苏木精-伊红(HE)染色方法的改进

摘要】目的 由于二甲苯的高致癌性和对人体组织器官运亨通的损伤，在HE染色制片过程中使用二甲苯试剂会被越来越不可容忍。随着医改的进行，临床医师及患者对病理诊断报告的时间要求越来越短是大势所趋，对于病理工作者，顺应历史的发展，改进HE制技术是我们病理专业能快速发展的必要条件。现在介绍一种用TO试剂代替二甲苯并且缩短HE染色制片时间和提高HE染色质量的方法。方法 选取100个不同的组织块（包括肠、胃、肝、子宫肌瘤、子宫内膜、肺纤支镜活检，胃肠道内镜活检，子宫颈组织标本）经过脱水浸蜡、包埋、切片后进行HE染色，捞片后在58-60℃的温度烤片3分钟，在58-60℃温度下To试剂内脱蜡10分钟后进行常规HE染色，但酸酒精浓度为0.5％，每个蜡块的切片同时进行使用二甲苯传统的HE制片方法进行染色，捞片后在58-60℃下烤片50分钟后进行HE染色，酸洒精浓度为1％。稀氨水的浓度为1%。结果 使用To试剂改进的HE染色切片制片时间比传统方法缩短了47分钟，并且脱蜡干净彻底HE染色质量明显优于传统的HE制片方法，其主要原因，改进后的方法使用的酸酒精浓度为0.5％，而不是1％，组织在高温环境下处理时间短。结论 使用后试剂代替二甲苯对传统HE染色制片方法，缩短了染色时间，染色质量好，可以推广使用，改善病理科工作环境质量，满足临床病理诊断需要。 【关键词】HE 染色 改进

【中图分类号】R319 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）26-0095-01

1 材料与方法

选取100个不同的组织块大块组织厚度为0.3厘米,长2厘米,宽1.5厘米,所有组织厚度均小于0.3厘米(选取的组织包括肠、胃、肝、子宫肌瘤、子宫内膜、肺纤支镜活检，胃肠道内镜活检，子宫颈组织标本）。0.5%盐酸-乙醇的配制方法：90％的酒精99.5ML＋0.5ML浓盐酸。0.4%稀氨水的配制方法：99.6ML蒸馏水+0.4ML浓氨水。 2 方法

改进后的方法:组织固定：活检组织和手术切除组织离体后立即用中性福尔马林固定，中性福尔马林的体积是组织的5-10倍，组织的厚度被切成0.5厘米厚的薄片,空腔脏器要用剪刀剪开后固定，固定时间不低于3小时。取材后进入自动组织处理机进行脱水、浸蜡。操作步骤为：中性福尔马林固定2小时，90%乙醇1小时，95%乙醇1小时，95%乙醇1小时，95%乙醇1小时，无水乙醇1小时，无水乙醇1小时，To试剂30分钟，TO试剂30分钟，石蜡30分钟，石蜡1小时，石蜡1.5小时。石蜡包埋。组织切片。捞片后58-60℃的温度下烤片3分钟，58-60℃温度下To试剂内脱蜡5分钟两次，无水乙醇1分钟两次，95％的乙醇1分钟2次；80％乙醇1分钟1次。蒸馏水洗1分钟，苏木精液染色5分钟，蒸馏水洗去苏木精1-3分钟，0.5％盐酸-乙醇4秒钟，蒸馏水洗2分钟，组织颜色变蓝加深后，0.4％氨水30秒，观察到颜色进一步加深后，蒸馏水冲洗2分钟，80％乙醇30秒，95％乙醇30秒2次，无水乙醇10秒2次，注意最后一次无水乙醇要保持乙醇浓度足够，不含水分，To试剂20秒 2次，To试剂10秒1次，中性树胶封片（中性树胶溶剂为TO试剂）。

传统方法：组织固定：活检组织和手术切除组织离体后立即用中性福尔马林固定，中性福尔马林的体积是组织的5-10倍，组织的厚度被切成0.5厘米厚的薄

片,空腔脏器要用剪刀剪开后固定，固定时间不低于3小时。取材后进入自动组织处理机进行脱水、浸蜡。操作步骤为：中性福尔马林固定2小时，90%乙醇1小时，95%乙醇1小时，95%乙醇1小时，95%乙醇1小时，无水乙醇1小时，无水乙醇1小时，二甲苯试剂30分钟，二甲苯试剂30分钟，石蜡30分钟（石蜡温度为60摄氏度），石蜡1小时（石蜡温度为60摄氏度），石蜡1.5小时（石蜡温度为60摄氏度）。石蜡包埋（石蜡温度为60摄氏度）。组织切片。捞片后在58-60℃温度下烤片50分钟进行以下操作：二甲苯试剂内脱蜡10分钟两次，无水乙醇1分钟两次，95％的乙醇1分钟2次；80％乙醇1分钟1次。蒸馏水洗1分钟，苏木精液染色5分钟，蒸馏水洗去苏木精1-3分钟，1％盐酸-乙醇4秒钟，蒸馏水洗2分钟，组织颜色变蓝加深后，1％氨水30秒，观察到颜色进一步加深后，蒸馏水冲洗2分钟，80％乙醇30秒，95％乙醇30秒2次，无水乙醇10秒2次，注意最后一次无水乙醇要保持乙醇浓度足够，不含水分，二甲苯试剂20秒 2次，二甲苯试剂10秒1次，中性树胶封片（中性树胶溶剂为二甲苯试剂）[1]。 3 结果

用To试剂代替二甲苯改良后的HE染色方法与传统的使用二甲苯的染色方法的制片比较，两种方法制片的细胞核核膜染色清晰胞核内染色质清晰，能观察到细微结构，胞浆染色清楚，有层次感，背景清晰无污染。用To试剂代替二甲苯改良后的HE染色方法完成的HE切片细胞核的染色有更好的层次感，细胞核的细微结构更清晰。用To试剂代替二甲苯后改良后的HE染色方法比传统的使用二甲苯的制片方法，缩短了染色时间47分钟。 4 讨论

现在由于医疗资源极度紧张，对人均住院天数要求逐渐缩短，节约医疗资源，尽可能使用少的医疗资源完成患者的疾病治疗，提高疗效，节约医院医疗资源的占用，节约患者的宝贵时间，因此对病理诊断的时间提出了崭新要求，缩短制片时间显得极为紧迫，因此改进HE制片方法是大势所趋，由于二甲苯对具有高致癌性和人体的健康已经引起了广泛关注，寻找二甲苯的替代品，改进制片方法是我们当今的重要课题。在HE制片过程中使用中性福尔马林固组织,保持组织的形态,乙醇脱水，To试剂引导，置换，透明，石蜡均匀浸入组织间隙，浸蜡后的组织变硬，质地较均匀，利于组织切片。切片后切片上组织经高温处理的时间应尽可能短，如果时间过长，就会影响染色效果。但如果捞片后，切片不经过60摄氏度高温烤片，染色过程中易出掉片，并且染色时间会延长，难以满足临床的需求。这种缺陷仍需要我们继续努力改进。办木精-伊红（HE）染色过程中通过反复实践：使用酸酒精的浓度最佳浓度为0.5％盐酸-乙醇，浓度过高会导致过度分化，苏木精染色浅；浓度过低会导致分化不足，染色被景过深，影响显微镜下观察。稀氨水的最佳浓度为：0.5％氨水，浓度过高会导致返蓝过度，浓度过低会导致返蓝不足，其他试剂用于返蓝不易控制返蓝的程度，0.5％稀氨水返蓝不会导致返蓝不足或者返蓝过深，随着返蓝时间的延长不会导致返蓝过深，易于掌握。

参考文献

[1]王陇德等.临床技术操作规范.病理学分册，2004，33，37-38.