胶体金法和免疫荧光法检测血浆肌钙蛋白I的比较

检验医学与临床２０１２年６月第９卷第１１期Ｌａｂ　Ｍｅｄ　Ｃｌｉｎ，Ｊｕｎｅ　２０１２，Ｖｏ１．９，Ｎｏ．１１　・　１３２５　・　・论　著・　胶体金法和免疫荧光法检测血浆肌钙蛋白Ｉ的比较　吴吉江（江苏省邳州市人民医院检验科２２１３００）　【摘要】　目的通过两种方法检测结果的比较，对胶体金法（Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ　Ｇｏｌｄ　Ａｓｓａｙ）检测血清心肌肌钙蛋白Ｉ　（ｃＴｎＩ）进行方法学评价，并探讨其临床应用价值。方法　应用胶体金法测定２ｏ名健康人和２Ｏ例急性心肌梗死　（ＡＭＩ）患者的血清ｃＴｎＩ水平，并与免疫荧光法（ＩＦＡ）检测结果相比较，系统研究胶体金法测定ｃＴｎＩ的敏感性、特异　性、可用度。结果胶体金法（Ｙ）与免疫荧光法（Ｘ）具有良好的相关性（ｙ一０．８０１Ｘ一０．１７４，ｒ一０．９８０），结果差异　无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。诊断敏感度、特异度、可用度分别为８５．０　、９５．０　、８０．３　，阳性和阴性似然比分别为　１７．０　和１５．８　，阳性预测值和阴性预测值分另Ｉ】为９４．４％、８６．４　。结论　胶体金法操作简便、结果准确可靠、自　动化程度高，且检测快速，具有较高的临床可用度；ｃＴｎＩ对诊断ＡＭＩ有高度特异性和敏感性，且持续时间较长，适　合在临床工作中推广应用。　【关键词】胶体金法；　免疫荧光法；　肌钙蛋白Ｉ；　急性心肌梗死　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９４５５．２０１２．１１．０２３　文献标志码：Ａ　文章编号：ｌ６７２—９４５５（２０１２）ｌ１一ｌ３２５一Ｏ２　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｃｏｌｌｏｉｄａｌ　ｇｏｌｄ　ａｓｓａｙ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ａｓｓａｙ　ｉｎ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ｃａｒｄｉａｃ　ｔｒｏｐｏｎｉｎ　Ｉ　ＷＵ　Ｊ　ｉ—　ｊｉａｎｇ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｐｉｚｈｏｕ　Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ　Ｐｅｏｐｌｅ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｐｉｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ　２２１３００，Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｃｏｎｄｕｃｔ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｏｌｌｏｉｄａｌ　ｇｏｌｄ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｃａｒｄｉ—　ａｃ　ｔｒｏｐｏｎｉｎ　Ｉ（ｃＴｎ１）ｂｙ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｉｔｓ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｖａｌｕｅ．Ｍｅｔｈ－　ｏｄｓ　Ｓｅｒｕｍ　ｃＴｎＩ　ｌｅｖｅｌ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｃｏｌｌｏｉｄａｌ　ｇｏｌｄ　ａｓｓａｙ　ｉｎ　２０　ｈｅａｌｔｈｙ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ａｎｄ　２０　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｃｕｔｅ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ（ＡＭ１）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏ—　ｒｅｓｃｃｎｃｅ　ａｓｓａｙ．Ｔｈｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｌｌｏｉｄａｌ　ｇｏｌｄ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｃＴｎｌ　ｗｅｒｅ　ｓｙｓｔｅｍａｔ—　ｉｃａｌｌｙ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｃｏｌｌｏｉｄａｌ　ｇｏｌｄ　ａｓｓａｙ（Ｙ）ｈａｄ　ｇｏｏｄ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ａｓｓａｙ（Ｘ）（ｙ　一０．８Ｏ１Ｘ一０．１７４，ｒ一０．９８０）．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｗｏ　ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｐ＞０．０５）．Ｔｈｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　ｗｅｒｅ　８５．０　，９５．０　ａｎｄ　８Ｏ．３　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ　ｒａｔｉｏ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ　ｒａｔｉｏ　ｗｅｒｅ　１７．０　ａｎｄ　１５．８　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ　ｖａｌｕｅ（ＰＰＶ）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ　ｖａｌｕｅ（ＮＰＶ）ｗｅｒｅ　９４．４　ａｎｄ　８６．４　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｃｏｌｌｏｉｄａｌ　ｇｏｌｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｒｅｌｉａｂｌｅ，ａｖａｉｌａｂｌｅ，ｆａｉｒｌｙ　ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　ｅａｓｙ　ｔｏ　ｐｅｒｆｏｒｍ　ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ　ｄｅｇｒｅｅ．ｃＴｎｌ　ｈａｓ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｆｏｒ　ｄｉａｇｎｏｓｉｎｇ　ＡＭＩ，ａｎｄ　ｌａｓｔｓ　ｆｏｒ　ａ　ｌｏｎｇ　ｔｉｍｅ．Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｒｏｕｔｉｎｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ｃＴｎｌ　１ｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　１ａ—　ｂｏｒａｔｏｒｙ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］　ｃｏｌｌｏｉｄａｌ　ｇｏｌｄ　ａｓｓａｙ；　ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ａｓｓａｙ；ｔｒｏｐｏｎｉｎ　Ｉ；　ａｃｕｔｅ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ　随着心肌肌钙蛋白（ｃａｒｄｉａｃ　ｔｒｏｐｏｎｉｎ　Ｉ，ｃＴｎＩ）测定方法的　于乙＝胺四乙酸二钾（ＥＤＴＡ—Ｋｚ）抗凝真空采血管中，收集血　标准化、检测系统相对固定及质量控制措施的不断完善，２０００　浆置于一２ｏ℃冰箱保存，备检。　年，欧洲心脏学会（ＥＳＣ）与美国心脏学会（ＡＣＣ）对急性心肌梗　１．３仪器与试剂　美国博适（Ｂｉｏｓｉｔｅ）公司的Ｔｒｉａｇｅ诊断仪、　死（ＡＭＩ）进行了重新定义，联合发表了新标准，确定ｃＴｎＩ为　美国瑞莱（Ｒｅｌｉａ）公司的多功能免疫检测系统，试剂均为仪器　ＡＭＩ诊断的首选心脏标志物，以ｃＴｎＩ取代心肌肌酸激酶同工　原厂配套试剂。　酶（ＣＫ—ＭＢ）作为评价心肌坏死和诊断心肌梗死“金标准”。定　１．４实验方法Ｔｒｉａｇｅ诊断仪采用免疫荧光法。Ｒｅｌｉａ多功　量的ｃＴｎＩ检测在临床上已经应用广泛，但以往临床应用过程　能免疫检测系统采用胶体金法，应用双向侧流免疫反应原理，　中发现各种方法之间差异很大，目前市场上检测ｃＴｎＩ的方法　通过双抗体夹心法制备而成。实验操作均严格按照试剂盒说　很多　］。本文对美国Ｂｉｏｓｉｔｅ　Ｔｒｉａｇｅ免疫荧光检测系统及美　明书进行。　国Ｒｅｌｉａ胶体金多功能免疫检测系统应用相同的实验方案，利　１．５统计学处理２种方法的阳性率比较采用Ｙ　检验；相关　用相同的临床样本进行分析，对二者进行比较评估。　性用线性相关分析。　１资料与方法　２结　果　１．１一般资料　２．１胶体金法与免疫荧光法比较　用两种方法分别对２Ｏ例　１．１．１健康对照组　２００９年１１月至２０１０年１月健康者２Ｏ　健康对照者和２Ｏ例确诊为ＡＭＩ的患者进行测定，对所测结果　例，男１３例，女７例，平均年龄７１岁（５ｌ～８６岁），均为本院门　进行　检验，差异无统计学意义（ｘ　一０．２５，Ｐ＞０．０５），见　诊各项化验指标正常者。　表１。　１．１．２　ＡＭＩ组本院心内科确诊为ＡＭＩ的住院患者２Ｏ例，　２．２　以免疫荧光法为诊断标准，胶体金法的各项指见表２。　其中男１１例，女９例，平均年龄６９岁（４６～８８岁）。　２．３两种测定方法的相关性分析将２种方法对２Ｏ例ＡＭＩ　１．２标本采集　以上对象均采肘静脉血，所有标本均取２　ｍＬ　患者所测结果进行回归分析，得胶体金法（Ｙ）与免疫荧光法　。１３２６‘　坌堕垦兰皇堕　±　旦整！鲞整　塑！：　！　：　！　：　！　：！：　：！！　（Ｘ）具有良好的相关性，回归方程为Ｙ＝＝０．８０１ｘ一０．１　７４，相关　系数ｒ一０．９８０，表明二者呈高度相关。　短，一般都可在２０　ｒａｉｎ内完成样品ｃＴｎｌ检测ｍ。及时检测系　统（ＰＯＣＴ）是ｃＴｎＩ检测方法发展的另一个方向，它可在急诊　表１　胶体金法与荧光免疫法的一致性分析（”）　Ｂｉ。　ｉｔ　（免疫荧光法）　Ｒｅｌｉａ（￣———室、病房直接开展ｃＴｎＩ检测，使用全血标本。由于减少了中间　步骤，仪器检测时间仅需约１０　ｍｉｎ，使从取血到出报告的时间　大为缩短　～一…　）———　——————　——一合计　阳性　阴性　。　阳性　阴性　合计　３　２０　１９　２０　１８　２２　４０　本文初步评估了两种ｃＴｎＩ　ＰＯＣＴ系统：一种是美国博适　公司的Ｔｒｉａｇｅ诊断仪采用了双抗体夹心免疫荧光技术，美国　食品与药物管理局（ＦＤＡ）认证灵敏度达到９８Ｇ，特异性达到　，９６　，准确度在９５　以上，该仪器具有快速、准确、操作简单等　特点，已经被全球大量的临床和实验中心所采用，在国内外均　得到＿『认可。另一种是美国Ｒｅｌｉａ生物公司的多功能免疫检　表２胶体金法的各项指标（　）　百—————————　■１厂　百——————————　测系统，该系统采用具有独立知识产权的胶体金双向免疫侧流　同检验项目或者不同血液标本（血浆、血清、全血）的检测，大大　缩短了检测时１９，提高了检测效率。　敏感度　ｓＥ　可用度总一致性　。　・。１Ｉ阳性似然比‘Ｐ　Ｒ　８０．。ｌＩ特异度（ＳＰ）　９Ｏ．０　Ｉｌ调整一致性　９５．。　９０．０　・。Ｏ　此外，与Ｔｒｉａｇｅ诊断仪相比，该检测系统可以同时进行多种不　本研究结果表明，以免疫荧光技术为诊断标准，胶体金法　检测ＡＭＩ的敏感性和特异性分别为８５　和９５　，临床可用度　　Ｙｏｕｄｅｎ指数诊断效率　阳性预测值（ＰＰｖ）　———————————８０．ｏ　ｌｌ阴性预测值（ＮＰＶ）９０．ｏ　ＩＩ阴性似然￣ｇ（Ｎ１　Ｒ）　９４．４　——８６．４　１５．８　Ｌ————————————一Ｉｌ　为８。・３　，两种方法的一致性为９ｏ　，与Ｔｒｉａｇｅ诊断仪所测的　结果具有很好的相关性，用　检验证实两种方法的检验结果　差异无统计学意义（Ｐ＞Ｏ．０５）。表明胶体金法测定血清ｃＴｎＩ　的结果准确可靠；ｃＴｎＩ是敏感，特异的心肌标志蛋白，对心肌　３讨　论　肌钙蛋白（Ｔｒｏｐｏｎｉｎ，　Ｉ＇ｎ）是心肌和骨骼肌收缩的重要调　节蛋白，由３个亚基组成：肌钙蛋ｃ、肌钙蛋白Ｔ和肌钙蛋白Ｉ。　Ｔ　Ｉ是肌动蛋白抑制亚基。它也有３种亚型：快骨髂肌亚型、　慢骨骼肌亚型和心肌亚型，这种ＴｎＩ亚型分别源于３种不同的　基因。ｃＴｎＩ与快、慢骨髂肌型ｃＴｎＩ的氨基酸序列分别存在　５２　和５４　的差异，且　Ｔ　Ｉ氨基末端比骨髂肌Ｔ　Ｉ（　Ｔ　Ｉ）多　损伤，特别是对ＡＭＩ的诊断、治疗、检测和预后评估均具有重　要临床价值，适合在临床工作中推广使用。　参考文献　［１］杨振华，潘柏申，许俊堂．心肌损伤标志物的应用准则　３１个氨基酸，这种独特的氨基酸顺序列使之具有较高的心肌　特异性，特别是ＡＭＩ具有高度的组织特异性。。Ｔ　Ｉ在血清中　主要以复合物形式存在，其中９０￣／／ｏ是ｃＴｎＩ—ｃＴｎＣ复合物，约　［Ｊ］．中华检验医学杂志，２００２，（３）：１８５—１８９・　［２］王峰，向定成．肌钙蛋白Ｉ检测方法的研究进展［Ｊ］．实用　医学杂志，２００８，２４（８）：１２７５　１２７７．　５　为ｃＴ　Ｉ　Ｔ　Ｔ复合物　。　ｃＴｎＩ在ＡＭＩ发病后会迅速释放人血，胸痛后４～８　ｈ升　高，１４～３６　ｈ达峰值，持续时１９为３～７　ｄ，血中浓度可高达　１００～３００　ｇ／　。因其在心肌损伤中特异性好和灵敏度高，　１９９９年ＥＳＣ和ＡＣＣ联合发表文件，建议将ｃＴｎＩ的异常变化　作为诊断ＡＭＩ的必要条件　。尽管ＡＣＣ和ＥＳＣ推荐使用ｃＴｎ１作为诊断心肌损伤的确　定性标志物，但由于Ｔｎ本身在体外很容易被蛋白酶等降解，　检测体系尚未完善，导致各种检测方法之间存在着不一致性，　甚至存在很大的差异，ｃＴｎＩ检测的标准化问题亟待解决。　ｒ３］郭玮，潘柏申．心肌肌钙蛋白——心肌损伤的确定生化标　志［Ｊ］．上海医学检验杂志，２０００，１５（１）：８　１０．　［４］漆良琴．心肌肌钙蛋白Ｉ的医学用途及检测进展［Ｊ］．中国　当代医药，２０１０，（１５）：７－８・　Ｅ５］Ａｄａｍｓ　ＪＥ　３ｒｄ，Ｓｉｃａｒｄ　ＧＡ，Ａｌｉｅｎ　ＢＴ，ｅｔ　ａｌ・Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｐｅｒｉｏｐｅｒａｔｉｖｅ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃａｒｄｉａｌ　ｔｒｏｐｏｈｉｎ　ＩＥＪ］．Ｎ　Ｅｎｇｌ　Ｊ　Ｍｅｄ，１９９４，３３０（１０）：６７０一　６７４．　［６］Ａｐｐ　ｌｅ　ＦＳ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ　ｉｓｓｕｅｓ　ｃｏｎｆｒｏｎｔｉｎｇ　ｃａｒｄｉａｃ　ｔｒｏｐｏｎｉｎ　Ｉ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｅｍ，１９９９，４０　ｃＴｎＩ最早以放射免疫试验（ＲＩＡ）进行检测，使用多克隆抗　体，交叉反应较多，分析灵敏度仅为１０　ｎｇ／ｍＬ，耗时达２４～３６　ｈ。后来采用免疫放射试验（ＩＲＭＡ）和酶联免疫吸附试验　度可达０．１　Ｉ１ｇ／　ｉ　，但检测变异系数（ｃｖ）仍较大，耗时长。目　前常用全自动化学发光免疫分析法（ＡｃＬＩＡ）。ＡＣＬＩＡ使用单　克隆抗体，以全自动检测设备取代手工操作，使检测的重复性　和可靠性大幅提高，分析灵敏度呵达０．０１　ｎｇ／ｍＬ，且检测耗时　（１）：１８　２０・　［７］李华宁，刘傲雪，彭钰茹．两种心肌肌钙蛋白测定结果临　床应用价值探讨［Ｊ］．吉林医学，２０１０，（１９）：３０３１　３０３２．　方法建立与初步应用［Ｊ］・中华心血管病杂志，２０００，２８　（６）：４７２　４７３・　（收稿Ｆｔ期：２０１１　１２－２７）　（Ｅｌ　ＩＳＡ），使用单克隆抗体，提高了灵敏度和特异性，分析灵敏、　［８］李志梁，吴宏超，丁明学，等．床边检测心肌肌钙蛋白Ｔ、Ｉ