提取香菇多糖测的实验设计

提取香菇多糖测的实验设计

----生物091班 曹雅淇

实验目的：掌握水溶醇沉法分离多糖类化合物的原理和方法。

实验原理：在组织中，多糖多与蛋白质以共价相结合，所以在生化产品制备工艺中，往往第一步多用酶降解蛋白质部分或用碱使多糖—蛋白质间的键裂开，以促进多糖在提取时的溶解。碱性提取可避免多糖中硫酸基团水解而破坏。现多采用碱性提取的同时用蛋白质水解酶处理组织。提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉淀剂使之沉淀，也可用其他方法使变性沉淀，如适当调pH和加热等。

实验用具：离心机 漏斗 铁架台案板、刀 洗耳球 量筒 平底锅 烧杯 98%酒精

酒精灯 天平 研钵 电炉子 香菇 石油醚

实验方法步骤：

1.样品的处理

1）称量：将新鲜的香菇洗净后用托盘天平称量其质量，记为m1；

2）切碎：称量后的香菇用刀再案板上尽量切碎；

3）研磨：切碎后的香菇再放入研钵中研磨，

2、香菇汁液的提取

1）加水预热：

用量筒量取体积为五倍于香菇质量数的蒸馏水，记体积数为v1,然后倒入铝锅中。随后打开电炉给锅内蒸馏水加热至沸腾；

2）装锅：

再把研磨后的香菇放进煮沸的蒸馏水中，边煮边搅拌以防香菇粘在锅底。当水分减少时，在适当时候往锅内加适量的蒸馏水，定容至v1；

3）出锅：

大约煮1.5h后关掉电路的开关，冷却后将香菇汁液倒出，边倒出边进行过滤；

3、过滤

漏斗下放置一烧杯并使漏斗管贴着烧杯内壁，接着用四层纱布过滤，过滤时尽量把纱布内的和浸到纱布里的汁液过滤到烧杯中，记下过滤后的体积数为v2；

4、蒸发浓缩

打开电路的开关，使盛有过滤液的烧杯隔着石棉网在电炉上加热蒸发浓缩，直至体积数为=v3

5、多糖的提取

5.1沉淀

1）酒精的配置：配置95%浓度的酒精，酒精的量与v3成1：5的比例，记体积为v4。盛装酒精的烧杯并用封口膜密封以免酒精挥发；

2）静止沉淀：将配置的酒精与浓缩液混合后静置24h，每隔一定时间观察混合液的变化；

5.2离心

1）多糖的分离：

静止后的多糖混合液分别把上清液倒入烧杯中，剩下用酒精沉淀的絮状物装入烧杯里；

2）装瓶：

拿一只离心用的瓶子装入絮状物和少许上清液总体积约占瓶子的2/3，并用电子天平称出其质量再拿另一只瓶子装入同等质量的上清液。就这样每两个一组称、装，边称装边及时盖紧瓶盖并在瓶的一侧贴上标签记上组数和酒精浓度。

3）离心：

合上离心机的开关并打开离心机放入盛有需要离心的瓶子。放入时，一组中的两只瓶子（质量相同的一只絮状物、一只上清液的两只瓶子）的坐位要对称。合上离心机后，4500

转/min，10min

4）分离：

将离心后将瓶内底部沉淀物用玻璃棒置入培养皿中

5.3烘干

将培养皿放入烘箱内烘干（121℃，30min）,烘干后的多糖用培养皿称出其质量盖好皿盖避免多糖吸水。