Fhit和CerbB-2在乳腺癌进展过程中的表达和意义

◎丫玉～哼ｍ欧应登关键词：乳腺癌；ＦｈｉｔＣｅｒｂＢ一２左慢摊易一现娜代怔ｒ迅呲程删教Ｍ育№第８卷第１１期总第９１期２０１０年０６月・上半月刊Ｆｈｉｔ和ＣｅｒｂＢ一２在乳腺癌进展过程中的表达和意义湖南省益阳市兰溪人民医院（４１３０００）文章编号：１６７２－２７７９（２０１０）一１１—０２５６－０２ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—２７７９．２０１０．１１．２２６脆性组氨酸三联体基因（ｆｒａｇｉｌｅｈｉｓｔｉｄｉｎｅｔｒｉａｄｇｅｎｅ，Ｆｈｉｔ基因）是１９９６年Ｏｈｔａ等用定位克隆及外显子捕获技术在３ｐ１４・２首先克隆出来的，在多种肿瘤中，均有改变，以缺失为主。目前认为，Ｆｈｉｔ基因是一个候选的抑癌基因。ＣｅｒｂＢ．２已证实是一个与肿瘤侵袭行为相关的癌基因，ＣｅｒｂＢ．２的蛋白表达与乳腺癌的组织学分级，临床肿瘤进展期及肿瘤腋淋巴结的转移等显著相关。我们针对上述情况，应用免疫组化Ｓ－Ｐ法检测１０５例乳腺癌组织、乳腺良性肿瘤５０例、正常乳腺对照组织４０例中Ｆｈｉｔ、ＣｅｒｂＢ一２蛋白表达情况，探讨它们之间的内在关系及乳腺癌的发病机制，并为其临床诊断和治疗提供依据。１资料与方法１．１资料选取益阳市中心医院和兰溪人民医院２００６年１月至２００９年９月有完整病例资料的乳腺癌、乳腺良性肿瘤及正常乳腺组织共１９５例，年龄１７岁到７８岁，均为女性，其中乳腺癌１０５例（高分化癌３０例，中分化癌４９例，低分化癌２６例），乳腺良性肿瘤５０例；正常乳腺对照组织（取自乳腺良性肿瘤以外２ｃｍ的乳腺组织）４０例。１．２方法所有标本均采用１０％甲醛固定，常规石蜡包埋切片、ＨＥ染色。鼠抗人．Ｆｈｉｔ多克隆抗体（美国Ｚｙｍｅｄ公司）、鼠抗人Ｃ—ｅｒｂＢ一２多克隆抗体（武汉博士德生物制剂有限公司），采用免疫组化Ｓ－Ｐ法，切片厚４ｕｍ，行微波处理，一抗４。Ｃ过夜，ＤＡＢ显色，以ＰＢＳ缓冲液代替一抗作阴性对照。１．３结果判定Ｆｈｉｔ阳性反应定位于胞浆上，细胞浆染成棕黄色为阳性细胞；Ｃ—ｅｒｂＢ．２阳性反应定位于胞膜上，胞膜染成棕黄色颗粒样为阳性细胞。每张切片观察５个具有代表性的高倍视野，计数５００个细胞中的阳性细胞数，按阳性细胞所占的比例数进行分级：＝＜２５％为（一），２５％～５０％为（＋），５１％～７５％为（＋＋），＞＝７５％为（＋＋＋）。１．４统计学分析数据用ＳＰＳＳｌ２．０软件包处理。采用妒检验、妒趋势检验和Ｆｉｓｈｅｒ确切概率法对数据进行分析。Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相关分析资料的相关性。２结果２．１Ｆｈｉｔ蛋白在正常乳腺组织与乳腺肿瘤组织中的表达三组免疫组化染色后计数结果如表１所示。Ｆｈｉｔ在乳腺癌组织中的阳性率为４８．６％，在乳腺良性肿瘤组中的阳性率为８０％，而在正常乳腺组织中的阳性率为１００％，差异显著有统计学意义ｆ尸＜０．０５）。表１Ｆｈｔ蛋白在正常乳腺组织、乳腺肿瘤组织中的表达注：Ｐ＝１５７．６９、Ｐ＜０．０５２．２Ｃ．ｅｒｂＢ一２蛋白在正常乳腺组织与乳腺肿瘤组织中的表达三组免疫组化染色后计数结果如表２所示。Ｃ．ｅｒｂＢ．２在乳腺癌组中的阳性率为７６．２％，在乳腺良性肿瘤组中有一例表达阳性万方数据表２Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白在正常乳腺组织、乳腺肿瘤组织中的表达注：妒＝１１５．３２、Ｐ＜０．０５率２０％，而在正常乳腺组织不表达阳性率为Ｏ％，差异显著有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。２．３乳腺癌中Ｆｈｉｔ。Ｃ．ｅｒｂＢ．２的表达与乳腺癌分期、分级的关系在浸润性乳腺癌组织中，随着组织学病理分级的增加，临床分期的进展和淋巴结的转移，Ｆｈｉｔ蛋白表达阳性率逐渐下降，Ｃ—ｅｒｂＢ一２蛋白表达阳性率则逐渐上升，宽表３和表４。表３乳腺癌Ｆｈｉｔ，ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的表达与乳腺癌分期的关系注：＋趋势妒＝５．７５、Ｐ＝０．０１６，・・趋势妒＝３．７７、Ｐ＝０．０５２壅！塾堡堕坠！！：曼！！！！：！至皂塑墨姿兰塾璺堕坌墼塑羞墨．乳腺癌分型例数＊Ｆｈｉｔ阳性表达（％）＋＋ｃ—ｅｒｂＢ一２阳性表达（％）注：＋趋势户＝４．１２、Ｐ＝０：０４２，”趋势户＝１１．０４６、Ｐ＝０．００１２．４乳腺癌Ｆｈｉｔ蛋白与Ｃ．ｅｒｂＢ．２蛋白表达的相关性本实验中我们发现，根据Ｃ—ｅｒｂＢ一２表达不同的分组中Ｆｈｉｔ表达有显著性差异，Ｃ．ｅｒｂＢ．２阴性组Ｆｈｉｔ表达率高：Ｃ—ｅｒｂＢ一２表达率越高，Ｆｈｉｔ表达率愈低，Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相关分析显示：乳腺癌组织中Ｃ—ｅｒｂＢ一２和Ｆｈｉｔ的表达呈负性相关（芦．０．３４Ｐ＝０．００１）。见表５。表５乳腺癌Ｆｈｉｔ，ＣｅｒｂＢ一２蛋白表达的相互关系３讨论３．１Ｆｈｉｔ与乳腺癌的关系本研究结果显示：Ｆｈｉｔ基因存在于所有正常乳腺组织，在乳腺良性肿瘤中有缺失，而在乳腺癌中缺失或部分表达，显著低于乳腺良性肿瘤和正常乳腺组。提示：在正常乳腺对照组织、乳腺良性肿瘤和乳腺癌组织中Ｆｈｉｔ蛋白表达在逐步下降，特别在乳腺癌组织中显著下降。认为Ｆｈｉｔ蛋白缺失或部分表达是与乳腺癌发生发展过程密切相关的分子事件，并且早在良性肿瘤阶段，ＦｈＪｔ基因已有缺失。Ｆｈｉｔ基第８卷第１１期总第９１期２０１０年０６月・上半月刊寸玉一哼ｍ名惶㈣为一现咖代雌！＿班呲程删教聪育№因存在于所有正常乳腺组织，主要通过参与细胞周期的调控和凋亡发挥作用，可使细胞受阻于增殖周期的Ｓ期，并激活Ｃａｓｐａｓｅ８、Ｃａｓｐａｓｅ９引起Ｃａｓｐａｓｅ酶介导的凋亡级联反应。正常乳腺细胞的增殖与凋亡共同维持细胞数量的动态平衡。乳腺肿瘤通过Ｆｈｉｔ的缺失或部分表达，阻断凋亡通道，破坏细胞周期调控的精确性，从而保持肿瘤细胞的生长和增殖，因此认为乳腺肿瘤中Ｆｈｉｔ基因缺失或部分表达对乳腺肿瘤的演变、恶性转化起重要作用。本组按乳腺癌分级、分期分组，进行比较表明：Ｆｈｉｔ在乳腺癌中的缺失与组织分级、分期有明显相关性。Ｆｈｉｔ基因缺失与乳腺癌组织的分化程度、临床分期、淋巴结转移等因素密切相关，说明Ｆｈｉｔ基因缺失对乳腺癌的分子生物学行为有重要影响。认为Ｆｈｉｔ的缺失对于乳腺癌的恶性程度和预后的估计有明显价值，可作为判断乳腺癌患者预后的有效指标。３．２Ｃ—ｅｒｂＢ．２与乳腺癌的关系本研究结果显示，正常乳腺组织中无Ｃ—ｅｒｂＢ．２蛋白阳性表达，良性肿瘤组有Ｃ—ｅｒｂＢ．２蛋白阳性表达，而在乳腺癌中高表达，显著高于良性肿瘤组和正常乳腺组，此结果提示，在正常乳腺组织、乳腺良性肿瘤和乳腺癌组织中Ｃ—ｅｒｂＢ一２蛋白表达在逐步升高，特别乳腺癌变后显著升高，认为Ｃ—ｅｒｂＢ．２蛋白过度表达是与乳腺癌发生发展过程密切相关的分子事件，并且早在良性病变阶段Ｃ．ｅｒｂＢ一２已被激活，表达出过量Ｃ—ｅｒｂＢ．２蛋白。在侵袭性乳腺癌中［１’２】，疾病早期即可发现Ｃ．ｅｒｂＢ一２蛋白的过表达；Ｃ—ｅｒｂＢ一２过度表达的乳腺癌侵袭力较阴性表达者强，肿瘤更易、更早出现转移；Ｃ．ｅｒｂＢ一２基因高表达者，恶性度较高，复发率高，术后生存期短；而且Ｃ—ｅｒｂＢ．２蛋白的表达与乳腺癌的临床分期也有密切的关系。本研究按乳腺癌分级、分期分组，进行比较表明：Ｃ—ｅｒｂＢ一２在乳腺癌中的过度表达与组织分级、分期有明显相关性，也与淋巴结转移有明显的相关性，认为Ｃ．ｅｒｂＢ一２蛋白的检测对乳腺癌恶性程度的预测有重要价值。Ｃ。ｅｒｂＢ一２蛋白表达随乳腺癌分期的增加明显增加，认为Ｃ—ｅｒｂＢ．２蛋白表达的强弱对于病情轻重的预测有明显价值。Ｃ—ｅｒｂＢ．２蛋白阳性细胞率高的乳腺癌预示其分期可能较晚。我们知道乳腺癌的分期的主要区别在肿块的大小，淋巴结转移与癌转移，因此推断Ｃ．ｅｒｂＢ一２蛋白的活化与乳腺癌的侵袭转移密切相关，表达Ｃ—ｅｒｂＢ．２蛋白阳性细胞率高的乳腺癌提示其侵袭性强，并提示该病例容易发生或已有癌的转移。３．３乳腺癌中Ｆｈｉｔ与Ｃ—ｅｒｂＢ一２的相互关系及临床意义３．３．１乳腺癌中Ｆｈｉｔ与Ｃ．ｅｒｂＢ一２的相互关系乳腺癌中Ｆｈｉｔ与Ｃ—ｅｒｂＢ一２的相互关系国内外尚未见文献报道。如前所述，Ｆｈｉｔ的缺失与．ＣｅｒｂＢ一２的过度表达都是乳腺癌发生发展的事件，都与乳腺癌演变有关，它们之间是否有着内在联系协同作用而导致乳腺组织的癌变？Ｃ．ｅｒｂＢ一２原癌基因属于酪氨酸激酶Ｉ型受体家族，是一种跨膜蛋白，由细胞外结合功能域、亲脂性的跨膜功能域、细胞内酪氨酸激酶功能域和一段调节性羧基末端构成。Ｃ．ｅｒｂＢ一２参与了正常乳腺组织生长与发育的调节，正常情况下不会引起乳腺细胞癌变。病理状态下，Ｃ—ｅｒｂＢ一２受体表达增多，细胞内酪氨酸激酶的蛋白活化增强，酪氨酸激酶自身磷酸化，信息通道活性提高，信息经细胞膜和细胞间质传至细胞核，激活基因，同时Ｃ—ｅｒｂＢ．２的异二聚体大大减少了细胞内吞过程中的降解，促进Ｃ—ｅｒｂＢ一２循环回到细胞膜，在细胞膜过度表达，加速了细胞的增殖，细胞过度增殖导致肿瘤形成和增长加快。研究表明，Ｆｈｉｔ蛋白存在于细胞浆，是一种Ａｐ３Ａ水解酶，可分解Ａｐ３Ａ成为ＡＭＰ、ＡＤＰ，降低胞内Ａｐ３Ａ水平。而Ａｐ３Ａ为ＡＴＰ类似物，能以底物方式提供磷酸基团从而提高蛋白激酶的活性。因此Ｆｈｉｔ表达下降时Ａｐ３Ａ水平升高可增强万方数据生长信号传递途径，阻断抑癌途径或凋亡通道，导致肿瘤的发生。本研究提示，乳腺癌中Ｆｈｉｔ蛋白与ＣｅｒｂＢ一２蛋白的表达呈负相关，即乳腺癌中Ｆｈｉｔ蛋白表达的缺失与Ｃ—ｅｒｂＢ．２蛋白的表达增加呈正相关。结合前面所述，在病理状态下，Ｃ—ｅｒｂＢ．２基因的激活需要细胞内酪氨酸激酶自身磷酸化，而Ｆｈｉｔ蛋白表达下降时细胞内Ａｐ３Ａ水平升高能以底物方式提供磷酸基团。由此推测，在正常情况下Ｃ—ｅｒｂＢ２基因处于非激活状态，参与细胞生长、分化的调节。而Ｆｈｉｔ存在于大多数正常组织中。当受到某些致癌因素的作用后，信息由细胞膜上Ｃ—ｅｒｂＢ一２蛋白传到细胞浆，使Ｆｈｉｔ蛋白部分表达或缺失，以至Ａｐ３Ａ聚集，以底物方式提供磷酸基团使酪氨酸激酶磷酸化从而启动了Ｃ—ｅｒｂＢ．２蛋白的表达，因此在我们的研究中表现出乳腺癌组织中Ｃ．ｅｒｂＢ一２蛋白的表达与Ｆｈｉｔ蛋白的表达呈负相关。由此我们推测，Ｃ—ｅｒｂＢ．２基因的激活需要胞浆中的Ｆｈｉｔ的缺失，Ａｐ３Ａ聚集提供磷酸基团。Ｆｈｉｔ蛋白的缺失与Ｃ．ｅｒｂＢ一２蛋白的激活间的具体分子机制有待进一步研究。３．３．２乳腺癌中Ｆｈｉｔ与Ｃ—ｅｒｂＢ．２的临床意义有研究表明，Ｃ．ｅｒｂＢ一２癌基因蛋白过度表达者中，患者的５年生存率为２８％，而Ｃ—ｅｒｂＢ．２癌基因阴性者５年生存率为７１％【３】，两者５年生存率有明显差异。淋巴结转移情况是判断乳腺癌患者预后的传统指标，研究发现，病例中淋巴结转移者，Ｃ．ｅｒｂＢ一２阳性率显著增高，有淋巴结转移且Ｃ．ｅｒｂＢ一２过度表达者５年生存率仅为３．３％，由此显示Ｃ—ｅｒｂＢ．２过度表达是乳腺癌预后差的一个指标。Ｃ．ｅｒｂＢ一２作为与乳腺癌分期、组织学分级密切相关的原癌基因，其意义已经明确，在乳腺癌危险度分级及指导治疗作用中已得到广泛应用。乳腺癌分子靶向治疗是指针对乳腺癌发生、发展有关的癌基因及其相关表达产物进行治疗。分子靶向药物通过阻断肿瘤细胞或相关细胞的信号转导，来控制细胞基因表达的改变，而抑制或杀死肿瘤细胞。赫赛汀（曲妥珠单抗，Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ，ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）是以Ｈｅｒ－２为靶点的人源化单克隆抗体，已成为乳腺癌治疗领域第一个分子靶向性药物，为临床治疗带来了新突破。其作用机制是与ＨＥＲ－２受体结合后干扰后者的自身磷酸化及阻碍异源二聚体形成，抑制信号传导系统的激活。Ｆｈｉｔ作为较新的肿瘤抑制基因，在乳腺癌组织中其低表达与Ｃ．ｅｒｂＢ一２高表达应当有同等意义——分化较差，侵袭性强，预后不良。研究表明，乳腺浸润性导管癌ＦＨＩＴ蛋白表达与导管内癌比较差异有显著性，乳腺癌伴淋巴结转移组ＦＨＩＴ蛋白表达率与未伴淋巴结转移组比较差异有显著性：提示ＦＨＩＴ蛋白低表达与乳腺癌的侵袭、转移相关。ＦＨＩＴ基因异常、ＦＨＩＴ蛋白低表达均与乳腺癌进展相关；ＦＨＩＴ的低表达与乳腺癌患者无病生存率及其他多项临床病理指标显著相关【４】；Ｆｈｉｔ蛋白用免疫组化方法易于检测，因此可能成为一种新的预后分子指标用于临床监测患者预后。本实验中可看到，在原癌蛋白Ｃ—ｅｒｂＢ一２高表达的病理组织中，同时存在着抑癌基因Ｆｈｉｔ低表达的趋势。联合检测乳腺肿瘤组织中Ｆｈｉｔ蛋白，Ｃ—ｅｒｂＢ．２蛋白的异常表达，有助于对肿瘤恶性程度、侵袭性，及预后做出正确的评价。参考文献［１］ＫａｐｔａｉｎＳ，ＴａｎＬＫ，ＣｈｅｎＢ．ＨＥＲ一２／ｎｅｕａｎｄｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＤｉａｇｎＭｏｌＰａｔｈｏｌ，２００１，１０：１３９．［２１史金兰，陈萍倩，林裕嫒，等．乳腺癌雌孕激素受体与ＣｅｒｂＢ一２、ｐ５３、ｎｍ２３基因表达及相关分析［Ｊｊ实用肿瘤学杂志，２００１，１３（１）：１０—１２．［３］李俐，尹力心，张东旗，等．乳腺肿瘤中ＥＭＡ、ＣＡｌ５—３，ＥＲ、ＰＲ、ＰＣＮＡ、ＣｅｒｂＢ一２、１）５３的表达及生物学潜能的研究叨．中国厂矿医学，２００４，１７（２）：１２９．［４】王甜甜，马榕．ＦＨＩＴ基因与乳腺癌［Ｊ】中国普通外科杂志，２００５，１４（４）：２９４—２９６．（本文校对：张文娟收稿日期：２０１０．０３．２３）