不同水飞蓟素制剂的人体药动学研究

・实验研究・　２０１３年７月第１０卷第１９期　不同水飞蓟素制剂的人体药动学研究　罗小平　郭晓平　湖北五二五投资有限公司医院药剂科，湖北襄阳４４１０２１　『摘要１目的制备水飞蓟素固体分散体胶囊剂，考察不同水飞蓟素制剂的体外溶出度和人体药动学特性。方法　采用溶剂法和熔融法制备水飞蓟素固体分散体，并进行不同水飞蓟素制剂体外溶出度和人体药动学研究。结　果制备的水飞蓟素固体分散体胶囊剂的溶出度和生物利用度均高于市售的国产的益肝灵片和进口的利肝隆　胶囊。结论水飞蓟素固体分散体胶囊剂能够显著提高水飞蓟素的生物利用度。　ｆ关键词１水飞蓟素；固体分散体；益肝灵片；利肝隆胶囊；药动学；生物利用度　『中图分类号１　Ｒ９４　【文献标识码】Ａ　【文章编号】１６７３—７２１０（２０１３）０７（ａ）一００２８－０３　Ｈｕｍａｎ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｉｌｙｍａｒｉｎ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ　ＬＵＯＸｉａｏｐｉｎｇ　ＧＵＯＸｉａｏｐｉｎｇ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｈｕｂｅｉ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　５２５　Ｉｎｖｅｓｔｍｅｎｔ　Ｃｏ．，ＬＴＤ，Ｈｕｂｅｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｘｉａｎｇｙａｎｇ　４４１０２１，Ｃｈｉｎａ　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｉｌｙｍａｒｉｎ　ｓｏｌｉｄ　ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ（ＳＤ）ｃａｐｓｕｌｅｓ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｉｌｙｍａｒｉｎ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｓｉｌｙｍａｒｉｎ　ｓｏｌｉｄ　ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ　ｗａｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ａｎｄ　ｍｅｌｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ．ａｎｄ　ｓｔｕｄｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｉｌｙｍａｒｉｎ　ｎ　ｖｉｔｒｏ　ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｈｕｍａｎ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｅａｎ　Ａ　Ｃ　ｏｆ　Ｓｉｌｙｍａｒｉｎ　ａｆｔｅｒ　ｓｏｌｉｄ　ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ（ＳＤ）ｃａｐｓｕｌｅｓ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｅ　Ａ　ＵＣＩｏ￣）　ａｆｔｅｒ　ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｉｔ　ｉｓ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｔｏ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｉｌｙｍａｒｉｎ　ｉｆ　ｇｉｖｅｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｏｌｉｄ　ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ　ｃａｐｓｕｌｅｓ　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】Ｓｉｌｙｍａｒｉｎ；Ｓｏｌｉｄ　ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ；Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　Ｔａｂｌｅｔｓ；Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　Ｃａｐｓｕｌｅｓ；Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ；Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　水飞蓟素（Ｓｉｌｙｍａｒｉｎ）是在菊科植物水飞蓟中提取的一　大吸收，故以２８６　ｎｍ为测定波长。　种黄酮类化合物，具有肝脏靶向性。在体内主要是以与血　浆蛋白结合的形式存在ｌ１ｌ。水飞蓟素具有多种药理学活性，　取水飞蓟素的乙醇溶液适量，分别配制成０．２５、０．５０、　１．００、２．Ｏ０、４．００、８．００　Ｉｘｇ／ｍＬ的水飞蓟素水溶液，以９　ｍＬ蒸　如保肝［２１、抗氧化［３１、降血脂、稳定肝细胞膜［４１、清除自由基Ｌ５　ｌ、　抗辐射ＩＮ、抗胃溃疡【　等作用。水飞蓟素具有低毒，无诱变和　无致畸的作用，但是由于水飞蓟素的水溶性差，生物利用　度低，影响了其临床应用。固体分散体（ＳＤ），是一种新型的　分散体系，是将难溶性的药物分散于固体载体中的分散体　馏水加１　ｍＬ乙醇作为空白，在２８６　ｎｍ波长处测定吸收度，　以浓度对吸收度进行线性回归，得到线性回归方程为Ｃ＝　２９．４１６Ａ＋０．１５８７：线性相关系数ｒ＝０．９９９９：线性范围为　０．２５－８．Ｏ０　ｐ￣ｇ／ｍＬ。　２．１．２溶剂法制备水飞蓟素固体分散体将不同比例的原　系，最终以固体的形式存在。目前已经得到了广泛的应用。　本研究是制备水飞蓟素的固体分散体胶囊，并与现在上市　料药水飞蓟素和泊洛沙姆１８８等辅料分别用８０％无水乙　醇溶液溶解、混合、超声后，用旋转蒸发仪干燥，干燥后取　出干燥物质放入烘箱内烘干２４　ｈ；取出后研磨。过８０目筛　后保存至干燥器内备用。　２．１．３熔融法制备水飞蓟素固体分散体将不同比例的原　的国产的益肝灵片和进口的利肝隆胶囊共同进行体外溶　出度和人体药动学研究，目的在于提高水飞蓟素的生物利　用度。　１仪器与试药　料药水飞蓟素和泊洛沙姆１８８等辅料混匀后加热至熔融，　原料药水飞蓟素（湖北大仝生物化工科技有限公司）：　市售益肝灵片（上海朝晖药业有限公司）；市售进Ｅｌ利肝隆　胶囊（德国马博士大药厂）；泊洛沙姆１８８（Ｆ６８，德国ＢＡＳＦ　公司）；ＰＶＰＫ１５、Ｋ３０（德国ＢＡＳＦ公司）；ＰＥＧ６０００（德国　ＢＡＳＦ公司）；ＦＯＤＴ一６０１光纤药物溶出度实时测定仪（上海　后立即转至冰浴内，并不断搅拌，使之迅速冷却成固体，之　后放入冰箱内２　ｈ，然后转移至干燥器内，放置２４　ｈ，取出　后研磨，过８０目筛后保存至干燥器内备用。　２．１．４不同辅料制备的水飞蓟素固体分散体溶解度的测定　配制自制的不同辅料的水飞蓟素固体分散体及原料药水　飞蓟素的饱和水溶液．以蒸馏水作空白。在２８６　ｎｍ波长下　测定吸光度，得到水飞蓟素原料药、水飞蓟素ＰＥＧ６０００（１￣４）、　水飞蓟素一泊洛沙姆１８８（１：４）的平衡溶解度分别为０．３８５、　１７．２３５、１９．９８６　ｍｇ／ｍＬ。由结果可知，ＰＥＧ６０００和泊洛沙姆　富科思分析仪器有限公司）；７５２型紫外光分光光度计（南　京麒麟分析仪器有限公司）。　２方法与结果　２．１固体分散体胶囊剂的制备　２．１．１体外分析方法的建立取干燥至恒重的水飞蓟素适　量，配置成适当浓度的乙醇溶液，以乙醇作空白，在２００～　４００　ｎｍ波长范围内进行紫外扫描，发现在２８６　ｎｍ处有最　［作者简介】罗小平（１９７２．１０一），男，汉族，湖北云梦人，湖北五二五投资　有限公司医院药剂科主任；研究方向：不同水飞蓟素制剂的研究　２８中国医药导报ＣＨＩＮＡ　ＭＥＤＩＣＡＬ　ＨＥＲＡＬＤ　１８８制备的水飞蓟素固体分散体的溶解度均较原料药水飞　蓟素有较大的提高，考虑到泊洛沙姆１８８的毒性较小，故　选择泊洛沙姆１８８作为水飞蓟素固体分散体的辅料。　２．２不同水飞蓟素制剂的溶出度的测定　溶出度实验中自制的水飞蓟素固体分散体是以胶囊　２０１３年７月第ｌ０卷第ｌ９期　・实验研究・　剂的形式进行的，本文是以固体分散体的制备和人体药动　学为主，所以胶囊剂的制备将在其他文中做详细的论述。　将自制固体分散体胶囊、市售益肝灵片和市售进口利肝隆　胶囊各３粒，按照《中国药典）ｚｏｌｏ年版二部附录ｘ　Ｃ第　二法，分别以０．１　ｍｏｌ／Ｌ盐酸、蒸馏水、ｐＨ值６．８缓冲盐９００ｍＬ　作为溶出介质，转速为１００　ｄｍｉｎ，依法操作，分别在５、１０、　１５、３０、４５、６０　ｍｉｎ时，取出溶液，过０．４５　ｍ微孔滤膜，取　内的溶出度均超过８０％，而市售益肝灵片和市售进口利肝　隆胶囊在０．１　ｍｏ肌盐酸、蒸馏水、ｐＨ　６．８缓冲盐中１　ｈ时　溶出度不超过５０．０％。由溶出结果可知，自制的固体分散　体胶囊的溶出度远远超出两种市售制剂。　２．３不同水飞蓟素制剂的人体药动学研究　选择２Ｏ～３０岁之间健康志愿者１８名，男女比例各半．　随机分成３组，每组６名志愿者．空腹后，分别服用市售益　续滤液按“２．１．１”项下方法测定溶液浓度，计算出累积溶出　肝灵片、市售进口利肝隆胶囊及自制固体分散体胶囊。于用　量。溶出曲线见图１～３。　１００　８Ｏ　一　６Ｏ　瓣４０　艟　２０　时婀ｒｍＩｎ　ｐＨ１—●一ｐＨ６．８－１．　水　图１　水飞蓟素固体分散体胶囊剂的溶出曲线　５０　４０　３Ｏ　２０　书　褥　０　Ｏ　Ｏ　１０　２Ｏ　３Ｏ　４０　５０　６０　时间《ｍＩ　ｎ）　＋ｐＨｌ—卜ｐＨ６．８　卜水　图２市售益肝灵片的溶出曲线　５０　４０　茹３０　嚣２０　豫　１Ｏ　０　１０　２０　３０　４０　５Ｏ　６Ｏ　时阉｝ｍ…）　＋ｐＨｌ＿Ｉ－ｐＨ６．８十水　图３市售进口利肝隆胶囊剂的溶出曲线　由图ｌ～３可知，自制固体分散体胶囊中水飞蓟素的溶　出不受溶出介质的影响。且在３种不同溶出介质中５０　ｍｉｎ　药后０．２５、０．５Ｑ　１．００、１．５０、２．００、４．００、８．００、１２．００　ｈ取静脉　血５　ｍＬ。采用高效液相法测定健康志愿者口服不同制剂后　不同时间点血浆中水飞蓟宾的浓度，计算出药动学参数。　２．３．１血浆样品的处理方法在１０　ｍＬ具塞离心试管中加　入精密量取的血浆样品１．０　ｍＬ，０．２　ｍＬ　０．１　ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢　钠，６ｍＬ乙醚，置于涡旋上振荡５ｒａｉｎ，５０００　ｒ／ｍｉｎ离心５ｒａｉｎ，　取上清液至１０　ｍＬ离心试管中，常温下氮气吹干，加人０．１　ｍＬ　流动相复溶，离心，取上清液２０　Ｌ，液相测定。　２－３．２体内分析方法的建立采用ＨＰＬＣ法。色谱柱：Ｄｉｋｍａ　Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ　Ｃ】８　０ＤＳ柱（２００　ｍｍｘ４．６　ｍｍ，０．５　ｍ），流动相：　甲醇一水（体积比５５：４５，用冰醋酸ｐＨ值至４．２），检测波长：　２８６　ａｍ，流速：１．０　ｍＬ／ｍｉｎ。精密称定干燥后的水飞蓟素对　照品ｌ０．０２　ｍｇ，置于一２５　ｍＬ棕色容量瓶中．加流动相定　容配制浓度为４００　ｍｇ／Ｌ的溶液作为对照品储备液。精密　量取不同体积的储备液于１０　ｍＬ容量瓶中，加流动相稀释，　定容，摇匀，配制一系列浓度的溶液，取空白血浆ｌ　ｍＬ至　１０　ｍＬ离心试管中，加入适量系列标准溶液，配制相当于　血浆浓度为０．０１６、０．０３２、０．０６４、０．１２８、０．２５６、０．５１２　ｍｇ／ｍＬ　的溶液，按照“２．３．１”项下方法处理血浆样品，取２０　Ｌ进　样，测定峰面积。以峰面积　）对浓度（Ｃ）进行线性回归，得　水飞蓟素线性回归方程为Ａ＝２．２５ｘｌ０４Ｃ～６．２５　ｘｌ０　（ｒ＝　０．９９９６），线性范围为１６．０—５１２．０　ｍｇ／Ｌ，平均回收率为　９９．２％，ＲＳＤ为Ｏ．４４％，符合方法学要求。　２．４结果　分别服用三种制剂后药动学参数见表１。　表１给药后药动学参数　注：与参比制剂比较。　＜０．０５　由表１可知，以市售益肝灵片为参比制剂，市售利肝　隆胶囊的相对生物利用度为１３１．８％，自制的固体分散体　胶囊剂的相对生物利用度分别为２００．１％，显著高于两种　市售制剂，因此所制备的固体分散体胶囊剂显著提高了水　飞蓟素的生物利用度。　３讨论　药物在固体分散体载体中存在的粒径在１－１００　ｍ之　ＣＨｌＮＡ　ＭＥＤｌＣＡＬ　ＨＥＲＡＬＤ中国医药导报２９　・实验研究・　２０１３年７月第１０卷第１９期　问，主要应用于增加水溶性低的药物的溶解度，进而提高　其溶出度，最终提高该药物的生物利用度。根据固体分散　体释药性能的不同，可以将固体分散体分为靶向型、缓　（控）型和速释型三类固体分散体，其中速释型固体分散体　服给药后，水飞蓟素固体分散体的生物利用度有了很大程　度的提高。其在体内的吸收过程和吸收机制将在其他文章　中做进一步研究。本研究结果为今后水飞蓟素剂型的进一　步改进和临床实验创造了条件。水飞蓟素固体分散体胶囊　剂制备过程简单，毒性小，成本低，且大幅度地提高了水飞　蓟素的生物利用度，因此市场前景广泛。　的应用更为广泛，本文研究的为速释型固体分散体。固体　分散体的载体也包括三类，包括水溶性、肠溶性和水不溶　性载体，常用载体主要有聚乙二醇（ＰＥＧ）、聚乙烯吡咯烷　酮（ＰＶＰ）、泊洛沙姆、聚乙烯氧化物（ＰＥＯ）、混合脂肪酸、甘　【参考文献】　『１１　Ｇｒｉｆｉｈｔｓ　ＬＡ，Ｂｒｏｗｎ　Ｓ，Ｈａｃｋｅｒ　ＡＭ．Ｔｈｅ　Ｈｅｐａｔｉｃ　Ｍｅｔｂａｏｌｉｓｍ　ｏｆ　Ｆｌｖａｏｎ　露醇和修饰的卡拉雅胶（ＭＧＫ）等。本文以溶解度为指标，　兼顾到泊洛沙姆１８８的毒性较低．最后选择泊洛沙姆１８８　为固体分散体制剂的载体。　ｏｉｄｓⅢ．Ｓｔｕｄ　Ｏｒｇ　Ｃｈｅｍ，１９８２，１１：４５１．　ｆ２］王宗伟．秋水仙碱和水飞蓟素保护四氯化碳慢性肝损害的对比研　究『Ｊ］．国外医学：中医中药分册，１９９７，１９（６）：３６—３７．　水飞蓟素是一种类黄酮，主要存在于菊科植物水飞蓟　的种子中．有３种同分异构体，分别为水飞蓟宾（Ｓｉｌｙｂｉｎ）、　水飞蓟宁（Ｓｉｌｉｄｉａｎｉｎ）和水飞蓟丁（Ｓｉｌｉｃｈｒｉｓｔｉｎ），其中水飞蓟　宾还有一种同分异构体为异水飞蓟宾（Ｉｓｏｓｉｌｙｂｉｎ）。于乐成　等ｉｓ］对水飞蓟素的药理学效应有过详细的阐述，认为水飞　蓟素有清除活性氧，保持细胞膜的流动性．防止脂质过氧　化的药理学活性；具有防止产生一氧化氮，并控制期与氧　［３】孙铁民，李铣．水飞蓟素药理研究进展【ＪＪ．中草药，２０００，３１（３）：２２９—　２３１．　［４】Ｌｅｎｇ　Ｐ．Ａｌｃｏｈｏｌ—ｒｅｌａｔｅｄ　ｌｉｖｅｒ　ｄｉｓｅａｓｅｓ－ｕｓｅ　ｏｆ　ｌｅｇａｌｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．　Ｐｈａｒｍｅｄｉｃｕｍ，１９９４，２（１）：２２．　『５】Ｆｌｏｒａ　Ｋ，Ｈａｈｎ　Ｍ，Ｒｏｓｅｎ　Ｈ．Ｍｉｌｋ　ｔｈｉｓｔｌｅ（Ｓｉｌｙｂｕｍ　ｍａｒｉａｎｕｍ）ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｈｅｒａｐｙ　ｏｆｌｉｖｅｒＤｉｓｅａｓｅ［￣ｊ．Ａｍ　ＪＧａｓｔｍｅｎｔｅｍｌ，１９９８，９３（２）：１３９一ｌ４４．　［６】Ｄｍｅｌｏｗ　Ｃ，Ｍｕｒａｗｓｋｉ　Ｎ，Ｇｒｏｏｔ　ＨＳ．Ｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｏｆ　ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ａｎｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｒａｅｈｉｄｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｂｙ　ｓｉｌｉｂｕｍ　ｉｎ　离子发生反应的药理活性：具有抑制氧脂结合酶活性的药　理学活性：具有保护肝细胞膜并促进肝细胞的修复和再生　的药理学活性。　．　目前水飞蓟素的剂型主要包括片剂、胶囊剂和注射剂三　ｈｕｍａｎ　ｃｅｌｌｓ『Ｊ］．Ｌｅｆｅ　Ｓｃｉ，１９９６，５８（１８）：１５９１．　【７］Ａｌａｒｃｏｎ　ＭＪ，Ｍａｒｔｉｎ　Ｅ．Ｍａｒｈｕｅｎｄａ　Ｇａｓｔｉｒｃ　ａｎｔｉ—ｕｌｃｅｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｓｉｌｙ—　ｍａｎ，ａｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｉｎ　ｒａｔｓ［Ｊ１．Ｊ　Ｐｈａｒｍ　Ｐｈｍａｒａｃｏｌ，１９９２，４４　（１１）：９２９－９３．　类。目前对水飞蓟素的研究主要有水飞蓟素磷脂复合物［９１，　水飞蓟素环糊精包合物ｌｌｑ．水飞蓟素注射剂等【ｌ１】。综合考虑　［８】于乐成，顾长海．水飞蓟素药理学效应研究进展叨．中国医院药学杂志，　２００１，２１（８）：４９３—４９４．　『９　Ｄａｎｉｅｌ９］ｅ　Ｓ，Ｐａｏｌａ　ＣＨ，Ｇｉａｎｌｕｃａ　Ｐ．Ｓｏｆｔｇｅｌ　Ｃａｐｓｕｌｅ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｓ　ａｎｅｎ—　ｈａｎｅｅｒ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎａｔｕｒａｌ　ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ｉｎ　ｈｕｎｍａｎｓ．Ａｒｚｎｅｉｍ　患者的顺应性，毒性，经济性等因素，水飞蓟素固体分散体　胶囊剂值得临床推广。　不同剂型的水飞蓟素的溶出度和人体药动学的研究　『Ｊ１．ＤｒｕｇＲｅｓ，１９９８，４８（ＩＩ）：ｌ１０４—１１０６．　［１Ｏ］李范珠，康廷国，吕佳，等．水飞蓟素一环糊精包合物的研究【Ｊ］．时珍　国药研究，１９９６：３：８８—８９．　【１１】王鸿辰，褚书玲，水飞蓟素溶解性能的研究『Ｊ］．药学通报，１９８４，１９　（１２）：２３＿２５．　在国内外尚未见报道，本文以泊洛沙姆１８８为载体，分别　采用溶剂法和熔融法制备的水飞蓟素固体分散体，可以显　著提高水飞蓟素的溶出度。水飞蓟素，泊洛沙姆１８８固体分　散体胶囊剂、市售益肝灵片和进口的利肝隆胶囊志愿者口　（收稿日期：２０１３—０１—２１本文编辑：卫轲）　（上接第２７页）　抑制作用的筛选，获得了阿魏酸、蔓荆子黄素、绿原酸和肉　桂酸四种对沙门菌生物被膜形成具有较强抑制作用的天　然多酚类化合物。但此类化合物抑制作用的机制。尚需进　行深入研究。天然多酚类化合物多为植物的次生代谢产　物，在植物与微生物的相互作用过程中起到非常重要的作　用，常被称为植保素【ｌ】　：因此从天然产物中筛选抗生物被　膜的化合物，并进一步开发成药物，对于新型抗菌剂的开　发具有重要意义。　ｔｅｒｉｃａ　ｓｅｒｏｖａｒ　Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ　ａｎｄ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ：ｆｒｏｍ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｔｏ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ　Ｇｅｎｅｔ　Ｅｖｏ［，２００８，８：２１７—２２６，　［６】Ｂｏｙｌｅ　ＥＣ，Ｂｉｓｈｏｐ　ＪＬ，Ｇｒａｓｓｌ　ＧＡ，ｅｔ　ａ１．Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ：ｆｒｏｍ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅ—　ｓｉｓ　ｔｏ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｂａｅｔｅｒｉｏｌ，２００７，１８９：１４８９－１４９５．　【７】Ｎｅｗｅｌｌ　ＤＧ，Ｋｏｏｐｍａｎｓ　Ｍ，Ｖｅｒｈｏｅｆ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｆｏｏｄ—ｂｏｒｎｅ　ｄｉｓｅａｓｅｓ—　ｔｈｅ　ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ　ｏｆ　２０　ｙｅａｒｓ　ａｇｏ　ｓｔｉｌｌ　ｐｅｒｓｉｓｔ　ｗｈｉｌｅ　ｎｅｗ　ｏｎｅｓ　ｃｏｎｔｉｎｕｅ　ｔｏ　ｅｍｅｒｇｅ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｆｏｏｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１０，１３９（１１）：￥３－１５．　【８】Ａｇａｒｗａｌ　ＲＫ，Ｓｉｎｇｈ　ｓ，Ｂｈｉｌｅｇａｏｎｋａｒ　ＫＮ，ｅｔ　ａ１．Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉ—　ｃｒｏｔｉｔｒｅ　ｐｌａｔｅ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔｉｎｇ　ｏｆ　ｂｉｏｆｉｌｍ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｉｎ　ｄｉｆ－　【参考文献】　［１］王晓泉，焦新安，刘晓文，等．江苏部分地区食源性和人源沙门氏菌　的多重耐药性研究ｌＪＪ．微生物学报，２００７，４７（２）：２２１—２２７．　ｆｅｒｅｎｔ　Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｓｅｒｏｔｙｐｅｓ『Ｊ１．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｆｏｏｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｊｏｕｒｎａｌ，　２０１１．１８：６．　【９】Ｂｅｒｔａｎｉ　Ｇ．Ｌｙｓｏｇｅｎｙ　ａｔ　ｍｉｄ－ｔｗｅｎｔｉｅｔｈ　ｃｅｎｔｕｒｙ：ＰＩ，Ｐ２，ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｓｙｓｔｅｍｓ［］ｊ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，２００４，１８６（３）：５９５—　６０ｏ．　【２］Ｎｅｇｒｅａ　Ａ，Ｂｊｕｒ　Ｅ，Ｙｇｂｅｒｇ　ＳＥ，ｅｔ　ａ１．Ｓａｌｉｃｙｌｉｄｅｎｅ　ａｃｙｌｈｙｄｒａｚｉｄｅｓ　ｔｈａｔ　ａｆｆｅｃｔ　ｔｙｐｅ　ｌＵ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｅｎｔｅｒｉｃａ　ｓｅｒｏｖａｒ　ｔｙ—　ｐｈｉｍｕｒｉｕｍ［Ｊ］．Ａｎｔｉｍｉｅｒｏｂ　Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００７，５１：２８６７－２８７６．　［３１　Ｆｒａｎｃｏｉｓ　ＸＷ，Ｆｒａｎｅｏｉｓｅ　Ｇ．Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎ　Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｅｎｔｅｒ－　ｉｃａ　ｓｅｒｏｔｙｐｅ　ｔｙｐｈｉｍｕｉｕｍ　ｆｒｏｍ　ｈｕｍａｎｓ　ｉｎ　Ｆｒａｎｃｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，　２００６，４４（３）：７００－７０８．　【１０］Ｙａｍａｚａｋｉ　Ａ，Ｌｉ　Ｊ，Ｚｅｎｇ　Ｑ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｃｏｒｎ—　ｐｏｕｎｄ　ａｆｆｅｃｔ　ｔｈｅ　ｔｙｐｅ　ＵＩ　ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉ—　ｎｏｓａ　ｖｉａ　ａ　ＧａｃＳ－ＧａｃＡ　ｔｗｏ－ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ｓｉｇｎａｌ　ｔｒａｎｓｄｕｅｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ　Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２０１２，５６：３６—４３．　【４］Ｌａｙｔｏｎ　ＡＮ，Ｈｕｄｓｏｎ　ＤＬ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ　Ａ，ｅｔ　１．Ｓａｌａｉｃｙｌｉｄｅｎｅ　ａｃｙｌｈｙｄｒａｚｉｄｅ—　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｙｐｅ　Ｉｎ　ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ—－１　ｉｎ　Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｅｎ－・　ｔｅｒｉｃａ　ｓｅｒｏｖａｒ　Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｒｏｎ　ｒｅｓｔｉｃｔｒｉｏｎ　ａｎｄ　ｃａｎ　【１１】郭艳玲。张鹏英，郭默然，等．次生代谢产物与植物抗病防御反应【Ｊ】．　植物生理学报，２０１２，４８（５）：４２９—４３４．　【ｌ２】范志金，刘秀峰，刘凤丽，等．植物抗病激活剂诱导植物抗病性的　ｂｅ　ｒｅｖｅｒｓｅｄ　ｂｙ　ｆｒｅｅ　ｉｒｏｎ［Ｊ］．ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｌｅｔｔ，２０１０，３０２：１１４—１２２．　【５１　Ｌａｖｉｇｎｅ　ＪＰ，Ｂｌａｎｃ—Ｐｏｔａｒｄ　ＡＢ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｅｎ．　３Ｏ中国医药导报ＣＨＩＮＡ　ＭＥＤＩＣＡＬ　ＨＥＲＡＬＤ　研究进展　植物保护学报，２００５，３２（１）：８７—９２．　（收稿日期：２０１３—０２－０１本文编辑：卫轲）