检测甲型H1N1流感病毒富集方法的初步探索

医学研究杂志２０１０年６月　第３９卷第６期　地预防、控制疫情及治疗做准备。由于有些临床样品　病毒数量极少，浓度极低，难以直接检测，参考目前提　高环境水体中的病毒浓度的方法　，对样品中Ｈ１Ｎ１　流感病毒的浓集采取免疫学反应法和免疫吸附法。　・论　著・　达１０～，检测的灵敏度又提高ｌ０倍，所采用的病毒　富集方法效果是显著的，说明通过用富集病毒的方　法，使检测灵敏度得到提高，有可能为Ｈ１Ｎ１病毒分　子检测提供新的思路和方法依据，同时也为其他　ＲＮＡ病毒的分子检测提供新的模式。　参考文献　１　卢锦汉，章以浩，赵铠．医学生物制品学［Ｍ］．北京：人民卫生出版　社，１９９５：６４２—６５１；２版，２００７：８０５—８１０　其中免疫学方法（抗原抗体反应）其敏感性非常高、　特异性强、操作简便；免疫吸附法在免疫学方法的基　础上进一步浓集病毒，使检测的敏感性更高、特异性　更强。通过富集，增加了病毒量，浓缩并纯化了检测　的病毒样品，排除了干扰。对用于ＰＣＲ方法检测的　样品，消除了抑制物的影响　。在本实验中有两个　特异性选择过程，一是抗原一抗体的特异性免疫结　２陆学东．临床常见呼吸道病毒及其实验室诊断技术［Ｊ］．中华检验　医学杂志，２００９，３２（８）：９５６—９６０　３　Ｚｉｅｇｌｅｒ　Ｔ，Ｈａｌｌ　Ｈ，Ｓａｎｃｈｅｚ—Ｆａｕｑｕｉｅｒ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｔｙｐｅ　ａｎｄ　ｓｕｂｔｙｐｅ—　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｆｌｕｅｎｚａ　ｖｉｒｕｓｅｓ　ｉｎ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ　ｂｙ　ｒａｐｉｄ　合。另一个是Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ／Ｇ与抗原一抗体免疫复合物　的又一次特异性结合，保证了抗原样品的纯度及灵敏　度，减少了非特异性，降低了检测结果的假阴性，提高　了ＲＴ—ＰＣＲ检测的灵敏度。实验中选择Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ／　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｓｓａｙ　Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９５，３３：３１８—３２１　４　Ｄｏｌｌｅｒ　Ｇ，Ｓｃｈｕｙ　Ｗ，Ｔｊｈｅｎ　ＫＹ．ｅｔ　ａ１．Ｄｉｒｅｃｔ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｆｌｕｅｎｚａ　ｖｉ－　ｈｉｓ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｉｎ　ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ　ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ　ｂｙ　ｄｉｒｅｃｔ　ｅｎｚｙｍｅ　ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　ｉｎ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｗｉｔｈ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｎｇ　ｖｉｒｕｓ　ｓｈｅｄｄｉｎｇ．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１．　１９９２，３０：８６６—８６９　Ｇ，是利用其特性来富集、浓缩病毒以提高检测的灵　敏度。Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ／Ｇ是使用Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ与Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｇ的　抗体结合结构域融合后的重组蛋白和树脂偶联制成。　由于Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ／Ｇ连接所有人类ＩｇＧ亚类、还有ＩｇＡ、　５　中华人民共和国卫生部．甲型Ｈ１Ｎ１流感诊疗方案（２００９年试行版　第１版）［Ｊ］传染病信息，２００９，２２（３）：Ｉ～Ⅲ　６贾菲综述，高宝荣，朱春玉，等．高致病性禽流感病毒实验室检测方　法研究进展［Ｊ］．国际病毒学杂志，２００９，１６（２）：３９—４３　７王四全，吴俊，曹玉广．水体中病毒富集方法研究进展［Ｊ］．中国公　共卫生，２００９，２５（１１）：１２８７—１２８９　ＩｇＥ、ＩｇＭ及少量的ＩｇＧ，且连接不受环境条件ｐＨ的影　响。Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ／Ｇ使用多位点交联技术，稳定性好、特　异性高并具有广谱结合力，每毫升基质可特异性结合　６～１０ｒａｇ抗体。　８陈小岳，田海林．水体肠道病毒的浓集及核酸检测方法的应用　［Ｊ］．职业与健康，２００７，２３（４）：２９３—２９５　９陈军红，周志军，张林，等．空气和水环境中病毒的富集与检测研究　进展［Ｊ］．中国公共卫生，２００５，２１（４）：５０２—５０４　（收稿：２０１０一叭一２９）　（修回：２０１０—０４—０５）　由结果可知，对样品直接ＲＴ—ＰＣＲ，其检测的稀　释度仅约１０　（１：５００），当采用ＨｌＮ１特异性血清免　疫沉淀病毒后，其检测的稀释度提高至ｌ０～，而用特　异性血清与Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ／Ｇ联合使用，其检测的稀释度　虎杖苷吸入剂对哮喘大鼠模型炎性细胞的影响　江庆澜　雷秀霞　梁颜笑　刘桂长　巫小莉　梁成结　连家燕　摘　要　目的　分析虎杖苷吸入剂对支气管哮喘大鼠模型的干预效果。方法　以１０％的卵蛋白（ＯＶＡ）和３％的氢氧化铝　混合液腹腔注射实验大鼠２次致敏，然后以２％的ＯＶＡ诱喘并进行虎杖苷和氨茶碱干预及生理盐水对照实验两周。观察实验大　鼠诱喘和药物干预后的行为变化和肺组织切片、检测各组大鼠心室血中白细胞（ＷＢＣ）、嗜酸性粒细胞（ＥＯＳ）、嗜碱性粒细胞　（ＢＡＳＯ）、中性粒细胞（ＮＥＵＴ）和淋巴细胞（ＬＹＭ）的数量变化。结果在诱喘过程中，虎杖苷干预组大鼠的哮喘症状得到明显改　善，虎杖苷干预组大鼠ＥＯＳ、ＬＹＭ和ＭＯＮＯ数量［（０．１３３９±０．０１７９４）×１０　／Ｌ，（６．５４４０±０．４９５３０）×１０　／Ｌ，（０．２１４８±０．０８２８７）　×ｌ０　／Ｌ］较哮喘对照组大鼠的ＥＯＳ、ＬＹＭ和ＭＯＮＯ［（０．１９４８±０．０２４５４）×１０　／Ｌ，（８．００９０±０．７１１６６）×１０　／Ｌ，（０．２９４６±　０．１４２５７）×１０　／Ｌ］有所下降（Ｐ＜０．０５，Ｐ＞０．０５，Ｐ＞０．０５），且与正常对照组水平（０．１２５７±０．０２４５４，６．９６１０±０．９７２４３，０．１９７４±　基金项目：广州市医药卫生科技项目（２００８一ＹＢ一０２７）；广州市中医药、中西医结合科技项目（２００９一Ａ一０５）　作者单位：５１０１８０广州市第一人民医院（江庆澜，雷秀霞，梁颜笑，刘桂长，巫小莉）；５１０１８２广卅ｌ医学院（梁成结，连家燕）　・７３・