实验操作步骤

实验名称：菌种复苏（分3步完成，用时3天） 第一天：

1、紫外线照射超净台30分钟，进行准备工作（MH肉汤，EP管 ，5ml及200µl枪头）

2、擦拭超净台，点酒精灯，擦手，擦枪，放EP管 3、向EP管中加入5ml肉汤（注意做空白对照） 4、向EP管中加入30µl菌液 5、做好标记，培养箱过夜培养 实验结果标准

实验组肉汤混浊，对照组肉汤清亮，证明无污染 第二天： 实验方法

1、准备：麦康凯培养基（需提前灭好麦康凯琼脂，倒入培养皿，冷却即为麦康凯培养基），接种环，菌液（至少生长18h）等。紫外线照射超净台30分钟

2、擦拭超净台，点酒精灯，擦手，接种环用酒精灯火焰高温消毒

3、振荡菌液使其混合均匀，将接种环伸入菌液取一环菌液，在培养基中划线

4、划完做标记，培养箱中培养过夜

划线方法：划三区，每划一次换一个接种环。第一区占1/3最密，第二区占1/2稍稀疏，第三区最稀疏，只与二区接触，不与一区接触。 划线示意图

最佳挑菌区 单菌落生长区

实验结果标准：麦康凯平板上大肠杆菌光滑湿润，稍有隆起，边缘整齐，呈红色。部分呈线状连在一起，有单菌落。 第三天 实验名称：挑菌 实验方法

1、准备：EP管（10ml），枪头（5ml,10µl）,移液枪，酒精灯等

2、紫外线照射超净台30分钟，擦拭超净台，点酒精灯，擦手，擦枪，放EP管 3、取5ml肉汤于EP管中（拆开肉汤，烧一圈瓶口再取肉汤；包括实验组和空白对照）

4、使用10µl枪头挑取单菌落后打入EP管中（对照组中只打入干净10µl枪头） 5、盖盖标记，培养箱过夜培养。 实验结果标准

实验组肉汤混浊，对照组肉汤清亮，证明无污染

实验名称：菌液稀释 实验方法

1、 准备三个EP管（1.5ml），枪头（200µl，1ml），移液枪，酒精灯，MH肉汤等 2、 向每个EP管中加入900µl肉汤

3、 从原始菌液（通过肉眼观察浑浊度判断假定浓度为108）中取100µl加入EP管，涡旋仪涡旋混匀，再从该EP管中取100µl加入EP管，涡旋混匀。依次操作。此时菌液被稀释到105。

4、 留下最后一个EP管，涡旋仪涡旋混匀，从该EP管中取100µl加入含药平板。

实验名称：制作含药平板 实验方法

1、 准备锥形瓶、封口膜、记号笔、MH琼脂粉、培养皿 2、 依照所需琼脂量，按比例配好，灭菌 3、 配置所需浓度ENR溶液（提前计算）

4、 取出灭好的琼脂，当灭好的琼脂不烫手时，加入配的药（用枪加），摇晃混匀（尽量不

制造泡沫）

5、 倒平板，冷却，做标记