HPLC-MS法测定人血浆中那格列奈浓度

安徽医药Ａｎｈｕｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　２００８　Ａｐｒ；１２（４）　’３０９’　◇药物分析◇　ＨＰＬＣ．ＭＳ法测定人血浆中那格列奈浓度　史天陆　，陈礼明　，孙言才　，张善堂　，魏（１．安徽医科大学药学院，安徽合肥摘要：目的瑜　２３０００１）　２３００３２；２．安徽省立医院药剂科，安徽合肥建立人血浆中那格列奈浓度的ＨＰＬＣ—ＭＳ测定法。方法　血浆中加入含内标液地西泮，用０．３　ｍｌ乙腈沉淀离心　后，采用选择性离子检测（ＳＩＭ）方法测定其血药浓度。色谱柱：Ｔｅｋｎｏｋｒｏｍａ　Ｃ　（５　ｐ，ｍ，２．１　ｍｍ×１００　ｍｍ）；流动相：Ｌ／］￣－ｏ．１％甲　酸（６０：４０，ｖ／ｖ）；流速ｏ．２　ｍｌ・ｍｉｎ～；柱温：２５℃。结果标准曲线线性范围为０．０５～１５　ｍｇ－Ｌ～，标准曲线线性关系良好，　回归方程为：Ａｓ＝０．７１６７Ｃ一０．００９４，（ｒ＝０．９９６　８）。高、中、低三种浓度的日内和Ｅｔ间变异均小于１０．０％，绝对回收率在８７．７％　～９２．７％，相对回收率在９１．１％～１０５．７％。结论本方法操作简便，灵敏度高，样品稳定性良好，适用于那格列奈的临床血药　浓度检测及药动学研究。　关键词：那格列奈；ＨＰＬＣ—ＭＳ；血药浓度　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎａｔｅｇｌｉｎｉｄｅ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｌａｓｍａ　ｂｙ　ＨＰＬＣ－ＭＳ　ＳＨＩ　Ｔｉａｎ．１ｕＩ＇　ＣＨＥＮ　Ｌｉ．ｍｉｎｇ　。ＳＵＮ　Ｙａｎ．ｃａｉ　，ＺＨＡＮＧ　Ｓｈａｎ．ｔａｎｇ　，Ｗｅｉ　Ｙｕ　．（１．ＡｎＨｕｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ　２３００３２；２．ＡｎＨｕｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｈｅｆｅｉ　２３０００１）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｉｍ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎａｔｅｇｌｉｎｉｄｅ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｌａｓｍａ　ｂｙ　ＨＰＬＣ—ＭＳ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｎａｔｅｇｌｉｎｉｄｅ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｐｌａｓｍａ　ｗｉｔｈ　０．８３　ｍｌ　ｏｆ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ．ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉａｚｅｐａｍ．ＨＰＬＣ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｗｉｔｈ　Ｔｅ—　ｋｎｏｋｒｏｍａ　Ｃ１８（５　ｍ，２．１　ｍｍ×１００　ｍｍ）．Ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ　ｏｆ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－０．１％ｆｏｒｍｉｃ　ａｃｉｄ（６０：４０，Ｖ／Ｖ）ａｔ　ａ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　０、２　ｍｌ・ｍｉｎ～、Ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｉｓ　２５℃、Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ—ｉｏｎ　ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ　ｍｏｄ—　ｅ１．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｃｕｒｖｅ　ｗａｓ　ｌｉｎｅａｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ０．０５　ｍｇ－Ｌ一　ａｎｄ　１５　ｍｇ・Ｌ　（Ａｓ＝０．７１６７Ｃ一０．００９４，ｒ＝０．９９６　８）．Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｔｒａ—ｄａｙ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒ－ｄａｙ　ｗａｓ　ｓｍａｌｌｅｒ　ｔｈａｎ　１０％、Ｔｈｅ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｏｆ　ｎａｔｅｇｌｉｎｉｄｅ　ｗｅｒｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　８７、７％　ａｎｄ　９２、７％，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｏｆ　ｎａｔｅｇｌｉｎｉｄｅ　ｗｅｒｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　９１．１％ａｎｄ　１０５．７％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｓｐｅｃｉｉｆｃ，ｓｅｎｓｉ－　ｔｉｖｅ，ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎａｔｅｇｌｉｎｉｄｅ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｌａｓｍａ　ａｎｄ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｎａｔｅｇｌｉｎｉｄｅ；ＨＰＬＣ—ＭＳ；ｐｌａｓｍａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　那格列奈（ｎａｔｅｇｌｉｎｉｄｅ）是作为一种新型苯丙氨酸类血糖　调节剂，１９９９年首先在Ｅｔ本上市，２００１年初被ＦＤＡ批准单独　或与二甲双胍合用治疗２型糖尿病…。在餐前１０　ｍｉｎ服用　本品能很快被吸收，迅速刺激胰岛素分泌，并在提内很快被肾　清除，从而有效改善非胰岛素依赖型糖尿病病人餐后血糖水　平　。由于那格列奈在临床剂量其血中药物浓度较低，采用　ＨＰＬＣ—ｕＶ法　样品预处理操作烦琐、系统误差大，灵敏度较　低。而本文建立的那格列奈血药浓度ＨＰＬＣ—ＭＳ测定法，操作　简便，灵敏度高，可用于临床药物浓度检测及其药动学研究。　１仪器和试药　性（正离子）；离子化方式（气动辅助电喷雾离子化）；检测对　象：那格列奈，［Ｍ＋Ｈ］　，ｍ／ｚ　３１８．４，内标地西泮，［Ｍ＋　Ｈ］　，ｍ／ｚ　２８５．３０；毛细管电压２．８　ｋＶ；锥孔电压３０　Ｖ；二级锥　孔电压２　Ｖ；干燥气流速２００　Ｌ・ｈ～；干燥气温度２５０　ｏＣ。　２．３溶液的配制　２．３．１标准溶液的配制　精密称取那格列奈１０．０　ｍｇ，置于　１０　ｍｌ量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得１００　ｍｇ・Ｌ　那格列奈甲醇溶液；依次稀释，配成１０、１　ｍｇ・Ｌ　那　格列奈甲醇标准溶液备用。　２．３．２　内标溶液的配制精密称取地西泮１０　ｍｇ，置于１０　ｍｌ　１．１仪器Ｗａｔｅｒｓ　ＺＱ２０００液相色谱一质谱联用仪（含：双高　压泵，自动进样器，柱温箱，电喷雾离子化接口，２６９５液相色　量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得１　ｇ・Ｌ　内　标储备液。取储备液０．１　ｍｌ用乙腈定容至１０　ｍｌ量瓶中得到　浓度为１０　ｍｇ－Ｌ　的地西泮标准溶液，取０．６　ｍｌ加入至３００　谱仪）；色谱工作站：Ｍａｓｓｌｙｎｘ　４．０高级色谱工作站；ＭＥＴＦＬＥＲ　电子天平。　ｍｌ乙腈中得到含地西泮２０　ｇ・Ｌ　的乙腈沉淀液待用。　受试制剂：那格列奈片（江苏恒瑞医药股份有限　２．４血浆样品的处理精密加入人血浆样品０．１　ｍｌ于离心　管中，加入含内标液地西泮２０　ｇ－Ｌ　的乙腈沉淀液０．３　ｍｌ，　涡旋３　ｍｉｎ，于１６　０００　ｒｐｍ离心３　ｍｉｎ。吸取上清液置于自动　１．２试药公司生产，批号０５１１０６，每片３０　ｍｇ）；那格列奈对照品（江苏　恒瑞医药股份有限公司提供，纯度９９．８％）；地西泮（内标，江　苏恒瑞医药股份有限公司提供，纯度９９．６％）；乙腈为色谱　纯，试验用水为自制超纯水，甲醇及其它试剂为ＡＲ试剂。　２方法与结果　进样分析小瓶中，精密吸取１０　ｌ进样分析。　２．５样品的色谱行为在本实验所采用的色谱条件下，那格　列奈和内标出峰时间分别在５．２、４．５　ｍｉｎ左右，各目标化合　物峰形良好，无杂峰干扰测定，基线平稳，结果见图１。　２．１色谱条件　色谱柱：Ｔｅｋｎｏｋｒｏｍａ　Ｃ】８（５　ｍ，２．１　ｍｍ×　１００　ｍｍ）；流动相：乙腈　．１％甲酸（６０：４０，ｖ／Ｖ）；流速０．２　ｍｌ　－ｍｉｎ～；柱温：２５℃。　２．６标准曲线的绘制和线性范围取离心管数支，分别精密　加入不同量的那格列奈对照品液后以氮气流吹干，加入空白　血浆０．１　ｍｌ，涡旋１　ｍｉｎ，配成血浆中含那格列奈分别为０．０５，　２．２质谱条件离子检测方式（选择性离子检测）；离子极　维普资讯 http://www.cqvip.com ‘３１０’　安徽医药Ａｎｈｕｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　２００８　Ａｐｒ；１２（４、　０．１，０．２，０．５，１．５，５，１５　ｍｇ・Ｌ　的标准系列浓度，按“血浆样　品的处理”项下操作，记录色谱图及那格列奈峰及内标面积。　以那格列奈面积（Ａｓ）和内标峰面积（Ａｉ）比值ｆ（ｆ＝Ａｓ／Ａｉ）的　平均值对血药浓度（ｃ）作回归计算，得回归方程：Ａｓ＝０．７１６７　×Ｃ一０．００９４，（ｒ＝０．９９６８，权重系数ｒ＝１／Ｃ×Ｃ）；定量下限　浓度为０．０５　ｍｇ・Ｌ～。可见在血浆浓度０．０５～１５　ｍｇ・Ｌ　范围内，那格列奈标准曲线线性关系良好。　格列奈标准液适量于离心管中，用甲醇配成含那格列奈浓度　分别为０．１，０．５，５　ｍｇ・Ｌ　的溶液，每份０．１　ｍｌ，以氮气流吹　干后，精密加入０．１　ｍｌ双蒸水和含内标液地西泮２０　・Ｌ　的乙腈沉淀液０．３　ｍｌ溶解残渣，自动进样器精密吸取１Ｏ　进样分析，记录色谱图和峰面积计算其比值．　（．　：Ａｓ／Ａｉ）。　取离心管数支，于离心管中精密加入不同量的那格列奈溶液适　量，以氮气流吹干后，精密加入０．１　ｍｌ空白血浆，涡旋１５　ｓ，配　成含那格列奈０．１，０．５，５　ｍｇ・Ｌ　的含药血浆，每种浓度各做　５份样品，按“血浆样品处理”项下“加入含内标液地西泮２ｏ　・Ｌ　的乙腈沉淀液０．３　ｍｌ”起操作。记录色谱图和峰面积，计　：Ａｓ／Ａｉ），上述　和ｆｓ的比值即为那格列奈的　表２血浆中那格列奈绝对回收率（ｎ＝５）　．．一　一　算其比值　＾４．５０　绝对回收率（Ｒ％），　％＝ｆｉ／￣×１００％，结果见表２。　＾４．５０　ｌ＼２Ｌ　３５．５０　Ｌ　ＪＪ　Ｌ　＼２３５．５０　ｌ　３　５　７　ｌ　３　５　７　ｔ／ｍｉｎ　ｔ／ｍｉｎ　Ａ　Ｂ　ｌ　３　５　７　ｔ／ｍｉｎ　Ｃ　ｌ　３　５　７　ｔ／ｍｉｎ　Ｄ　注：Ａ．空白血浆；Ｂ．样品对照品（ＹＰ）；Ｃ．内标对照品（ＩＳ）；Ｄ．空白血　浆加入那格列奈标准品和内标物后的血浆样品　图１血浆中那格列奈ＨＰＬＣ－ＭＳ图　２．９准确度试验（相对回收率）　将前述标准曲线质控样品　系列浓度的那格列奈峰面积代入相应标准曲线方程，计算测　得浓度和加入浓度的比值即为相对回收率，结果见表３。　表３血浆中那格列奈相对回收率（ｎ＝５）　２．７精密度试验取离心管数支，分别精密加入不同量的那　格列奈对照品液后以氮气流吹干，加入空白血浆０．１　ｍｌ，涡旋　１　ｍｉｎ，０．１，０．５，５．０　ｍｇ・Ｌ　各５份质控样品，按“血浆样品　的处理”项下操作，精密吸取上清液进样分析，记录色谱图，　计算伪麻黄碱峰面积　和内标峰面积Ａｉ的比值　并代入相　应的标准曲线求出其浓度，得日内ＲＳＤ，同法每天测定高、中、　低３个浓度的那格列奈质控样品各１份，连续测定５　ｄ，得日　间ＲＳＤ。结果见表１。　表１那格列奈精密度试验（ｎ＝５）　２．１０稳定性试验取干净离心管数支，按标准曲线配制方　法制备含那格列奈０．１，０．５，５．０　ｍｇ・Ｌ　的标准含药血浆，平　行制备５份，一份配制好后按“血样预处理及测定”项操作　后，立即进样分析；一份血样室温放置４　ｈ后沉淀操作；一份　提取后于４℃自动进样器放置１０　ｈ；一份于冰箱中冷冻保存　ＲＳＤ％　加入浓度　／ｍｇ・Ｌ一　旦凼　±　ＲＳＤ％　旦间　±　３周后取出化冻；另一份在３周内反复冻融３次，然后同法操　作。结果表明样品在上述条件下稳定性良好，符合生物样品　分析要求，结果见表４。　２．８回收率试验（绝对回收率）　取离心管数支，分别取那　表４　Ｉ－ＩＰＬＣ法测定血浆中那格列奈的浓度平均值（ｍｇ・Ｌ　）　３讨论　缩短，柱寿命延长，仪器损耗减少，成本低，适合于那格列奈临　有关测定血浆中那格列奈的方法，文献报道　多采用　床血药浓度的常规监测、临床药动学及生物等效性研究。　参考文献：　［１］Ｌｉｎｄｅｒ　ＴＲ．ＦＤＡ　ａｐｐｒｏｖｅｓ　ｎａｔｅｇｌｉｎｉｄｅ　ｆｏｒ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｙｐｅ　２　ｄｉａｂｅ—　ｔｅｓ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｓｙｓｔ　Ｐｈａｒｍ，２００１，５８（４）：２８５—８．　［２］Ｏｋａｍｏｔｏ　Ｍ，Ａｋａｉ　Ｈ，Ｉｄｅ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｓｉｎｇｌｅ　ｏｒａｌ　ｄｏｓｅ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ＡＹ　４１６６　ｉｎ　Ｂｅａｇｌｅ　ｄｏｇｓ［Ｊ］．Ｊｐｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｔｈｅｒ，１９９７，２５（ｓｕｐ—　ｐ１．）：ｓ９一Ｓ１１．　ＨＰＬＣ．ｕＶ法，流动相多用磷酸缓冲盐，样品采用固相萃取法　处理后进样，这些方法柱平衡时间长，每个样本分析时间也较　长（都在１０　ｍｉｎ以上），且样品预处理操作烦琐、耗时、系统误　差大，不太适合那格列奈常规血药浓度监测和大样本量的药　代动力学及生物等效性研究。　笔者建立的血浆中那格列奈的ＨＰＬＣ—ＭＳ测定法，样品不　经提取浓缩，直接用乙腈沉淀后进样分析，操作简便，系统误　差小，本方法测定快速，灵敏度高，重现性好，那格列奈峰形良　好，无杂峰干扰，流动相构成比简单、用量少，样品的分析时间　［３］　朱南平，徐平声．ＨＰＬＣ测定血浆中那格列奈及其人体药动学和　相对生物利用度研究［Ｊ］．中国药学杂志，２００５，４１（１３）：１０１３一　维普资讯 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安徽医药Ａｎｈｕｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　２００８　Ａｐｒ；１２（４）　‘３１１。　高效液相色谱法测定养胃舒颗粒中橙皮苷的含量　彭文莉　，周文艳　（１．安徽省祁门县中医院，安徽祁门２４５６００；２．合肥康诚科技有限公司，安徽合肥２３００２３）　摘要：目的建立一种高效液相色谱法测定养胃舒颗粒中橙皮苷的含量。方法以ＯＤＳ—Ｃ　。为固定相，乙腈－０．５％磷酸（１８：８２）　为流动相，检测波长为２８４　ｎｍ。结果　橙皮苷线性范围为９８．７５　ｎｇ～３１６０　ｎｇ，ｒ＝０．９９９９，加样回收率为９８．０２％，ＲＳＤ为　０．５２％。结论该方法简便快速、准确，适合养胃舒颗粒的质量控制。　关键词：高效液相色谱法；养胃舒颗粒；橙皮苷　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｉｎ　ｙａｎｇｗｅｉｓｈｕ　ｇｒａｎｕｌｅｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　ＰＥＮＧ　Ｗｅｎ．１ｉ　．ＺＨＯＵ　Ｗｅｎ．ｙａｎ　（１．Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｅｎ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆＱｉｍｅｎ，Ｑｉｍｅｎ　２４５６００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｈｅｆｅｉ　Ｋａｎｇｃｈｅｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｌｔｄ，Ｈｅｆｅｉ　２３００２３，Ｃｈｉａｎ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｉｍ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｎ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ　ｉｎ　ｙａｎｇｗｅｉｓｈｕ　ｇｒａｎｕｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ，ＯＤＳ—Ｃｌ８　ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ　ａｓ　ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ　ｐｈａｓｅ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｏｆ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅＪｏ．５％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ（１８：８２），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　ａｔ　２８４ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ　Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ　ｗａｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　９８．７５　ｎｇ　ａｎｄ　３１６０　ｎｇ（ｒ＝０．９９９９）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｙｒ　ｗａｓ　９８．０％ａｎｄ　ＲＳＤ　ｗａｓ　０．５２％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｙａｎｇｗｅｉｓｈｕ　ｇｒａｎｕｌｅｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；ｙａｎｇｗｅｉｓｈｕ　ｇｒａｎｕｌｅｓ；ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ　养胃舒颗粒为中药成方制剂，标准收载于卫生部药品标　醇－０．２２％氢氧化钠溶液（６４：３６）的混合溶液溶解制成每１　ｍｌ　准中药成方制剂第十三册（标准号为ＷＳ３一Ｂ一３４３８０８）。处方　中含４０　ｇ的溶液，即得。　主要由党参、陈皮、黄精、山药、玄参等十一味组成，具有扶正　２．２．２供试品溶液取本品，研细，取细粉１．５　ｇ，精密称定，　固体，滋阴养胃。调理中焦，行气消导。本品标准中无含量测　置具塞锥形瓶中，精密加人甲醇－０．２２％氢氧化钠溶液（６４　定项，产品的可控性较差，为有效控制本品的质量，以保证临　：３６）的混合溶液２５　ｍｌ，密塞，称定重量，超声提取３０　ｍｉｎ，放　床用药安全有效，建立了高效液相色谱法测定养胃舒颗粒中　冷。再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，离心　橙皮苷含量，结果满意。　（３　５００　ｒ・ｍｉｎ　）１０　ｍｉｎ，取上清液，滤过，即得。　１仪器与试药　２．２．３阴性样品溶液模拟处方制备不含陈皮药材的阴性　１．１仪器ＬＣ．１０ＡＴｖＰ高效液相色谱仪（日本岛津公司）、　样品，按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液，备用。　ＳＰＤ一１０Ａｖｐ紫外检测器、浙大Ｎ２０００色谱工作站；７５６ＰＣ型紫　２．３检测波长的确定根据有关文献　。　，橙皮苷测定选用　外分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；ＡＬｌ０４型电子天平　的波长较多，报道的有２８３、２８４、２８６、２８８　ｎｍ。取橙皮苷对照　（梅特勒一托利多仪器有限公司）；ＪＬ－６０型超声波清洗器（上　品适量，分别加甲醇和甲醇－０．２２％氢氧化钠溶液（６４：３６）的　海杰理科技有限公司）。　混合溶液制成每１　ｍｌ中约含８　ｔｚｇ的溶液，照紫外分光光度　１．２试药乙腈（色谱纯，上海试一化学试剂有限公司）；磷　法（中国药典２００５年版一部附录ＶＡ），在２００～４００　ｎｍ波长　酸（分析纯，中国医药（集团）上海化学试剂公司）；重蒸水；橙　范围内扫描，结果橙皮苷在上述两种溶剂中最大吸收波长均　皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，产品批号：１１０７２１—　为２８４　ｎｍ，故我们选择２８４　ｎｍ作为本品橙皮苷含量测定的检　２００２１１）；养胃舒颗粒（市售，合肥神鹿双鹤药业有限责任公　测波长。　司；每袋装１０　ｇ，产品批号：０７０７２０３、０７０７２０８、０７０９２０２）。　２．４方法可行性考察分别取对照品溶液、供试品溶液、阴　２方法与结果　性样品溶液各２０　ｌ，在上述色谱条件下进行测定，结果见　２．１色谱条件与系统适用性试验色谱柱ＯＤＳ—Ｃ。　（４．６　ｍｍ　图１。结果显示，样品色谱图中与对照品色谱峰保留时间　×１５０　ｍｍ，５　ｔｚｍ）；流动相为乙腈－０．５％磷酸（１８：８２）；流速为　９．３５　ｍｉｎ处有相应的橙皮苷色谱峰，而阴性样品在相应位置　０．９　ｍｌ・ｍｉｎ～；检测波长为２８４　ｎｍ；进样量为２０　ｌ。在该色　处没有吸收峰，说明阴性样品不干扰样品中橙皮苷的测定。　谱条件下，橙皮苷的理论塔板数为３５７４，色谱峰保留时间为　２．５线性关系考察精密称取橙皮苷对照品７．９　ｍｇ，置５０　９．３５　ｍｉｎ。　ｍｌ量瓶中，加甲醇－０．２２％氢氧化钠溶液（６４：３６）的混合溶液　２．２溶液的制备　溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取适量，加上述混合溶　２．２．１对照品溶液取橙皮苷对照品适量，精密称定。加甲　液稀释并制成约５、１０、２０、４０、８０、１６０ｍｇ・Ｌ　六种不同浓度　［４］孟勤，尹建元，王恩思，等．反相高效液相色谱法测定那格列　［６］殷琦，李鹏，郭理博，等．那格列奈胶囊在健康志愿者的药　奈含量［Ｊ］．药物分析杂志，２００３，２３（５）：３７０—１．　代动力学和生物等效性［Ｊ］．中国临床药理学杂志，２００４．２０　［５］　胡欣，曹国颖，武秀忠，等．那格列奈人体药代动力学及生物　（５）：３５９—６２．　转化过程中消旋化的研究［Ｊ］．中国临床药理学杂志，２００２，１８　（收稿日期：２００７—１１～０７）　（３）：１９５—９．