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丝状真菌实验室诊断及药敏分析35例

2022-07-17 来源:步旅网
256 世界最新医学信息文摘2014年第14卷第1期 ・医学检验・ 丝状真菌实验室诊断及药敏分析35例 2.黑龙江省医院感染内科,黑龙江哈尔滨150036) (1.黑龙江省医院实验诊断部,黑龙江哈尔滨150000; 施中凯 ,胡晓丽 ,杜英 , 苏秀丽 ,朱鹏飞 ,陈岩 摘要:目的对患者深部分离的真菌进行检测和耐药性分析,了解患者深部真菌感染的现状,为临床感染性疾病提供病 原学诊断和合理使用抗真菌药物的依据。方法患者血液、无菌体液培养、分离出的菌株用棉蓝染色直接镜检和培养相 结合的方法进行鉴定及药敏试验。结果在1829份血液和无菌体液标本中,分离丝状真菌35株,阳性率1.9%;其中 以烟曲霉茵感染为主,检出前3位的科室为重症监护病房(1CU)、肝胆外科和血液科;分离的菌株对药物的敏感性分别 为氟康唑91.4%、5.氟胞嘧啶88.6%、伊曲康唑71.4%、两性霉素B100.0%。结论血液和无菌体液中分离的丝状真菌 以烟曲霉菌最多见,药敏结果显示对伊曲康唑的耐药性增加。 关键词:丝状真茵;诊断;药敏分析 中图分类号:R446 文献标识码:B DO1 10.3969/j.issn.1671—3141.2014.01.193 本文对1829份血液和无菌体液标本培养、分离、鉴定。 0引言 近年来,随着糖皮质激素、免疫抑制剂和高效广谱抗菌 药物的广泛应用,器官移植和其他介入性治疗的普遍开展, 以及艾滋病患者的不断增加,深部丝状真菌的感染逐年增 多。在上世纪八十年代,酵母菌(如白念)是引起深部真菌 感染的主要病原菌,近来的研究显示,丝状真菌引起的深 部感染越来越多,甚至在某些特定人群中有赶超酵母菌的 趋势 】。由于这些菌种对临床常用的抗真菌药物耐药或不敏 感,所以该类菌种的感染病死率较高,并且深部真菌感染 缺乏特征性的临床症状,难以在发病早期获得病原学诊断, 当患者出现持续高热而抗生素数日无效时,往往提示真菌感 染已经扩散到数个器官口 。因此,在患者发病早期即能做出 快速准确的诊断,对挽救深部真菌感染患者的生命有重大意 义。本文统计分析了来自2011年l0月2012年4月北京协 和医院以及2012年4月至今黑龙江省医院的病原标本共计 32例,依靠乳酸酚棉蓝染色观察丝状真菌孢子特点加以鉴 定,期望给临床丝状真菌感染的诊断带来帮助。 结果显示烟曲霉菌检出率为57.14%,黄曲霉菌为14.29%, 黑曲霉菌为8.57%,土曲霉菌为5.71%,其它丝状真菌各检 出1株。见表1。 表1 35例丝状真菌鉴定构成比 2.2不同科室丝状真菌检出构成比 丝状真菌感染主要集中在ICU、肝胆外科、血液科等, 这些病房的真菌感染率较其他病房阳性率高。 表2不同科室病原菌检出构成比 1材料和方法 1.1对象 来自2011年10月至2012年4月北京协和医院以及 2012年4月至今黑龙江省医院门诊及住院患者的病原标本。 1.2试剂培养基 临床送检标本经ESP一256血培养仪培养,血液或无菌 体液培养阳性培养物转种至血琼脂、沙保弱琼脂各两份分 别置于35℃、25℃培养箱培养24h后,对分离的真菌菌株 做乳酸酚棉蓝染色观察丝状真菌孢子特点加以鉴定。 1.3药敏试验 采用药敏试纸条法,严格按照产品说明书进行操作及结 果判读。药物包括5一氟胞嘧啶(5一Fc),两性霉素B(AMB), 氟康唑fFEZ),伊曲康唑fITR)。 2.3 丝状真菌对抗真菌药物的敏感性分布 35株假丝酵母菌属对4种抗真菌药物的药敏结果,其 2结果 2.1丝状真菌鉴定构成比 中两性霉素B对4种抗真菌药物全部敏感。见表3。 表3 35例丝状真菌对抗真菌药物的敏感性分布 世界最新医学信息文摘2014年第14卷第1期 注:1)s代表敏感;2)SDD代表剂量依赖性敏感;3)R 代表耐药。 257 3讨论 由于深部真菌感染在临床早期缺乏特征性的表现,难以 早期诊断。以烟曲霉为首的曲霉菌属依然是深部丝状真菌感 染的主要病原菌,但随着预防性抗真菌治疗的增多,很多 对临床常规用药不敏感甚至耐药的病原菌明显增加,使深 部丝状真菌感染病原菌的分布有了很大的改变,呈现出烟 曲霉所占比例逐年降低,非烟曲曲霉(如土曲霉等)以及非 曲霉丝状真菌f如镰刀霉等)的感染所占比例渐渐增加的特 点口】。近来的研究显示,很多以前无致病性的非曲霉丝状真 菌,现在也能够引起导管介导的菌血症以及深部脏器的播 散性感染 ]。因此,早期诊断及提供准确的药敏结果,为临 床治疗提供可靠的依据,显得尤为重要。本研究显示,临 床深部丝状真菌感染以曲霉菌为主,其它丝状真菌有上升 趋势;ICU病房仍然是曲霉菌感染的常见科室,由于免疫抑 制剂的应用及介人技术的开展逐年增多,血液科、外科患 者深部真菌的感染率逐渐上升。目前,临床上常用的抗真 菌药主要包括氟康唑、伊曲康唑、5一氟胞嘧啶、两性霉素B、 制霉菌素等口】。本研究显示伊曲康唑及5一氟胞嘧啶的耐药 率较高,氟康唑临床敏感性下降,给临床治疗带来了困难。 另外,临床科室与微生物实验室之间缺乏沟通与信任,也导 致临床医生对病原学检测不重视,不能够合理的使用抗真 菌药物。所以应该重视病原学检测,在积极控制原发病的 同时,应当提高真菌检测水平,争取做到早期诊断和及时治 疗,并且还要根据临床实验室的体外药敏试验结果,指导临 床用药。对与那些真菌感染的高危人群,特别是在有感染症 状而常规抗菌药物治疗无效的情况下,应及时做血液、无菌 体液培养和药敏检测。 参考文献 [1]Nucci M,Anaissie E.Cutaneous infection by Fusarium species in healthy and immun0c0mpr0mised hosts:implications for diagnosis and management[J].Clin Infect Dis,2002,35(8):909-920. [2】冯文莉,杨静,奚志琴,等.3年间医院内侵袭性真菌感染的病原 菌分布及临床分析lJ1.中华医院感染学杂志,2008,18(7):1030—1033. [3】王文平,朱磊.深部真菌医院感染的菌群分布及耐药性分析fJ1_ 中华医院感染学杂志,2009,19(3):353—354. [4]Abelson JA,Moore T,Bruckner D,et a1.Frequency of fungemia in hospitalized pediatric inpatientsover 1 1 years at atertiary care institution [J].Pediatrics,2005,1 16(1):61-67. [5】黄金竹,母连军.抗真菌药物的研究进展[J].国外医药抗生素分 册,2007,28(6):246—251. (上接第251页) 隆抗体与淋巴细胞膜上相应的抗原结合,经过溶血、洗涤『和 (或)固定】等步骤后,在流式细胞仪上进行分析,从而得 到T淋巴细胞及其亚群的相对百分数。 7.2开机及仪器校准 启动之前,分别将鞘液盒和清洁液盒加满,废液桶倒净。 打开电源箱门,检查:AIR FILTER及VACUUM FILTER必须干燥无水,WATER TRAP液体不能超过1/3; VACUUM TRAP液体不超过1/4,然后打开电源箱开关。 开启计算机,双击相应的检测图标“EXP032 ADC XL 4 Color”,启动流式细胞仪。 预热l5~20分钟,待仪器主机READY灯亮,即可开 始上机检测。 仪器光路与流路校准:将Flow—check荧光微球校准 品室温下避光放置lO分钟,取5滴Flow Check放人洁净 12mm×75mm的试管,加等量蒸馏水或鞘液,混匀,选择 检测Flow Check的PROTOCOl,将稀释混匀的Flow Check 试管放在样品台上进样检测,取数5000(FS),记录前向角散 射光(Fs)及荧光FL1一FIA的HPCV值,核对是否<2%。 仪器光路与流路校准合格后才能进行样本检测。 5仪器 流式细胞仪EPICS XL(美国Beckman Co gter公司)。 6试剂 单克隆抗体Beckman Co gter公司的CD45一FITC/ CD4一RD1/CD8一ECD/CD3一PC5, 或CD4一FITC/CD8一PE/ CD3一PC5。 Beckman CoIX gter公司的OptiLyse C(溶血素)。 cLENz(cleaning Agent,清洗液)。 Isoton III Diluent(稀释液或磷酸盐缓冲液或鞘液)。 Flow—check荧光微球校准品。 7操作步骤 7.1标本荧光染色 7.1.1全血标本前处理 取100IXl抗凝全血或106个细胞/ml加入标号的 7.3标本上机检测 7-3.1 建立分析方案(Protoco1) 12mm×75mm试管中,加入l0 l荧光素标记的单克隆抗体 混合试剂CD3/CD4/CD8或CD45/CD3/CD4/CD8,混匀,室 温避光孵育2O分钟;加入500IX g溶血素,混匀,室温避 光孵育lO分钟;加人500 g稀释液,混匀,室温避光孵育 10分钟;2小时内上机检测。 7.1.2肺泡灌洗液前处理 取5 lOml肺泡灌洗液,用双层洁净纱布过滤于 标号的15ml离心管中,500g离心5分钟,弃上清(残留 沉淀物200 1左右)。混匀沉淀,取100/If加入标号的 l2ram×75mm试管中,加入l0 l荧光素标记的单克隆抗 体混合试剂CD3/CD4/CD8,混匀,室温避光孵育20分钟; 加入300 l溶血素,混匀,室温避光孵育10分钟;加入 300 1稀释液,混匀,室温避光孵育10分钟,500g离心5 分钟,弃上清,加入500 l稀释液,混匀,2小时内上机 检测[21。 选择相应的参数并画图,依次将同型对照管以及单阳性 管f前处理同样本管)上机并调整合适的增益、电压和颜色 补偿,保存该方案。方案建立好后,只要仪器状态及标本 条件不变,即可一直使用该分析方案。 7-3.2选择相应的分析方案(Protoco1) 将前处理好的标本管放在样品台上进样检测,调整门的 大小。待仪器停止收集后,对结果进行分析和记录。 7.4清洗仪器 关机前需要执行仪器日常清洗程序和真空管清洗程序。 参考文献 [1]赵衍江.恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞CD25的测定与临床检 验学研究『J】.中国当代医药,2012,19(32):99—100. [2】王世婷,姚伯程.实用McAb—A—E直接法检验T淋巴细胞亚群反 应管替代对比研究[J].中国保健营养(中旬刊),2012,10:26— 27. 

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