大麦中酶形成的时间曲线

ｉ｝　主　童　嘲日ｏ１目标ｌＩ　诅　ｌ　熹ｈｔＩｐＪｈ￣ｖ　．ｋＯｒ，　ｔｌｙ．ＣｔＩ　帅　ｌ＝Ｋｏｎ。　口　”　１０　Ｘ　康迪日用化工有限公司　・　５９　・　李涛蔡国林陆健【摘译】　江南大学生物工程学院【摘２１４１　２２　要１通过浸麦，发芽和提取浸出物来观察大麦中酶形成的顺序。提取制麦过程中大麦籽　粒的不同部分，研究了以下５种酶的形成次序：羧肽酶（Ｅｃ３．４．１６．１）、内一ｐ１—３，１－４葡聚糖酶　（ＥＣ　３．２．１．７３）、内一Ｂ１—４一木聚糖酶（ＥＣ３．２．１．１３６）、阿拉伯呋喃糖苷酶（ＥＣ３．２．１．５５）和仅一淀粉　酶。早期形成的羧肽酶及跟随其后稍微晚一点形成的ｐ一葡聚糖酶和最后形成的　一淀粉酶，证　实了早期关于这些酶合成次序的报道。虽然木聚糖酶在浸麦和出芽早期就形成了，可是其他　研究人员发现这个酶在制麦过程中形成得比较晚。除了最终均匀分散于麦粒中的木聚糖酶，　其他酶在麦粒近末端有较高水平的活性。在四个效应物的条件下，在不发芽大麦环片中检验　酶的形成。水分对照样反映了在全部大麦籽粒中观察到的酶形成方式。赤霉酸促进形成更　高的酶总活力并同时形成了所有的酶。脱落酸促进了后期酶（木聚糖酶，阿拉伯呋喃糖苷酶　和　一淀粉酶）的形成并且木聚糖酶活力比单独用水处理有明显的增高。赤霉酸和脱落酸的混　合物显示了非排他的，复合的更高活力水平的反应以及酶形成起始期的变化。和用赤霉酸或　赤霉酸与脱落酸的混合物处理相比，用赤霉酸和氯化钙的混合物处理引起了羧肽酶活力的较　大提高和木聚糖酶活力的大幅降低。　［关键词】大麦细胞溶解酶酶的形成发芽浸麦木聚糖酶　１实验方法（略）　２结果和讨论　最早的变化；在浸麦后的ｌ２至２４ｈ内，岱一葡聚糖　酶活性第二个形成；在浸麦结束后的２４到３６ｈ内　形成阿拉伯呋喃糖苷酶和　一淀粉酶。　表１单因素方差分析法测出芽大麦中酶形成的值　酶　一２．１发芽大麦中酶的形成　羧肽酶、木聚糖酶和　—Ｌ一阿拉伯呋喃糖苷酶　的活力能在大麦中检测到，而　一葡聚糖酶和　一淀　粉酶检测不到。在４８ｈ浸麦之后紧接着出现了Ｂ一　葡聚糖酶有效水平，　一淀粉酶活力出现在６０ｈ，或　者说浸麦后的１２ｈ。　在浸麦和发芽的各阶段，除了木聚糖酶之外，　第一次明显　Ｆ　第一次合　第二次合　第三次台　间隔期（ｈ）　ｆＦ　６ｏ）　成间隔期　成问隔期　成间隔势　７２—斗８４　２１１８９　．．淀粉酶　７２—　８４　６０＿一９６　９６—÷１Ｏ８　ｌＯ８—　１２０　Ｂ一葡聚糖酶　６　一７２　３４８５１　木聚糖酶　羧肽酶　（卜＋４８　Ｏ＿’４８　７４５５　．－＇４８　＿＋７２　８４—｝９６　９６—　１２Ｏ　８４－　９６　１３２—＇ｌ　３０４９８　．麦粒近端各种酶的活力都比末端的高。近端和末　端羧肽酶和Ｂ一葡聚糖酶的活力比为３：２，仅一阿拉　伯呋喃糖苷酶的活力比率为２：１，　一淀粉酶活力　比在３和４之间。近端和末端木聚糖酶活力比为　ｌ：１。　阿拉伯呋　哺糖苷酶　７２—　８４　１１３．ｏ６　７２—斗９６　ｌＯ８—｝１３２　在０到４８ｈ内浸麦，１４４ｈ出芽结束，每隔１２小时取样。　木聚糖活性水平的大幅提高超过了浸麦时的　曲线。浸麦开始后的峰值大约相当于１４４ｈ时观　单因素方差分析鉴别出研究的五个酶时间点　察到的总酶活性的４０％。试验中剩余的酶在任何　间有明显不同的平均值（表１）。用Ｔｕｋｅｙ模型的　时间点没有一个在活性上显示出和上述相同的峰　成对比较法鉴别出每条时间曲线中有明显不同的　值。所有的酶在总活性上至少有两个跨越几个时　总活性平均值的最早两个时间点。这两个时间点　间点的稳定期，这些时间点在成对比较中酶活性　之间的时间段被标记为酶合成的起始。在时问０　上没有发现任何不同。仅一淀粉酶、Ｂ一葡聚糖酶和　和浸麦结束这段时间，木聚糖酶和羧肽酶表现出　阿拉伯呋喃糖苷酶的活性都有两个稳定期。木聚　糖酶和羧肽酶有三个稳定期。　收稿日期：２０１０—０１—１２　皇　颤　脖　Ｅ—・薪型巴氏杀菌监潮仪　１０ｏ－８４６０１３．８４６㈨ｋ　Ｉｌ　口疽　ｂｍ－曲Ｉｎａ∞ｍ　６；８『帆＿４６０１３　１０昌器　。　６’　６０・　德蔺颐贝隆公司中圜总代理　颐贝隆电子科技（北京）有限公司　在全部的１４４ｈ中每个酶的总活性不是恒定　肽酶总活力增加到１３２ｈ，在这个时间点后活力也　¨¨¨¨　¨ｌ，ｉ啪啪啪螂｛　，　５。Ⅲ呲Ⅲ咐啪螂咐啪饥　机　饥　　札　机～埘一埘伽　乱　ｍ　ｎ　的增长。仅一淀粉酶总活性一直增加到１２０ｈ时的　开始下降。只有木聚糖酶和阿拉伯呋喃糖苷酶的　片最大值，之后总活性开始下降。Ｂ一葡聚糖酶和羧　活性在整个实验中持续增长。　ｊ　一一　．，嗣．　。　．　。　Ｕ／　片　Ｕ／坏片　由。　，　，　，　ｏ　Ｏ　Ｏ　Ｏ　尊４　。　，２　１　茸　，喀４　　２　。　．　蛳螂ｉ。　培养时间（ｈ）　Ｆｉｇ．１　．经赤霉素处理的大麦环片中酶形成曲线。黑条表示环片组织中酶活力，白条表示激素培养基中　酶活力，误差条代表标准偏差　蛊　＾＝ｌＩ　辫一＾　■　］　—Ｉ　ｎ　■　－［＝二＝］■■　上＝＝＝＝＝＝Ｉ　Ｅ　Ｏ　Ｏ　Ｕ／所片　Ｏ　Ｏ　Ｏ　Ｏ　口　Ｏ　Ｏ　：　。　晰瞄蝴　蚴　洲。　晰州　Ｏ　ｏｏ●　０　ｏ０７　Ｏ　∞ｅ　≤环　０　∞ｓ　片Ｏ．∞●　Ｏ　∞３　Ｏ．Ｏ０２　乱∞’　ａ　０　１２　２４　３●　‘．ＳＯ　培养时间（ｈ）　黑条表示环片组织中酶活力。白条表示激素培养基中　Ｆ　２．经脱落酸处理的大麦环片中酶形成曲线ｇ．　酶活力，误差条代表标准偏差　Ｏ　Ｏ　｝ｌ州乏　五壹　薪型巴Ｅ］Ｅ杀菌监测仪　颐刃鹰　《：８１１０－０－８４６０ｏ１ｌ３６３６；８４Ⅲ６０１。１　０　０１６４３６６４２６３０９０６７“　’　Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｎｇ￣ｅｂｒＯ－ｃｈｉｎａｃｏ　德田颐贝隆舟　中ｃ剁巷代理　颐贝隆电子科技（北京）有限公司　・　６１　・　’ｏ型　表２在脱落酸（ＡＢＡ，０．５ｘｌＯ　Ｍ）处理的大麦环片中　用单因素方差分析和成对比较法测酶形成的值　酶　第一次明显　Ｆ　活力　局部小　对总活　间隔期（ｈ）　（Ｆｃｒｉｔ＝５．６０）　位置　时活力　的影响　一淀粉酶　１２｝２４　５３．４８　培养基　４８　Ｂ一葡聚糖酶　３＿３７　培养基　０　ｎ０ｎｅ　木聚糖酶　ｌ２６Ｏ　４＿８９　培养基　０　羧肽酶　３＿３３　培养基　２４　ｎ０ｎｅ　阿拉伯呋　喃糖苷酶　１２—｝３６　５３．４８　大麦环片　０　ｎ０ｎｅ　“＋”表示比对照样有更大活力；　“ｎｏｎｅ”表示与对照样没有明显差别。　表３在赤霉酸（ＧＡ，。１０　Ｍ）和氯化钙（１０　Ｍ）处理的大麦　环片中用单因素方差分析和成对比较法测酶形成的值　酶　第一次明显　Ｆ　活力　局部小　对总活力　间隔期（ｈ）　（Ｆｃｒｉｔ＝５．６０）　位置　时活力　的影响　Ｏｒ＿一淀粉酶　１２｝４８　ｌ２＿２１　培养基　０　＋　Ｂ一葡聚糖酶　２４—＋３６　２４．３７　培养基　０　＋　木聚糖酶　１２一十２４　９６．８１　培养基　２４　＋　羧肽酶　１２＿＋２４　２２４．９　培养基　０　十　阿拉伯呋　１２—　３６　１２－２１　培养基　３６　＋　喃糖苷酶　“十”表示比对照样有更大活力；　“ｎｏｎｅ”表示与对照样没有明显差别。　表４在赤霉酸（ＧＡ　。１０。Ｍ）和脱落酸（ＡＢＡ，Ｏ．５ｘｌＯ　Ｍ）　处理的大麦环片中用单因素方差分析和　成对比较法测酶形成的值　酶　第一次明显　Ｆ　活力　局部小　对总活力　间隔期（ｈ）　（Ｆｃｒｉｔ＝５．６０）　位置　时活力　的影响　一淀粉酶　ｌ２—＋３６　１２．４　培养基　３６　＋　Ｂ一葡聚糖酶　１２—　２４　３７．８７　培养基　Ｏ　＋　木聚糖酶　１２３６　１５．６３　培养基　１２　＋　羧肽酶　阿拉伯呋　１２２４　４４．４９　培养基　０　上　喃糖苷酶　１２—｝４８　１２．４　培养基　４８　＋　＋”表示比对照样有更大活力；　ｎｏｎｅ”表示与对照样没有明显差别。　２．２暴露于水和激素中的大麦环片中酶形成曲线　大麦环片中酶开始形成的时问不同从根本上　排除了ＧＡ的存在，当环片暴露在激素中２４小时　后，所有的酶都表现出快速形成（图１）。这就间　接说明环片中ＧＡ的作用被其他影响因素缓解　了，例如其他激素的作用。只有水的培养基形成　酶的水平最低。除了木聚糖酶，所有的酶在加入　ＧＡ，的培养基中显示出增强的活力。　用ＡＢＡ处理的大麦环片中酶合成的顺序与　用水处理的不同。以前较晚形成的酶现在形成的　早多了（表２和图２）。阿拉伯呋喃糖苷酶的活力　提前１２ｈ而仅一淀粉酶提前２４ｈ。单因素方差分析　和成对比较显示出木聚糖酶活性可能开始形成于　１２ｈ，但是在１２到６０ｈ这段间隔时间内可以看到活　性增加明显的不同。但ｐ～葡聚糖酶和羧肽酶在　任何间隔期没有明显的不同。这两种结果说明　ＡＢＡ对Ｂ一葡聚糖酶和羧肽酶的形成有抑制作　用。和用水处理的实验相比，木聚糖酶是唯一表　现出更高活性的酶。在用水处理的试验中，木聚　糖酶活性只局限于培养基中。其余所有的酶和用　水处理的试验中一样显示出相同的局部化。　用ＧＡ／ＡＢＡ处理的大麦环片中酶合成的顺序　和用ＧＡ处理的相同。所有酶开始形成于１２和　３６ｈ之间。这也说明ＡＢＡ不是平衡ＧＡ影响的唯　一因素。令人惊奇的是：　一淀粉酶和木聚糖酶都　有一个很小又很早的间隔期——１２—２４ｈ（表　３）。这个结果反映了在ＡＢＡ处理中仅一淀粉酶和　阿拉伯呋喃糖苷酶的形成与用激素处理的相比转　变到一个较早的时间点。然而只用ＧＡ处理，所　有酶的活性水平都比较高。除了木聚糖酶和阿拉　伯呋喃糖苷酶，所有酶的活性与水处理一样都有　局部化（图３）。木聚糖酶被发现在环片组织中具　有较高的集中性而阿拉伯呋喃糖苷酶主要集中在　激素培养基中。　对应于ＧＡ和氯化钙组的大麦环片中酶合成　的顺序与ＧＡ或ＧＡ／ＡＢＡ处理的不同（表４）。除　了Ｂ一葡聚糖酶外其余的酶开始形成的时间在　１２～３６ｈ之间。然而木聚糖酶开始合成的间隔期　比其他酶更密集更早。此外，在单因素方差分析　和成对比较中对应于ＧＡ／Ｃａ　组处理的木聚糖酶　活性的Ｆ值比处于其他影响因子环境中都高。这　也说明四个平行样的值不是一个偶然事件。　在单因素方差分析和成对比较后，对应于　ＧＡ／Ｃａ　组的羧肽酶活力的Ｆ值也比对应于其他影　响因子的值高。除了木聚糖酶，其他酶主要位于　影响因子培养基中（图４）。　２．３讨论　本试验中，发芽大麦中酶形成的模式与以前　的研究者观察到的不完全相同。结合以前的研究　给出下列酶合成的顺序：羧肽酶，Ｂ一葡聚糖酶，　一　淀粉酶然后是其他肽酶。酶合成的综合顺序大致　上符合Ｋａｎａｕｃｈｉ和Ｂａｍｆｏｒｔｈ依据在细胞壁制剂　上培养绿色木霉提出的次序。然而，当前的研究　也分析了原麦、浸麦和先前工作者研究结束之后　型巴氏杀菌监潮仪　颐贝隆　・　Ｅ￣ａｉｌ：Ｊ’ｆ－ｑ＠。ｈｏｔｈＩｍ∞ｍ　：ｏ０１　０－８４４６６ｏ０１１３８６｝　器昌　ｇ　“　６２・　德闺颐贝隆仑司中鹕总代理　颐贝隆电子科技（北京）有限公司　伯受　的４８小时中酶的变化。在这个研究中酶合成的　顺序也支持了浸麦中木聚糖酶和羧肽酶先合成，　仅一淀粉酶。木聚糖酶早期形成与先前的报告冲　突，但可以从Ｋａｎａｕｃｈｉ和Ｂａｍｆｏｒｔｈ的模型中得到　随后是Ｂ一葡聚糖酶和阿拉伯呋喃糖苷酶，最后是　预测。　●－ｏ　喜　基　基　Ｏ　２．基　２．ｏ　１。墨　’．ｏ１　Ｏ＋５　Ｏ山　＇４００　，２Ｏ０　１ｏｏｏ　枷　８Ｏ０　４００　２ｏｏ　Ｏ　Ｏ．０，２　Ｏ．０１ａ　口．ａ０矗　Ｏｍ００　口。０Ｏ４　Ｏ。心Ｏ皇　ｎ．ｎ０ａ　Ｏ　Ｏ，２　Ｏ，Ｏ１Ｏ　Ｏ．ＯＯ●　Ｏ．ＯＯｅ　Ｏ．００４　Ｏ　ＯＯ２　Ｏ．ＯＯＯ　Ｏ　船１●　Ｏ　Ｏ１２　Ｏ　１Ｏ　Ｏ．删　Ｏ．∞ｅ　Ｏ删　Ｏ　ｏｏ２　Ｏ伽　Ｏ　Ｉ２　２４　３０　４８　柏　培养时间（ｈ）　．经赤霉酸和脱落酸处理的大麦环片中酶形成　。黑条表示环片组织中酶活力，白条表示激素　培养基中酶活力，误差条代表标准偏差　７　Ｏ　稿　Ｏ　环　片　５．ｏ　，Ｏ　３．０　２。０　１　Ｏ　Ｏ　０　，拍０　矗ＯＯ　１４０Ｏ　≤　弼　＇　Ｏ　片　１￣０００　Ｃ、葺，　Ｏ　Ｏ　ｏ　Ｏ　Ｏ　Ｏ　Ｏ口Ｏ　螂鲫枷ｉｌ　ｍ啪ｍ　ｍ　Ⅲ嗽　啪　３口．自．嗣。　．　。＿。　Ｏ．ｏ＇２　ＯＯ１０　森ｏ・懈　片ｏｍ　０００４　０．００２　０　０００　０　０＇４　ｏ．Ｏｔ　０　０１０　≤０。００８　环　片　００６　０，００４　＋０Ｏ２　０．０００　Ｏ　１２　２４　３嚣　●嚣　６０　培养时间（ｈ）　ｌ￣ｉｇ：４经赤霉酸和氯化钙处理的大麦环片中酶形成　曲线。黑条表示环片组织中酶活力，白条表示激素　培养基中酶活力。误差条代表标准偏差　宅　五　缉　蘑　薪型巴氏杀菌监测仪　０。１０１０－．８４６０６０１３ｅ６｝８４｝６０　１。；器　篙　“　’　Ｅ－ｍａｉ＋：ｌｉｎｇ＠ｅｂｒｏ－ｃｈｉｎａ　ｃｏｒｎ　德国断贝隆冉目中阗总代理　１Ｏ　Ｘ　颐页隆电子科技（北京）有限公司　・６３　・　我们尽量小比例的模拟浸麦并在其中中断浸　除了木聚糖酶，发芽大麦近端酶的活力都比　是，末端的高。只有木聚糖酶活性平均地分布在近末　水，而且阻止微生物生长的预防措施也很简单，只　两端。水分从近端穿过珠孔进入完整的大麦籽粒　使用了次氯酸盐。　中引发了胚中激素的合成。从而确保了酶在最接　这项研究与声明内原ＡＢＡ经常在发芽和酶　近胚的糊粉层，也可能是盾状体中开始合成。这　形成过程起抑制作用的研究矛盾。相反它支持　样我们希望在近端看到更多酶的活性。较高的木　ＡＢＡ是木聚糖酶形成的一个积极影响因子的观　聚糖酶活性较早出现在近端并且在浸麦中均一的　点。然而我们观察到的木聚糖酶的总活力并不是　ＡＢＡ处理的组一样高。在大麦酶　分布在大麦籽粒中，这说明木聚糖酶合成比其他　和用ＧＡ或ＧＡ／细胞溶解酶早。这些数据同样支持了阿拉伯糖基　形成中ＡＢＡ的积极影响是作为过氧化物酶的同　木聚糖鞘的模型，它覆盖了细胞壁中一个１３一葡聚　工酶被报道的。在麦芽制造中实践中先用ＧＡ处　　糖核心。这个鞘肯定首先被水解以使Ｂ一葡聚糖　理再用ＡＢＡ是可行的。酶更好的进入细胞壁核心。细胞壁的糊粉层富含　３结论　在发芽谷粒和暴露在外原激素混合物中的组　在本次研究中木聚糖酶的合成远早于先前研　织里，羧肽酶和木聚糖酶早于ｐ一葡聚糖酶合成符　３一葡聚糖容易接近它　究者，这是因为先前的研究人员分别用了Ｃｌｉｐｐｅｒ　合这些酶的功能是为了使１以及Ｒｉｃｈａｒｄ和Ｔｒｉｕｍｐｈ的亚种而我们没有调查　的水解酶的假设。　这些亚种。然而大麦发芽研究中一个基本差异与　（注：编辑部对本译文有删节）　阿拉伯糖基木聚糖。　浸麦的方式有关。在早期的研究中，研究者将谷　物持续浸没在水中以达到４４％的浸麦度。他们在　摘译自：Ｒｏｂｅｒｔ　Ｌ】．Ｋｕｎｔｚ　ａｎｄ　Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｗ．Ｂａｒｎ－　ｆＯｒｔｈ．Ｔｉｍｅ　Ｃｏｕｒｓｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｄｅｖｅｌｏｐｄｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍｅｓ　ｉｎ　Ｂａｒｌｅｙ１．ｄｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　ｂｒｅｗｉｎｇ．１１３　试验中也使用制霉菌素，硫酸新霉素和氯霉素，表　面上起到了抗生素的作用。与他们形成对比的　▲▲一　▲▲　ｌ▲　０　＾　▲　ｌ一▲…ｌ＾　０▲０　＾　、，▲　▲　０　ｌ▲　溘　＾ｖ▲　▲　＾　（２）．１９６－２０５。２００７．　０　ｌ▲　－“　雀　▲　■▲　一　‘　＾　▲ｖ　ｌ▲．¨ｌ▲●　▲　■＾　▲▲　▲１．ｖ　关于举办“２０　１　０届国家级啤酒评酒委员＂考评选拔　暨“　品酒师　国家职业资格鉴定＂的通知（摘要）　中国酿酒工业协会啤酒分会决定于２０１　０年４月２３日～２７日在山东　省济南市举办“２０１　０届国家级啤酒评酒委员考评选拔’’暨“　品酒师　国家　职业资格鉴定＂活动。　目前，各省、直辖市、自治区协会推荐３－作已经结束。啤酒分会对报名　参加考评和鉴定的人员进行了审核，已进入应试确认和教材发放阶段，请　已经报名并接到通知的应试人员尽快办理考评费汇款事宜，尽早确认考评　资格和购买考试教材。如有已通过省、直辖市、自治区协会推荐但尚未接　到考试通知的人员尽快与中国酿酒工业协会啤酒分会取得联系（联系方　式：０１　０．６８１　９３０３９　６８１　９３００２　１　３９１　０９８１　２５９）。