富含甘油二酯的大豆油制备工艺优化

５４　粮食与油脂　２０１７年第３０卷第１　１期　富含甘油二酯的大豆油制备工艺优化　刘晓娟，张姗姗，吴　琼　（长春大学食品科学与工程学院，农产品深加工省重点实验室，吉林长春１３００２２）　摘要：在无溶剂体系中采用磷脂酶催化，制备富含甘油二酯的大豆油。采用气质联用检测　甘油二酯含量。考察水解时间、水解温度、加水量、加酶量以及ｐＨ对反应的影响。通过响　应面试验，得出最佳水解条件为加水量２５　ｍＬ、水解温度４Ｏ　、加酶量７００　ｇＬ、反应时间　１２　ｈ。在最佳工艺条件下，得到大豆油中甘油二酯含量为１６．３％。所得回归模型拟合情况良好，　达到设计要求。　关键词：大豆油；甘油二酯；磷脂酶；水解　Ｕｐｎｌ、　』●　●珈ｚａｎｏｎ　　●　ｏｉ　ｎ　ｐｒｅｐａ瑚Ｉｎｏｎ　●　ｐｒｏｃｅｓｓ　０ｔｎ　　ｓｏｙｂｅａｎ　’　ｏｆｆ…　ｒｉ　一ｃｈ　　●ｍ￣　＇・ｈ￣ｙｃｅｒｉ　一　－一ｄｅ　　ＬＩＵ　Ｘｉａｏ－ｊｕａｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｓｈａｈ—ｓｈａｈ，、ＶＵ　Ｑｉｏｎｇ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｏｆ　Ｊｆｌｉｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　Ｏｒｄｉｎａｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００２２，Ｊｉｌｉｎ，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｏｙｂｅａｎ　ｏｉｌ　ｒｉｃｈ　ｉｎ　ｄｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ　ｗａｓ　ｃａｔａｌｙｓｅｄ　ｂｙ　ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ　ｉｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ－ｆｒｅｅ　ｓｙｓｔｅｍ．ＧＣ－ＭＳ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｄｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ．Ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｔｉｍｅ，ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｗａｔｅｒ　ｃｏｎｔｅｎｔ，ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｎｄ　ｐＨ　ｏｆ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｏｎｄｉｉｔｏｎｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｂｙ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｌｏｗｓ：　ｗａｔｅｒ　２５　ｍＬ，ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　４０℃，ｅｎｚｙｍｅ　ｄｏｓａｇｅ　７００　，ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｌ　２　ｈ．Ｕｎｄｅｒ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｄｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｗａｓ　１　６．３％．Ｔｈｅ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｍｏｄｅｌ　ｗａｓ　ｒｕｔｔｅｄ　ａｔ　ｉｆｔｔｉｎｇ　ｉｎ　ｇｏｏｄ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，　ｔｏ　ｍｅｅｔ　ｈｅ　ｔｄｅｓｉｇｎ　ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｓｏｙｂｅａｎ　ｏｉｌ；ｄｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ；ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ；ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　中图分类号：ＴＳ２２５．１＋３　文献标识码：Ａ　文章编号：１００８．９５７８（２０１７）１１－００５４—０５　甘油二酯（Ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ，ＤＡＧ或ＤＧ），是　甘油三酯（ＴＡＧ）中一个脂肪酸（Ｆｒｅｅ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ，　ＦＦＡ）被羟基代替的结构脂质，是由１分子丙三醇　（Ｇｌｙｃｅｒｏｌ，Ｇｌｙ）和２分子ＦＦＡ反应的产物，又称　双甘酯、甘二酯、二甘酯。甘油二酯主要有２种　豆油中脂肪酸以人体所需不饱和脂肪酸为主且含有　１．１％～３．２％的磷脂，因此具有降低胆固醇、预防心　血管疾病发生、增强记忆力等生理功效　”。　本研究采用磷脂酶Ａ　催化水解大豆油制取甘　油二酯，气质联用色谱仪测定甘油二酯含量，并通　过响应面试验设计对工艺条件进行优化，旨在为甘　异构体：１，３．甘油二酯与１，２一甘油二酯　。］。研　究表明，甘油二酯具有良好的降低血脂、减轻体重、　减少体脂、预防动脉血栓、缓解糖尿病和肾病的　作用　，而且食用安全　，不产生副作用，长期　油二酯的工业生产提供理论依据。　１材料与方法　１．１材料与试剂　食用可以辅助治疗临床多种代谢性疾病。此外，　甘油－－－Ｎ的口感、色泽和风味与普通的甘油三酯无　异【１…。甘油二酯的制备主要有生物法、化学合成　法和酶法等。在酶法制备甘油二酯中常用的有甘油　三酯水解法…］、脂肪酸酯化法　等方法。酶法反　磷脂酶Ａ　：诺维信公司；大豆油：九三粮油　工业集团有限公司；脂肪酸混合标样（１５Ａ，棕榈酸，　油酸，亚油酸，亚麻酸）、油酸甘油二酯（Ｄ．２３７）、　亚油酸甘油二酯（Ｄ　２５２）、棕榈酸甘油二酯（Ｄ一　１５２）、硬脂酸甘油二酯（Ｄ一１６２）：武汉美泰克　科技有限公司。　应条件温和，酶的选择性高，较易得到高纯度的１，３．　甘油二酯［１　３］０我国粮油学会也已经把ＤＡＧ等功能　性油脂列为长期发展规划的主要研究内容［１４－１６］０大　无水乙醇、石油醚（沸程６０～９０℃）、磷酸二　氢钾、磷酸氢二钠、氢氧化钾、酚酞、正己烷、甘　收稿日期：２０１６—１０—２９　基金项目：吉林省科技发展计划项目（２０１４０５２０１８０ＪＨ）　作者简介：刘晓娟（１９９０－－），女，硕士研究生，研究方向为天然产物开发与利用。　通信作者：吴琼（１９７８一），女，副教授，博士，研究方向为天然产物开发与利用。　２０１７年第３０卷第１　１期　粮食与油脂　５５　油标准品、硫酸、无水甲醇、甲苯等均为分析纯。　１．２仪器与设备　ＨＨ２一型恒温水浴锅：天津泰斯特仪器有限公　司；ＮＴＳ。４０００Ｂ．型恒温震荡水槽：日本东京理化　公司；ＬＤ４—２Ａ一型离心机：北京京立离心机有限公　司；ＤＨＧ．９２４０Ａ．型电热恒温鼓风干燥箱：上海精　宏实验设备有限公司；ＧＣＭＳ—ＱＰ２Ｏｌ０．型气质联用　色谱仪：日本岛津公司。　１．３方法　１．３．１酶活测定　脂肪酸标准曲线绘制：配制一系列不同浓度　的油酸正己烷溶液，分别取１６　ｍＬ于锥形瓶中，　加入２　ｍＬ　５％的醋酸铜溶液，磁力搅拌３　ｍｉｎ，在　６　０００　ｒ／ｍｉｎ条件下离心５　ｍｉｎ，离心后取上层有　机相在７ｌ０　ｎｍ处测定吸光度。未加油酸的空白　溶液作参比，以吸光度对油酸浓度作图，得到　线性回归方程：ｙ＝８．８０６２ｘ＋３．２６９　＝０．９９４７）。　酶活测定方法：取３　ｍＬ　Ｏ．０２　ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓　冲溶液和１　ｍＬ橄榄油，放人３７℃的水浴恒温磁力　搅拌器中预热５　ｍｉｎ，加人１００　ｇＬ磷脂酶，磁力搅　拌１０ｍｉｎ，立即加入８ｍＬ甲苯，继续搅拌２ｍｉｎ，　终止反应后，在４　０００　ｆｍｉｎ下离心１０　ｍｉｎ，取上　层有机相４　ｍＬ于锥形瓶中，加入１　ｍＬ显色剂，　磁力搅拌３　ｍｈａ，然后在６　０００咖血条件下离心１０ｍｉｎ，　取上层含有脂肪酸铜的甲苯溶液，用分光光度计在　７１０啪波长处测吸光度。用相同的方法制备不含酶　的空白溶液作参比。经测得磷脂酶酶活为５５０　Ｕ／ｇ。　１－３．２磷脂酶法水解大豆油　称取豆油５０　ｇ于２００　ｍＬ锥形瓶中，依次加入　一定量的去离子水和磷脂酶，待达到预定温度，放　人恒温水浴振荡器中，在１５０　ｒ／ｍｉｎ的振荡条件下　反应一定时间，反应后的混合液为大豆油水解液。　１．３－３单因素试验　以大豆油为样品，甘油二酯含量为考察对象，　分别对水解时间、水解温度、加水量、加酶量以　及ｐＨ　５个因素进行单因素试验，各因素试验因素　水平设计表见表１。结果显示，水解时间均大于　１２　ｈ且基本稳定，ｐＨ在６．４５～７．２５之间基本稳定，　所以响应面考察了水解时间、水解度及加酶量３　个因素。　表１单因素试验因素与水平　水平　加旭／ｍＬ　，ｌｌＬ　ｐＨ　‘　３　３０　１０　５Ｏ　５．５５　５　３５　２０　ｌ０Ｏ　６．４５　８　４０　２５　３００　６．６５　１０　４５　３０　５００　６．８５　１２　５Ｏ　４０　７００　７．２５　１６　６０　５０　８００　７．４５　１．３．４响应面优化试验　基于单因素试验结果，设定水解时间为１２　ｈ，　ｐＨ为体系原有酸值。采用响应面试验设计法，以　水解温度、加水量、加酶量３个因素为自变量，确　定响应面法设计试验的因素水平见表２。　表２响应面试验的因素水平表　１．３．５甘油二酯测定方法　１．３．５．１样品甲酯化　取大豆油水解液适量，加入甲醇，用量为水解　液体积的１．５倍，加入硫酸（催化剂），用量为加　入甲醇量体积的２ｏ／ｏ，在７８℃下冷凝回流２．５　ｈ。甲　酯化后用９５℃的热水洗涤，除去杂质及剩余硫酸，　取上层清液检测甘油二酯含量。　１．３．５．２成分测定　取适量甲酯化的样品溶于石油醚，配成５％样　品溶液，然后用气质联用色谱仪分析脂肪酸组成。　色谱分析条件：ＧＳＢＰ－ＳＭＳ型色谱柱，膜厚０．５０　岫，长度３０　ｍ，内径０．２５　ｎｌｌｎ，采用程序升温，　ＧＣ柱箱温度１９０℃，最终温度３００　ｏＣ，进样口温度　２５０℃，线速度３０　ｃｍ／ｓ，吹扫流量３．０　ｍＬ／ｍｉｎ，分　流比４０：１。ＭＳ离子源温度２００　ｏＣ，接口温度　２００　ｏＣ，溶剂延迟时间２ｍｉｎ。　２结果与分析　２．１响应面试验结果与分析　利用Ｄｅｓｉｇｎ—Ｅｘｐｅ￣Ｓｏｔｔｗａｒｅ　８．０５ｂ软件设计响　应面试验，以ＤＡＧ含量为响应值ｙ，试验结果见　粮食与油脂　２０１７年第３０卷第１　１期　表３，方差分析见表４。对数据进行二次多元回归　拟合，得到在给定的范围内预测甘油二酯含量的回　归方程：　ｙ＝１　３．９０＋０．３５Ｘｌ＋０．７４Ｘ２＋３．０４Ｘ３十１．０７Ｘ１Ｘ２—　验结果的干扰很小；相关系数Ｒ　：０．８５９　７，说明该　模型对实际情况拟合程度较好，可以用该模型对磷　脂酶催化合成甘油二酯进行分析和预测。在给定的　水平范围内，一次项　影响极显著（Ｐ＜０．ｏＤ，二　次项　，　影响极显著（ＪＰ＜０．ｏ１）。　利用Ｄｅｓｉｇｎ．Ｅｘｐｅｒｔ软件对数据进行二次多元　回归拟合，３个因素之间的交互作用见图５～７。由　图５～７可知，在所选试验条件范围内存在响应面　最高点。在响应面三维图中，等高线越扁平，表示　因素之间的相互影响越大，可知加酶量和加水量对　ＤＡＧ影响比较大。酶在不改变平衡状态下，与底　物形成活性中间体降低了反应活化能，从而提高反　０．６２Ｘ　Ｘ３＋０．０７９Ｘ￣（３—４．０６Ｘ１Ｌ　１．５６Ｘ２　＋０．５８Ｘ３　表３响应面试验结果　应效率。但是过量的酶不能完全悬浮，造成乳化界　面减小，影响反应继续进行．Ｉｌ８　，也造成酶的浪费　和反应成本的增加。在各因素指定范围内，ＤＡＧ　含量随着温度的增加先升高后降低。酯化反应是一　个吸热反应，提高反应温度有利于反应进行，但是　酶在最适温度下具有最高活性。因此，反应体系需　要恒温最适温度。　００　４５　００　篓　ｏ００　鞋　＊　３５＿００　注：＋・表示差异极显著，Ｐ＜０．０ｌ；　表示差异显著，０．Ｏｌ＜　Ｐ＜Ｏ．Ｏ５。　ｌ０００　１６　００　：　００　２８　００　３４００　４０００　Ｉ：ＪＪ¨水ＩｄＪｍＬ　由表４可知：本研究得到的模型具有高度显著　性（Ｐ＜０．０１），失拟项不显著，说明未知因素对试　图５加水量和水解温度交互影响ＤＡＧ含量的晌　应曲面图及等高线图　２０１７年第３０卷第１　１期　粮食与油脂　２．２验证试验　５７　利用软件的分析得出最优的反应条件为加水量　２５　ｍＬ、水解温度４０℃、加酶量７００　０Ｌ，此时ＤＡＧ　含量最大预测值为１７．４５％。为验证回归模型的可　靠性，在此最优条件下做３次验证试验，得到的　ＤＡＧ含量分别为１５．９８％、１６．２４％、１６．８７％，平　均含量为ｌ６．３０％，预测值与试验值拟合良好，进　一步证明该模型是可行的。　利用磷脂酶催化大豆油合成甘油二酯，以　５００　００１０　００　２．３甘油酯及脂肪酸检测　ＤＡＧ含量／％　ＧＣ．ＭＳ测定最佳反应条件下油样的成分，结果如　６５０ｏ０　图８所示。图８（ａ）中，Ａ为标样Ｄ．１５２、Ｂ为标样　Ｄ一２５２、Ｃ为标样Ｄ．２３７、Ｄ为ｌ５Ａ、Ｅ为磷脂酶　咖　避６００　００　水解后的油样气质图。Ｄ中根据标样出峰顺序为棕　榈酸甲酯、亚油酸甲酯、油酸甲酯、硬脂酸甲酯和　５５０　００　花生酸甲酯及合成的甘油二酯。图８（ｂ）为图８（ａ）　中Ｅ的ＤＡＧ部分放大图。　１０Ｏ０　Ｉ６　０ｏ　２２　０ｏ　２８　ｏ０　３４０ｏ　４０　ｏ０　Ｘｔ：加水量／ｍＬ　图６加水量和加酶量交互影响ＤＡＧ含量的响应　曲面图及等高线图　时间／ｍｉｎ　（ａ）　００　嘿　６５０　００　蚓　避６０ｏ０ｏ　６０　６４　６８　５５０．００　时间／ｍｉ“　（ｂ）　图８磷脂酶催化大豆油的ＧＣ图　３０　００　３５　ｏ０　４０　００　４５　００　５０　００　：水解　ｆ｛ｉ＝／℃　图７加酶量和水解温度交互影响ＤＡＧ含量的响　应曲面图及等高线图　５８　粮食与油脂　２０１７年第３０卷第１１期　３结论　本试验采用磷脂酶Ｌｅｃｉｔａｓｅ　Ｕｌｔｒａ催化大豆油　水解反应制备ＤＡＧ。反应在无溶剂体系中进行，　避免了使用其他溶剂带来的毒害和溶剂回收等问　题。测得磷脂酶酶活为５５０　Ｕ／ｇ；酶促反应的最佳　工艺参数为加水量２５　ｍＬ、水解温度４０℃、加酶　量７００　ｇＬ、反应时间１２　ｈ，反应得到的ＤＡＧ含量　占总量的１６Ｉ３％　［参考文献］　［１］ＷＡＴＡＨＡＢＥ　Ｌ　ＳＵＧＩＵＲＡＭ，ＳＡＴＯ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ａ　ｐａｃｋｅｄ　ｂｅｄ　ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ［Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｂｉｏ—ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　２００５，４０（２）：６３７—６４３．　［２］黄楚楚，熊辉煌，龚斌，等．脂肪酶催化单油酸甘油酯制备功　能性ｌ，３一甘油二酯［Ｊ］ｌ食品科学，２０１５，３６（２２）：１－５．　（３］ＷＨＡＬＬＥＹ　Ｈ　Ｃ，ＰＡＰＭＥＹＥＲ　Ｍ，ＲＯＭＡＮＩＵＫ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｄｉａｃｙｌａｌｙｃｅｒｏｌ　ｋｉｎａｓｅ　ｅｔａ（ＤＧＫＨ）ｇｅｎｅ　ｏｎ　ｂｒａｉｎ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ａ　ｃｈｏｒｔ　ａｔ　ｆａｍｉｌｉａｌ　ｒｉｓｋ　ｏｆ　ｂｉｐｏｌｒａ　ｄｉｓｏｒｄｅｒ［Ｊ］．　Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｒｎａｃｏｌｏｇｙ，２０１２，３７（４）：９１９—９２８　［４］ＷＡＬＴＥＲＭＡＮＮ　Ｍ，ＳＴＯＶＥＫＥＮ　ＳＴＥＩＮＢＵＣＨＥＬ　Ａ．Ｋｅｙ　ｅｎｚｙｍｅｓ　ｆｏｒ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｎｅｕｔｒａｌ　ｌｉｐｉｄ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｉｎ　ｐｒｏｋａｒｙｏｔｅｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ｗａｘ　ｅｓｔｅｒ　ｓｙｎｔｈａｓｅｓ／ａｃｙｌ—ＣｏＡ：ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ　ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ［Ｊ１＿　Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，２００７，８９（２）：２３０—２４２．　［５］刘小如，张超，胡蒋宁，等．酶催化茶油合成甘油二酯工艺及　脂肪酸变化［Ｊ】．食品科学，２０１３，３４【２）：３６—４１．　［６］ＹＡＳＵＴＡＫＥ　Ｋ，ＮＡＫＡＭＵＴＡ　Ｍ，ＳＨＩＭＡ　ｅｔ　ａ１．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｏｎ—・ｏｂｅｓｅ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｎｏｎ・・ａｌｃｏｈｏｌｉｃ　ｆａｔｔｙ　ｌｉｖｅｒ　ｄｉｓｅａｓｅ：Ｔｈｅ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ　ｏｆ　ｄｉｅｔａｒｙ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ［Ｊ］．Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００９，４４（４）：４７１—４７７．　［７］ＹＡＭＡＭＯＴＯ　Ｋ，ＴＯＭＯＮＯＢＵ　Ｋ，ＡＳＡＫＡＷＡ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉｅｔ　ｔｈｅｒａｐｙ　ｗｉｔｈ　ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ　ｏｉｌ　ｄｅｌａｙｓ　ｔｈｅ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｎａｌ　ｆａｉｌｕｒｅ　ｉｎ　ｔｙｐｅ　２　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｈｔ　ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ｃａｒｅ，２００６，２９（２）：４１７—４１９．　［８］ＬＩＵＮ，ＷＡＮＧ　ＺＨＡＯＱｚ，ｅｔ　ａ１．Ｆａｓｔ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ１，３一ＤＡＧｂｙ　Ｌｅｃｉｔａｓｅ￣Ｕｌｒｔａ－ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ—ｆｒｅｅ　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＬｉｐｉｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，１１３（８）：　９７３．９７９．　［９］ＹＥＨ　ｖ，ＢＥＮＯ　Ｄ，ＢＲＯＤＪＩＡＮ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｐｏｔｅｎｔ，ｓａｆｅ，ａｎｄ　ｏｒａｌｌｙ　ｅｆｉｆｃａｃｉｏｕｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆ　ａｃｙｌ—ＣｏＡ：ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ　ａｃｙｌｒｔａｎｓｆｅｒａｓｅ　ｌ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＭｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１２，５５（４）：１７５卜１７５７．　［１０］ＢＬＡＳＩ　Ｆ，ＣＯＳＳＩＧＮＡＮＩ　Ｌ，ＳＩＭＯＮＥＴＴＩ　Ｍ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．　Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｅｄ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｓｎ一１，３一ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ　ｏｉｌ　ｆｒｏｍ　ｅｘｔｒａ　ｖｉｒｇｉｎ　ｏｌｉｖｅ　ｏｉｌ［Ｊ］．Ｅｎｚｙｍｅ　ａｎｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，　４１（６／７）：７２７－７３２．　［１１］ＷＡＮＧ　Ｙ，ＺＨＡＯ　Ｍ　Ｍ，ＯＵ　Ｓ　Ｙ＇ｅｔ　ａ１．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ—ｅｎｒｉｃｈｅｄ　ｐａｌｍ　ｏｌｅｉｎ　ｂｙ　ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ　Ａ（１）一　ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｐａｒｔｉａｌ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＬｉｐｉｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，ｌ１１（７）：６５２—６６２．　（１２］ＬＯ　Ｓ　Ｋ，ＣＨＥＯＮＧ　Ｌ　Ｚ，ＡＲＩＦＩＮ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ　ａｎｄ　ｔｒｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ　ａｓ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｉｎ　ａ　ｄｕａｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ—ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｆｏｒ　ｄｉａｃｙｌｇ１ｙｃｅｒ０ｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｌｉｐａｓｅ—ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｅｓｔｅｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ａ　ｐｉｌｏｔ　ｐａｃｋｅｄ—ｂｅｄ　ｅｎｚｙｍｅ　ｒｅａｃｔｏｒ［Ｊ］．Ｊｏｕｍａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００７，５５（１４）：５５９５—５６０３．　（１３］朱顺达，高红林．酶法合成甘油二酯的研究进展【Ｊ】．粮油与　食品工业，２００６，１３（６）：１２—１４．　［１４］段章群，杜伟，刘德华．生物酶法制备１，３一甘油二酯［ＪｌＪ．化　学进展，２００９，２１（９）：１９３９—１９４４．　［１５］ＹＥＯＨＣＭ，ＣＨＯＯＮＧＴＳＹＡＢＤＵＬＬＡＨＬＣ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｓｉｌｃａ　ｇｅｌ　ｉｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｆ０ｌ　ｖｉａ　ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｇｌｙｃｅｒｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｐａｌｍ　ｏｌｅｉｎ［Ｊ】．Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｌｉｐｉｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，１　１　ｌ（６）：５９９—６０６．　［１６］中国粮油学会．２０２０年中长期发展规划植物油与油脂加ｌｒ新　技术［Ｊ］．粮油加工与食品机械，２００３（１１）：８－１１．　［１７］段毅．大豆生化成分及其生理工能功效　．甘肃科技，２００５，　２１（３）：１６８—１６９．　［１８］孟祥河，潘秋月，邹冬芽，等．无溶剂体系中酶催化亚油　酸、甘油生产１，３．甘油二酯工艺的研究［Ｊ】．中国油脂，２００４，　２９（２）：４７—５０．