循环内皮细胞和放射性神经损伤的关系

《中国神经肿瘤杂志》２００６，４（３）：２０５－２０８　・２０５　论著・　循环内皮细胞和放射性神经损伤的关系　李祥攀，甘浪舸，阮林，韦力，吴晓飞，马代远　（广西医科大学一附院放疗科，广西南宁５３００２１）　【摘要】背景与目的：放射性神经损伤是影响头颈部肿瘤放疗后生存质量的重要因素。本研究探讨大鼠不同　剂量脑照射后不同时期神经行为和循环内皮细胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ＣＥＣｓ）数量的变化。方法：１０８只　ｓＤ大鼠信封法随机分成３组，用６０Ｃｏ单次照射大鼠脑，Ａ组为空白对照组，Ｂ组为１０Ｇｙ组，Ｃ组为３０Ｇｙ组。　Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫分别对照射后７天、１个月和６个月的大鼠进行神经行为检测．水迷宫试验结束后心脏取血计数　ＣＥＣｓ。结果：照射７天后．３组大鼠Ｍｏｒｉｒｓ水迷宫的游泳潜伏期、平台象限时间、穿过平台区域次数比较无差　异；照射１个月和６个月后Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫Ｂ、Ｃ组较Ａ组及Ｃ组较Ｂ组潜伏期延长，平台象限时间缩短．穿过平　台区域次数减少．差异有统计学意义；ＣＥＣｓ数量在１周和１个月时Ｂ、Ｃ组较Ａ组及Ｃ组较Ｂ组有明显增高，差　异有统计学意义，６个月时３组ＣＥＣｓ数量之间无差异。在Ｂ组和Ｃ组１周时ＣＥＣｓ数量和６个月时潜伏期相关　（ｒＢ＝０．９７．ｒＣ＝０．９５）。结论：循环内皮细胞数量改变与损伤严重程度相关。　关键词：放射性脑损伤；神经行为；大鼠；循环内皮细胞　中图分类号：Ｒ７３９．４１　文献标识码：Ａ　文章编号：１７２６—８１９２（２００６）０３－０２０５—０４　Ｔｈｅ　Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　Ｒａｄｉａｔｉｏｎ－－ｉｎｄｕｃｅｄ　Ｂｒａｉｎ　Ｉｎｊ　ｕｒｙ　ａｎｄ　Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　Ｅｎｄｏｔｈｉａｌ　Ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　Ｒａｔｓ　Ｘｉａｎｇ－ｐａｎ　Ｌｉ，Ｌａｎｇ－ｋｅ　Ｇａｎ，Ｌｉｎ　Ｒｕａｎ，Ｌｉ　Ｗｅｉ，Ｘｉａｏ－ｆｅｉ　Ｗｕ，Ｄａｉ－ｙｕａｎ　Ｍａ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＲａｄｉａｔｉｏｎ　Ｏｎｔｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｉｆｌｉｔｅｄ　ａＨｏｓｐｉｔｌ，Ｇｕａｎｇｘｉａ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　Ｎａｎｎｉｎｇ５３００２１．ＰＲ．Ｃｈｉｎａ　【ＡＢＳＴＲＡＣＴ】ＢＡＣＫＧＲＯＵＮＤ＆ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ：Ｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ　ｈａｓ　ｂｅｃｏｍｅ　ｏｎｅ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｐｒｏｂｌｅｍｓ　ａｆｆｅｃｔｉｎｇ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　ｌｉｆｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｈｅａｄ＆ｎｅｃｋ　ｔｕｍｏｒｓ　ｗｈｏ　ｒｅｃｅｉｖｅｄ　ｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｔｈｅｒａｐｙ．　Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｗａｓ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｈｅ　ｎｅｕｒｔｏｂｅｈａｖｉｏｒ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｉｍｕｌａｉｔｎｇ　ｅｎｄｏｔｈｅｈａｌ　ｃｅｌｌｓ（ＣＥＣｓ）ｃｈａｎｇｅｓ　ａｔ　ｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｔｉｍｅ　ｅｒ　ｂｒａｉｎ　ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｒａｔｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ：Ｏｎｅ　ｈｕｎｄｒｃｄ　ａｎｄ　ｅｉｇｈｔ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ａｓｓｉｇｎｅｄ　ｉｎｔｏ　，３　ｇｒｏｕｐｓ：Ａ　ｗａｓ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，Ｂ　Ｗａｓ　ｉｒａｄｉａｔｅｄ　ｂｙ　６０Ｃｏ　ａｔ　ａ　ｓｉｎｇｌｅ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　１０Ｇｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｎｃｅｐｈａｌｏｎ　ｏｆ　ｒａｔｓＣ　ｗａｓ　ｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｔｗｈ　３０Ｇｙ．Ｔｈｅ　ｎｅｕｒｏｂｅｈａｖｉｏｒｌａ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｂｙ　Ｍｏｒｒｉｓ　ｗａｔｅｒ　ｌａｂｙｒｉｎｔｈ　ｉｎ　７　ｄａｙｓ，１　ｍｏｎｔｈ　ａｎｄ　６　ｍｏｎｔｈｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｆｔｅｒ　ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ＣＥＣｓ　ｔｈａｔ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｒｉｇｈｔ　ｖｅｎｔｉｒｃｕｌａｒ　ｂｌｏｏｄ　ｗｅｌｅ　ｃｏｕｎｔｅｄ　ａｆｔｅｒ　Ｍｏｒｒｉｓ　ｗａｔｅｒ　ｍａｚｅ　ｔｅｓｔ．ＲＥＳＵＬＴ：Ａｔ　ｔｈｅ　７ｔｈ　ｄａｙ　ａｆｔｅｒ　ｉｒａｄｉａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｓｗｉｍ　ｌｎｔｅｎｃｙｔａｈｅ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　，ｓｗｉｍ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｌａｔｆｏｒｍ　ｑｕａｄｒａｎｔ，ｔｈｅ　ｔｉｍｅｓ　ｏｆ　ｓｗｉｍ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ｐｌａｔｅａｕ　ｒｅｇｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｉｎ　３　ｇｒｏｕｐｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ１　，ｍｏｎｔｈ　ａｎｄ　６　ｍｏｎｔｈｓ　ａｆｔｅｒ　ｉｒａｄｉａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｓｗｉｍ　ｌｎｔａｅｎｃｙ　ｗａｓ　ｌｏｎｇｅｒ　ｉｎ　ｉｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐｓ（ｇｒｏｕｐ　Ｃ＞Ｂ＞Ａ，Ｐ＜０．０５）．　Ｔｈｅ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｓｗｉｍ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｌａｔｆｏｒｍ　ｑｕａｄｒａｎｔ，ｔｈｅ　ｔｉｍｅｓ　ｏｆ　ｓｗｉｍ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ｐｌａｔｅａｕ　ｒｅｇｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ａｌｓｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｅｒ．　ｅｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅｓｅ　ｇｒｏｕｐｓ（ｇｒｏｕｐ　Ａ＞Ｂ＞Ｃ，Ｐ＜０．０５）．Ａｔ　ｔｈｅ　７ｔｈ　ｄａｙ　ａｎｄ　１　ｍｏｎｔｈ　ａｆｔｅｒ　ｉｒａｄｉａｔｉｏｎ，ｔＩｌｅ　ＣＥＣｓ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｉｆ．　ｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅｓｅ　ｇｒｏｕｐｓ（ｇｒｏｕｐ　Ａ＞Ｂ＞Ｃ，Ｐ＜０．０５），ｗｈｉｌｅ　ａｆｔｅｒ　６　ｍｏｎｔｈｓ，ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ　３　ｇｒｏｕｐｓ．　Ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ　ａｎｄ　Ｃ，ｔＩｌｅ　ＣＥＣｓ　ｉｎ　１　ｗｅｅｋ　ｗｅｒｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｓｗｉｍ　ｌａｎｔｅｎｃｙ　ｉｎ　６　ｍｏｎｔｈｓ（ｒＢ＝０．９６６，ｒＣ＝０．９５，ｒｅｓｐｅｃ．　ｔｉｖｅｌｙ）．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮＳ：Ｔｈｅ　ＣＥＣｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｈｔ　ｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ．　收稿日期：２００５—１２—１１　ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：Ｒａｄｉａｔｉｏｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｒａｉｎ　通讯作者：李祥攀　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ　ｔｏ：Ｘｉａｎｇ－ｐａｎ　Ｌｉ　Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｘｐ００８ｃｎ＠ｓｉｎａ．ｔｏｍ　ｉｎｊｕｒｙ；Ｎｅｕｒｏｂｅｈａｖｉｏｒ；Ｒａｔ；Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｅｎ・　ｄｏｔｈｅｌｉｌａ　ｃｅｌｌｓ（ＣＥＣｓ）　维普资讯 http://www.cqvip.com

２０６　李祥攀，等．循环内皮细胞和放射性神经损伤的关系　头颈部肿瘤在我国是一种常见的恶性肿瘤．　放射治疗是主要的治疗手段之一。随着患者生存　期的延长，放射性神经损伤成为影响生存质量的　重要因素，但放射性神经损伤发病潜伏期长，平均　为３．６年，难以早期诊断，确诊后缺乏特异的治疗手　段，治疗效果差，因此应寻找一种早期协助诊断该　病的指标。循环内皮细胞ｆｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ，ＣＥＣｓ１是指从血管内皮层脱离的进入外周血　的成熟内皮细胞，是血管内皮损伤特异而敏感的指　根”。目前放射性神经损伤的发病机理不清，但照射　对血管内皮的损伤可能对该病的形成具有重要作　用，血管内皮损伤可脱落形成ＣＥＣｓ．检测外周血　ＣＥＣｓ形态和数量，可了解ＣＥＣｓ和放射性神经损　伤形成及病情严重程度的关系。神经行为是一种　早期和敏感性指标，常在临床症状和生化指标改　变之前，就表现出行为功能的障碍，本研究用Ｍｏｒ—　ｒｉｓ水迷宫检测大鼠神经行为的改变，判断放射性　神经损伤的严重程度［２１。　１材料与方法　１．１实验动物及分组　实验动物为ＳＤ大鼠（广西医科大学动物实验　中心提供）１０８只，３个月龄，体重为２２０～２３０ｇ，信　封法随机分成３大组，９小组，每小组１２只；Ａ组　为空白对照组，Ａ１组：１周空白对照组，Ａ２组：１个　月空白对照组，Ａ３组：６个月空白对照组；Ｂ组为　１０Ｇｙ组．Ｂ１组：１０Ｇｙ　１周组，Ｂ２组：１ＯＧｙ　１个月　组．Ｂ３组：１０Ｇｙ　６个月组；Ｃ组为３０Ｇｙ组，Ｃ１组：　３０Ｇｙ　１周组，Ｃ２组：３ＯＧｙ　１个月组，Ｃ３组：３０Ｇｙ　６　个月组。按照自然昼夜节律采光，室温（２５±１）ｃ【＝，相　对湿度６０％～７０％，自由摄食和饮水。　１＿２照射方法和剂量　照射剂量和方法参照文献［３］。实验组大鼠用　Ｏ．５％戊巴比妥钠（５０ｍｇ／ｋｇ）腹腔麻醉，予印ｃｏ作俯　卧位垂直照射，制做铅模，照射野大小为２＋３ｃｍ，　每次照射６只。照射野上界位于双眼后眦连线，下　界位于双耳后连线。Ｂ组照射空气剂量１ＯＧｙ，ｃ组　照射空气剂量３０Ｇｙ，对照组经同样麻醉后放在相　似的环境中，但不予照射。　１．３神经行为测试　Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫实验（中国医医学科学院药物研　究所制）：水迷宫的组成包括直径１５０ｃｍ的圆形水　池，水温保持（２５±１）ｃ【＝，水池壁和底均涂成黑色，池　壁上标有东南西北四个入水点，它们将水池等分　为四个象限，分别称ＳＷ，ＮＷ、ＳＥ及ＮＥ象限，在　ＳＷ象限正中离池壁３３ｃｍ处放一个直径１０ｃｍ、高　１５ｃｍ的平台，平台顶低于水面ｌｃｍ。迷宫上方安置　带有显示系统的摄像机，同步记录大鼠运动轨迹。　训练期间迷宫外参照物保持不变，训练在每天上　午１０：００至下午５：００进行，大鼠于池边４个固定　点入水，面向池壁，计算机自动跟踪记时，允许在　１２０ｓ内找到平台，找到后在平台上保持１５ｓ，如　１２０ｓ内找不到或爬上平台，引导到平台上，保持　１５ｓ，前连续６天为定向航行试验（ｐｌａｃｅ　ｎａｖｉｇａｔｉｏｎ　ｔｅｓｔ），第７天进行空间搜索实验用于测量大鼠学会　寻找平台后，对平台空间位置记忆的能力。即在第　７天撤除平台，ＮＥ象限为人水点将大鼠面向池壁　放入水中，记录大鼠在１２０ｓ内搜索平台的路线图，　测量其平台象限的游泳时间。主要参数有：（１）第６　天平均潜伏期（ａｖｅｒａｇｅ　ｅｓｃａｐｅ　ｌａｔｅｎｃｙ）；（２）第７天　ＳＷ象限（平台象限）持续时间；（３）第７天穿过目　标区域（平台区域）次数。　１．４　ＣＥＣｓ的检测　神经行为测试结束后，Ｏ．５％戊巴比妥钠（５０ｍｇ／　ｋｇ）麻醉，开胸行右心室抽血３ｍｌ，与０．３ｍｌ　３．８％枸　檬酸钠液充分混合后立即进行分离，采血和分离　器具均硅化。ＣＥＣｓ的分离按照Ｈｌａｄｏｖｅｃ［４１建立的方　法加以改进，将血液标本离心２０　ｍｉｎ（１　０００ｒ／ｍｉｎ），　收集上清液ｌｍｌ；将０．Ｉ％ＡＤＰ液０．２　ｍｌ加入上清　液中；离心２０　ｍｉｎ（３　０００ｒ／ｍｉｎ）；再取上清液以　３０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，弃去上清液，加入０．１ｍｌ生　理盐水，振荡１０　ｍｉｎ使沉淀物重悬后备检。计数　时，使混悬液充分　昆匀后，取０．０１ｍｌ滴入细胞计数　池内．在光学显微镜下计数全部９个大方格中的　ＣＥＣｓ数。同一标本计数４次，取其平均值，以细胞　数１Ｏ　个，Ｌ表示。ＣＥＣｓ的鉴定采用ⅧＲ：Ａｇ间接免　疫荧光检测，呈现较强的黄绿色荧光着色。　１．５血管内皮染色　大鼠心脏取血后经左心室升主动脉灌注４％　甲醛固定、取脑，常规脱水、透明、石蜡包埋鼠脑，自　前囟后２．５ｍｍ连续切片，片厚６ｌｘｍ，血管染色采　用兔抗大鼠ＣＤ　多克隆抗体和即用型ＳＡＢＣ试剂　盒．染色的血管呈棕黄色。　１．６统计学处理　数据采用ＳＰＳＳ１３．０进行统计，应用Ｏｎｅ—Ｗａｙ　ＡＮＯＶＡ、相关性分析（数据以　拯的形式表示）。　维普资讯 http://www.cqvip.com

李祥攀，等．循环内皮细胞和放射性神经损伤的关系　２结果　２．１照射后大鼠一般情况观察　Ａ组有１只大鼠麻醉后未醒致死，Ｂ、Ｃ组共有　２只于麻醉后照射过程中死亡，均被排除。存活大　鼠肢体活动正常，提尾时身体无旋转反射等异常　神经体征。　２．２　Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫试验　２．２．１　寻找平台潜伏期的差异　Ａ、Ｂ、Ｃ　３组大鼠　寻找水下平台潜伏期结果见表１。各组第４天起潜　伏期渐趋平稳。比较第６天各组潜伏期变化，在照　射后１周检测，Ａ、Ｂ、Ｃ组之间无差异；在照射后１　月和６月时，Ｃ组与Ａ组相比，潜伏期延长，两者　问差异有显著性（Ｐ＜Ｏ．０５），Ｂ组潜伏期较Ｃ组缩短，　差异有显著性（Ｐ＜Ｏ．０５），但仍比Ａ组长（Ｐ＜Ｏ．０５）。　表１　３组大鼠在不同时期寻找平台潜伏期（　，ｓ）　与Ａ组比较：性０．００５；ｂＰ＝－０．０００；仕０．００２；性０．０００；　与Ｂ组比较：　］＝０．０００：ｆＰ＝－０．０００。　２．２．２空间搜索能力的差异　各组大鼠游泳路线　可见．在照射后１周检测，Ａ、Ｂ、Ｃ组之间差异不明　显；在照射后１个月和６个月时，Ａ组能依靠空间　搜索寻找平台，运动轨迹多位于原平台所在象限，　而Ｂ组及Ｃ组多绕池壁游泳，运动轨迹呈随机分　布于各象限中，ＳＷ象限时间Ｃ组与Ａ组相比，停　留减少，两者问差异有显著性（Ｐ＜Ｏ．０５），Ｂ组停留时　间较Ｃ组延长，差异有显著性（Ｐ＜Ｏ．０５），但仍比Ａ　组短（Ｐ＜Ｏ．０５），见表２。　表２　３组大鼠在ＳＷ象限停留时间（　拯，ｓ）　与Ａ组比较：性Ｏ．０１２；　尸＝Ｏ．０００；　尸＝Ｏ．００７；ｌａｐ＝０．０００　与Ｂ组比较：　Ｏ．０４９；　Ｏ．０４６。　２．２．３穿过目标区域次数差异　３组大鼠穿过目　标区域次数见表３，在照射后１周，各组之间差别不　明显，在照射后１月及６月Ｃ组与Ａ组相比，次数减　少，两者间差异有显著性　）＜Ｏ．０５），Ｂ组次数较Ｃ组增　加，差异有显著性（Ｐ＜０．０５），但仍比Ａ组少（Ｐ＜０．０５）。　表３　３组大鼠在不同时期穿过目标区域次数（　拯，次）　与Ａ组比较：　Ｏ．００７；　Ｐ＝Ｏ．０００；￣Ｐ＝－０．０２０；　Ｏ．０００；　与Ｂ组比较：　＝Ｏ．０４５；ｆＰ＝－０．０３３。　２．３　ＣＥＣｓ的形态观察及计数　光镜下ＣＥＣｓ体积较大，直径约１０—５０ｌ＆ｍ，形　态多样，大多为极不规则的多边形，故极易辨认。Ａ　组细胞大多明显皱缩，核消失，Ｂ、Ｃ组细胞大多胞　浆丰富，有核。　脑照射后，血中ＣＥＣｓ数量增加，照射剂量越　高，ＣＥＣｓ增加越明显，６个月后恢复正常。在照射　后１周及１个月，Ｃ组与Ａ组相比，细胞数量明显　升高，两者间差异有显著性（Ｐ＜Ｏ．０５），Ｂ组数量较Ｃ　组少，差异有显著性（Ｐ＜Ｏ．０５），但仍比Ａ组长，差异　有显著性（Ｐ＜０．０５）；但６个月时，Ａ、Ｂ、Ｃ之间细胞　数量已经没有差别，见表４。　表４　３组大鼠不同时期血ＣＥＣｓ数量（　，１０　个几）　与Ａ组比较：性Ｏ．０００；ｈｐ＝－０．０００；　Ｐ＝Ｏ．０２２；　Ｐ：Ｏ．０２７；　与Ｂ组比较：　尸＝Ｏ．０００；ｆＰ＝－０．０４５。　２．４　寻找平台潜伏期和ＣＥＣｓ数量之间相关性　分析　照射后动态观察３组大鼠ＣＥＣｓ变化．在照　射后的１周时间内，各组大鼠的ＣＥＣｓ数量最高；　而对于寻找平台潜伏期时间，在６个月时潜伏期　最长。行１周和６个月时Ｂ组大鼠的ＣＥＣｓ数量和　寻找平台潜伏期时间的相关性检验．相关系数ｒＢ－　Ｏ．９７（Ｐ＝０．０３４），两者之间相关性明显。同样检Ｎｃ　组时两者的相关性，ｒｃ＝Ｏ．９５（Ｐ＝Ｏ．０１３），即在受到照　射后ＣＥＣｓ数量改变和神经行为改变之间呈正相　关。　２．５　脑血管改变　在ｘｌ００倍视野下．海马部：Ａ组的血管管腔内　表面平滑，内皮细胞位于管壁一侧，管腔通畅，Ｂ、Ｃ　组血管管腔变得明显不规则，管腔中可见有血栓　形成，管腔内膜凹凸不平；Ｂ较Ａ组血管密度低，　管径、截面积小，Ｃ组较Ｂ组有相同的结果。在Ｂ、　维普资讯 http://www.cqvip.com

２０８　李祥攀，等．循环内皮细胞和放射性神经损伤的关系　Ｃ组内部６个月时较１周及１个月可看到部分血　管狭窄严重、闭塞。　３讨论　Ｍｏｍｓ水迷宫翻是神经生物学研究动物空间学　习、记忆功能常用的模型工具，能够较准确地反映　实验动物以视觉为基础的空间学习、记忆、定向及　定位能力的变化。学习和记忆涉及大脑海马、边缘　系统等多种结构，任一部位的损伤均可造成学习、　记忆能力的损害。人头颈部肿瘤放射治疗后，颞　叶、海马均可受损，引起记忆力的明显下降。本实　验在１周时脑损伤还未表现出来，１个月时出现．６　个月时最严重，表明该病潜伏期较长，Ｂ、Ｃ组脑接　受照射后，逃避潜伏期显著延长，空间搜索试验中　可见照射后大鼠多绕池壁游泳，其轨迹随机分布　于各象限，平台象限的路程百分比、穿越目标区域　的次数减少，说明其以视觉为基础的空间学习、记　忆、定向及定位能力受到显著抑制。而且Ｃ组较Ｂ　组照射剂量加大后，其逃避潜伏期显著长于Ｂ组，　平台象限的路程百分比、穿越目标区域的次数较Ｂ　组明显减少，显示照射剂量越大，损伤越重。　正常情况下，血中即存在极少量的ＣＥＣｓ．但多　为明显皱缩，核基本消失的ＣＥＣｓ，这是新陈代谢脱　落下来的衰老细胞；在心血管疾病、炎症等情况　下，血管内皮发生损伤，严重时脱落，致使外周血　中ＣＥＣｓ增多【６一。　本实验观察到的ＣＥＣｓ数量随照射剂量的升　高呈上升趋势，临床上行再程放疗的患者放射性　神经损伤的出现率远高于首程放疗的患者，表明　照射剂量高则损伤重．ＣＥＣｓ的这种数量变化正是　这种损伤的表现，因此ＣＥＣｓ数量可以作为观察放　射性神经损伤严重程度的一个指标。对照射前后　ＣＥＣｓ的形态进行比较发现，照射前血中ＣＥＣｓ多明　显皱缩、核消失，可能为凋亡细胞，照射后血中　ＣＥＣｓ大多胞浆丰富、有核，提示照射可使血管内皮　发生损伤并脱落，致使血中ＣＥＣｓ增多，且多为有核　ＣＥＣｓ，ＣＥＣｓ是血管损伤内皮脱落的直接证据，同时　ＣＥＣｓ多为有核的形态也证实ＴＳｏｌｏｖｅｙ的在疾病状　态下凋亡不是ＣＥＣｓ形成的主要机制【８］观点。　Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫可以用来评价放射性神经损伤　是否出现以及损伤的严重程度，ＣＥＣｓ数量变化则　表明照射对血管内皮的直接损伤作用。两种剂量　下的寻找平台潜伏期和ＣＥＣｓ数量之间相关性分　析表明：放射性神经损伤严重程度和ＣＥＣｓ数量之　间有明显的相关性。ＣＥＣｓ数量在照射后早期改变　最明显，表明正常脑血管受到照射后出现内皮细　胞脱落，血管的完整性受到破坏，血脑屏障通透性　增加，临床上可以观察到　．刀治疗后病灶周围水　肿可能和此有关，血管受到破坏后发生重构，本实　验观察到受照脑血管管腔不规则，内有血栓．管　径、截面积小，血管密度降低，导致脑局部的血供　减少，放脑患者常见脑局部坏死，低密度灶［　，局部　缺血可为形成这些病灶的原因之一。放射性神经　损伤的潜伏期长，缺乏早期、特异的观察指标．　ＣＥＣｓ的检测可以为预测该病是否出现及严重程度　提供帮助，有待于临床的进一步检验。　［参考文献］　［１］Ｂｕｔｔｈｅｐ　Ｐ，Ｒｕｍｍａｖａｓ　Ｓ，Ｗｉｓｅｄｐａｎｉｅｈｋｉｊ　Ｒ，ｅｌ　１ａ．Ｉｎ—　ｃｒｅａｓｅｄ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｉｌｓ，ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，ａｎｄ　ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ　ｉｎ　ｈｔａｌａｓｓｅｍｉｌａ［Ｊ］．Ａｍ　Ｈｅｍａｔｏｌ，２００２，７０（２）：１００—１０６．　［２］　阮林，韦力，甘浪舸，等．大鼠脑照射后神经行为变化　的动态观察［Ｊ］．广西医科大学学报，２００５，２２（４）：　４９２－４９４．　［３］邢诒刚，唐亚梅，孙颖，等．急性放射性脑损伤鼠模　型的建立［Ｊ］．中华放射医学与防护杂志，２００３，２３　（４）：２６９—２７０．　［４］Ｈｌａｄｏｖｅｃ　Ｊ．　Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌａ　ｃｅｌｌｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｔｏ—　ｇｅｔｈｅｒ　ｗｉｔｈ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｔｅｉｒ　ｃｏｕｎｔｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｔｈｒｏｍｂ　Ｒｅｓ，１９７３，３（２）：６６５－　７６４．　［５］Ｚｈａｎ　Ｈ，Ｔａｄａ　Ｔ，Ｎａｋａｚａｔｏ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｓｐａｔｉｌａ　ｌｅａｒｎｉｎｇ　ｔｒａｎｓｉｅｎｔｌｙ　ｄｉｓｔｕｒｂｅｄ　ｂｙ　ｉｎｔｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｕａｂａｉｎ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｌ　Ｒｅｓ，２００４，２６（１）：３５—４０．　［６］Ｄｉｇｎａｔ－Ｇｅｏｒｇｅ　Ｆ，Ｓａｍｐｏｌ　Ｊ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌａ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖａｓｃｕｌｒａ　ｄｉｓｏｒｄｅ１＂Ｓ：　ｎｅｗ　ｉｎｓｉｇｈｔｓ　ｉｎｔｏ　ａｎ　ｏｌｄ　ｃｏｎｃｅｐｔ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｈａｅｍａｔｏｌ，２０００，６５（１）：２１５－２２０．　［７］Ｃｈｏｎｇ　Ａ　Ｙ，Ｌｉｐ　Ｇ　Ｙ，Ｆｒｅｅｓｔｏｎｅ　Ｂ．Ｂｌａｎｎ　ＡＤ．Ｉｎ—　ｃｒｅａｓｅｄ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ａｃｕｔｅ　ｈｅａｒｔ　ｆａｉｌ—　ＵＩ＇ｅ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｗｉｔｈ　ｖｏｎ　Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄ　ｓｏｌｕｂｌｅ　Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｈｅａｒｔ　Ｆａｉｌ，２００６，８（２）：１６７－１７２．　［８］Ｓｏｌｏｖｅｙ　Ａ，Ｇｕｉ　Ｌ，Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｓｉｃｋｌｅ　ｃｅｌｌ　ａｎｅｍｉａ　ａｓ　ａ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｓｌａｔｅ　ｏｆ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　ａｎｔｉ－ａｐｏｐｔｏｔｉｃ　ｔｏｎｅ：ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｖａｓｅｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｌｌｅｌｉｌａ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｏｎ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ａｎｄ　ｕｎａｎｅｈｏｒｅｄ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．　Ｂｌｏｏｄ，１９９９，９３（１１）：３８２４－３８３０．　［９］孔琳，张有望，吴永和，等．鼻咽癌放射治疗后脑脊　髓损伤的临床和影像学诊断［Ｊ］．肿瘤，２００２，２２（４）：　３１５－３１８．