分析检测铁皮石斛中有机氯农药多残留检测方法的研究及应用周键超，韦雪飞，羊超菠（磐安县食品药品检验检测中心，浙江磐安 322300）摘 要：目的：研究并制定一套高效的铁皮石斛原料中有机氯农药多残留检测方法，并对铁皮石斛道地药材进行应用研究。方法：在空白试样铁皮石斛粉末中加入13种有机氯农药标准品，用乙腈进行溶解提取，过HLB-A中药农残专用柱净化，氮吹至近干后用正己烷定容，用ECD检测器检测有机氯农药残留。结果表明，该检测方法下对铁皮石斛原料粉末中13种有机氯回收率在60.01%～120.31%，RSD在0.846%～9.792，满足有机氯农药残留检测要求。结论：该研究结果可为中药材中有机氯农药多残留检测方法的制定及应用提供参考依据。关键词：铁皮石斛；有机氯农药残留；固相萃取；气相ECD检测铁皮石斛，学名为Dendrobium officinale Kimura et Migo，是兰科石斛属草本植物，生于海拔1 600 m的山地半阴湿的岩石上，主要分布于我国安徽、浙江、福建等地区[1]，铁皮石斛以其茎入药，属补益药中的补阴药，益胃生津，滋阴清热。铁皮石斛成分复杂，包括石斛多糖、生物碱、黄酮、酚类物质、石斛其他类结构物质及微量元素等[2]，为食药同源中药材。浙江省磐安县是“中国药材之乡”，全县有家种和野生中草药1 219种，“浙八味”中白术、元胡、玄参、贝母和白芍主产于磐安，俗称“磐五味”，2016年，铁皮石斛与三叶青、灵芝、玉竹、天麻被评为新磐五味。作为道地药材之一，铁皮石斛在种植、药用、临床等研究方法发挥着重大作用，但对铁皮石斛原料中有机氯农药多残留研究有所欠缺。人工栽培、生长环境等会造成中药材中农药不同程度的残留[3]，但《中国药典》2020版中未对铁皮石斛农药残留有明确限量指标[4]，这不仅影响药材的用药安全，也不利于中药材出口走出国门及助推产业更好发展。因此，研究并制定简单、快速、准确，并可同时定性、定量的农药多残留检测方法是保障人们用药安全、推动中药材现代化建设迫切需要结果的问题之一[5]。序号12345678910111213表1 13种有机氯农药标准品表中文名称α-六六六β-六六六γ-六六六五氯硝基苯δ-六六六七氯艾氏剂α-硫丹p,p’-滴滴伊β-硫丹p,p’-滴滴滴o,p’-滴滴涕p,p’-滴滴涕英文名称α-666β-666γ-666Quintozineδ-666HeptachlorAldrinAlpha-Endosulfanp,p’-DDEBeta-Endosulfanp,p’-DDDo,p’-DDTp,p’-DDT浓度/(μg·mL)100100100100100100120100100100100100100配制溶剂正己烷正己烷正己烷正己烷正己烷正己烷正己烷正己烷正己烷正己烷正己烷正己烷正己烷1.3 方法1.3.1 试样制备与提取取铁皮石斛样品，将其磨碎过80目筛，制成待测样。取待测样粉末2.5 g，精密称量，加入氯化钠1 g，摇散后加入乙腈25 mL，以2 500 r/s涡旋混匀5 min，4 500 r/min离心5 min，分取上清液于平底烧瓶内，沉淀再加乙腈 25 mL，涡旋5 min，离心5 min，合并两次上清液，40 ℃水浴旋转蒸发上清液减压浓缩至3～5 mL，放冷，用乙腈稀释至10.0 mL，摇匀，即得。1.3.2 净化量取直接提取法制备的供试品溶液3～5 mL,直接通过亲水亲油平衡材料（HLB SPE）固相萃取柱（200 mg， 6 mL），收集全部净化液，摇匀。吸取1.0 mL摇匀后的净化液置水浴氮吹仪氮吹至近干，用正己烷定容至1.0 mL，过0.2 μm滤膜过滤进行测定。1.3.3 标准溶液配制（1）准确吸取各农药标准品0.1 mL，于10.0 mL容量瓶中，1 材料与方法1.1 材料与试剂抽样市面销售铁皮石斛；氯化钠（分析纯）；乙腈（色谱纯）；正己烷（色谱纯）；中药农残专用柱HLB-A（纳普分析技术（苏州）有限公司）；13种有机氯农药标准品，国家标准物质研究中心。13种有机氯农药标准品具体见表1。1.2 仪器设备赛默飞TRACE1300气相色谱仪，配有ECD检测器（赛默飞世尔科技）；电子天平AL204/01（梅特勒-托利多公司）；多管漩涡混合仪GL-50（杭州金谱科学仪器有限公司）；智能氮吹仪MFV-24（广州得泰仪器科技有限公司）；台式高速离心机ST8（苏州Thermo）；旋转蒸发仪Precision（海道尔夫）。作者简介：周键超（1995—），女，浙江磐安人，本科，助理工程师。研究方向：食品安全检测。44 食品安全导刊 2021年8月Copyright©博看网 www.bookan.com.cn. All Rights Reserved.分析检测用正己烷定容至刻度，此时溶液浓度为1.0 μg/mL的标准储备液，4 ℃保存。用铁皮石斛基质提取液稀释标准储备液，配制成各浓度的混合标准工作液，4 ℃保存，备用。（2）准确吸取标准储备液（1.0 μg/mL）0.10 mL，用正己烷定容至1.0 mL，此时混合标准品溶液浓度为0.10 μg/mL。（3）分别准确吸取混合标准品溶液（0.10 μg/mL） 0.01 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL和0.50 mL，用正己烷定容至1.0 mL，此时混合标准品浓度分别为0.001 μg/mL、0.005 μg/mL、0.010 μg/mL、0.020 μg/mL和0.050 μg/mL。1.3.4 色谱条件色谱柱：SPB-530 m×0.25 mm×0.25 μm；进样口温度：240 ℃；升温程序：90 ℃保持1 min，以10 ℃/min的速率升至180 ℃并保持5 min，以4 ℃·min-1的速率升至280 ℃并保持10 min；检测器温度：300 ℃；进样量：1 μL；载气图1 13种有机氯农药标准品的色谱图表1 13种有机氯农药标准品的色谱表序号12345678910111213峰名称α-666β-666γ-666五氯硝基苯δ-666七氯艾氏剂α-硫丹p,p’-DDEβ-硫丹p,p’-DDDo,p’-DDTp,p’-DDT保留时间/min15.05516.30716.66216.91517.80220.27222.00025.73026.96328.45028.93029.08830.670峰面积/kHz·min3.4141.4272.7982.8652.9842.5813.3732.5232.9942.4972.1411.5441.646峰高/kHz49.38420.53239.79039.66843.05433.36343.31530.43037.52229.68029.54521.10221.439相对峰面积（/%）相对峰高（/%）10.414.358.538.749.107.8710.297.709.137.626.534.715.0211.254.689.079.049.817.609.876.938.556.766.734.814.89样品量/μg/mL0.100 50.100 10.100 40.100 10.100 70.101 30.120 60.100 70.100 20.100 30.099 00.098 90.101 6及流速：50 mL/min；定量方法：峰面积外标法定量。2 结果与分析2.1 13种有机氯农药标准品的色谱表色谱图13种有机氯农药标准品的色谱图如图1所示，具体参数见表1。2.2 提取过程中直接加乙腈的考察在对铁皮石斛粉末进行提取过程中，观察到加入水浸润粉末后再加乙腈，会因为铁皮石斛糖分多而发生黏连情况，导致最后回收率过低；而不加水直接乙腈提取，则没有黏连情况，添加回收率也较好，因此选择提取过程中直接加乙腈。2.3 定容溶剂选择对铁皮石斛粉末中13种有机氯农药多残留的检测中，选择乙腈进行提取，离心完过滤浓缩净化后较为清澈，且能充分提取出农药残留，但选择乙腈作为定容溶剂时，上机过程中发现溶剂响应值偏大，在做低浓度添加回收时有较大影响，故选择净化后取1 mL水浴氮吹至近干，换正己烷对其进行定容。2.4 线性范围用以上混合标准品梯度溶液配制的基质标，在1.3.4条件下进行测定，分别以各组分的溶液浓度（X，μg/mL）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线。从曲线结果上看，13种有机氯农药标准品在0.001～0.100 μg/mL的浓度范围内线性关系良好（R2≥0.997 0），满足定量分析要求，同时，该条件下测定的检出限定量限均满足《中华人民共和国药典》2020版四部有机氯农药残留要求。13种有机氯农药残留的线性关系见表2。2.5 回收率和精密度对空白均质的铁皮石斛样品基质分别做低、中、高3种添加回收实验，每个水平重复6次，均按照1.3方法进行实验，测定回收率及精密度，实验结果表明，该方法下的添加回收率和精密度基本满足农药残留分析方法规定的相关要求。11种有机氯农药残留在3个水平下的回收率及相对标准偏差范围（n=6）见表3、表4。2.6 实际样品应用根据以上实验方法，抽取了本地市面销售的10批铁皮石斛样品，对其分别进行上述13种有机氯农药多残留检测，结果见表5。实验结果显示，10批铁皮石斛样品中，13种有机氯农药残留部分未检出，检出的均低于《中华人民共和国药典》2020版四部有机氯农药残留要求的定量限。Aug. 2021 CHINA FOOD SAFETY 45Copyright©博看网 www.bookan.com.cn. All Rights Reserved.分析检测表2 13种农药线性范围、线性关系及相关系数表序号12345678910111213农药α-六六六β-六六六γ-六六六五氯硝基苯δ-六六六七氯艾氏剂α-硫丹p,p’-滴滴伊β-硫丹p,p’-滴滴滴o,p’-滴滴涕p,p’-滴滴涕0.007 mg/kg序号1234567891011农药α-六六六β-六六六γ-六六六五氯硝基苯δ-六六六七氯艾氏剂α-硫丹p,p’-滴滴伊β-硫丹p,p’-滴滴滴回收率（/%）80.00114.1385.59114.2185.7168.5662.7162.7462.80102.8679.980.009 mg/kg回收率（/%）62.7284.48RSD（/%）5.2008.48760.1260.01RSD（/%）3.4764.8547.4261.8662.3852.8742.0730.8461.9392.8691.6610.001～0.1000.001～0.1000.001～0.1000.001～0.1000.001～0.1000.001～0.1000.001～0.1000.001～0.1000.001～0.1000.001～0.1000.001～0.1000.001～0.1000.001～0.100线性范围/(μg/mL)线性方程Y=33.628 6X+0.035 3Y=13.839 4X+0.041 5Y=27.472 2X+0.039 1Y=27.818 5X+0.081 0Y=29.355 1X+0.029 7Y=25.312 4X+0.016 4Y=27.469 6X+0.058 8Y=24.674 4X+0.038 7Y=29.033 6X+0.084 9Y=24.501 0X+0.039 0Y=21.150 9X+0.046 7Y=15.223 1X+0.039 0Y=15.787 9X+0.042 20.009 mg/kg回收率（/%）97.78120.31111.36111.27102.2284.4862.5471.3671.24111.1197.810.030 mg/kg回收率（/%）RSD（/%）7.7627.93886.2881.71RSD（/%）2.6856.9345.1843.2222.7382.4928.9298.5967.2579.6564.95393.33106.7492.06106.7089.3370.6769.4173.3968.0397.3390.670.070 mg/kg回收率（/%）RSD（/%）5.1295.358R20.998 90.999 00.999 30.998 20.998 90.997 80.998 80.998 80.998 20.999 10.998 30.998 10.997 00.030 mg/kg回收率（/%）RSD（/%）4.2593.7193.8933.6404.5809.7927.9473.4375.4975.0366.326表3 11种有机氯农药在3个水平下的回收率及相对标准偏差范围表（n=6）表4 2种有机氯农药在3个水平下的回收率及相对标准偏差范围表（n=6）序号12农药o,p’-滴滴涕p,p’-滴滴涕表5 铁皮石斛样品有机氯农药残留检测结果表农药α-666β-666γ-666五氯硝基苯δ-666七氯艾氏剂α-硫丹p,p’-滴滴伊β-硫丹p,p’-滴滴滴o,p’-滴滴涕p,p’-滴滴涕/ND＜0.008＜0.003＜0.007＜0.003＜0.007＜0.006＜0.01＜0.006＜0.003＜0.008ND＜0.005大棚遮60%（3年老条）ND＜0.008＜0.003＜0.007＜0.003＜0.007＜0.006＜0.01＜0.006＜0.003＜0.008＜0.018＜0.005林下（4年）＜0.004＜0.008＜0.003ND＜0.003＜0.007＜0.006ND＜0.006＜0.003＜0.008＜0.018ND仿野生（立钻）ND＜0.008＜0.003＜0.007＜0.003＜0.007＜0.006＜0.01＜0.006ND＜0.008ND＜0.005露天条（3年）ND＜0.008＜0.003NDND＜0.007＜0.006＜0.01＜0.006＜0.003NDND＜0.005周遮60%ND＜0.008＜0.003＜0.007＜0.003＜0.007ND＜0.01＜0.006＜0.003＜0.008＜0.018＜0.005露天条（3年）ND＜0.008＜0.003＜0.007＜0.003＜0.007＜0.006＜0.01＜0.006＜0.003NDNDND浙种云南（段）ND＜0.008＜0.003＜0.007ND＜0.007＜0.006＜0.01＜0.006ND＜0.008＜0.018＜0.005浙种云南露天条（2年）（直条）遮阳40%ND＜0.008＜0.003＜0.007＜0.003＜0.007＜0.006＜0.01＜0.006＜0.003＜0.008＜0.018＜0.005ND＜0.008＜0.003＜0.007＜0.003＜0.007＜0.006＜0.01＜0.006ND＜0.008＜0.018＜0.005注：ND表示未检出。46 食品安全导刊 2021年8月Copyright©博看网 www.bookan.com.cn. All Rights Reserved.分析检测3 结论从检测结果看，该实验方法建立了铁皮石斛原料中13种有机氯农药多残留检测方法：用乙腈对铁皮石斛粉末进行提取，过亲水亲油平衡材料（HLB SPE）固相萃取柱净化，净化液氮吹至近干用正己烷定容。该方法下得出的各农药回收率均在60.01%～120.31%，RSD在0.846%～9.792%，符合农药残留检测标准，同时该方法高速、有效，可推广并应用于铁皮石斛原料中的有机氯农药的残留检测。参考文献[1]吴建,王建方,方玲,等.国内铁皮石斛研究概况[J].中国药学杂志,2013,48(19):1610-1613.[2]王换,张建霞,吴坤林,等.不同石斛的生物学特性及主要成分比较研究[J].广东农业科学,2012,39(12):44-46.[3]宋稳成,单炜力,叶纪明,等.国内外农药最大残留限量标准现状与发展趋势[J].农药学学报,2009,11(4):414-420.[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典2020年版:4部[M].北京:中国医药科技出版社,2020.[5]胡奇杰,朱佳茜,王新财,等.铁皮石斛饮片中有机氯及拟除虫菊酯农药多残留检测方法的研究[J].安徽农业科学,2016,44(7):66-69.（上接第43页）抗体进行免疫酶染色，对显色后的有色产物进行定性和定量分析，确定物质含量。具有灵敏、准确、稳定、普遍适用、操作简便、速度快及价格低的优点，可用于测量沙门氏菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等的检测。2.3.3 免疫磁性微球技术免疫磁性微球技术是将抗体包被的磁珠混合在样品中，通过磁场变化分析确定微生物种类，具有精度高、时间短的优点。2.4 分析化学技术分析化学技术是通过仪器对微生物的化学组成进行分析，判断微生物种类，主要包括高效液相色谱、气相色谱-质谱联用、气相色谱、液相色谱-质谱联用。3 食品微生物检验的质量控制3.1 提高检验人员检测水平食品微生物检验工作需要由专业人员进行，并对检验人员提出了更高的要求。①作为食品微生物检验人员，需要具备相应的法律意识，并能够熟练掌握各种专业化的操作技术，进一步保证检验流程的规范性。②针对于检验人员，检验部门需要开展专业化培训，同时还要聘请专家授课传授先进检验方法和技术，进一步提高食品微生物检验人员的专业技能，确保检验工作的质量。并重视高素质人才的引进，提高检验人员的专业能力和水平[3]。③在食品微生物检验工作中，会涉及到测定检验数据，要求数据填写具备真实性，检测人员需准确记录与检验过程相关的信息，保证检验结果的正确性和可靠性。④制作操作手册，规范人员岗位职责，制定实验室安全措施。3.2 规范检测环境①房屋要求。房屋宽敞、通风，照明良好；墙面地面易清洁；根据工作内容分用房间。②环境设施要求。布局合理，操作区域同办公区域分开，培养室、无菌室、洗涤室、消毒室等功能区应分开，无菌室要有套间或缓冲间，检验室要有消毒设施和洗手池定期对无菌室进行消毒，经常进行空气落菌实验。③制定完善的卫生制度，定期对环境消毒，将废弃物投入指定容器中，无害化处理后方可排放。④仪器要求。加强仪器功能检测，对实验室内的温度计、天平、显微镜等仪器进行定期检验、监测、校准和消毒更换，有日常维护记录。3.3 规范食品检验流程①在针对食品微生物检验过程中，要求检验人员要实现样品的规范化采集，仔细辨别样品的包装和外观，并随机取样，确保采集样品的代表性。②定期使用有证标准物质和次级标准物质进行内部质量控制。③利用不同方法或相同方法重复检测，对留存的样品进行再次检测。④对给定的微生物菌种按照有关的方法和指标做生化等方面的鉴定。⑤使用标准菌株，不使用来源不明的菌株，采用准确方法保存菌株，防止菌株发生变异。⑥做好实验室安全防护，加强安全培训，张贴警示标志，加强对有毒有害物的防护，防止空气污染[4-5]。4 结语当前食品安全越来越受到关注，为了进一步提高食品监管力度，降低食品安全问题发生的概率，需要构建一套完整的食品微生物检验体系，进一步优化食品微生物检验的流程和相应技术，加强对检验过程的质量控制，为食品安全管理提供重要的技术支持。参考文献[1]王秀芹,张敏,颜萍.食品微生物检测技术研究进展[J].微生物学,2012(11):77-79.[2]王慧,郑晶晶.食品微生物检测技术研究进展[J].现代食品,2017(8):30-32.[3]郭紫娟,洪智骏一.食品微生物检验的影响因素及质量控制方法[J].现代食品,2020(12):163-165.[4]邹雨虹,杨丹妮,张晓金.食品微生物检验的问题及解决措施[J].现代食品,2021(2):74-75.[5]班美静.食品微生物检验的影响因素分析和质量控制对策探究[J].现代食品,2018(12):114-115.Aug. 2021 CHINA FOOD SAFETY 47Copyright©博看网 www.bookan.com.cn. 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