玉叶金花苷酸甲酯对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞NO分泌量的影响

第２０卷Ｖ０１．２０　第４期　Ｎｏ．４　中莲药导般　Ｇｕｉｄｉｎｇ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　２０１４年４月　Ａｐｒｉｌ．２０１４　玉叶金花苷酸甲酯对ＬＰＳ诱导ＲＡＷ２６４．７　巨噬细胞ＮＯ分泌量的影响　潘利明　，林励２（通讯作者）　（１．广东药学院，广东广州５１０００６；２．广州中医药大学，广东广州５１０００６）　『摘要１　目的：研究玉叶金花苷酸甲酯对ＬＰＳ诱导ＲＡＷ２６４．７巨噬细胞ＮＯ分泌量的影响。方法：采用ＬＰＳ诱导ＲＡＷ２６４．７细　胞建立细胞炎症反应模型，利用ＮＯ试剂盒检测ＮＯ分泌量。结果：玉叶金花苷酸甲酯能够显著减少ＬＰＳ诱导的ＲＡＷ２６４．７细胞　ＮＯ的产生和释放。与对照组比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．Ｏ１）。结论：玉叶金花苷酸甲酯可能通过减少ＮＯ的释放量而发挥抗　炎作用。　『关键词１玉叶金花苷酸甲酯；脂多糖；ＲＡＷ２６４．７细胞；一氧化氮　『中图分类号１　Ｒ２８５．５『文献标识码１　Ａ『文章编号１　１６７２—９５１Ｘ（２０１４）０４—００５８—０２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｍｕｓｓａｅｎｏｓｉｄｅ　ｏｎ　Ｌｉｐｏｐ０ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ　Ｎｉｔｒｉｃ　Ｏｘｉｄｅ　Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｉｎ　ＲＡＷ　２６４．７　Ｃｅｌｌｓ　ＰＡＮ　Ｌｉ－ｍｉｎｆ，ＬＩＮ　ＬＦ（Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　Ａｕｔｈｏｒ）　（Ｊ．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５１０００６；　２．Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５１ｏｏｏ６）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｍｕｓｓａｅｎｏｓｉｄｅ　ｏｎ　ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｎｉｔｉｒｃ　ｏｘｉｄｅ　ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｉｎ　ＲＡＷ　２６４．７　ｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｃｅｌｌ　ｐａｔｔｅｒｎ　ｗｉｔｈ　ＲＡＷ２６４．７　ｃｅｌｌｓ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｂｙ　ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（ＬＰＳ）ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＮＯ　ｗａｓ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＮＯ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｋｉｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｍｕｓｓａｅｎｏｓｉｄｅ　ｃａｎ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｒｅｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｏｆ　ＮＯ　ｉｎ　ＲＡＷ　２６４．７　ｃｅｌｌｓ，ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ＬＰＳ，ｗｉｔｈ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０１），ｃｏｍｐａｒｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：　Ｍｕｓｓａｅｎｏｓｉｄｅ　ｍａｙｂｅ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ａｎ　ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｂｙ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ＮＯ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】Ｍｕｓｓａｅｎｏｓｉｄｅ；Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ；ＲＡＷ　２６４．７　ｃｅｌｌｓ；ＮＯ　玉叶金花苷酸甲酯（Ｍｕｓｓａｅｎｏｓｉｄｅ，ＭＵ）是一种环烯醚　萜苷成分，本课题组在前期工作中从茜草科植物玉叶金花　溶液配制：精密称取ＬＰＳ　２．０　ｍｇ，以少量ＤＭＳＯ溶解后用培养　基稀释成２　咖Ｌ（控制ＤＭＳＯ的终浓度＜０．１％），备用。　１．２．２仪器ＳＷ．ＣＪ一２Ｆ型超净工作台（苏州净化设备有限公　司）；ＴＳ一１００型倒置显微镜（美国ＡＷＡＲＥＮＥＳＳ公司）；Ｍｕｌｔｉ—　ｓｋａｎ　Ａｓｃｅｎｔ酶标仪（Ｔｈｅ邢０　Ｅｌｅｃｔｒｏｎ公司产品）。　１．３实验方法　（Ｍｕｓｓａｅｎｄａ　Ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ　Ａｉｔ．￡）中分离得到，并通过动物实验、　体外抑菌实验证实ＭＵ具有抗炎、镇痛及抑菌作用Ｉｌ】，为进一　步完善其抗炎活性方面的研究，本实验通过脂多糖（ＬＰＳ）诱　导小鼠巨噬细胞ＲＡＷ２６４．７，建立体外细胞炎症模型，测定ＭＵ　对该炎症模型细胞中炎症介质ＮＯ的分泌量，以考察ＭＵ的抗　炎活性。　１材料与方法　１．３．１小鼠ＲＡＷ２６４．７巨噬细胞复苏、培养、传代、计数及冻　存（１）细胞复苏：从液氮中取出细胞冻存管，立即放于３７℃　的水浴中快速摇动，使其迅速溶解，转入培养瓶中，加入　ＤＭＥＭ高糖培养基（含１０％胎牛血清ＦＢＳ）适量，并轻轻吹打　１．１　细胞小鼠巨噬细胞ＲＡＷ　２６４．７（ＡＴＣＣ　ＴＩＢ一７１）．由广　东药学院中药药理教研室惠赠。　１．２主要试剂、药物及仪器　使培养基与细胞混合均匀，置于ＣＯ，培养箱中培养，约１２　ｈ细　胞贴壁后，更换培养基。（２）细胞培养与传代：将细胞置于细　胞培养瓶中，加入含１０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ培养基约５　ｍＬ，置于９５％　１．２．１主要试剂、药物ＭＵ由本研究室分离纯化并鉴定，采　用ＨＰＬＣ归一法测定其含量＞９８％；脂多糖ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ公司）；　Ｍ，Ｉ－Ｉ１（Ｓｉｇｍａ公司）；高糖ＤＭＥＭ培养基（ＨｙｃｌｏＢｅ公司）；胎牛血　清（Ｈｙｃｌｏｎｅ公司）；ＮＯ试剂盒（南京建成生物工程研究所）；　ＤＭＳＯ（Ａｍｅｒｓｅｃｏ公司）。ＭＵ配制：精密称取ＭＵ　２．０　ｍｇ，以少　量ＤＭＳ０溶解后用培养基配成浓度为２　ｍ　Ｌ的溶液，备用。ＬＰＳ　５８　湿度、５％Ｃ０２、３７℃的ｃ０，培养箱中培养。当细胞贴壁达９０％面　积以上时可以对细胞进行传代。弃掉旧的培养基，适量ＰＢＳ冲　洗２—３遍，加入０．２５％的胰蛋白酶溶液１　ｍＬ，消化约０．５　ｍｉｎ，期　间不断在倒置显微镜下观察。当细胞变圆接近脱壁时，弃掉　胰酶，加入新鲜培养基，轻轻吹打使细胞混匀，然后按照１传３　第２０卷　第４期　Ｖｏｌ－２０　Ｎｏ．４　中莲药导般　Ｇｕｉｄｉｎｇ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　２０１４年４月　Ａｐｒｉｌ．２０１４　接种到新的培养瓶。（３）细胞计数：按上述传代步骤中方法，　使细胞脱壁，并加入新的培养基使细胞混匀，吸取适量，￣ＩＰＢＳ　稀释至一定量，加入到专用盖玻片一侧计数板凹槽处，使盖　玻片下充满液体。置倒置显微镜下，计数四角大方格内的细　胞总数，压边线的细胞只计压上线及左线者，细胞团按单个　细胞计数。按下式计算悬液中细胞总数。细胞总数（个／ｍＬ悬　液）＝（４大格细胞总数／４）ｘ１０４ｘ稀释倍数。（４）细胞冻存：倒置　显微镜下观察处于对数生长期且状态良好的细胞可进行冻　存。以０．２５％胰蛋白酶消化，收集于１．５ｍＬ离心管中，１０００　ｒｐｍ　离心５　ｍｉｎ，弃上清液，加入冻存液，混合均匀，置于冻存管中。　于４℃冰箱中放置３０ｍｉｎ，一２０℃冰箱中放置４０－６０ｍｉｎ，一８０℃　低温冰箱中放置１２　ｈ以上，再置入液氮中长期保存。　１．３．２炎性细胞模型的建立取对数生长期的ＲＡＷ２６４．７细　胞，用胰酶消化后计数，用培养液调整细胞密度为１ｘ１０ａ＠／ｍＬ，　以每：ｆＬ２ｏｏ　Ｌ接种Ｔ９６￣Ｌ培养板，每个浓度设５个复孑Ｌ，用终　浓度分别为ｏ、ｏ．０Ｏｌ、ｏ．Ｏｌ、ｏ．１、１　Ｉｘｇ／ｍＬ的ＬＰＳ进行诱导，置　于９５％湿度、５％Ｃ０２、３７　ｏＣ的ＣＯ　培养箱中培养。２４　ｈ后终止培　养，收集上清，用ＮＯ试剂盒方法测定细胞分泌的ＮＯ的量。以　确定ＬＰＳ刺激的最佳作用剂量。　１．３．３　ＭＴＹ法测定不同浓度ＭＵ对ＲＡＷ２６４．７细胞的毒性［２，３１　试验分为空白组、细胞对照组和实验组。空白组为等体积不　加细胞的含１０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ培养基，细胞对照组为不加药物　的等体积培养液，实验组即Ｍｕ稀释液（终浓度为１０００　ｍｇ／Ｌ、　５００　ｍｓ／Ｌ、２５０　ｍｓ／Ｌ、１２５　ｍｇ／Ｌ、６２．５　ｍｇ／Ｌ）。取对数生长期的　ＲＡＷ２６４．７细胞，用胰酶消化后计数，用培养液调整细胞密度　为ｌｘｌ０卟，ｍＬ，以每：ｆＬ２ｏｏ　Ｌ接种于９６孔培养板，置于３７℃、　５％ＣＯ　培养箱培养２４　ｈ后，吸弃孔内培养液。每孔加入５个不　同浓度的ＭＵ的稀释液，每个浓度设５个复孔，实验重复３次。　培养２４　ｈ后，吸弃孔内培养液，用ＰＢＳ洗一遍，于每孔中加　５　ｍＣｍＬ的ＭＴｒ　２０　ｏ．Ｌ，继续孵育４　ｈ，吸弃上清液，每孔加入　ＤＭＳＯ　１５０　０，Ｌ，轻震使溶解，以酶标仪４９０　ｎｍ处测定ＯＤ值。计　算细胞的相对存活率。相对细胞存活率＝（实验组孔Ａ值一空　白组孔Ａ值）／（对照组孔Ａ值一空白组孔Ａ值）ｘ１００％。　１．３．４　ＭＵ对ＬＰｓ诱导ＲＡＷ２６４．７细胞ＮＯ分泌量的影响　试验分为模型组、空白组、ＭＵ高、中、低剂量组。模型组不使　用ＭＵ进行预处理，但加入同样剂量的ＬＰＳ进行诱导；空白组　既不使用ＭＵ进行预处理，也不ＪＪＵＬＰＳ诱导。３个实验组中ＭＵ　终浓度分别为１０００　ｍｓ／Ｌ、５００　ｍｇＬ、２５０　ｍｇ／Ｌ。于９６孔板中，每　孔加入ＲＡＷ２６４．７细胞悬液（１．０ｘ１０６个／ｍＬ）２００　ｔｘＬ，ＭＵ高、　中、低剂量组分别用终浓度１０００　ｍｇ／Ｌ、５００　ｍｓ／Ｌ、２５０　ｍｇ／Ｌ的ＭＵ　预处理２　ｈ，加入Ｉ．ＰＳ（１　ｐ．ｇ／ｍＬ）￣＝］：３７　ｏＣ、５％ＣＯ　培养箱孵育　２４　ｈ，重复５孔。以南京建成生物工程研究所ＮＯ试剂盒的相关　操作测定ＮＯ分泌量。　１．４统计学方法数据均采用ＳＰＳＳ　１９．０统计分析软件分析　处理，数据用（互　）表示，采用方差分析。　２结　果　２．１　炎性细胞模型的建立经浓度为０．１、１￣ｇ／ｍＬ的ＬＰＳ诱　导后，细胞ＮＯ分泌量较正常对照组明显增加（Ｐ＜０．０１１，提示　炎性细胞模型建立成功。（见表１）因此，后续实验研究皆选用　浓度为１．０００　ｗｇ／ｍＬ的ＬＰＳ对ＲＡＷ２６４．７细胞进行诱导。　表１不同浓度ＬＰＳ对ＲＡＷ２６４．７细胞ＮＯ产生的影响　（ｉ　，ｎ＝５，Ｉｘｇ／ｍＬ）　注：与正常对照组比较．　Ｐ＜Ｏ．Ｏｌ。　２－２　ＭＴＴ法测定不同浓度ＭＵ对ＲＡＷ２６４．７细胞的毒性　细　胞对照组的细胞存活率为１００％，则各实验组的相对细胞存活　率在９５．４—９８．７％，与细胞对照组比较，差异无统计学意义（Ｐ＜　０．０１），说明ＭＵ的浓度小于１０００　ｍｇ／Ｌ时对ＲＡＷ２６４．７细胞无明　显的毒性，可用于后续试验研究。　２－３　ＭＵ对ＬＰＳ诱导ＲＡＷ２６４．７细胞ＮＯ分泌量的影响　模型　组与空白组比较，ＮＯ分泌明显增加，说明经ｕ　诱导ＲＡＷ２６４．７　细胞建立的炎性细胞模型成功，各实验组与模型组的ＮＯ分　泌量比较，均有减少，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１），说明ＭＵ可　以降低ＬＰＳ诱导的ＲＡＷ２６４．７细胞ＮＯ的分泌量，但３个剂量组　之间差异性不明显，未表现出剂量依赖性。（见表２）　表２　ＭＵ对ＬＰＳ诱导ＲＡＷ２６４．７细胞ＮＯ分泌量的影响　【；蚣，ｎ＝５。１．￣ｇ／ｍＬ）　注：与模型组比较，。Ｐ＜０．０１。　３讨　论　一氧化氮（ＮＯ）是介导炎症反应的关键因子，在内毒素致　机体损伤中起重要作用嘲。研究表明，ＮＯ在炎症的各个阶段均　有产生。ＮＯ是一种自由基，其性质活泼，除以ＮＯ形式存在外，　还ＩＡ）ＮＯ：、Ｎ２０　、ＮＯ　、亚硝胺、ｓ一亚硝基化蛋白形式存在。ＮＯ是　一种胞间信使分子，可介导许多生物学现象，其作为一种炎　性介质，在炎症初期，起保护作用。但是过多的ＮＯ可以促进巨　噬细胞释放ＩＬ一１、ＴＮＦ一０【等形式，这些促炎性细胞因子可以刺　激巨噬细胞分泌产生更多的ＮＯ，形成恶性循环，加重炎症反　应，因此能抑制ＮＯ分泌产生的物质具有抗炎的作用。本实验　中ＭＵ可以降低ＬＰＳ诱导的ＲＡＷ２６４．７细胞ＮＯ的分泌量。提示　ＭＵ具有抗炎活性，这为ＭＵ及玉叶金花药材进一步开发研究　提供了理论依据。ＭＵ对其它炎症因子的影响及抗炎机理的　研究尚待进一步的实验研究证实。　ＭＴｒＩ：Ｌ色法１９，１ｑ，是一种检测细胞存活和生长的方法。其　检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性ＭＴｒ　还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲腆（Ｆｏｎｎａｚａｎ）并沉积在细胞　中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）能溶解细胞中的　甲瓒，用酶联免疫检测仪在４９０　ｎｍ波长处测定其光吸收值，　可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，ＭＴＩ＇￣晶形成　的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子　５９　第２Ｏ卷　第４期　Ｖｏ１．２０　Ｎｏ．４　中基药导般　Ｇｕｉｄｉｎｇ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　２０１４年４月　Ａｐｒｉｌ．２０１４　正交设计优选鱼腥草总黄酮提取工艺木　李明娟　，刘峰高２，王鸿建１，刘柳成２　（１。邵阳医学高等专科学校，湖南／ｔｌＩＩ￣Ｈ　４２２０ｏ０；２．牛马司镇中心完小，湖南邵阳４２２０００）　【摘要】　目的：优选出鱼腥草总黄酮最佳提取工艺。方法：以总黄酮含量为指标采用正交设计的方法研究总黄酮提取工　艺。结果：鱼腥草在ｒＸ６０％浓度的乙醇为提取液，料液比为１：２５，超声波功率为６００Ｗ的条件下提取３０ｍｉｎ，提取总黄酮最高。结　论：此方法提取鱼腥草总黄酮工艺稳定、可靠，是鱼腥草中总黄酮的最佳提取工艺。　［关键词】鱼腥草；总黄酮；提取工艺　【中图分类号】Ｒ２８４．２【文献标识码】Ａ【文章编号】　１６７２—９５　１Ｘ（２０１４）０４—００６０—０３　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ　Ｃｏｒｄａｔａ　ｕ　Ｍｉｎｇ－ｊｕａｎｌ，ＨＵ　Ｆｅｎｇ－ｇａｏｅ，ＷＡＮＧ　Ｈｏｎｇ－ｊｉａｎｌ，ｕＵ　Ｌｉｕ－ｃｈｅｎｇ２　ｆＪ．Ｓｈａｏｙａｎｇ　Ｍｅ￣ｃｄ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｓｈａｏｙａｎｇ　Ｈｕｎａｎ　４２２０００；　２．Ｎｉｕｍ￣ｉ　Ｔｏｗｎ　Ｃｅｎｔｅｒ　Ｅｌｅｍｅｎｔａｒｙ　Ｓｃｈｏｄ，Ｓｈａｏｙａｎｇ　Ｈｕｎａｎ　４２２０００）　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ　ｃｏｒｄａｔａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：　Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　ｃｈｏｓｅｎ　ａｓ　ｔｈｅ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｉｎｄｉｃｅｓ　ｔｏ　ｅｖａｌｕ￣ｅ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｗａｓ　Ｕｎｄｅｒ　６００　Ｗ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐｏｗｅｒ　ｔｏ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｗｉｔｈ　２５　ｔｉｍｅｓ　６０％ｅｔｈａｎｏｌ　ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｏｒ　３０　ｍｉｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｆｅａｓｉｂｌｅ，ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ　ｃｏｒｄａｔａ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ　ｃｏｒｄａｔａ；Ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　鱼腥草是三白草科蕺菜属多年生草本植物，药用食用历　史悠久ｌｌＩ。其主要活性成分为挥发油和黄酮类化合物，黄酮类　基金项目：邵阳市科技计划项目资金（Ｊ１１５０）　成分具有抗菌消炎、清热解毒、降血糖、降血脂、利尿通便、抗　氧化衰老、消除体内自由基等药理作用［２－３１。为了更合理的开　发利用鱼腥草资源，本研究比较了不同提取方法对总黄酮提　的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及　肿瘤放射敏感性测定等。　从前期实验Ⅲ及本实验结果可见，ＭＵ具有显著的抗炎作　用，为玉叶金花药材抗炎活性的主要物质基础。　参考文献　ｆ５１姜晓，敖林，崔志鸿，等．昆明山海棠总生物碱对ｕ）Ｓ诱导的　小鼠ＲＡＷ２６４．７细胞分￣，ＴＮＦ—　及ＮＯ的影响『Ｊ１．中医药导　报，２０１１，１７（３）：８２—８４　『６陈一晴，聂少平，６１黄丹菲，等．大粒车前子多糖对ＲＡＷ２６４．７　细胞一氧化氮生成的影响『Ｊ１．中国药理学通报，２００９，２５（８）：　１１１９—１１２０　【ｌ１潘利明．玉叶金花抗炎物质基础及质量标准研究ｆＤ１．广州：　广州中医药大学，２０１３　『７】胡亚娥，茅家慧，刘霞，等．氧化苦参碱对脂多糖诱导的　ＲＡＷ２６４．７细胞一氧化氮及其诱导型合酶表达的影响『Ｊ１．　南通大学学报（医学版），２０１１，３１（３）：１６６—１６９　［２】陈秋铃，高幼衡，张丽媛．Ｎｏｄｏｓｉｎ对脂多糖刺激ＲＡＷ２６４．７　细胞分泌ＮＯ及细胞因子的影响『Ｊ］．广州中医药大学学报，　２０１３，３０＠）：２１　１－２１３　【３】白生宾，陈红香，钟近洁，等．Ｍ１ＴＩ法检￣ＲＡＷ２６４．７细胞活　【８】李娜，邱海波．一氧化氮在急性肺损伤炎症反应中的双向　调节作用『Ｊ】．国际呼吸杂志，２００６，２６（３）：２０９—２１２　【９】方蓉，李芳秋，武建国．ＭＴＩ＇Ｉ：Ｌ色法的条件探讨『Ｊ］．临床检验　杂志。２００３，２１（１）：３４—３５　力及可能因素分析［Ｊ］．中国现代医学杂志，２０１１，２１（２３）：　２８３　１－２８３３　［１０１潘兴瑜，付京晶，薛欣，等．ＭＴＴ比色法改进的研究［Ｊ】．中国　免疫学杂志．１９９９，１５（１２）：５５９　（收稿日期：２０１３－０９—０２编辑：蒋凯彪）　ｆ４］徐玲杰，李聪，张勉，等．款冬花乙酸乙酯部位对炎症因子　释放的影响【Ｊ１．中国药科大学学报，２０１　１，４２（１）：６４—６７　６０