质粒的提取
1、原理：破菌后，由于细菌基因组DNA和质粒的分子量及结构不一样，在不同pH状况下，可以将两者分离，然后进行纯化，就可以得到较纯的质粒。
2、质粒抽提步骤
（1）将带有质粒的E.coli接种于5ml LB、抗生素培养液中，37度摇床培养12-16h。
（2） 取1.0-5.0ml的菌液，室温下10000×g离心1min收集菌液。
（3） 倒弃培养基。加入250μL Solution I/RNaseA混合液，漩涡振荡使细胞完全悬浮。
（4） 往重悬混合液中加入250μL Solution II,轻轻颠倒混匀4-6次。此操作避免剧烈混匀裂解液且裂解反应不要超过5min。
（5） 加入350μL Solution III，温和颠倒数次至形成白色絮状沉淀。
（6）室温下，大于或等于10000×g离心10min。
（7） 转移上清液至套有2ml收集管的Hi Bind DNA结合柱中，室温下，10000×g离心1min，倒去收集管中的滤液。
（8） 把柱子重新装回收集管，加入500μL HB Buffer，按上述条件离心，弃去滤液。
（9）把柱子重新装回收集管，加入700μL DNA Wash Buffer，按上述条件离心，弃去滤液。
（10） (可选)弃去滤液，重复第9步骤一次。
（11）弃去滤液，把柱子重新装回收集管，10000×g离心空柱2min以甩干柱子基质。
（12）把柱子装在干净的1.5ml离心管上，加入30-50μL Elution Buffer 到柱子基质中，静置1-2min，10000×g离心1min洗脱出DNA。
因篇幅问题不能全部显示，请点此查看更多更全内容