅ　ｔｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ａｎｄ　ｋａｎａｍｙｃｉｎ　ｉｎ　ｋａｎａｍｙｃｉｎ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｒａｗ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．　Ｋｅｖ　ｗｏｒｄｓ　Ｃｈａｒｇｅｄ　ａｅｒｏｓｏｌ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ　ｆＣＡＤ１：Ｋａｎａｍｙｃｉｎ　ｓｕｌｆａｔｅ；Ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ；Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｎｔｅｎｔ；　Ｋａｎａｍｙｃｉｎ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｉｎｉｅｃｔｉｏｎ；ＨＰＬＣ　卡那霉素为氨基糖苷类抗生素中具有代表性的　药物之一［１１，其制剂的原料根据硫酸盐数目不同分　为单硫酸卡那霉素（Ｃ　Ｈ　Ｎ　Ｏ　Ｈ　ＳＯ　）和硫酸卡那霉　素（Ｃ１　Ｈ　６Ｎ４Ｏ　ｘＨ　ＳＯ４）两种［２］，目前各国药典均收录　了至少一种原料【　。据文献报道，卡那霉素组分包　括主要组分卡那霉素Ａ，以及卡那霉素Ｂ、卡那霉素　Ｃ和卡那霉素Ｄ等几种小组分，以及在降解中可能出　现的巴龙霉胺等有关物质［８－９］。然而除《中国药典》　２０１５年版外，各国药典均采用薄层色谱法进行有关　物质检查，方法专属性较差且分离能力较低，无法　对杂质谱进行深入分析。　《中国药典》２０１５年版中　则采用高效液相色谱蒸发光散射法（ＨＰＬＣ—ＥＬＳＤ）对　单一杂质卡那霉素Ｂ进行检查。该方法灵敏度较低，　不利于未知杂质的检出及杂质谱分析；同时，该方　法中蒸发光散射检测器（ＥＬＳＤ）浓度与峰面积不呈线　性响应，但并未采用取对数拟合等方式进行校正，　导致定量结果存在不准确的风险【．ｏ］。此外，之前的　文献还报道了采用高效液相色谱荧光检测器以及毛　细管电泳电容耦合非接触电导检测器进行卡那霉　素有关物质测定的方法。高效液相色谱荧光检测器　方法灵敏度较好，但需进行衍生化，操作复杂…】；　毛细管电泳电容耦合非接触电导检测器方法分离效　果良好［　】，然而毛细管电泳方法存在电渗流不稳定　以及进样歧视，与高效液相色谱方法相比具有重现　性、准确性较差的问题。　ＣＡＤ检测器为一种新型的高效液相色谱通用型检　测器［＂】，可用于硫酸卡那霉素有关物质的直接检测。　与此前流行的示差折光检测器（ＲＩＤ１以及ＥＬＳＤ比较，　ＣＡＤ检测器具有一系列的优势，包括可以用于梯度　洗脱且无基线波动、浓度与峰面积可呈线性响应、灵　敏度较ＥＬＳＤ还高一个数量级左右等［１４】。因此，本文　建立了ＨＰＬＣ．ＣＡＤ法进行单硫酸卡那霉素、硫酸卡　那霉素及硫酸卡那霉素注射液中有关物质及含量测　定。该方法利用高效液相色谱专属性强、分离度高　的特点以及ＣＡＤ检测器具有灵敏度高、准确度好的　优势，使新建立的方法较现行标准可以更有效地测　定有关物质与卡那霉素含量。　１仪器与试药　１．１仪器　Ｕｌｔｉｍａｔｅ　３０００高效液相色谱仪（赛默飞世尔公　司）；Ｃｏｒｏｎａ　Ｖｅｏ电喷雾检测器（ＣＡＤ）（赛默飞世尔公　司）；ＬＣ一２０Ａ高效液相色谱仪（岛津公司）；２０００ＥＳ蒸　发光散射检测器（ＥＬＳＤ）（奥泰公司）；ＸＡ２０５电子天平　（Ｍｅｔｔｌｅｒ－ｔｏｌｅｔｏ多公司）等。　１．２对照品　卡那霉素对照品（批号：１３０５５６—２００５０１，含量　６６．５％）和卡那霉素Ｂ对照品（批号：１３０５４８．２００５０１）均　购自中国食品药品检定研究院。　１．３试剂　三氟乙酸、甲醇均为色谱纯，购￣ｔＭｅｒｃｋ公司。　１．４样品　单硫酸卡那霉素原料，分别来自企业Ａ和企业　Ｂ；硫酸卡那霉素原料，来自企业Ｃ；硫酸卡那霉素　注射液，分别来自企业Ｄ和企业Ｅ。　２实验方法及结果　２．１　ＨＰＬＣ—ＣＡＤ条件　液相色谱条件：色谱柱为Ｗａｔｅｒｓ　ＨＳＳ　Ｔ３色谱柱　（４．６ｍｍ￣２５０ｍｍ，５￣ｔｍ），流动相为０．２ｍｏｌ／Ｌ三氟乙酸　水溶液，采用０．３ｍＬ／ｍｉｎ的流速，柱温为３０℃，进样　体积为２Ｏ　。　ＣＡＤ￣Ｎ器条件：喷雾器温度：３５℃；采样频率：　ＩＨｚ；输出范围：１００ｐＡ：氮气工作气压：５８．７ｐｓｉ。　２．２样品及对照品溶液的配制　精密称取样品适量，加水溶解并定量稀释制成　约含卡那霉素２ｍｇ／ｍＬ的溶液，作为有关物质供试品　溶液；精密量取适量，用水定量稀释制成约含卡那　霉素０．０４ｍｇ／ｍＬ的溶液，作为有关物质对照溶液。　精密称取样品适量，加水溶解并定量稀释制成约　中国抗生素杂志２０１８年３月第４３卷第３期　含卡那霉素０．１５ｍｇ／ｍＬ的溶液，作为含量测定供试品　溶液；精密称取卡那霉素对照品适量，加水溶解并定　量稀释制成约含卡那霉素０．１０、０．１５和Ｏ．２０ｍｇ／ｍＬ的　溶液，作为含量测定对照品溶液（１）、（２）和（３），用线　性回归方程计算供试品中卡那霉素的含量。　２．３系统适用性试验　分别称取卡那霉素对照品１２．３７ｍｇ，卡那霉素Ｂ　对照品８．４２ｍｇ，置于１００ｍＬ量瓶中，加水溶解并稀　释至刻度，摇匀，作为系统适用性试验溶液。精密　量取系统适用性试验溶液２０ｕＬ注入液相色谱仪，照　“２．１”项下条件分析，结果见图１。　硫酸根离子峰与卡那霉素峰分离度高达１０．５５，　卡那霉素峰与卡那霉素Ｂ峰分离度达到６．６５，硫酸根　离子峰理论塔板数为５４３２，满足分析要求。　２．４专属性试验　∞卯　如”　按企业提供的制剂处方，称取亚硫酸氢钠６ｇ，　依地酸二钠０．３ｇ，加３０００ｍＬ水溶解，混合均匀，　作为辅料干扰溶液。将辅料干扰溶液和空白溶剂照　“２．１”项下条件分析，结果详见图２。如图所示，空　白与辅料均不干扰样品测定，方法专属性良好。　２．５破坏试验　取批号为２０１２０１　１２．１的原料样品，分别进行如　下处理：（１）酸破坏：加１０ｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液ｌｍＬ，放置　７ｈ，用１０ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液ｌｍＬ中和至中性，用水　稀释制成约含卡那霉素２ｍｇ／ｍＬ的溶液，作为酸破坏　溶液；（２）碱破坏：加１０ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液ｌｍＬ，放　置７ｈ，用１０ｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液ｌｍＬ中和至中性，用水稀　释制成约含卡那霉素２ｍｇ／ｍＬ的溶液，作为碱破坏溶　液：（３）光破坏：在４５００Ｌｘ照度下放置２　１　ｄ，用水稀　释制成约含卡那霉素２ｍｇ／ｍＬ的溶液，作为光破坏溶　液；（４）热破坏：１００Ｔ水浴加热１５ｈ，用水稀释制成　约含卡那霉素２ｍｇ／ｍＬ的溶液，作为热破坏溶液；（５１　氧化破坏：￣Ｈ３０％过氧化氢ｌｍＬ，放置５０ｈ，用水稀　ｔ／ｍｉｎ　图１系统适用性试验色谱图　Ｆｉｇ．１　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｉｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｓｕｉｔａｂｉｌｉｔｙ　ｔｅｓｔ　Ｏ　０　ｍ　５．Ｏ　ｔ／ｍｉｎ　Ａ：空白；Ｂ：辅料　图２专属性试验色谱图　Ｆｉｇ．２　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｉｎ　ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ　ｔｅｓｔ　释制成约含卡那霉素２ｍｇ／ｍＬ的溶液，作为氧化破坏　溶液。分别取以上各破坏溶液，按照“２．１”项条件　分析，结果详见图３。　由结果可以看出，卡那霉素在各条件破坏下得　到的杂质均能实现满意分离。　２．６检出限与定量限　称取卡那霉素对照品适量，加水溶解并逐级稀　释得系列稀释溶液，按信噪比为３：１测定检测限为　６．１ｎｇ，按信噪比１０：１测定定量限为１２．２ｎｇ。　２．７有关物质线性关系考察　精密称取卡那霉素对照品适量，加水溶解并稀　释制成含卡那霉素浓度分别为０．６、１．５、３、６、１２、　３Ｏ、６０和１２０￣ｇ／ｍＬ的系列卡那霉素对照品溶液，作　为有关物质线性范围分析溶液。　分别取上述溶液，按照“２．１”项下条件分　析，以质量浓度Ｘ（ｍｇ／ｍＬ）为横坐标，以卡那霉　素峰面积ｙ为纵坐标，进行线性回归，回归方程为　Ｙ＝３４．０９Ｘ＋Ｏ．２２５１，Ｒ２＝Ｏ．９９１７。结果表明，卡那霉素质　量浓度在０．６￣１２０ｐｇ／ｍＬ的范围内，线性关系良好。　２．８含量测定线性关系考察　精密称取卡那霉素对照品适量，加水溶解并稀　释制成含卡那霉素浓度分别为６０、１００、１５０、２００和　４００１ｘｇ／ｍＬ的系列卡那霉素对照品溶液，作为含量测　定线性范围分析溶液。　３４４　ＨＰＬＣ—ＣＡＤ法测定硫酸卡那霉素及注射液含量及有关物质　李珉等　ｌ　１　＿＿１　叁　菪　Ｉ　Ｕ　１２０　１００　—８０　墨６０　誊４０　０　２０　０　一　ｄＪ若ｌＵ　—１２　０．０　５．０　∞盯　ｉ０．０　如＂　１５．０　０　ｍ　２０．０　２５．０　３０．０　ｔ／ｍｉｎ　Ａ：未破坏；Ｂ：酸破坏；Ｃ：碱破坏；Ｄ：光照破坏；Ｅ：加热破坏；Ｆ：氧化破坏　图３供试品溶液原液及５种方式破坏溶液的色谱图　Ｆｉｇ．３　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｏｆ　ｏｒｉｇｉｎａｌ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓａｍｐｌｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｄｅｓｔｒｏｙｅｄ　ｂｙ　ｉｆｖｅ　ｗａｙｓ　分别取上述溶液，按照“２．１”项下条件分析，以　２．１１　溶液稳定性试验　质量浓度Ｘ（ｍｇ／ｍＬ）为横坐标，以卡那霉素峰面积】，为　取批号为２０１２０１１２—１的单硫酸卡那霉素原料样　纵坐标，进行线性回归，回归方程为　３３．１２Ｘ＋２．７８４，　品、批号为１００７０１的硫酸卡那霉素原料样品和批　Ｒ　０．９９７２。结果表明，卡那霉素质量浓度在在　号为１３０６１７１的硫酸卡那霉素注射液样品，分别按　０．０７５－－０．３０ｍｇ／ｍＬ的范围内，线性关系良好。　“２．２”项下方法配制含量测定供试品溶液，并分别　２．９进样精密度试验　于放置０、１、２、３、６、１２和２４ｈ后，按照“２．１”　精密称取卡那霉素对照品２２．６３ｍｇ，置于１００ｍＬ　项下条件分析。结果卡那霉素主峰面积均无趋势性　量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为精密度试验溶　变化，其中单硫酸卡那霉素样品中主峰面积的ＲＳＤ　液。按照“２．１”项下条件进行分析，重复进样６次，　为１．６％，硫酸卡那霉素样品中主峰面积的ＲＳＤ为　记录色谱图，计算卡那霉素主峰面积ＲＳＤ为０．７％，保　０．９％，硫酸卡那霉素注射液样品中主峰面积的ＲＳＤ　留时间ＲＳＤ为０．０３％，表明方法进样精密度良好。　为０．５％，表明本品溶液在２４ｈ内稳定。　２．１０重复性试验　２．１２　回收率试验　取批号为２０１２０１１２—１的原料样品６份，按“２．２”　分别精密称取批号为Ｄ１４０５０２２的原料样品适　项下方法配制含量测定供试品溶液，分别照“２．１”　量，加辅料干扰溶液溶解并稀释制成约含卡那霉素　项下条件进行分析，计算含量，结果的ＲＳＤ为０．１２、０．１５和０．１８ｍｇ／ｍＬ的溶液，每个浓度重复配制３　０．６％，表明方法重复性良好。　份，作为含量测定回收率试验溶液。分别照“２．１”　中国抗生素杂志２０１８年３月第４３卷第３期　项下条件分析，测定含量结果并计算回收率，结果　如表ｌ所示。　表１回收率试验结果　Ｔａｂ．１　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｔｅｓｔ　２．１３有关物质检查　分别取批号为２０１　２０１　１２．１、２０１２０２０３—１、　Ｄ１４０５０２０￣ＮＤ１４０５０２２的单硫酸卡那霉素原料样品，　批号为１００７０１、１３０７０１和１３１００１的硫酸卡那霉素原　料样品以及批号为１３０６１７１、１３０６１７２、１３０３１０２、　１３０９１３０１、１３０９１３０２和１３０９１３０３的硫酸卡那霉素注　射液样品，按“２．２”项下方法配制有关物质供试品　溶液及有关物质对照溶液，按照“２．１”项下条件分　析。计算杂质含量，结果见表２。　表２有关物质检查结果　Ｔａｂ．２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　２．１４含量测定　分别精密称取“２．１．３”项下各批号样品，按　“２．２”项下方法配制含量测定供试品溶液，精密称　取卡那霉素对照品按“２．２”项下方法配制含量测定　对照品溶液，分别照“２．１”项下条件分析。计算主　成分含量，结果见表３。　３４５　表３含量测定结果　Ｔａｂ．３　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ａｓｓａｙ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　：单硫酸卡那霉素及硫酸卡那霉素原料含量均按干燥品计算　３讨论　３．１色谱条件的确定　现行《中国药典》２０１５版中硫酸卡那霉素有关　物质仅检测卡那霉素Ｂ，流动相为０．２ｍｏｌ／Ｌ￣氟醋酸．　甲醇（９５：５１。取系统适用性溶液与有关物质供试品　溶液，分别在流动相比例为０．２ｍｏｌ／Ｌ＿．￣氟醋酸一甲醇　ｆ９５：５）、０．２ｍｏｌ／Ｌ三氟醋酸一甲醇（９８：２）￣Ｄ０．２ｍｏｌ／Ｌ＝氟　醋酸（１ｏ０％）的条件下分析，分离情况见图４。　由图４可以看出，在流动相为０．２ｍｏｌ／Ｌ￣氟醋酸　（１００％）的条件下分离度好于现行药典方法，可将原　方法中无法分开的杂质实现分离，检出更多的有关　物质，各峰之间的分离度良好，能分别定量。　分别对流速（０．２、０．３和０．４ｍＬ／ｍｉｎ）、柱温　（２５℃、３０℃和３５℃）、三氟醋酸比例ｆＯ．１、０．１５、　０．２、Ｏ．２５和０．３ｍｏｌ／Ｌ　、ＣＡＤ雾化器温度（３０、３５和　４０￣Ｃ）各条件进行考察及优化，最终得到不同条件系　统适用性结果，详见表４。由结果可见，最优条件为　０．３ｍＬ／ｍｉｎ流速，３０℃柱温，流动相为０．２ｍｏｌ／Ｌ＝氟　醋酸，ＣＡＤ雾化器温度为３５℃。　３．２　ＣＡＤ与ＥＬＳＤ比较　３．２．１灵敏度的比较　按照“２．１”项下液相色谱条件，采用ＥＬＳＤ进行　定量限与检出限的测定，结果按信噪比为３：１测定检　测限为３ｌｎｇ，按信噪比１０：１测定定量限为６２ｎｇ。可见　ＣＡＤ灵敏度显著高于ＥＬＳＤ。　３．２．２检测杂质数量的比较　取“２．１３”项下供试品溶液，按照“２．１”项下　液相色谱条件，分别采用ＣＡＤ与ＥＬＳＤ检测，得到两　３４６　ＨＰＬＣ．ＣＡＤ法测定硫酸卡那霉素及注射液含量及有关物质　李珉等　５０　墨　＇垦２５　０　５０　壹ｚｓ　Ｏ　ｔ／ｍｉｎ　ｃ：　三氟乙酸溶液－甲醇（１００：０、　４…　●Ｊ　ｔ　ｊ　Ａ：三氟乙酸溶液－甲醇（９５：６）；Ｂ：三氟乙酸溶液一甲醇（９８：２）　ｃ：三氟乙酸溶液一甲醇（１００：０１　图４不同流动相分离结果　Ｆｉｇ．４　Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｂｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　表４不同条件下系统适用性结果　Ｔａｂ．４　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｓｙｓｔｅｍ　ｓｕｉｔａｂｉｌｉｔｙ　ｉｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　种检测器的有关物质供试品溶液色谱图，详见图５。　由图可以看出，ＣＡＤ可检出８种杂质，而ＥＬＳＤ仅能　检出４种杂质。　３．２．３测定结果的比较　两种方法含量测定的结果详见表３，有关物质测　定的结果详见表５。可以看出，两种方法的含量测定　结果相近；而有关物质测定结果中，ＣＡＤ法测定的　卡那霉素Ｂ含量、单个未知杂质含量、杂质总量以及　杂质个数均显著高于ＥＬＳＤ法，尤其是卡那霉素Ｂ及　单个未知杂质含量测定结果差异大，重复实验结果　仍是如此。分析可能是由于两种方法杂质均以卡那　霉素为对照，而卡那霉素Ｂ及单个最大杂质在两种方　法中的响应差异大，造成结果不具有可比性。其他　未知杂质可能存在同样的问题。　ｔ／ｍｉｎ　图５不同检测器有关物质图谱　Ｆｉｇ．５　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｏｆｒｅｌａｔａｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ｂｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　根据文献报道『ｌ５　１＿ｓ】，两种检测器的检测原理不　同。同样通过高温雾化的形式形成气溶胶颗粒，　ＥＬＳＤ检测的是颗粒对光的散射，而不同物质形成的　颗粒大小、性状各不相同，造成散射的光量不同，　因此化合物之间的响应很不一致；而ＣＡＤ检测的是　颗粒上的电荷水平，因此不同化合物之间响应一致　性良好。此外，在该分析要求的范围内，ＣＡＤ检测　方法的含量与峰面积呈线性响应，相较ＥＬＳＤ采用对　数一对数拟合后呈线性响应，ＣＡＤ法微小的峰面积误　差带来的结果偏差更小。因此，ＣＡＤ法测定的结果　较ＥＬＳＤ法测定的结果更加准确。　４小结　本文建立了测定硫酸卡那霉素含量及有关物质的　ＨＰＬＣ．ＣＡＤ方法。该方法较现行标准方法提高了分离　度，能更好地用于卡那霉素的有关物质及含量测定。　此外，采用的新型ＣＡＤ检测技术与传统ＥＬＳＤ相比，　具有分离效果更好、灵敏度更高、检出的杂质个数更　多，有关物质结果更加准确等一系列的优势。因此，　新建立的ＨＰＬＣ．ＣＡＤ方法可以更好地控制硫酸卡那霉　中国抗生素杂志２０１８年３月第４３卷第３期　表５两种检测器有关物质结果比较　Ｔａｂ．５　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｂｙ　ｔｗｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓ　素原料及注射液的质量。此外，该方法还有应用于其　他氨基糖苷类抗生素质量分析的巨大潜力。　参考文献　［１］　杨忠毅．氨基糖苷类抗生素在临床治疗中的合理使用［Ｊ］．　医药前沿，２０１６，６（３２１：５１－５２．　［２】Ｐｕｉｕｓ　Ｙ　Ａ，Ｓｔｉｅｖａｔｅｒ　Ｔ　Ｈ，Ｓｒｉｋｒｉｓｈｎａｎ　Ｔ．Ｃｒｙｓｍｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，　ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｋａｎａｍｙｃｉｎ　Ａ【Ｊ］．ＣａｒｂｏｈｙｄＲｅｓ，２００６，３４１（１７）：２８７１—２８７５．　［３】Ｔｈｅ　Ｂｒｉｔｉｓｈ　Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ　２０１　７［ｓ］．Ｂｒｉｔｉｓｈ　Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ　Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ：２０１７（ＩＩ）：４３－４６．　［４　４］Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ　９．Ｏ［Ｓ］．Ｓｔｒａｓｂｏｕｒｇ：Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｄｉｒｅｃｔｏｒａｔｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅｓ，２０１７：２８４５—２８４６．　［５】Ｔｈｅ　Ｊａｐａｎｅｓｅ　Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ　ＸＶＩＩ［Ｓ］．Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ，　ＬａｂｏｕｒａｎｄＷｅｌｆａｒｅ，２０１６：１１１８－１１２０．　［６］Ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｓｔａｔｅｓ　Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ　４０ｔｈ　Ｅｄｉｔｉｏｎ［Ｓ］．Ｒｏｃｋｕｉｌｌｅ　Ｍ　Ｄ：Ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｓｔａｔｅｓ　Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａｌ　Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ．２０　１　７：　４７４２．４７４４．　［７】　国家药典委员会．中国人民共和国药典ｉｓ］．（２ｏ１５年版二　部）．北京：中国医药科技出版社，２０１５：１３１６．　［８】　Ｕｍｅｚａｗａ　Ｈ，Ｕｅｄａ　Ｍ，Ｍａｅｄａ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆａ　ｎｅｗ　ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ，ｋａｎａｍｙｃｉｎ［Ｊ］．ＪＡｎｔｉｂｉｏｔ，１９５７，　１０（５）：１８１－１８８．　［９】　Ｕｍｅｚａｗａ　Ｓ，Ｔｓｕｃｈｉｙａ　Ｔ．（Ａｌｐｈａ—ｄ－６一ａｍｉｎｏ一６一ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏ　３４７　ｐｙｒａｎｏｓｙ１）一ｄｅｏｘｙｓｔｒｅｐｔａｍｉｎｅ，ａｎ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｏｆｋａｎａｍｙｃｉｎ［Ｊ］．ＪＡｎｔｉｂｉｏｔ，１９６２，１５（１）：５１—５２．　『１０］刘海玲，曹晓云．ＨＰＬＣ—ＥＬＳＤ法测定硫酸核糖霉素的含　量和有关物质［Ｊ］＿中国抗生素杂志，２０１０，３５（９）：６８４—６８７．　『１　１１鞠建刚，杜迎彬．注射用硫酸卡那霉素有关物质分析方法　研究［Ｊ］．山东化工，２０１５，４４（１７）：８２．８６．　［１２］Ｅ１一Ａｔｔｕｇ　Ｍ　Ｎ，Ａｄａｍｓ　Ｅ，Ｈｏｏｇｍａｒｔｅｎｓ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｃａｐａｃｉｔｉｖｅｌｙ　ｃｏｕｐｌｅｄ　ｃｏｎｔａｃｔｌｅｓｓ　ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｓ　ａｎ　ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｍｏｄｅ　ｉｎ　ＣＥ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆｋａｎａｍｙｃｉｎ　ｓｕｌｐｈａｔｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ［Ｊ］．ｄＳｅｐ　Ｓｃｉ，２０１　１，３４（１８）：２４４８—２４５４．　［１３］Ｇｏｒｅｃｋｉ　Ｔ，Ｌｙｎｅｎ　Ｆ，Ｓｚｕｃｓ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｉｎ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｕｓｉｎｇ　ｃｈａｒｇｅｄ　ａｅｒｏｓｏｌ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．　Ａｎａｌ　Ｃｈｅｍ，２００６，７８（９）：３１８６—３１９２．　『１４］张凤妹，王建．ＨＰＬＣ．电喷雾检测器测定硫酸阿米卡星　中卡那霉素和硫酸盐的含量［Ｊ】．中国抗生素杂志，２０１５，　４０（５）：３５４—３５８．　［１５］Ｌｏｎｇ　Ｚ，Ｇｕｏ　ｚ，Ａｃｗｏｒｔｈ　Ｉ　Ｎ，　ａ，．Ａ　ｎｏｎ—ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｉｓｏｓｔｅｒｏｉｄａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａ　ｂｙ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｈａｒｇｅｄ　ａｅｒｏｓｏｌ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｔａｌａｎｔａ，２０１６，　１５１：２３９．２４４．　『１　６］Ｖｅｒｖｏｏｒｔ　Ｎ，Ｄａｅｍｅｎ　Ｄ，Ｔｏｒｏｋ　Ｇ．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅ　ｌｉｇｈｔ　ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒｇｅｄ　ａｅｒｏｓｏｌ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｒｅｖｅｒｓｅｄ　ｐｈａｓｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］．Ｊ　ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２００８，１１８９（１）：９２—１００．　［１７】Ｔａｋａｈａｓｈｉ　Ｋ，Ｋｉｎｕｇａｓａ　Ｓ，Ｓｅｎｄａ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ａ　ｃｏｒｏｎａ－ｃｈａｒｇｅｄ　ａｅｒｏｓｏｌ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ　ａｎｄ　ａｎ　ｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅ　ｌｉｇｈｔ—ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ａ　ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｐｏｌｙｍｅｒ　ｂｙ　ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ　ｌｆｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］．　ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２００８，１１９３（１）：１５１－１５５．　［１　８］Ｍａｇｎｕｓｓｏｎ　Ｌ　Ｅ，Ｒｉｓｌｅｙ　Ｄ　Ｓ，Ｋｏｒｏｐｃｈａｋ　Ｊ　Ａ．Ａｅｒｏｓｏｌ－ｂａｓｅｄ　ｄｅｔｅｃｔｏｒｓ　ｆｏｒ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ　Ａ，　２０１５．１４２１：６８．８１．