维生素D受体基因BsmI多态性与强直性脊柱炎的相关性研究

垦　验医学杂志２０１３年１１月第３４卷第２２期　Ｉｎｔ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　２０１３，Ｖｏ１．３４，Ｎｏ．２２　・基础实验研究论著・　维生素Ｄ受体基因ＢｓｍＩ多态性与强直性脊柱炎的相关性研究　ｆ１．川北医学院附属医院检验科，四川南充６３７０００；２．廖　涛　，注光蓉　，邢　艳　　，蒋　红　，赵明才　△　川北医学院风湿免疫研究所，四，ｌｌ１南充６３７０００）　摘　要：目的　探计维生素Ｄ爱体基因Ｂｓｍｌ多态性与强直性脊拄炎的关系。方法　应用聚合酶链反应一限制性片段长度多　态性（ＰＣＲ　ＲＦＩ　Ｐ）分析技术，检测】０７例强直性脊柱炎患者（Ａｓ组）和１６６例健康体检者（对照组）维生素Ｄ受体Ｂｓｍｌ基因型和　等位基因的分布频瘴。结果　维生素Ｄ受体ＢｓｍＩ基因型Ｂｂ和ｂｂ在ＡＳ组中的分布频率分别为２２．４　和７７．６　，在对照组中　分别为７．８　和９２．２　，，．两组之间的基因型频率分布有显著性差异ｆＹ。一１１．８３，Ｐ＜０．０５），ＡＳ组与对照组均未检测到ＢＢ基因　型；等位基因Ｉ｛和ｈ的分布频率在ＡＳ组中分男ｌＩ为１１．２　和８８．８　在对照组分剐为３．９　和９６．１　，两者比较差异有统计学意　义　一１ｏ．９７，Ｐ　）＿０５）。结论　维生紊Ｄ受体Ｂｓｍｌ基因多态性与Ａｓ有一定的相关性，Ｂｂ基因型可能增加ＡＳ的易感性。　关键词：强直．性脊垃炎；　维生素Ｄ受体；　ＢｓｍＩ；　基因多态性　ＤＯＩ：１０．３９６９／　＇ｇｓｎ．１６７３—４１　３Ｏ　２Ｏ１　３．２２　００６　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７３－４１３０（２０１　３）２２　２９５６—０３　Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｖｉｔａｍｉｎ　Ｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇｅｎｅ　Ｂｓｍｌ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ａｎｄ　ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ　ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ　Ｌｉａｏ了１ｎＩ）　，Ｗａｎｇ　Ｇｕａｎｇｒｏｎｇ　．Ｘｉｎｇ　Ｙａｎ　．Ｊｉａｎｇ　Ｈｏｎｇ。．Ｚｈａｏ　Ｍｉｎｇｃａｉ　。　ｉ　１．Ｄｅｐａｒｔ？７￣ｅ？ｌｔ　ｎｆ（＇ｌｉ？＊ｉｃａｌ　Ｌａｂｏｒ　（ｄｔＯ？ｙ（Ｉｆ　Ａ　ｆ　｝ｉｌｉａｌｅｄ｝　ｓｐｉｔａｌ¨ｆ　Ｎｗ　ｔｈ　Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　Ｎａｎｃｈｏｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ　６３７０００，　㈠ｔ７１ａ　２．　￣ｌｉｔ　ｚ，ｔｅｔ＇ｊ　ｒ｛ｈｅｕ．ｍｔｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｌｍｍｕｎｏｌｏｇ　ｙ　ｏｌ　Ｎｏｒｔｔｌ　Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｎａｎｃｈｏｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ，６３７０００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｈｉｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｖｉｔａｍｉｎ　Ｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＶＤＲ）ｇｅｎｅ　ＢｓｍＩ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ａｎｄ　ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ　ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓｆＡＳ）ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｈａｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ｆｒｏｎｌ　１０７　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ＡＳ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ａｎｄ　１６６　８ｅｘ　ａｎｄ　ｅｔｈｎｉｃａｌｌｖ　ｍａｔｃｈｅｄ　ｃｏｎｔｒｏｌｓ　ｗｅｒｅ　ｔｙｐｅｄ　ｆｏｒ　ＶＤＲ　ＢｓｍＩ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ｂｙ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｌｅｎｇｔｈ　ｐｏｔｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　（ＰＣＲ～ＲＦ１　Ｐ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ＶＤＲ　Ｂｓｍ１　ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＡＳ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ　ｏｆ　ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｔｅ　Ｂｂ（２２４　）ａｎｄ　ｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅ　ｂｂ　．（７７．６　）・ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ＶＤＲ　Ｂｓｍｌ　ｇｅｎｏｔｙｐｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＣＯＩｌｔｒｏｉｓ，ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐｏｓｅｄ　ｏｆ　ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｔｅ　Ｂｂ（７８　）ａｎｄ　ｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅ　ｂｂ（９２．２　）．　．Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ＷａＳ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ＶＩ）Ｒ　ＢｓｍＩ　ｇｅｎｏｔｙｐｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅｓｅ　ｔｗｏ　ｇｒｏｕｐｓ（ｖ　一１１８３，Ｐ＜Ｏ．０５）．Ｔｈｅｒｅ　．ｗａｓ．ｒｉｏ　ＢＢ　ｇｅｎｅｔｙｐｅ　ｉｎ　ｂｏｔｈ　ｇｒｏｕｐｓ、Ｔｈｅ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ　ｏｆ　ＶＤＲ　Ｂｓｍｌ　ａｌｌｅｌｅ　Ｂ　ａｎｄ　ｂ　ｉｎ　ＡＳ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　１１．２　ｗｅｒｅ　３。９　ａｎｄ　９６．】　ａｎｄ　８８．８　，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌｓ．Ｔｈｅ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　ｏｆ　ＶＤＲ　Ｐ，ｓｍｌ　ａｌｌｅｌｅ　ｉｎ　ＡＳ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ．ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈａｉ！ｎ　ｃｏｎｔｒｏ｝ｓ　ｒ　Ｙ　一１　Ｏ．９７，Ｐ＜０．０５）　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｆｈｅｒｅ　ｉｓ　ａｎ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ＶＤＲ　ｇｅｎｅ　ＢｓｍＩ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｌｏ　ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ　ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ　ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｈａｎ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄ　Ｂｂ　ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｔｏ　ａｎｋｙｔｏｓｉｎｇ　ｓｐｏｎ　ｄｙｌｉｔｉｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ　ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ；　ｖｉｔａｍｉｎ　Ｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ；　Ｂｓｍｌ；ｇｅｎｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　强直性脊柱炎（ＡＳ）的病因目前尚　明确，近年研窀表明　遗传因素在本病的发病中发挥蘑要作用，已有研究证实ＡＳ的　发病与ＨＩ　Ａ　Ｂ２７密切相关，９０　以　的ＡＳ患者ＨＩ—Ａ～Ｂ２７阳　性，并呈现出明显的家族聚集性。但另一方面，ＨＩ　Ａ　Ｂ２７阳性　人群中只有１　３／０一一５　发展为ＡＳ，这表明ＨＩ　Ａ—Ｂ２７并　是ＡＳ　片段长度多态性（ＰＣＲ—ＲＦＩ　Ｐ）方法对四川汉族人群ＡＳ患者进　行ＶＤＲ基因ＢｓｍＩ多态性检测分析。　１资料与方法　１．１　一般资料　ＡＳ组为２００５年１２月至２００８年５月期间来　自本院风湿血液门诊及住院部的ｌＯ７例ＡＳ患者，其中男９２　易感的惟　因素。近年来，国内外学者对ＨＩ　Ａ　Ｂ２７以外的基　因．如ＩＬ１Ａ　Ｈ．１ｌ｜］ＲＮ、】１　１ｆｊ、ＡＮＫＨ、ＮＰＰＳ及ＭＳＸ２等与ＡＳ　例，女ｌ５例；年龄１　６～６ｏ岁，平均年龄３３岁。ＡＳ患者符合　１９８，ｔ年纽约修订ＡＳ诊断标准。对照组ｌ６６例系性别及年龄　的相关件游行ｒ研究　。然而。这些基因存ＡＳ中的意义尚不　明确，其中的大多数相关性研究结果尚未在其他人群．特别是　在不同种族中得到证实。　ＡＳ患者常伴骨量减少及椎骨骨质疏松，有些可引起脊柱　与ＡＳ组匹配的健康人，无血缘关系。　１．２仪器与试剂　全血基因组ＤＮＡ提取试剂盒、ＰＣＲ扩增　所用试剂、ＤＮＡ标记物（Ｄ１　２０００）购自博瑞克生物技术有限公　司；限制性内切酶Ｂｓｍｌ购自立陶宛ＭＢＩ公司；Ｈｙｂａｉｄ　ＰＸ２型　畸形和骨痛．严重影响患者的生活质量　根据ＷＨＯ的标准，　５ｏ　以上的ＡＳ患者伴有腰椎骨质疏松。因此，与骨量减少或　骨质疏松相关的基因可能是ＡＳ易感的最佳候选基因。维生　素Ｄ受体（ＶＤＲ）基因多态性与骨质疏松的相关性目前广为围　际关注　。．多数研究表明ＶＤＲ基因多态性与骨密度、骨质疏　松明显相关，但不同人群的研究结果不尽相同。本文为了探讨　ＰＣＲ仪、ＰｏｗｅｒＰａｃＴＭＨＣ型电泳仪、Ｇｅｌ　Ｄｏｃ　２０００型凝胶成像　仪均为伯乐科技有限公司产品。　１．３方法　１．３．１　外周血基因组ＤＮＡ提取　ＥＤＴＡ抗凝静脉血液　２　ｍＩ　，按照全血基因组ＤＮＡ提取试剂盒说明书操作。　１　３．２　ＶＤＲ基因的ＰＣＲ扩增　弓｛物参照文献设计，由北京　华大中生科技发展有限公司合成，序列为：上游引物（Ｐ１）５　ＶＤＲ基因多态十中与Ａｓ的相关性，采用聚合酶链反应一限制性　＊　基金项目：国家自然科学基金资助项目（３０９７２７４９）；四川省卫生厅课题资助项目（０８００９７）。　作者简介：廖涛，女，副教授，主要从事感染　性疾病研究。　通讯作者，Ｅ　ｍａｉｌ：｜ｉｒ　增ｅ＠ｓｏｈｕ　Ｃｏｒｌｑ　国际检验医学杂志２０１３年１１月第３４卷第２２期Ｉｎｔ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　２０１３，Ｖｏ１．３４，Ｎｏ．２２　ＣＡＡ　ＣＣＡ　ＡＧＡ　ＣＴＡ　ＣＡＡ　ＧＴＡ　ＣＣＧ　ＣＧＴ　ＣＡＧ　ＴＧＡ－３　；Ｆ　游引物（Ｐ２）５ＬＡＡＣ　ＣＡＧ　ＣＧＧ　ＧＡＡ　ＧＡＧ　ＧＴＣ　ＡＡＧ　ＧＧ－３　。　ＰＣＲ扩增反应总体积５Ｏ　Ｉ　，包括模板ＤＮＡ　５／ＬＩ　，引物Ｐ１（２０　ｐｍｏｌ／ｐＬ）、Ｐ２（２０　ｐｍｏｌ／￣Ｌ）各１　Ｌ，ｄＮＴＰ（２．５　ｍｍｏｌ／Ｉ　）４　Ｉ　，　ＭｇＣＩ２（２．５　ｍｍｏｌ／Ｉ　）２／ＬＬ，ｌ０×ＰＣＲ缓冲液５　Ｌ，２．５　Ｕ　Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶，加ＤＨ２０至５Ｏ　Ｉ　。ＰＣＲ反应条件为：９４℃预变　性５　ｍｉｎ；９４℃变性３０　ｓ，６０℃退火５０　ｓ，７２。Ｃ延伸１　ｍｉｎ，３０个　循环；７２℃延伸１０　ｍｉｎ。取ＰＣＲ扩增产物在１　琼脂糖凝胶中　进行电泳，凝胶成像仪下观察结果并照相保存图象。　１．３．３限制性内切酶ＢｓｍＩ酶切检测ＶＤＲ基因型取ＰＣＲ　扩增产物６　Ｌ，加人５　Ｕ　ＢｓｍＩ酶，１０×缓冲液２　Ｉ　，加ＤＨ２Ｏ　至２０“Ｌ，３７　Ｃ水浴过夜（约１５　ｈ），６５。Ｃ、１５　ｍｉｎ终止酶切反　应。取酶切产物在１．５％琼脂糖凝胶中进行电泳，凝胶成像仪　下观察结果并照相保存图象。其中缺乏内切酶ＢｓｍＩ酶切位　点用Ｂ表示，存在酶切位点用ｂ表示。　１．４统计学处理　采用ＳＰＳＳ１６．０软件进行统计学分析，计　数资料采用Ｙ。检验，计量资料采用ｔ检验，Ｐ％０．０５有统计！学　意义。　２结　果　２．１　ＶＤＲ基因ＰＣＲ扩增结果　以外周血基因组ＤＮＡ为模　板，用合成的引物进行ＶＤＲ基因ＰＣＲ扩增，１　琼脂糖凝胶电　泳显示扩增出约８２５　ｂｐ　ＤＮＡ片段，与预期的碱基大小一致，　而阴性对照未扩增出条带，见图ｌ（见《国际检验医学杂志》网　站主页“论文附件”）。　２．２　ＰｃＲ产物Ｂｓｍｌ酶切结果　经限制性内切酶ＢｓｍＩ对　ＰＣＲ产物消化后电泳发现ＶＤＲ基因存在多态性。ＶＤＲ基因　有２个等位基因Ｂ和ｂ，可组合形成ＢＢ、Ｂｂ和ｂｂ基因型。ｂ　表示存在ＢｓｍＩ酶切位点，Ｂ表示缺乏ＢｓｍＩ酶切位点。因此缺　乏酶切位点的ＢＢ基因型只有１条带（８２５　ｂｐ），存在酶切位点　的ｂｂ基因型有２条带（６５０、１７５　ｂｐ），杂合子Ｂｂ基因型有上：述　３条带（８２５、６５０、１７５　ｂｐ），本次研究人群中未检出ＢＢ基因型，　见图２（见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”）。　２．３　Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遗传平衡检验　应用Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎｂｅｒｇ　遗传平衡吻合度检验方法，对ＡＳ组和对照组的ＶＤＲ基因型　分布进行Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡检验。结果ＡＳ组和对照组的　基因型分布均符合遗传平衡定律（ｘ　一１．５２，　一０．２６，Ｐ＞　０．０５），说明所选样本人群的代表性好，见表１。　表１　Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遗传平衡检验　２．４　ＡＳ患者和正常人ＶＤＲ　Ｂｓｍｌ基因检测结果　维生素Ｄ　受体ＢｓｍＩ基因型Ｂｂ和ｂｂ在ＡＳ组中的分布频率分别为　２２．４　（２４／１０７）和７７．６　（８３／１０７），在对照组中分别为７．８　（１３／１６６）和９２．２　（１５３／１６６），２组之间的基因型频率分布经　检验，差异有统计学意义（ｘ。一ｌ１．２０，Ｐ＜０．０５）；等位基因　Ｂ和ｂ的分布频率在ＡＳ组中分别为１１　２　（２４／１０７）和８８．　８Ｋｏ（１９０／２１４），在对照组中分别为３．９　（１３／１６６）和９６．１　（３１９／３３２），经　检验，两者差异有统计学意义（．）ｆ　一１０．２２，Ｐ　－（０．０５）。在参加试验的２组人群中均未发现ＢＢ基因型个　体。　２．５　ＶＤＲ基因型与ＣＲＰ、ＥＳＲ关系　对Ａｓ组中不同的　ＶＤＲ基因型对应的血清ｃ反应蛋白（ＣＲＰ）浓度及红细胞沉降　率（ＥＳＲ）进行统计分析，Ｂｂ、ｂｂ基因型中ＣＲＰ浓度分别为　（３１．７±２５．９）、（２８．６±２５．２）ｍｇ／Ｉ　，差异无统计学意义（ｔ一　０．３４，Ｐ＞０．０５），ＥＳＲ分别为（４５．２±３１．４）、（３１．４±２４．６）　ｍｍ／ｈ，差异也无统计学意义（￡一１．５１，Ｐ＞０．０５），可见ＶＤＲ　基因型与ｃＲＰ、ＥＳＲ之间没有相关性。　３讨　论　ＡＳ的病因目前虽尚未明确，但认为与遗传、感染、免疫、环　境等因素有关，其中遗传因素起主导作用　］。ＨＬＡ—Ｂ２７已被　证实是ＡＳ最主要的易感基因，但是大约８ｏ　的ＨＩ　Ａ—Ｂ２７阳　性者并不发生Ａｓ，而大约１０　的ＡＳ患者ＨＩ　Ａ—Ｂ２７阴性，提　示还有其他因素参与发病　］。维生素Ｄ受体基因是目前国际　上有关骨质疏松最受关注且最有争议的一个候选基因，研究发　现ＡＳ常伴有明显的骨质疏松，且由于ＶＤＲ基因在基因与环　境及基因与基因之间的相互作用，以及在骨和矿物质的代谢中　的作用，因此推测ＶＤＲ叮能在ＡＳ的候选基因里占有重要地　位　。　ＶＤＲ基因定位于１２ｑ１２～ｑ１４，有１１个外显子，全长　７５　ｋｂ。近年报道ＶＤＲ基因多态性与４个单核苷酸多态性　（ＳＮＰ）位点有关，分别为２号外显子的Ｆｏｋｌ位点、第８内含子　的ＢｓｍＩ位点、ＡｐａＩ位点及第９外显子的ＴａｑＩ位点。澳大利　亚学者首次报道ＶＤＲ基因ＦｏｋＩ、ＢｓｍＩ、ＡｐａＩ、ＴａｑＩ位点多态　性与骨密度（ＢＭＤ）水平密切相关，且占至遗传因素的７５　左　右，而ＢＭＤ水平的变化对骨质疏松起着重要作用。此后各个　国家、各个地区学者对ＶＤＲ基因与ＢＭＤ、骨质疏松相关性进　行了大量研究，主要集中在ＢｓｍＩ和ＦｏｋＩ多态性位点上，但不　同地区、不同种族的研究结论不　。　ＥＩ－Ｓｈｅｈａｂｙ等　］对８Ｏ例终末期肾病患者和４ｏ例健康人　进行对比研究，发现ＢｓｍＩ基因型在两组间无显著差异，患者　组Ｂ等位基因频率４１．６　，健康对照组３９．２　，然而患者组　ＢＢ基因型血浆中２５一ＯＨ—ＶｉｔＤ水平较Ｂｂ和ｂｂ基因型显著降　低，等位基因Ｂ的频率与左心室体积指数呈正相关。通过６５　岁以上高加索人群ＶＤＲ基因ＦｏｋＩ和ＢｓｍＩ多态性与心血管　疾病体征和生化指标的相关性研究也表明，在男性中，ＢｓｍＩ基　因型Ｂｂ占５０　＇ｂｂ占２３　，ＢＢ占２７　，ＦｏｋＩ基因型Ｆｆ占　５０　，ｆｆ占１８　，ＦＦ占３２　，在女性中，ＢｓｍＩ基因型Ｂｂ占　４８　，ｂｂ占２ｏ　，ＢＢ占３２　，ＦｏｋＩ基因型Ｆｆ占４８　，ｆｆ占　２２　，ＦＦ占３０　，携带ｂ等位基因的女性胰岛素抵抗指数与　携带Ｂ的女性有差异，而携带ｂ等位基因的男性胰岛素水平与　携带Ｂ的男性有差异，男女之间基因型均无显著差异［９］。目　前仅有１篇国外文献对ＶＤＲ　ＦｏｋＩ、ＢｓｍＩ多态性与Ａｓ患者骨　密度及炎性指标相关性进行报道，结果显示在男性ＡＳ患者里　ＶＤＲ　ＦｏｋＩ与脊柱ＢＭＤ有关，女性的ＢＭＤ与ＶＤＲ　ＦｏｋＩ、Ｂｓ—　ｍＩ都不相关　ｌ。目前有关ＶＤＲ基因多态性与ＡＳ患者的相　关性研究尚未见报道。　本研究结果显示汉族人群维生素Ｄ受体ＢｓｍＩ基因型以　ｂｂ基因型为主，占９ｏ　以上，未检出ＢＢ基因型，与来自哈尔　滨地区和广西地区部分汉族人群及韩国的报道接近　州。而　西方国家报道，ＶＤＲ基因型分布以Ｂｂ最多，约占总基因型的　４５　～５５　’ｂｂ基因型仅占３Ｏ　～４Ｏ　Ｄ　４－ｔ５］。由此可见，　ＶＤＲ基因多态性存在种族和地域的差异，在不同地区人群中　基因分布情况不完全相同，由此产生统计学上的频率偏移。　本研究对ＡＳ组患者及对照组健康者的基因多态性分析　・　２９５８　・　国际检验医学杂志２０１３年ｌ１月第３４卷第２２期　ＩｎＴ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　２０１３，Ｖｏ［，３４，Ｎｏ．２２　结果显示，ＡＳ组患者ＢｓｍＩ的基因频率、等位基因频率分布均　与对照组健康者有显著性差异，ＡＳ组患者中Ｂｂ基因型、Ｂ等　位基因频率均高于健康对照组，提示ＶＤＲ　ＢｓｍＩ基因多态性与　ＡＳ有一定的相关性，Ｂ等位基因可能增加ＡＳ的易感性。本　文通过对Ａｓ患者的研究提示：Ａｓ的发生发展可能与ＶＤＲ基　ｙｓｉｓｊ　Ｊｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ，２０１　３，４３（２）：３１８　３２６．　８］Ｅｌ　Ｓｈｅｈａｂｙ　ＡＭ，Ｅｌ　Ｋｈａｔｉｂ　ＭＭ，Ｍａｒｚｏｕｋ　Ｓ，ｅｌ　ａ１．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｏｆ　Ｂｓｍｌ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ｏｆ　ｖｉｔａｍｉｎ　Ｉ）ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇｅｎｅ　ｗｉｔ　ｈ　ｌｅｆｔ　ｖｅｎｔｒｉｃｕ　ｔａｒ　ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ　ａｎｄ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ｉｎ　ｈｅｍｏｄｉａｌｙｓｉｓ　ｐａｔｉｅｎｔｓ￣Ｊ］．　Ｓｃａｎｄ　Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｉ　ａｂ　Ｉｎｖｅｓｔ，２０ｌ３，７３（１）：７５　８１．　因型有关，如能早期进行ＶＤＲ基因型检测，及早　ｒ预，对于预　防ＡＳ的发生有重要意义。但是ＶＩ）Ｒ基因多态性在ＡＳ的发　病中所起的作用需要进・步阐明。　参考文献　）ｉｍｅｎｔｅｌ　Ｓａｎｔｏｓ　ＦＭ，Ｉ　ｉｇｅｉｒｏ　Ｄ，Ｍａｔｏｓ　Ｍ，ｅｌ　ａ１．ＡＮＫＨ　ａｎｄ　ａｕｓ　［１ｊ　ｆ｝９｝Ｉ　ａｃｚｍａｎｓｋｉ　Ｉ　，Ｍｉｌ（　ｗｉｅｚ　Ａ，Ｌｗｏｗ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｖｉｔａｍｉｎ　Ｄ　ｒｅｃｅｌＰｔｏｒ　ｇｅｎｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ａｎｄ　ｃａｒｄ１０ｖａｓｃｕｌａｒ　ｒｉｓｋ　ｖａｒｉａｂｌｅｓ　ｌｎ　ｅｌｄｅｒｌｙ　Ｐｏｌｉｓｈ　ｓｕｂｊｅｃｔｓ—　ｔＪ　．（　ｙｌｍｃｏｌ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｎｌ，２０ｌ３，２９（３　：２６８　２７２．　［１０］Ｂａｒｂａｒａ　Ｍ，Ｕｗｅ　Ｉ　，Ｇｅｒｗｉｇ　Ｆ．ｅｔ　ａ１．Ｖｉｔａｍｉｎ　Ｉ）ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ　ｃｏｄｏｎ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ｂｏｎｅ　ｄｅｎｓｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ　ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ￣Ｊ］．Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓ　Ｉｎｔ，２００３，１　４　（１２）：９９５　１０００．　ｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｔｏ　ａｎｄ　ｓｅｖｅｒｉｔｙ　ｏｆ　ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ　ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｒｈｅｕｍａ　ｔＯｌ，２０ｌ　２，３９（１）：１　３】ｌ　３４．　［１】］卜秀玲，朱秀英，聂英昆，等．地区部分汉族人群维生素Ｄ受体　Ｂｓｍｌ基因多态性与骨质疏松性骨折关系的研究［Ｊ］．ｒｐ国骨质疏　松杂志，２００７，ｌ３（１　０）：６９２　６９５．　　Ｈ，　ｒｕｌｇｕｎ（）ｎｒａｔ　Ｓ，Ｏｚｄａｍａｒ　Ｋ．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎｄ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　２　ｊ　（）ｚｂａａ［ａｃｔｏｒｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ　ｇｉｏｌ　Ｒｅｐ，２０ｌ２，３９（１２）：　１ｌ　２８９　１１　２９６．　ｒｌ２］郑敏．罗建明．广曲地区儿童维生素Ｉ）受体基因Ｂｓｍｌ和ＴｒｕｇＩ酶　切位点多态性分别［Ｊ］．实用儿科临床杂志，２Ｏ１０，２５（７）：５１　３　：）ｌ０．　Ｈｏｒｓｔ　Ｓｉｋｏｒｓｋａ　Ｗ，Ｄｙｔｆｅｌｄ　Ｊ，Ｗａｗｒｚｙｎｉａｋ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｖｉｔａｍｉｎ　Ｄ　ｒｅ　ｃｅｐｔｏｒ　ｇｅｎｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｂｉｓｍａ，ｂｏｎｅ　ｍｉｎｅｒａｌ　ｄｅｎｓｉｔｙ　ａｎｄ　ｆｒａｃｔｕｒｅｓ　ｉｎ　［１３］Ｋａｎｇ　ＴＪ，Ｊｉｎ　ｓＨ，Ｙｅｕｍ　ＣＥ。ｅ１　ａ１．Ｖｉｔａｍｉｎ　Ｉ）Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｇｅｎｅ　Ｉ＇ａｑｌ，Ｂｓｍｌ　ａｎｄ　Ｆｏｋｌ　Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ｉｎ　Ｋｏｒｅａｎ　Ｐａ１［ｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　Ｔｕ　ｐｏｓｔ　ｎｌｅｎｏｐａｕｓａｌ　ｗｏｍｅｎ　ｗｉｔ　ｈ　ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ［Ｊ　Ｉ．Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　Ｒｅｐ，　２０１　３　４０（１）：３８；３　３９０．　ｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ［－Ｊ］．１ｍｍｕｎＰ　Ｎｅｌｗ，２０ｌ１，ｌ１（５）：２５５　２５７．　Ｌ１　４］Ｍｏｓｔｏｗｓｋａ　Ａ，１．ｉａｎｅｒｉ　Ｍ，Ｗｕｄａｒｓｋｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｖｉｔａｍｉｎ　Ｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇｅｎｅ　Ｂｓｍｌ，Ｆｏｋｌ，Ａｐａｌ　ａｎｄ　Ｉｈｑｌ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｉｓｋ　ｏｆ　ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ｌｕ　ｒ　Ｒｅｖｅｉｌｌｅ　ＪＤ．Ｒｅｃｅｎｌ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ　ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ　Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ　Ｒｅｐ，２００９，１１（５）：３４０　３４８．　Ｂｒａｕｎ　ｌＩ，Ｂｏｌｌｏｗ　Ｍ，Ｒｅｍｌｉｎｇｅｒ（；，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ　ｏｆ　ｓｐｏｎｄｙｌａｒ　ｐｕｓ　ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ￣Ｊ］．Ｍｏ［Ｂｉｏｌ　Ｒｅｐ，２０１３，４０（２）：８０３　８ｌ０．　Ｌ１　０】Ｆｅｄｉｒｋｏ　Ｖ，Ｒｉｈｏｌｉ　Ｅ，　ｆＪＯｎｎｅｌａｎｄ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｅｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　２５　ｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎ　ｆ），ＶＤＲ　ａｎｄ　ＣＡＳＲ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ，ａｎｄ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ　ｃａｎｃｅｒ　ｉｎ　ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　ｐｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｔｂｒｏｐａｔｈｉｅｓ　ｉｎ　ＨＬＡ　Ｂ２７　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｂｌｏｏｄ　ｄｏｎｏｒｓ［Ｊ］．　Ａｒ“ｌｒ【ｔｉｓ　Ｒｈｅｕｍ，ｌ９９８，４ｌ（１）：５８　６７．　Ｍｎｉｌｔｉｃｉｅｈ）（）Ａ，Ｔｅｉｘｅｉｒａ　Ｆｄｅ　Ｍ，Ｃｈｉｅｓ　ＪＡ，ｅｔ　ａＩ．Ｖｉｔａｍｉｎ　Ｉ）ａｎｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ｏｆ　ＶＤＲ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ｌｕｐｕｓ　ｅｒｙ　ｌ　Ｊｊ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ　Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ　Ｐｒｅｙ，２Ｏ１２，２ｌ（４）：５８２　５９３．　ｔｈｅｔｎａｔｏｓｕｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，２０］２，３１（１０）：１　４ｌｌ　１４２１．　　Ｈ。（；ｈｅｎ　ＳＦ，ｅｔ　ａ１．Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｖｉｔａｍｉｎ　Ｉ）ｒｅ　［７］　Ｆｅｎｇ　Ｍ，Ｌｉ（收稿日期：２０１３　０５　２０）　ｃｅｐｔｏｒ　ｇｅｎｅ　ａｎｄ　ｒｉｓｋ　ｏｆ　ａｕｔｏｉｍｎｌｕｎｅ　ｔｈｙｒｏｉｄ　ｄｉｓｅａｓｅｓ：ａ　ｍｅｔａ　ａｎａｌ　（＿［　接第２９５５页）　［５］陈云娇，陈莉敏，美亮，等．核酸染料Ｇｅｎｅｔ＇ｉｎｄｅｒ使用方法的比较　ＥＪ］．生物技术，２０ｌ１，２１（５）：６６　６８　［６］刘歆，徐根明，郭江峰．等．基ｆ　ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ【的舣链ＤＮＡ定量　是一种简便、安全、灵敏度较高的ＥＢ替代核酸染料，能够很好　地用于琼脂糖凝胶中核酸的常规染色。（；－ｏｌｄ　Ｖｉｅｗ虽然灵敏　度ｎＪ以达到实验室的常规检测需求，价格也很便宜，但是从影　响细胞周期和增殖代谢的角度来讲，存在一定的安全隐患。　由于本实验中所检测的３种核酸染料都是来源于市场上　法［Ｊ］．中国生物Ｌ　程杂志，２００８，２８（１）：５５　５６．　１７］Ｋａｒｌｓｅｎ　Ｆ，Ｓｔｅｅｎ　ＨＢ．Ｎｅｓｌａｎｄ　ＪＭ．ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｉ　Ｉ）ＮＡ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｉｎ　ｃｒｅａｓｅｓ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ（）ｆ　ｖｉ　ｒｕｓｅｓ　ｂｙ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　的即用型商品，不了解其详细的配方和成分，若要进一步研究　核酸染料的致癌、致畸性，则需要从其详细成分着手，进一一步通　过动物实验确认，例如通过裸鼠皮下注射试验、Ａｍｅｓ试验　、　ｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｖｉｍｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００２，５５（１）：１　５３　Ｊ　５６．　８］Ｓｉｎｇｅｒ　ＶＩ　，１．ａｗｌｏｒ　ＴＥ，Ｙｕｅ　Ｓ．（、（）ｌｎｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　ｌ　ｎｕ　ｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｇｅｌ　ｓｔａｉｎ　ｎｌｕｔａｇｅｎｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｅｔｈｉｄｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ　ｍｕｔａｇｅｎｉｃｉ　ｔＹ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ／ｍａｍｍａｌｉａｎ　ｎｌｉｃｒｏｓｏｎｌｅ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｎｌｕｔａｔｉｏｎ　ａｓ　小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸　变等试验来确定其牛物安全性。　应当指出的是，核酸染料使核酸着色的机制都是要特异地　ｓａｙ（Ａｍｅｓ　ｔｅｓｔ）【　ｊｊ．Ｍｕ　ｒａｔ　Ｒｅａ，２０Ｏ２，４３９（１）：３　７　１７．　［９　ｊ　Ｍａｒｔｉｎ　ＳＥ，Ａｄａｍｓ（，Ｈ，Ｓｃｈｉｌｌａｃｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉｍｕｔａｇｅｎｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｅｌｅｎｉｕｍ　ｏｎ　ａｃｒｉｄｉｎｅ　ｏｒａｎｇｅ　ａｎｄ　７，１　２　ｄｉｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚ［Ｑ］ａｎｔｈｒａｃｅｎｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ａｍｅｓ　Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ／　ｍｉｃｒｏｓｏｍａ［ｓｙｓｔｅｍ（Ｊ『　ｌＭｕｔａｔ　Ｒｅｓ，Ｉ　９８　Ｉ，　８２（１）：４１　４６．　核酸结合，从这个角度来讲，核酸染料或多或少都存在一定　的风险，尤其足实验室工作人员、医院检验技师等与核酸染料　长期接触的Ｉ　作者，要注意采取庇护措施，并且妥善处理废弃　核酸染料和凝胶，将核酸染料对环境的影响降到最低。　参考文献　１］蒋玲艳，ｆ林果．核酸染料的应用研究进展［Ｊ］．玉林师范学院学　报：自然科学，２００６，２７（３）：１３１　１　３３．　［１０１汪姝，李彪，刘惠民．四种核酸染料在琼脂糖凝胶电泳　｝ｊ的染色特　性［ｆｊ．吉林农业，２Ｏ１１，２６１（１１）：７４．　ｒ１１］黄庆，府伟灵，赵渝徽，等．核酸荧光染料在琼脂糖凝胶电泳中的　染色特性［Ｊ］．中华医院感染学杂志，２００６．１　６（１　１）：１３１　６　ｌ　３ｌ８．　１　２］李丽．高灵敏度荧光染料ＳＹＢＲ的性质及应用［Ｊ］．实用医技杂　志，２Ｏ１２，１　９（８）：８６８—８６９．　［１３Ｊ　Ａｍｅｓ　ＢＮ，ＭｃＣａｎｎ　Ｊ，Ｙａｍａｓａｋｉ　Ｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｃａｒｃｉｎｏ　ｇｅｎｓ　ａｎｄ　ｎｌｕｔａｇｅｎｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ／ｍａｍｍａｌｉａｎ　ｍｉｃｒｏｓｏｍｅ　［２］Ｓａｍｂｒｏｏｋ　Ｊ，Ｒｕｓｓｅｌｌ　ＤＷ．分子克隆实验指南ｒＭ３．２版．黄培堂，　泽．北京：科学出版社，１　９９５：３０４　３ｌ５．　　１０　Ｊ　Ｂｅｎｓａｕｄｅ（）．Ｅｔｈｉｄｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ　ａｎｄ　ｓａｆｅｔｙ－ｒｅａｄｅｒｓ　ｓｕｇｇｅｓｔ　ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ｛｝ｊ．　Ｉ＇ｒｅｎｄｓ　Ｇｅｎｅｔ，ｌ９８８，４（４）：８９　９０．　【１　Ｉ　ｕｎｎ（；，Ｓａｎｓｏｎｅ　ＥＢ．Ｅｔｈｉｄｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ：ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｃｏｎ　ｍｕｔａｇｅｎｉｃｉｔｙ　ｔｅｓｔ　Ｌ￣Ｊ］．Ｍｕｔａｔ　Ｒｅｓ，ｌ　９　７５，３ｌ（６）：３４７—３｛５４１．　（收稿口期：２０１　３　０５　１５）　ｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ｛ｊ　１．ＡｎａＩ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９８７，ｌ６２（２）：４５３　４５８．