中国卫生检验杂志2oo6年5月第16卷第5期Chinese J0umal 0f Heahh Labomto ̄ -II10l。 ,May 2006;Vd 16 N。5 559 【化学测定方法】 薄层层析法测定苏丹红的方法探讨 张杨 515031) (广东省汕头市疾病预防控制中心,广东汕头[摘要】 目的:探讨用薄层法测定食品中苏丹红污染的可行性。方法:对样品按GB/T19681—20o5前处理后用薄层层析 法测定并与HPLC法对照。结果:两种方法基本一致。结论:薄层法简便快捷,灵敏度高。 [关键词】 苏丹红;薄层层析法 [中圈分类号】0658.1 [文献标识码】 A [文章编号】 1004—8685(2006) ̄-0559一o2 1.3.2定性测定取样品液5 及标准液5 、10 点于 苏丹红是一类人工合成的红色工业染料,暗红色粉末,可 分为I号、Ⅱ号、Ⅲ号、Ⅳ号。常用于地板蜡,鞋油,机油等产 品的染色。由于它能造成人体肝脏细胞的DNA突变,我国及 聚酰胺粉板上,展开剂展开挥干,按样品斑点与标准点的颜色 和Rf值是否相同定性,根据斑点的大小深浅概略定量。 1.4灵敏度测定 许多国家都禁止将其用于食品领域。然而,近来仍发现一些 厂家还在使用。由于目前国家标准方法只有高效液相色谱 法,该法在基层实验室不易普及,我们在工作实践中摸索出用 薄层层析法测定苏丹红,简便易行,其适应性更广。 1材料与方法 1.1原理 用聚酰胺粉薄层板,分别点样0.o5、0.10、0.15、oI 20 , 展开后挥干,有明显红色的最小斑点为最低检出量。 1.5展开剂的选择 展开剂的选择依据物质的相似相溶原理,我们选用实验 室常用的几种展开剂作试验,结果见表1。薄层板选用 o’25 rn/n聚酰胺粉薄层板。 裹1采用不同展开剂时几种苏丹红的斑点的Ⅺ值 样品中的苏丹红经提取、净化后,在薄层板上点样展开, 与苏丹红标准斑点比较定性或概略定量。 1.2试剂与标准品 (1)丙酮分析纯;(2)正己烷分析纯;(3)无水硫酸钠分 析纯;(4)5%丙酮的正己烷液:吸取50 ITIl丙酮用正己烷定容 至1 L;(5)层析用氧化铝(中性l0o~20o目);(6)层析柱管: 1 em(内径)×5 em(高)的注射管;(7)标准储备液:分别称取 苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ各10.0 mg,用乙醚溶解后用正 己烷定容至50 ITIl,则每毫升相当于20o 苏丹红。临用时 1.6与HPLC法对比 配成50峭/ITIl;(8)展开剂:①正丁醇:无水乙醇:氨水(20:1: 1),②乙酸乙脂;(9)0.25 rn/n聚酰胺粉薄层板。 1.3检验方法 为探讨检验结果的可靠性,我们取不含苏丹红色素的辣 椒酱约10 g人为的加入4.0o ITIl标准液,按上述方法处理后 定容0.5 ITIl,用薄层法定性并半定量,(样品点样5 ,标准点 样9、10、11 )。稀释50倍后用高效液相色谱仪测定(C。。反 相柱),结果见表2。 裹2 HPLc法与薄层法测定苏丹红的对照结果 1.3.1样品处理称取辣椒酱l0~20 g样品于离心管中,加 l0~20 Illl水将其分散成糊状,含增稠剂的样品多加水,加入 30 Illl正己烷:丙酮=3:1,匀浆5 Tllin,3 000 r/Tllin离心 10Ⅱlin,吸出正己烷层,于下层再加入20 ITIl×2次正己烷,匀 浆,离心,合并3次正己烷,加入无水硫酸钠5 g脱水,过滤后 自然蒸干,用5 ITIl正己烷溶解残渣后,慢慢加入氧化铝层析柱 中,为保证层析效果,在柱中保持正己烷液面为2 rn/n左右时 加样,在全程的层析过程中不应使柱干涸,用正己烷少量多次 淋洗浓缩瓶,一并注入层析柱。控制氧化铝表层吸附的色素 带宽宜小于0.5 em,待样液完全流出后,视样品中含油类杂质 的多少用l0~30 ITIl正己烷洗柱,直至流出液无色,弃去全部 正己烷淋洗液,用5%丙酮的正己烷液6o ITIl洗脱、收集、浓缩 后,用丙酮定容至oI 5 ITIl,待测。 【作者简介]张杨(1967一),女,检验师,主要从事卫生理化检验 工作。 (下转第570页) 570 中国卫生检验杂志2006年5月第16卷第5期Chinese Journal of Health laboratory Technology,May 2006;Vol 16 No 5 3讨论 溶血性弧菌存在。 副溶血性弧菌是我国东南沿海地区引起食物中毒的主要 生物芯片是病原微生物检测有效手段,具有准确、灵敏、 病原体之一,快速准确地分离、鉴定副溶血性弧菌,是积极采 快速平行化等特点,已在国内、外广泛应用,是传染病诊断的 取防治措施的关键,本次实验从16次食物中毒的事件中,采 发展方向。本次实验将一株副溶血性弧菌采用芯片扫描进行 取330份样品,分离到62株副溶血性弧菌。其中:250份患者 研究,实验结果表明芯片扫描结果能特异性地正确诊断副溶 肛拭,分离到59株菌副溶血性弧菌,涂抹样品52份中分离到 血性弧菌。该方法将能应用在快速诊断副溶血性弧菌病原体 3株副溶血性弧菌,而食品和呕吐物28份,未分离到副溶血性 引起食物中毒事件中,给快速开展防治工作提供可靠的实验 弧菌。本次实验采用一名患者采集二支肛拭,分别接种于氯化 依据。 钠结晶紫增菌管和硷性胨水增菌管中,进行分离率比较,实验 (本项实验研究得到杭州致远医学检验所杨更发副主任 结果表明:46名患者中,氯化钠结晶紫增菌管阳性率明显高 技师指导,表示感谢!) 于硷性胨水增菌管,分别为56.52%和21.74%,经显著性检 验表明,X2=10.266>6.63,P<0.01,有显著性差异。但值得 [参考文献] 指出的是:在氯化钠结晶紫增菌管未检出的3株副溶血性弧 [1]程苏云,翁景清,林香娟,等.副溶血性弧菌食物中毒菌株的血清 菌,在硷性胨水增菌管中分离到,表明采用二管法可提高阳 型、耐药性及基因检测[J].中国卫生检验杂志,2002,12(2):141 性率。 142. 从6株菌的血清学结果表明,二起食物中毒事件中,分别 [2]钟凯,田静,李业鹏,等.食品中副溶血性弧菌PCR快速检测方法 为0l型和03型,同一起食物中毒事件中主要是同一型别的 的研究[J].中国食品卫生杂志,2004,16(4):317—320. 副溶血性弧菌。未发现一起食物中毒事件中有二个型别的副 (收稿日期:2006—02—13) (上接第559页) 1.7回收率测定 剂,几种苏丹红的斑点Rf值相差较大,故采用它作为展开剂。 取6份不含苏丹红色素的辣椒酱加入不同含量的标样, 由于苏丹红色素在聚酰胺板上有拖尾现象,如样品中只含有 用薄层法测定其含量,计算回收率。结果见表3。 单种苏丹红色素,用展开剂①即可。 2.3 薄层法与HPLC法的对照 衷3回收试验结果 从表2结果表明,HPLC法与薄层法的测定结果相差不 取样量标准加人定容体积 测定含量(峙) 回收率(%) 大,两法的精密度较接近,说明用该法为苏丹红定性是可靠 (g)tl( ̄g) (m1) 苏丹红I苏丹红Ⅱ苏丹红m苏丹红I苏丹红Ⅱ苏丹红Ⅲ 的,必要时还可作概略定量。 1n0∞1 O n 5 2.4回收率 1饥抛9 2∞ O.5 175 170 175 盯.5 s5.O 87.5 本法平均回收率为88.2%,达到薄层法回收水平。 1n7841姗 n 5 25o 245 26o 83.0 81.7 86.7 1n5130 4130 0.5 370 360 360 92.5 90.0 90.0 3小结 1n4362 500 O.5 450 440 450 9o.O 88.O 90.0 1n3397 600 n 5 530 530 520 88.3 88.3 86.7 用薄层法定性食品中的苏丹红的方法简便、易行,结果可 靠,灵敏度高,满足实际需要,适应于基层实验室应用。 2结果与讨论 [参考文献] 2.1方法的灵敏度 [1]陶锐.薄层色谱及其在食品卫生分析上的应用[M].成都:I ̄11il 经多次反复试验,其最低检出量为0.1 P,g则可显色,对 人民出版社,1982. 渗入苏丹红的样品,若取样10.00 g,最后浓缩至0.5 ml,点样 [2]GB/T19861—2005.食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱 10 ,则每千克样品中含有0.5 nag苏丹红则可检出。 法[s]. 2.2展开剂的选择 [3]GB/TS009.1—2003.食品卫生检验方法理化部分总则[S]. 从表1中看出,采用正丁醇+无水乙醇+氨水作为展开 (收稿日期:2006—02—27)