氨基化羟基磷灰石纳米颗粒的体内组织分布研究

氨基化羟基磷灰石纳米颗粒的体内组织分布研究　谢广平，陆玮新（湖州师范学院医学院，浙江湖州３１３ｏｏｏ）　摘要：目的检测羟基磷灰石纳米颗粒（ＨＡＮＰｓ）在体内的分布情况，为其体内生物安全性评价提供参考。方法在氨基化表　面改性的基础上，对羟基磷灰石纳米颗粒进行　Ｉ标记，将　Ｉ标记的羟基磷灰石纳米颗粒注射到动物体内，通过放射免疫＾ｙ　计数仪检测给药后３０　ｄ内体内主要组织的放射性计数，以每克组织含百分比注射剂量（％ＩＤ・ｇ　）评价羟基磷灰石纳米颗粒　在各组织中分布情况。结果肺、肝脏和脾脏是羟基磷灰石纳米颗粒体内主要分布组织。在给药后１　ｄ，组织蓄积量均超过　本实验结果表明，肺、肝脏和脾脏是羟基磷灰石纳米颗粒体内生物安全性评价应重点关　．　文章编号：１００１—２４９４（２０１５）０８—０６９５—０５　５％ＩＤ・ｇ～；在给药后３０　ｄ内，羟基磷灰石纳米颗粒在肺组织中的蓄积量发生明显下降，而在肝脏和脾脏中则下降缓慢，蓄积　量仍维持在２％ＩＤ・ｇ　以上。结论注的效应组织。　关键词：羟基磷灰石纳米颗粒；　Ｉ标记；组织分布；生物安全性　ｄｏｉ：１０．１１６６９／ｃ￣．２０１５．０８．００９　中图分类号：Ｒ９４４　文献标志码：Ａ　／ｎ　Ｖｉｖｏ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ　Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ　Ｍｏｄｉｉｅｄ　ｗｉｔｈ　Ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌｆｔｒｉｅｔｈｏｘｙｓｉｌａｎｅ　ＸＩＥ　Ｇｕａｎｇ—ｐｉｎｇ，ＬＵ　Ｗｅｉ－ｘｉｎ（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｕｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｕｚｈｏｕ　３１３０００，Ｃｈｉｎａ）　ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｔｉｓｓｕｅ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ（ＨＡＮＰｓ）ａｎｄ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｉｍｐｏｒ－　ｒａｎｔ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｂｉｏｓａｆｅｔｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＡＮＰｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｔｈｅ　ＨＡＮＰｓ　ｗｅｒｅ　ｍｏｄｉｉｆｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｈｒｉｅｔｈｏｘｙｓｉｌａｎｅ　（ＡＰＴＳ）ｔｏ　ｉｎｔｒｏｄｕｃｅ　ａｍｉｎｏ　ｇｒｏｕｐｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｕｒｆａｃｅ．Ｔｈｅ　ｍｏｄｉｉｆｅｄ　ＨＡＮＰｓ　ｗｅｒｅ　ｌａｂｅｌｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｉ　ａｎｄ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ｍｉｃｅ．Ａ　７－ｃｏｕｎｔｅｒ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｙ　ａｓｓｅｓｓ　ｔｈｅ　ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｔｈｅ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＡＮＰｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｗａｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｉｎ—　ｊｅｃｔｅｄ　ｄｏｓｅ　ｐｅｒ　ｇｒａｍ　ｔｉｓｓｕｅ（％ＩＤ・ｇ　）．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｔｈｅ　ＨＡＮＰｓ　ｍａｉｎｌｙ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｕｎｇ，ｌｉｖｅｒ，ａｎｄ　ｓｐｌｅｅｎ．Ｏｎｅ　ｄａｙ　ｐｏｓｔ－　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅｓｅ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ＷａＳ　ｏｖｅｒ　５％ＩＤ・ｇ～．Ｄｕｒｉｎｇ　３０　ｄ　ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＡＮＰｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｕｎｇ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｑｕｉｃｋｌｙ．ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｉｖｅｒ　ａｎｄ　ｓｐｌｅｅｎ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｍｏｄｅｒａｔｅｌｙ　ａｎｄ　ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ　ａｔ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　２％ＩＤ・ｇ～．　ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｉｎｄｉｃａｔｅｓ　ｔｈａｔ　ｌｕｎｇ，ｌｉｖｅｒ　ａｎｄ　ｓｐｌｅｅｎ　ａｒｅ　ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｂｉｏｓａｆｅｔｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＡＮＰｓ．　ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ；　Ｉ　ｌｅｂｅｌｌｉｎｇ；ｔｉｓｓｕｅ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ；ｂｉｏｓａｆｅｔｙ　纳米颗粒（ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，ＮＰｓ）是一种尺寸介于　０—１００　ｎｍ之间的常用颗粒样物质，这种尺寸大小　与一些蛋白分子、甚至ＤＮＡ或ＲＮＡ处于相同等级，　具有极高的表面位能。这些特殊的尺度效应和表面　ＨＡＮＰｓ体内生物应用和安全性评价提供参考依据。　１材料和方法　１．１　主要试剂和耗材　效应使得ＮＰｓ能顺利进入细胞，并可能对ＤＮＡ、　ＲＮＡ、蛋白质等大分子物质的结构和功能产生直接　影响　１－２］。因此，评价ＮＰｓ对生物体的潜在危害性　已成为纳米材料生物安全性评价的重点问题。羟基　磷灰石纳米颗粒（ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，　ＨＡＮＰｓ（华东理工大学生物材料研究所，粒径　２０　ｎｍ左右）。无水乙醇、甲苯、氢氧化钠、乙二酸、　偏重亚硫酸钠、甘氨酸、Ⅳ，Ⅳ二甲基甲酰胺（ＤＭＦ）　等试剂均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。　氨基丙基三乙氧基硅烷（ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌｔｒｉｅｔｈｏｘｙｓｉｌａｎｅ，　ＨＡＮＰｓ）具有良好的生物相容性，常作为支架材料而　ＡＰＴＳ），对羟基苯丙酸琥珀酰亚胺脂［３一（４－ｈｙｄｒｏｘｙ—　ｐｈｅｎｙ１）ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　Ｎ－ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ　ｅｓｔｅｒ，　应用于组织工程等领域　引，最近也有研究报道，由　于ＨＡＮＰｓ能够吸附各种药物分子，在药物载体方面　具有广阔的应用潜能　。本实验将以ＨＡＮＰｓ作为　研究对象，通过建立ＨＡＮＰｓ的　Ｉ标记技术和放射　性定量检测，研究ＨＡＮＰｓ在体内的分布特性，为　ＢＨ试剂］和氯胺Ｔ（Ｃｈ．Ｔ）氧化剂（Ｓｉｇｍａ化学公　司）。碘化钠（Ｎａ　Ｉ）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ＠公司），快速薄　层层析硅胶纸（ＩＴＬＣ／ＳＧ）（德国Ｇｅｌｍａｎ公司），ＫＭ　系小鼠（上海西普尔．必凯实验动物公司）。放射免　基金项目：浙江省自然科学基金资助项目（Ｙ４１１０６６５）；浙江省公益技术应用研究项目（２０１２Ｃ３３１１５）　作者简介：谢广平，男，副教授　研究方向：纳米材料的生物安全性研究Ｔｅｌ：（０５７２）２３２１５８２　Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｇｐ９６＠ｓｉｎａ．ｃｏｎ　中国药学杂志２０１５年４月第５Ｏ卷第８期　Ｃｈｉｎ　Ｐ＾ｏｍ，．２０１５　ａｐｒｉｌ，Ｖｏ１．５０　Ｎｏ．８　疫　计数仪（上海原子核研究所Ｅｔ环仪器厂），放射　性活度仪（北京２６１厂）。　１．２　ＨＡＮＰｓ的表征　将ＨＡＮＰｓ分散于无水乙醇中，４０　ｋＨｚ频率下超　声震荡３０　ｒａｉｎ，得到ＨＡＮＰｓ乙醇溶液，采用ＴＥＭ、　ＰＣＳ和Ｚｅｔａ　ｓｉｚｅｒ对纳米颗粒进行形态观察、粒径分　析和表面Ｚｅｔａ电位检测。　１．３　ＨＡＮＰｓ的氨基化表面改性　参照现有文献［８］的方法，对ＨＡＮＰｓ进行氨基　化表面改性。将ＨＡＮＰｓ置于无水乙醇溶液中，４０　ｋＨｚ频率下超声震荡３０　ｒａｉｎ，用无水乙醇反复清洗　后备用。按照１：５（偶联剂一乙醇＝１：５，Ｖ／Ｖ）的比　例配置硅烷偶联剂稀释溶液。在９０　ｍＬ无水乙醇中　加人１０　ｍＬ上述硅烷偶联剂稀释溶液，调整反应体　系ｐＨ值为８．５，室温下继续搅拌水解１　ｈ。将２００　ｍｇ　ＨＡＮＰｓ加入到水解偶联剂溶液中，６Ｏ℃的水浴　中搅拌反应６　ｈ，过滤，用乙醇洗涤，真空干燥得到改　性的氨基化纳米颗粒。采用ＴＥＭ、ＰＣＳ和Ｚｅｔａ　ｓｉｚｅｒ　对氨基化ＨＡＮＰｓ进行表征。　１．４　ＨＡＮＰｓ的　Ｉ标记　取５　ｇ　ＢＨ试剂苯溶液于小反应管内，氮气吹　干后，依次加入２　ＤＭＦ和１．５　Ｎａ　Ｉ溶液（６０　ＭＢｑ），然后加入５　Ｌ（２０　ｇ）ｃｈ—Ｔ溶液，室温下　反应１　ｒａｉｎ后马上加入５　（６０　ｇ）的偏重亚硫酸　钠和５０　ＩＬＬ（２００　ｔｘｇ）的碘化钾溶液（０．０５　ｍｏ］・Ｌ　ｐＨ　７．４的磷酸缓冲液新鲜配制），混匀终止反应。　在上述反应液中加入５　Ｉ．ＬＬ　ＤＭＦ，２５０　重蒸馏苯，　再小心吸出苯溶液于小反应管中，并氮气吹干，即　得挖　Ｉ—ＢＨ标记物。取装有　Ｉ－ＢＨ试剂的小反应管　置于冰浴中，加入１　ｍｇ・ｍＬ　的氨基化ＨＡＮＰｓ乙　醇溶液，冰浴中搅拌反应３０　ｒａｉｎ，再加入１５０　ＩｘＬ　０．２　ｔｏｏｌ・Ｌ　的甘氨酸溶液，室温下继续搅拌反应　１５　ｒａｉｎ，以除去过量的　Ｉ—ＢＨ试剂。上述反应液用离　心法进行纯化，ｉｊ￣，ｂ从上述小反应管中取出反应液到　５　ｍＬ的离心管中，加入２　ｍＬ体积分数５０％乙醇水溶　液，超声振荡２０　ｒａｉｎ后，４　ｏＣ，３　０００　ｒ・ｒａｉｎ　离心１０　ａｒｉｎ，吸去上清液，沉淀物即为ＨＡＮＰｓ的　Ｉ标记产物　（　Ｉ．ＨＡＮＰｓ）。用４　ｍＬ体积分数５０％乙醇水溶液分　二次离心洗涤沉淀物，再用２　ｍＬ乙醇洗涤沉淀物后，　加入１　ｍＬ乙醇，超声振荡２０　ｒａｉｎ，一２０℃放存备用。　１．５　ＨＡＮＰｓ标记产物的鉴定和体外稳定性检测　采用ＩＴＬＣ／ＳＣ法进行鉴定，以ＩＴＬＣ／ＳＧ为载　体，用２．５％ＢＳＡ（Ｗ／Ｗ）的０．Ｏ１　ｔｏｏｌ・Ｌ～ｐＨ　７．４　的ＰＢＳ缓冲液展开，取２　ＩｘＬ　ＨＡＮＰｓ标记产物溶液，　Ｃｈｉｎ只ｈ。ｍ　Ｊ．２０１５　ａｐｒ／１．ＶｏＬ　５０Ｎｏ．８　点样后室温展开２０　ｒａｉｎ，然后将每条层析纸剪成１　ｅｍ等距离的小纸条，放人放射性测量试管中进行每　分钟放射性计数（ｅｐｍ）测定。以　Ｉ—ＢＨ标记物、　Ｉ　为对照，原点位置为　Ｉ—ＨＡＮＰｓ。根据原点位置放射　性计数占整条迁移带的比例来判断　Ｉ－ＨＡＮＰｓ的纯　度。将　Ｉ．ＨＡＮＰｓ重悬于０．Ｏ１　ｔｏｏｌ・Ｌ～ｐＨ值为　７．４的ＰＢＳ溶液中，室温保存，每天提取２　ＩｘＬ，采用　ＩＴＬＣ／ＳＧ法对溶液进行展开，通过＾ｙ计数仪检测原　点位置ｃｐｍ值，根据原点位置上的ｃｐｍ与整个纸层　析条带ｃｐｍ的比值来计算未解离的标记产物的百　分率，从而评价　Ｉ．ＨＡＮＰｓ的体外稳定性。　１．６动物体内分布实验　雄性ＫＭ系小鼠３０只，体质量（２０±１）ｇ。通　过尾静脉向动物注射　Ｉ．ＨＡＮＰｓ生理盐水溶液，质　量浓度为１　ｍｇ・ｍＬ一，剂量为１０　ｍｇ・ｋｇ～，每只动　物注射量为２００　Ｌ。静脉注射给药后，分别于１，３，　５，７和３０　ｄ随机从各组动物中抽取６只并通过断颈　方式处死，收集动物血液，提取心、肺、肝脏、脾脏、肾　脏、胃、小肠、骨（左侧股骨）、大脑等组织，将血液和　组织放入放射免疫测量塑料管中进行称重，然后通　过　计数议进行ｅｐｍ检测。根据组织ｅｐｍ数值、组　织的重量和注射给药（ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｄｏｓｅ，ＩＤ）总放射性计　数等参数，按照下列公式计算单位组织含百分比注　射剂量（％ＩＤ・ｇ　），％ＩＤ・ｇ～＝［（组织ｃｐｒｎ／组　织质量）／给药总ｃｐｍ］Ｘ　１００％。　１．７数据处理　实验各检测点放射性物质计数按照　Ｉ衰变方　程进行校正，Ｃ＝Ｃ　・ｅ　・　粥巧　，其中Ｃ为实际放　射性计数，Ｃ。为检测到的放射性计数，　为　Ｉ的半　衰期（５９．６　ｄ），ｔ为检测点天数，ｅ为常数　２．７１８　２８１　８２８。应用ＳＰＳＳ１４．０软件对实验数据进　行统计分析，采用ｔ检验对组间数据进行比较，Ｐ＜　０．０５认为差别具有统计学意义。　２结果　２．１纳米颗粒表征结果　分别对ＨＡＮＰｓ氨基化前后的理化性能进行　ＨＡＮＰｓ的ＴＥＭ形态观察和ＰＣＳ粒径检测，结果见　图１，从图１中可以看出，氨基化未对ＨＡＮＰｓ的形态　结构和粒径产生明显的影响，所检测的ＨＡＮＰｓ为粒　径在２０　ｎｍ左右的颗粒样结构。采用Ｚｅｔａ，ｓｉｚｅｒ对　ＨＡＮＰｓ进行表面Ｚｅｔａ电位检测，结果表明氨基化前　后的ＨＡＮＰｓ表面都呈现负电位，改性Ｚｅｔａ电位为　一１３．８　ｍＶ，改性后为一１０．４　ｍＶ。　中国药学杂志２０１５年４月第５０卷第８期　口Ｈ　、口０　【Ｉ置鲁８《　２　０　８　６　４　２　０　０　　。５　１０　１５　ｒ／ｄ　２Ｏ　２５　３０　图３　ＨＡＮＰｓ体内主要组织蓄积量及其时间变化情况．ｎ＝６，　±ｓ　Ａ一注射１　ｄ后体内各组织蓄积量；Ｂ一注射３０　ｄ内组织蓄积量的变化　Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＡＮＰｓ　ｉｎ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｄｕｒｉｎｇ　３０　ｄ．ｎ＝６．元±ｓ　Ａ—ｔｈｅ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＮＡＮＰｓ　ｏｎ　１　ｄ　ｐｏｓｔ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ：Ｂ—ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｄｕｒｉｎｇ　３０　ｄ　ｐｏｓｔ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　本实验的结果表明，在静脉注射给药后，ＨＡＮＰｓ　在肝脏、脾脏和肺等组织中表现出明显的蓄积（图　较缓慢，３０　ｄ时组织蓄积量仍处于比较高的水平。　这些结果说明，ＨＡＮＰｓ在肝脏和脾脏中存在明显的　滞留效应，这种滞留效应的发生可能和组织细胞作　３Ａ），说明这３种组织是ＨＡＮＰｓ体内主要分布组　织，这与现有的研究结果及笔者前期相关研究结果　相似　，“　。ＨＡＮＰｓ在肝脏和脾脏中蓄积可能与这　用有关。纳米颗粒的粒径大小在其细胞吞噬过程中　具有非常重要的作用　ＩＳ－１９］。现有的体外研究发现，　小尺寸的纳米颗粒更容易被巨噬细胞所吞噬　Ｊ，原　因可能是由于小尺寸纳米颗粒的高表面活性和在竞　些组织的血流灌注速率和毛细血管内皮屏障的特点　有关。一方面，肝脏和脾脏的组织血流灌注率比较　高，ＨＡＮＰｓ经静脉注射后可以很快灌注于这些组织　中，并且由于这些组织含有丰富的血液，所以随着血　液灌注的ＨＡＮＰｓ也较多。另一方面，这些网状内皮　系统组织中的毛细血管内皮细胞间连接较为疏松，　争识别细胞膜表面受体方面的优势。小尺寸纳米颗　粒的高表面活性可以提高其蛋白结合率从而促进其　被细胞表面受体识别、结合和吞噬。基于热动力学　理论和细胞膜表面受体扩散动力的竞争机制，小尺　寸的纳米颗粒更有机会与细胞膜表面受体结合，从　而更容易被内吞进入细胞　。表面电位也是影　存在一些大小约为１００　ｎｍ的“缺口”样结构，这就　使得灌注于这些组织的ＨＡＮＰｓ可以进一步向组织　间隙中扩散ｌ１　。由于这种扩散作用，组织中的　ＨＡＮＰｓ并不会随着血液浓度的下降而减少，反而会　逐渐增加，出现蓄积效应。另外，肝脏和脾脏含有丰　富的巨噬细胞，分布于组织中的纳米颗粒，被血清蛋　白包裹后，容易被巨噬细胞表面受体识别并启动细　胞内吞过程而被吞噬＿ｌ　。这些因素共同作用，促　使ＨＡＮＰｓ在肝脏和脾脏中表现出比较高的蓄积量。　本实验还发现，ＨＡＮＰｓ在大脑中分布的量都处于非　响纳米颗粒细胞吞噬的重要因素，对于负电位的纳　米颗粒，则更容易被巨噬细胞所吸附并吞噬　。本　实验中的ＨＡＮＰｓ粒径在２０　ｎｍ左右，表面电位为　一１０．４　ｍＶ，这种小粒径和负电位有利于被肝脏和　脾脏中的巨噬细胞所吞噬而滞留于这些组织中。　ＨＡＮＰｓ在体内主要组织间的分布情况可以提　示ＨＡＮＰｓ体内主要效应组织，这些组织则是　ＨＡＮＰｓ体内生物安全性评价应重点关注的组织。　常低的水平（图３Ｂ），说明氨基化的ＨＡＮＰｓ不能通　过血脑屏障进入脑组织。　本实验结果发现肝脏、脾脏和肺组织是ＨＡＮＰｓ体内　主要蓄积组织，而大脑等组织中的ＨＡＮＰｓ的蓄积量　通过对体内组织进行３０　ｄ定量检测，发现　ＨＡＮＰｓ各组织中的蓄积量在各检测期点的变化具　却非常低。提示，肝脏、脾脏和肺组织是ＨＡＮＰｓ体　内生物安全性评价应重点关注的对象，而脑组织体　内生物安全性则相对较为可靠。在ＨＡＮＰｓ作为药　物载体应用时，应考虑到ＨＡＮＰｓ在主要组织间分布　有时间效应，即随着时间延长而表现为逐渐下降的　趋势。在肝脏和脾脏中，虽然在各检测期间内　ＨＡＮＰｓ的蓄积量发生逐渐下降，但下降的幅度相对　Ｃｈｉｎ　Ｐ　０ｍ　Ｊ．２０１５　ａｐｒｉｌ．Ｖｏ１．５０　Ｎｏ．８　情况的差异性对承载药物发挥药效的影响作用。本　中国药学杂志２０１５年４月第５０卷第８期　实验获得的ＨＡＮＰｓ在体内主要组织中蓄积的准确　定量数据，为评价ＨＡＮＰｓ在体内可能引起组织损伤　的风险提供了参考依据。　ＲＥＦＥＲＥＮＣＥＳ　ｔｉｓｓｕｅ　ｄｉｓｔｉｒｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｉｐｅｒｉｎｅ　ｌｉｐｉｄ　ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｚｉｅ，　［１２］　ＹＡＮＧ　Ｚ，ＬＥ０Ｎ　Ｊ，ＭＡＲＴ１Ｎ　Ｍ。ｅｔ　ａ１．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅａｒ—ｉｎｆｒａｒｅｄ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ　ｎａｎｏｐａｒｔｉ—　２ｏｏ８，６３（５）：３５２．３５５．　ｃｌｅｓ［Ｊ］．Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２Ｏ（１６）：１６５１０１．　［１３］　ＸＩＥ　Ｇ　Ｐ，ＳＵＮ　Ｊ，ＺＨＯＮＧ　Ｇ。ｅｔ　ａ１．Ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉ０ｎ　ａｎｄ　ｔｏｘｉｃｉｔｖ　［１］ＸＩＡ　Ｔ，ＬＩ　Ｎ，ＮＥＬ　Ａ　Ｅ．Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｈｅａｌｔｈ　ｉｍｐａｃｔ　ｏｆ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ　［Ｊ］．Ａｎｎｕ　Ｒｅｖ　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ，２００９，３０：１３７．１５０．　［２］ＤＲＥＨＥＲ　Ｋ　Ｌ．ＨｅａｌｔＩｌ　ａｎｄ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｉｍｐａｃｔ　ｏｆ　ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏ１．　ｏｆ　ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｌｙ　ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ　ｓｉｌｉｃａ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ『Ｊ］．　Ａｒｃｈ　Ｔｏｘｉｃｏｌ，２０１０，８４（３）：１８３．１９０．　［１４］　ＳＵＮ　Ｊ，ＸＩＥ　Ｇ．Ｔｉｓｓｕｅ　ｄｉｓｔｉｂｕｔｒｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｌｙ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ　ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｌａｂｅｌｅｄ　ｗｉｔｈ　１２５　Ｉ［Ｊ］．Ｊ　Ｎａｎｏｓｃｉ　Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１１，ｌ１（１２）：１０９９６．１１０００．　ｏｇｙ：Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｄ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ［Ｊ］．　Ｔｏｘｉｃｏｌ　Ｓｃｉ，２００４，７７（１）：３－５．　［１５］　ＬＩ　Ｓ　Ｄ．ＨＵＡＮＧ　Ｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉ０ｎ　ｏｆ　ｎａｎ—　［３］ＬＩＡＯ　Ｓ　Ｓ，ＣＵＩ　Ｆ　Ｚ．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｎｅｒａ１．　ｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ［＇ｈａｒｍ，２００８，５（４）：４９６－５０４．　ｉｚｅｄ　ｃｏｌｌａｇｅｎ—ｂａｓｅｄ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｓｃａｆｆｏｌｄ：Ｎａｎｏｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ／ｃｏｌｌａ．　ｇｅｎ／ｐｏｌｙ（Ｌ－ｌａｃｔｉｄｅ）［Ｊ］．　ｓ　Ｅｎｇ，２００４，１０（１－２）：７３．８０．　［４］　ＷＡＮＧ　ｘ，ｕ　Ｙ，ＷＥＩ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆｂｉｏｍｉｍｅｔｉｃ　ｎａｎｏ．　ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ／ｐｏｌｙ（ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｅｎｅ　ａｄｉｐａｍｉｄｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅｓ［Ｊ］．　／ｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２００２，２３（２４）：４７８７－４７９１．　［５］　ＹＯｓＨＩＫＡｗＡ　Ｈ，ＭＹＯＵＩ　Ａ．Ｂｏｎｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｐｏｒ－　ＯＵＳ　ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ　ｃｅｒａｍｉｃｓ［Ｊ］．ＪＡｒｔｉｆＯｒｇａｎｓ，２００５，８（３）：　１３１—１３６．　［６］　ＳＭＩＴＨ　Ｇ　Ｐ，ＧＩＮＧＲＩＣＨ　Ｔ　Ｒ．Ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｏｆ　ｐｈａｇｅ－ｄｉｓｐｌａｙ　ｖｉｉｒｏｎｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２００５，３９（６）：８７９—　８８４．　［７］　ＭＩＺＵＳＨＩＭＡ　Ｙ，ＩＫＯＭＡ　Ｔ，ＴＡＮＡＫＡ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ　ｐｏｒ．　ＯＵ８　ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ　ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ａｓ　ａ　ｎｅｗ　ｃａｒｒｉｅｒ　ｆｏｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ　ｄｒｕｇｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｒｅｌｅａｓｅ，２００６，ｌ１Ｏ（２）：２６０—　２６５．　［８］　ＧＵＡＮＧＰＩＮＧ　Ｘ，ＣＨＥＮ　Ｗ，ＪＩＡＯ　Ｓ．ｅｔ　ａ１．Ｔｉｓｓｕｅ　ｄｉｓｔｉｒｂｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｌｙ　ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ　ｔｉｔａｎｉｕｍ　ｄｉｏｘｉｄｅ　ｎａｉｌ—　ｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌ　Ｌｅｔｔ，２０１１，２０５（１）：５５－６１．　［９］　ＨＥ　Ｘ，ＮＩＥ　Ｈ，ｗＡＮＧ　Ｋ．ｅｔ　ａ１．Ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｂｉｏｄｉｓｔｉｆｂｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｕｒｉｎａｒｙ　ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｕｒｆａｃｅ—ｍｏｄｉｉｆｅｄ　ｓｉｌｉｃａ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ『Ｊ］．　Ａｎａｌ　Ｃｈｅｍ，２００８，８０（２４）：９５９７－９６０３．　［１０］　ＦＡＢＩＡＮ　Ｅ，ＬＡＮＤＳＩＥＤＥＬ　Ｒ，ＭＡ—ＨＯＣＫ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｔｉｓｓｕｅ　ｄｉｓ—　ｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｌｙ　ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ　ｔｉｔａｎｉｕｍ　ｄｉｏｘ—　ｉｄｅ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ａｒｃｈ　Ｔｏｘｉｃｏｌ，２００８，８２（３）：１５１—　１５７．　［１　１］　ＶＥＥＲＡＲＥＤＤＹ　Ｐ　Ｒ，ＶＯＢＡＬＡＢＯＩＮＡ　Ｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　中国药学杂志２０１５年４月第５０卷第８期　［１６］　０ＰＡＮＡＳＯＰＩＴ　Ｐ．ＮＩＳＨＩＫＡＷＡ　Ｍ．ＨＡＳＨＩＤＡ　Ｍ．Ｆａｃｔｏｒｓ　ａｆ－　ｆｅｃｔｉｎｇ　ｄｒｕｇ　ａｎｄ　ｇｅｎｅ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｂｌｏｏｄ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｃｒｉｔ　Ｒｅｖ　Ｔｈｅｒ　Ｄｒｕｇ　Ｃａｒｒｉｅｒ跏　，２ｏ０２，１９　（３）：１９１－２３３．　［１７］　ＧＡＯ　Ｈ，ＳＨＩ　Ｗ，ＦＲＥＵＮＤ　Ｌ　Ｂ．Ｍｅｃｈａｎｉｃｓ　ｏｆ　ｅｒｃｅｐｔｏｒ．ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ＆　，２ｏ０５，１０２（２７）：　９４６９－９４７４．　［１８］　ＣＨＩＴＨＲＡＮＩ　Ｂ　Ｄ，ＧＨＡＺＡＮＩ　Ａ　Ａ．ＣＨＡＮ　Ｗ　Ｃ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓｉｚｅ　ａｎｄ　ｓｈａｐｅ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ　ｏｆ　ｇｏｌｄ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ　ｕｐｔａｋｅ　ｉｎｔｏ　ｍａｍｍａｌｉａｎ　ｃｅｉｌｓ［Ｊ］．Ｎａｎｏ　Ｌｅｔｔ，２００６，６（４）：６６２－６６８．　［１９］　ＮＡＫＡＩ　Ｔ，ＫＡＮＡＭＯＲＩ　Ｔ，ＳＡＮＤＯ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｍａｒｋａｂｌｙ　ｓｉｚｅ—　ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｃｅｌｌｉｎｖａｓｉｏｎ　ｂｙ　ａｒｔｉｉｆｃｉｌａ　ｖｉｕｒｓｅｓ．Ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ．ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｓｅｌｆ－ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｌｙｃｏｖｉｕｒｓｅｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｉｎ　ｇｌｙｃｏｖｉｒａｌ　ｇｅｎｅ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ［Ｊ］．ＪＡｍ　Ｃｈｅｍ　Ｓｏｃ，２００３，１２５（２８）：８４６５－８４７５．　［２Ｏ］　ＣＨＩＴＨＲＡＮＩ　Ｂ　Ｄ．ＣＨＡＮ　Ｗ　Ｃ．Ｅｌｕｃｉｄａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｕｐｔａｋｅ　ａｎｄ　ｒｅｍｏｖａｌ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ—ｃｏａｔｅｄ　ｇｏｌｄ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｉｚｅｓ　ａｎｄ　ｓｈａｐｅｓ［Ｊ］．Ｎａｎｏ　Ｌｅｔｔ，２００７，７（６）：１５４２．　１５５０．　［２１］　ＢＡＯ　Ｇ，ＢＡＯ　Ｘ　Ｒ．Ｓｈｅｄｄｉｎｇ　ｌｉｇｈｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｙｎａｍｉｃｓ　ｏｆ　ｅｎｄｏｃｙｔｏ—　ｓｉｓ　ａｎｄ　ｖｉｒｌａ　ｂｕｄｄｉｎｇ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，２００５，１０２　（２９）：９９９７－９９９８．　［２２］　ＤＥＷＯＬＦＨＫ，ＳＮＥＬＣ　Ｊ，ＶＥＲＢＡＡＮ　Ｆ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅａｔ—　ｉｏｎｉｃ　ｃａｌＴｉｅｒｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｔｕｍｏｒ　ｌｏｃａｌｉｚａｆｉｏｎ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄｓ　ａｆｔｅｒ　ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．　．，Ｐｈａｒｍ，　２００７，３３１（２）：１６７—１７５．　（收稿日期：２０１４．１１４）１）　Ｃｈｉｎ　Ｐｈ㈣Ｊ　２０１５　ａｐｒｉｌ　Ｖｏ１．５０　Ｎｏ．８　・６９９・